專利名稱：鹽膚木內酯a,其制備方法和其在制藥中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥物技術領域，具體地說，涉及一種鹽膚木內酯A化合物，其制備方法，和其在制備抗艾滋病藥物中和在制備抑制合胞體形成藥物中的應用。
背景技術：
艾滋病(Acquired Immuno-deficiency Syndrome，AIDS，獲得性免疫缺損綜合癥，簡稱艾滋病)是當今世界主要威脅人類健康的不可根治的致死性疾病之一。導致艾滋病的病原體即人類免疫缺損病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)，1983年獲得分離確證，有兩種亞型HIV-1和HIV-2，若干變異株。HIV繁殖過程大多已闡明，不同類型的化合物被相繼研究和用于抗艾滋病病毒。全世界已對約20000個化合物進行了抗HIV活性的研究，目前已成功地研制出了一系列抗逆轉錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑的艾滋病藥物。如逆轉錄酶抑制劑 (AZT，DDC，DDI，D4T，3TC，Nevirapine，Delavirdine，Efavinavir)和蛋白酶抑制劑藥物(Sequanavir，Ritonavir，Indinavir，Nelfinavir，Amprenavir)，這些藥雖然被批準用于臨床，客觀上延長了艾滋病患者的生命，但同時又有嚴重的毒副作用如骨髓抑制和健忘等以及導致抗病毒株的出現(xiàn)，患者往往難以忍受這些毒副作用而帶來的痛苦，而拒絕服用。因而臨床上急需研制出高效低毒的抗艾滋病新藥。從中草藥中發(fā)現(xiàn)天然抗HIV活性化合物或先導物是目前國內外研究的重要方面和非?；钴S的領域。至今發(fā)現(xiàn)100多種天然化合物具有抗HIV活性，分屬于倍半萜、二萜、三萜、甾體、黃酮、香豆素、肽類、生物堿，多糖，天花粉蛋白等，其中活性較強的如甘草甜素，金絲桃素，姜黃素，大豆皂甙，喜樹堿，栗精胺，香菇多糖，天花粉蛋白等。目前約有近百個品種正在進行臨床前研究和臨床試驗。從天然生物資源尋找新的抗HIV藥物或先導化合物的研究，是國內外新藥研制中非?；钴S的領域?，F(xiàn)有技術中未見有鹽膚木內酯A化合物的報道，也沒有其具有較強抗HIV活性的報道，此外，也沒有該化合物抑制HIV合胞體形成的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的具有藥用價值的化合物鹽膚木內酯A(Ruscholide A)。
本發(fā)明的另一目的是提供一種從鹽膚木(Rhus chinensis)在植物中提取本發(fā)明化合物的方法。
本發(fā)明進一步的目的是提供本發(fā)明化合物鹽膚木內酯A(Ruscholide A)在制備抗艾滋病藥物中的應用和在制備抑制合胞體形成藥物中的應用。
發(fā)明人由鹽膚木(Rhus chinensis)全株中分離出一種新的化合物鹽膚木內酯A(Ruscholide A)，該化合物具有有價值的藥用活性。
本發(fā)明的新的化合物用下述結構式(I)表示； 式(I)
本發(fā)明化合物鹽膚木內酯A(Ruscholide A)是由鹽膚木植物中提取而得到的，該方法包括以下步驟取鹽膚木(Rhus chinensis)，曬干，粉碎，用90％乙醇回流提取3次，每次2小時，合并濃縮液，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，石油醚部分直接經硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯(100∶0，95∶5，90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，V/V)梯度洗脫，得到六個流分Fr.A-F.，F(xiàn)r.E部分反復硅膠柱層析得鹽膚木內酯A(ruscholide A)，即5-羥基-3-甲叉基-7-(3，7，11，15-四甲基) -2， 6， 10， 11-十六四烯基-2(3H)-苯并呋喃酮[5-hydroxyl-3-(propan-2-ylidene)-7-(3，7，11，15-tetramethyl)-2，6，10，11-hexadecatetraenyl-2(3H)-benzofuranone]。
本發(fā)明的用于抗艾滋病的藥物組合物含有治療有效量的權利要求1化合物和/或藥學上可接受的載體。
本發(fā)明的用于抑制合胞體形成的藥物組合物含有治療有效量的權利要求1化合物和/或藥學上可接受的載體。
本發(fā)明的化合物鹽膚木內酯A(Ruscholide A)可用于制備抗艾滋病的藥物。
本發(fā)明的化合物鹽膚木內酯A(Ruscholide A)可用于制備抑制合胞體形成的藥物。
本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。所述藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.1-99％的活性成分即本發(fā)明化合物鹽膚木內酯A(Ruscholide A)，最優(yōu)選含有重量比為0.5-90％的本發(fā)明化合物，其余為藥物學上可接受的，對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經注射(靜注、肌注)和口服兩種形式給藥。
本發(fā)明化合物的施用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類型和嚴重程度等變化，其日劑量可以是O.01~1Omg/kg體重，優(yōu)選O.1~5mg/kg體重?？梢砸淮位蚨啻问┯?。


圖1是鹽膚木內酯A(Ruscholide A)對HIV-1誘導C8166細胞形成合胞體的抑制活性數(shù)據(jù)圖；圖2是鹽膚木內酯A(Ruscholide A)的細胞毒性測定圖。
具體實施例方式下面的實施例可以使本專業(yè)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實施例1鹽膚木內酯A(ruscholide A)，即5-羥基-3-甲叉基-7-(3，7，11，15-四甲基)-2，6，10，11-十六四烯基-2(3H) -苯并呋喃酮[5-hydroxyl-3-(propan-2-ylidene)-7-(3，7，11，15-tetramethyl)-2，6，10，11-hexadecatetraenyl-2(3H)-benzofuranone]的制備。
取鹽膚木(Rhus chinensis)全株(莖葉23kg)曬干粉碎，用90％乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液濃縮至小體積，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。石油醚部分(386g)直接經硅膠柱層析(1500g，200-300目，7.0×100cm)，用石油醚-乙酸乙酯(100∶0，95∶5，90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，v/v)梯度洗脫，每500mL收集一份，TLC檢測合并相同部分，共得到六個流分，流份1-12為Fr.A，流份13-21為Fr.B，流份22-33為Fr.C，流份34-40為Fr.D，流份41-45為Fr.E，流份46-50為Fr.F。流份Fr.E(12.5g)經硅膠柱層析(250g，200-300目，4.5×60cm)，用石油醚-乙酸乙酯(90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，v/v)梯度洗脫，得到四個流份Fr.E1-Fr.E4，F(xiàn)r.E1(400mg)經Sephadex LH-20，用氯仿-甲醇(1∶1)洗脫，得到主要流份150mg，再經硅膠柱層析(15g，200-300目，1.5×45cm)，石油醚-丙酮(90∶10)洗脫，得到結構式(I)所示的鹽膚木內酯A(ruscholide A)93mg。鹽膚木內酯A(ruscholideA)，即5-羥基-3-甲叉基-7- (3，7， 11， 15-四甲基)-2，6，10，11-十六四烯基-2(3H) -苯并呋喃酮[5-hydroxyl-3-(propan-2-ylidene)-7-(3，7，11，15-tetramethyl)-2，6，10，11-hexadecatetraenyl-2(3H)-benzofuranone]。
鹽膚木內酯A(Ruscholide A)的結構鑒定數(shù)據(jù)紫外光譜(UV)用UV-210A儀測定，紅外光譜(IR)用Bio-RadFTS-135型分光光度計測定，KBr壓片。質譜(MS)用Auto SPEC 3000型質譜儀測定。核磁共振譜(1H NMR和13C NMR)用Bruker DRX-500超導核磁共振儀測定，TMS作內標，CDCl3作溶劑。柱層析材料和薄層層析用硅膠為青島美高集團有限公司的產品。展開劑∶石油醚-乙酸乙酯 (70∶30)，Rf＝0.5。
結構式如式(I)所示 式(I)分子式C31H42O3分子量462性狀淡黃色粉末UV(CHCl3)λmax(logε)＝260(4.21)，294(3.87)，352(3.54)。
IR(KBr)vmax＝3447，1735，1620，1488，1457，1384，1358，1305，1290，1280，1170，1130，858，796cm-1。
EI-MS(70ev)m/z＝462(12)，419(10)，393(17)，326(21)，258(29)，204(26)，203(70)，175(22)，81(43)，69(100)；HR-EI-MSm/z＝463.3207[M+H]+(calcd.for C31H43O3463.3212)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)δH6.88(1H，d，J＝2.1Hz，H-4)，6.60(1H，d，J＝2.1Hz，H-6)，5.29(1H，t，J＝7.3Hz，H-2″)，5.11-5.07(3H，m，H-6″，10″，14″)，3.34(2H，d，J＝7.3Hz，H-1″)，2.56(3H，s，H-2′)，2.33(3H，s，H-3′)，2.33-1.96(12H，m，H-4″，5″，8″，9″，12″，13″)，1.70(3H，s，H-18″)，1.67(3H，s，H-16″)，1.58(9H，s，H-17″，19″，20″).
13C-NMR(CDCl3，125MHz)δc167.8(s，C-2)，119.4(s，C-3)，108.1(d，C-4)，152.0(s，C-5)，115.4(d，C-6)，125.2(s，C-7)，124.5(s，C-3a)，144.4(s，C-7a)，159.1(s，C-1′)，24.8(q，C-2′)，23.5(q，C-3′).27.4(t，C-1″)，120.7(d，C-2″)，137.5(s，C-3″)，39.7(t，C-4″)，26.7(t，C-5″)，124.4(d，C-6″)，135.1(s，C-7″)，39.7(t，C-8″)，26.6(t，C-9″)，124.2(d，C-10″)，135.0(s，C-11″)，39.7(t，C-12″)，26.5(t，C-13″)，124.0(d，C-14″)，131.2(s，C-15″)，25.6(q，C-16″)，17.6(q，C-17″)，16.2(q，C-18″)，16.0×2(q，C-19″，20″).
實施例2按實施例1的方法先制得鹽膚木內酯A(Ruscholide A)，按常規(guī)加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
實施例3按實施例1的方法先制得鹽膚木內酯A(Ruscholide A)，將其溶于無菌注射用水中，攪拌使溶，用無菌抽濾漏斗過濾，再無菌精濾，分裝于2安瓿中，低溫冷凍干燥后無菌熔封得粉針劑。
實施例4將所分離得到的鹽膚木內酯A(Ruscholide A)與賦形劑重量比為9∶1的比例加入賦形劑，制成粉劑。
實施例5按實施例1的方法先制得鹽膚木內酯A(Ruscholide A)，按其與賦形劑重量比為5∶1的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實施例6按實施例1的方法先制得鹽膚木內酯A(Ruscholide A)，按常規(guī)口服液制法制成口服液。
實施例7按實施例1的方法先制得鹽膚木內酯A(Ruscholide A)，按其與賦形劑重量比為5∶1的比例加入賦形劑，制成膠囊。
實施例8按實施例1的方法先制得鹽膚木內酯A(Ruscholide A)，按其與賦形劑重量比為3∶1的比例加入賦形劑，制成膠囊。
實施例9本發(fā)明化合物鹽膚木內酯A(Ruscholide A)及其與藥用載體或賦形劑組成的藥物組合物的藥理作用。
1.鹽膚木內酯A(Ruscholide A)對HIV-1誘導C8166細胞形成合胞體的抑制實驗(1)實驗方法將6×105/ml C8166細胞50μl與100μl不同濃度的化合物溶液混合，加入50μl HIV-1稀釋，M.O.I.為0.0089，同時設置不含化合物的對照孔和陽性藥物AZT對照孔，37℃，5％CO2培養(yǎng)三天，倒置顯微鏡下(100×)計數(shù)合胞體(五個視野)。計算化合物的EC50(50％Effective Concentration)，即化合物抑制50％合胞體形成的濃度。
(2)結果(見表1和說明書附圖1)表1 鹽膚木內酯A(Ruscholide A)對HIV-1誘導C8166細胞形成合胞體的抑制活性數(shù)據(jù)

2.鹽膚木內酯A(Ruscholide A)的細胞毒性實驗(1)實驗方法3×105/ml C8166細胞懸液100μl與100μl不同濃度的化合物溶液混合，同時設置不含化合物的對照孔和陽性藥物AZT對照孔，37℃，5％CO2培養(yǎng)三天，MTT法檢測細胞存活率。595 nm/630nm ELx800 ELISAReader測定OD值。計算化合物對細胞的CC50(50％CytotoxicConcentration)，即引起50％細胞死亡的化合物濃度。
(2)結果(見表2和說明書附圖2)
表2 鹽膚木內酯A(Ruscholide A)的細胞毒性測定結果

3、鹽膚木內酯A(Ruscholide A)抗HIV的治療指數(shù)(SelectiveIndex，SI)SI＝CC50÷EC50＝31.73μg/ml÷0.75μg/ml＝42從上述實驗結果可以證實本發(fā)明的鹽膚木內酯A對HIV-1誘導C8166細胞形成合胞體具有明顯抑制作用，它可用于制備抗艾滋病的藥物，也可用于制備抑制HIV合胞體形成的藥物。
權利要求
1.下述結構式(I)化合物鹽膚木內酯A(Rhuscholide A) 式(I)。
2.制備權利要求1化合物的方法，取鹽膚木(Rhus chinensis)，曬干，粉碎，用90％乙醇回流提取3次，每次2小時，合并濃縮液，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，石油醚部分直接經硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯(100∶0，95∶5，90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，V/V)梯度洗脫，得到六個流分Fr.A-F.，F(xiàn)r.E部分反復硅膠柱層析得鹽膚木內酯A(ruscholide A)，即5-羥基-3-甲叉基-7-(3，7，11，15-四甲基)-2，6，10，11-十六四烯基-2(3H)-苯并呋喃酮[5-hydroxyl-3-(propan-2-ylidene)-7-(3，7，11，15-tetramethyl)-2，6，10，11-hexadecatetraenyl-2(3H)-benzofuranone]。
3.用于抗艾滋病的藥物組合物，其中含有治療有效量的權利要求1化合物和/或藥學上可接受的載體。
4.用于抑制合胞體形成的藥物組合物，其中含有治療有效量的權利要求1化合物和/或藥學上可接受的載體。
5.權利要求1化合物鹽膚木內酯A在制備抗艾滋病藥物中的應用。
6.權利要求1化合物鹽膚木內酯A在制備抑制合胞體形成藥物中的應用。
全文摘要
下述結構式(I)化合物鹽膚木內酯A(Rhuscholide A)，其制備方法，其在制備抗艾滋病藥物中的應用和在制備抑制合胞體形成藥物中的應用。
文檔編號A61K36/22GK1995028SQ20061004871
公開日2007年7月11日 申請日期2006年10月10日 優(yōu)先權日2006年10月10日
發(fā)明者陳紀軍, 顧瓊, 鄭永唐, 王睿睿, 張雪梅, 周俊 申請人:中國科學院昆明植物研究所, 中國科學院昆明動物研究所