專利名稱：23－羥基白樺酸類衍生物、其制備方法、制劑及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類經(jīng)修飾的23-羥基白樺酸衍生物，本發(fā)明還公開了這些23-羥基白樺酸衍生物的制備方法、含有這些23-羥基白樺酸衍生物的藥物組合物及這類23-羥基白樺酸衍生物用于抗腫瘤的用途。
背景技術(shù)：
23-羥基白樺酸是與白樺酸結(jié)構(gòu)相似的化合物，23-羥基白樺酸是從中草藥白頭翁(Pulsatilla chinensis Regel)中提取的一種五環(huán)三萜類化合物，白頭翁始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，屬于毛莨科白頭翁屬植物，具有清熱解毒、涼血止痢、燥濕殺蟲的功效。臨床上主要用于治療細(xì)菌性痢疾、阿米巴痢疾、婦科陰道炎等?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)白頭翁除了抗菌和抗病原蟲作用外，還具有抗癌、殺精、治療內(nèi)毒素血癥等作用。從白頭翁中分離得到皂苷元23-羥基白樺酸(23-Hydroxy betulinic acid)，結(jié)構(gòu)與白樺酸很相近。CN 1491651A公開了23-羥基白樺酸對小鼠黑色素瘤、腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腸道腫瘤、肺癌、肝癌以及愛滋病的預(yù)防和治療有很好的作用。CN1682740A公開了白樺酸具有糖原磷酸化酶抑制劑作用。
人們對白樺酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，試圖找到藥理活性更好的化合物，如Bioorganic & MedicinalChemistry Letters，9(8)，1201-1204中公開了對白樺酸結(jié)構(gòu)修飾的一系列衍生物，部分結(jié)構(gòu)如下 該論文作者也對這系列衍生物做了藥理學(xué)研究，試驗結(jié)果如下
Table 1.Cytotoxicity profile of amino acid conjugates of betulinic acid against MEL-2 and KB cells lines．

NoteThe assay was performed twice in triplicates.The solubility was tested on the compounds that showed cytotoxicity against MEL-2.
從這些數(shù)據(jù)可以看出部分經(jīng)修飾的化合物的抗腫瘤活性與白樺酸相當(dāng)或略低，部分化合物在個別腫瘤細(xì)胞中的活性高于白樺酸，如化合物11、13，23，25。
目前在抗腫瘤領(lǐng)域，大多數(shù)的研究者認(rèn)為白樺酸及其衍生物通過抑制血管生成來達(dá)到抗腫瘤的目的，但多年來仍沒有這類化合物進(jìn)入臨床試驗階段。臨床需要藥效更好的抗腫瘤藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一類新的23-羥基白樺酸衍生物，通過對23-羥基白樺酸的結(jié)構(gòu)改造，得到通式I的23-羥基白樺酸衍生物

其中R1代表H、Br、Cl或F；R2代表OH、OR6、OCOR6、OSO2R6、OSO2NH2、NH2、NHCH2OR6、NHR6、N(R6)2、NOR6、OCOR6NHR6、NHCOR6、NHCOR6(COOH)X、NHSO2R6、NHNHR6、NHNHCH(OH)R6、OCOR6COOH、OCOCH(OH)CH(Ph)R7、OCOCOOR6、NOSO3H、NOR6或NHOR6；R3代表H、CH2OH，CHO、COOH、CH2OR6、CH2OCOR6、CH2OSO2R6、CH2OCOR6NHR6、、CH2NHCOR6、CH2NHCOR6(COOH)X、CH2NHSO2R6X、CH2NHNHR6、CH2NHNHCH(OH)R6、CH2OCOR6COOH、CH2OCOCH(OH)CH(Ph)R7、CH2OCOCOOR6、CH2NOSO3R6、CH2NOR6或CH2NHOR6；R4代表與R3相同的基團(tuán)，或者代表COOM、COCl、CON3、CONH2、COOR6、CONR6、CON(R6)2、COOR6COZ、COOR6OX、COO(CH2)mCH＝CH(CH2)nOR6、COO(CH2)mC≡C(CH2)nOR6、COOCOCH＝C(R6)2、COOCOR6、COOR6OCOR6、COOR6OCOR6COOH、CONHR6NHCOR6COOH，CONHR6COOR6、CONHR6CONHR6COOR6、COOR6CHO、COOCH2CH＝NOA、COOCH2CH2NHOA、COOCH2CH＝NR6、COOCH2CH2NHNHR6或COOCH2CH2N(R6)2；R5代表CH2＝C-CH3、CH2＝C-CH2OH、CH3CHCH3或CH2＝C-CH2Br；R6代表H、非取代或X取代的C1-C10直鏈或支鏈的烷烴、烯烴、炔烴、環(huán)烷烴、苯基、芐基、萘基；并且，當(dāng)R2為OH、R4為COOH或CH2OH時，R6不為H；R7代表NH2或NHR6X；X代表H、Cl、Br、F、I、CN、NH2，NO2、CF3、OH、OCH3、COOH，COOCH3，C1-C10直鏈或支鏈的烷烴、烯烴、炔烴、環(huán)烷烴、苯基、芐基、萘基；Z代表OH、OR6、鹵素、N3或NH2；A代表H、CH3、SO2C6H4CH3、OCOR6或R6；M代表Na、K、Li；m＝1-8，n＝1-8。
上述衍生物中優(yōu)選的化合物是R1代表H；R2代表OH、OCOR6、OCOR6COOH、＝O、NOH、NOCOR6、OCOCOOR6；R3代表H、CH2OH、CH2OCOR6、CH2OCOR6COOH、CH2OCOC6H5、CHO、COOH、
CH2OCOCOOR6；R4代表COOH、CONH R6、 COOR6、COOR6OH、COO(CH2)4OCOR6、COOR6OCOR6COOH、CONHR6NHCOR6COOH，CONHR6COOCH3、CONHR6COOH、CONHR6CONHR6COOR6，CONHR6CONHR6COOH或CH2OH；R5代表CH2＝C-CH3或CH2＝C-CH2OH；R6代表H、非取代或X取代的C1-C10直鏈或支鏈的烷烴、烯烴、炔烴、環(huán)烷烴、苯基、芐基、萘基；并且，當(dāng)R2為OH、R4為COOH或CH2OH時，R6不為H；X代表H、Cl、Br、F、I、CN、NH2，NO2、CF3、OH、OCH3、COOH，COOCH3，C1-C10直鏈或支鏈的烷烴、烯烴、炔烴、環(huán)烷烴、苯基、芐基、萘基；更為優(yōu)選的化合物是3，23-O-二乙?；?30-羥基-28-白樺酸甲酯3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺甘氨酸3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺丙氨酸3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺谷氨酸3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺纈氨酸3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺亮氨酸3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺苯丙氨酸3，23-O-二琥珀酸單?；讟逅?，23-O-二苯乙?；讟逅?-酮-23-醛白樺酸3-O-鄰苯二甲酸單?；?23-羥基-白樺酸3-羥基-23-O-苯甲酰基白樺酸3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸酰胺甘氨酸甲酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸酰胺谷氨酸二甲酯3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸酰胺丙氨酸甲酯3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸酰胺亮氨酸甲酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸酰胺苯丙氨酸甲酯3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸酰胺纈氨酸甲酯3，23-二羥基-28-白樺酸正辛酯
3，23-二羥基-28-白樺酸正己酯3，23-二羥基-28-白樺酸正庚酯3，23-二羥基-28-白樺酸環(huán)己酯3，23-二羥基-28-白樺酸丙烯酯3，23-二羥基-28-白樺酸丙炔酯3，23-二羥基-28-白樺酸丁二醇單酯3，23-二羥基-28-白樺酸乙二醇單酯3，23-二羥基-28-白樺酸己二醇單酯3，23-二羥基-28-白樺酸丁炔二醇單酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸正丁酰胺3，23-O-二乙?；?28-白樺酸異丙酰胺3，23-O-二乙?；?28-白樺酸環(huán)己酰胺3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸二正丁酰胺3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸苯乙酰胺3，23-O-二乙?；?28-白樺酸二乙酰胺3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸(3，4-亞甲二氧)苯乙酰胺3，23-O-二乙?；?28-白樺酸(α-甲基)芐酰胺3，23-O-二乙?；?28-白樺酸甲酯3，23-O-乙?；?28-白樺酸異丁酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸異丙酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸丙烯酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸丙炔酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇單酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸丁二醇單酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸丁炔二醇單酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸己二醇單酯3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸丁二醇丁二酸雙酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸丁二醇戊二酸雙酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸己二醇戊二酸雙酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇丁二酸雙酯3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇戊二酸雙酯
3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇鄰苯二甲酸雙酯3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸己二醇丁二酸雙酯3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸乙二醇順丁烯二酸雙酯3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺甘氨酸酰胺甘氨酸甲酯本發(fā)明的23-羥基白樺酸衍生物可用下列方法制備得到(其中R2、R3、R4、R6的定義前所述)當(dāng)R2為OCOR6或OCOR6COOH、＝O；R3為CH2OCOR6、CH2OCOR6COOH、CH2OCOC6H5、CHO或COOH時，制備步驟包括a、用大過量的酸酐或酰氯或氧化劑處理23-羥基白樺酸4-48個小時，溫度為室溫至120°C；b、向步驟a的溶液中加入水；c、用有機(jī)溶劑萃取，得到有機(jī)層，其中，氧化劑為PCC氧化劑(氯鉻酸吡啶)或Jone’s氧化劑(H2CrO4/H2SO4/丙酮)，有機(jī)溶劑為二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯。
當(dāng)R2為OCOR6；R3為CH2OCOR6；R4為COOR6OH、COO(CH2)4OCOR6或COOR6OCOR6COOH時，制備步驟包括a、將3，23-O-二酰基-17-酰氯白樺酸衍生物溶解在二醇中，反應(yīng)1-48小時，得到3，23-O-二?；?28-白樺酸二醇單酯衍生物；b、將a產(chǎn)物溶解在鹵代有機(jī)溶劑中，加入酸酐或二酸酐和有機(jī)堿，反應(yīng)1-48小時，得到3，23-O-二?；?28-白樺酸二醇單酸雙酯或3，23-O-二?；?28-白樺酸二醇二酸雙酯，其中鹵代有機(jī)溶劑為二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。
當(dāng)R2為OH或OCOR6；R3為CH2OH、CH2OCOR6；R4為CONHR6COOCH3、CONHR6COOH、CONHR6CONHR6COOR6或CONHR6CONHR6COOH時，制備步驟包括a.將氨基酸酯或氨基酸酯鹽酸鹽溶解在鹵代有機(jī)溶劑中，加入3，23-O-二?；?28-白樺酸酰氯反應(yīng)1-48小時，得到3，23-O-二酰基-28-白樺酸酰氨氨基酸酯；b.將a產(chǎn)物溶解在鹵代有機(jī)溶劑或THF(四氫呋喃)與甲醇的溶液中，加入1-8mol/L的強(qiáng)堿溶液，回流反應(yīng)1-8小時，得到3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺氨基酸；c.將縮合劑、有機(jī)堿以及氨基酸酯或氨基酸酯鹽酸鹽及上述產(chǎn)物溶解在鹵代溶劑中，反應(yīng)1-48小時，得到3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺氨基酸酰胺氨基酸酯；
d.將c產(chǎn)物溶解在鹵代有機(jī)溶劑或醚與甲醇的溶液中，加入1-8mol/L的強(qiáng)堿溶液，回流反應(yīng)1-8小時，得到3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺氨基酸酰胺氨基酸。
其中鹵代溶劑為二氯甲烷、氯仿或四氯化碳；強(qiáng)堿溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液；縮合劑為N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、N-(3-二甲基胺丙基)-N′-乙基碳二亞胺；有機(jī)堿為4-二甲基胺吡啶、1-羥基-苯并-三氮唑或N-甲基嗎啉。
當(dāng)R2為OH或OCOR6；R3為CH2OH或CH2OCOR6；R4為COOR6；R5為CH2＝C-CH2OH時，制備步驟包括a.將3，23-O-酰基-28-羧酸酯白樺酸衍生物與間氯過氧苯甲酸溶解在鹵代溶劑中，回流反應(yīng)4-10小時，得到3，23-O-二?；?30-羥基-28-羧酸酯白樺酸；b.將a產(chǎn)物溶解在鹵代有機(jī)溶劑或THF(四氫呋喃)與甲醇的溶液中，加入1-8mol/L的強(qiáng)堿溶液，回流反應(yīng)1-8小時，得到3，23，30-三羥基-17-羧酸酯白樺酸；其中鹵代溶劑為二氯甲烷、氯仿或四氯化碳；強(qiáng)堿溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液。
當(dāng)R2為OH、OCOR、OCOR6COOH、＝O、NOH或NOCOR6；R3為OH時，制備步驟包括a、23-OH白樺酸或28-COOH被保護(hù)的23-羥基白樺酸用選擇性保護(hù)試劑(可選自三苯基氯甲烷，二甲基叔丁基氯硅烷)保護(hù)，或直接使用；b、適量的酸酐或酰氯或氧化劑處理23-羥基白樺酸或其衍生物4-48個小時，溫度為室溫至120℃；c、向步驟b的溶液中加入水；d、用有機(jī)溶劑萃取，得到有機(jī)層，所述衍生物存在于有機(jī)層中；e、將d產(chǎn)物在甲酸溶液中脫去保護(hù)基團(tuán)，得到3-O-酰基-23-羥基-28-白樺酸或3-酮-23-羥基-28-白樺酸；f、將e產(chǎn)物3-酮-23-羥基-28-白樺酸酯，鹽酸羥胺溶解于吡啶中，室溫至70℃攪拌至反應(yīng)完全；g、將f產(chǎn)物用有機(jī)溶劑萃取，得到有機(jī)層，所述3-肟基-23-羥基白樺酸衍生物存在于有機(jī)層中；其中氧化劑為PCC氧化劑(氯鉻酸吡啶)或Jone’s氧化劑(H2CrO4/H2SO4/丙酮)；有機(jī)溶劑為二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯。
部分本發(fā)明的衍生物可以用下式反應(yīng)圖解表示制備過程(如未明確標(biāo)明，則R2、R3、R4、R6的定義前所述)反應(yīng)圖解1 由反應(yīng)圖解1可以合成的化合物類型有R2代表OH、OCOR6；R3代表CH2OH、CH2OCOR6；R4代表COOH、CONHR6、 COOR6、COOR6OH、COO(CH2)4OCOR6、COOR6OCOR6COOH、CONHR6COOCH3或CONHR6COOH。
反應(yīng)圖解2 由反應(yīng)圖解2可以合成的化合物類型有R2代表OCOR6；R3代表CH2OCOR6；R4代表COOR6OCOR6COOH或CONHR6NHCOR6COOH。
反應(yīng)圖解3 EDC為N-(3-二甲基胺丙基)-N′-乙基碳二亞胺，HOBT為1-羥基-苯并-三氮唑。
由反應(yīng)圖解3主要合成的化合物類型為R2和R3代表OH，R4代表CONHR6CONHR6COOR6或CONHR6CONHR6COOH。
反應(yīng)圖解4 其中m-CPBA為間氯過氧苯甲酸由反應(yīng)圖解4主要合成的化合物類型為R2代表OH、OCOR6；R3代表、CH2OH、CH2OCOR6R4代表COOR6；R5代表CH2＝C-CH2OH。
反應(yīng)圖解5
TrCl表示三苯基氯甲烷，DMAP為4-二甲胺基吡啶由反應(yīng)圖解5主要合成的化合物的類型有R3代表OH、OCOR6；R3代表CH2OH、CH2OCOR6R4代表COOH。
反應(yīng)圖解6 由反應(yīng)圖解6主要合成的化合物類型有R2代表OCOCOOR6；R3代表CH2OCOCOOR6；R4代表COOR6。
反應(yīng)圖解7
TBSCl為叔丁基二甲基氯硅烷，PCC為氯鉻酸吡啶PCC氧化劑，DMAP為4-二甲基胺吡啶。由反應(yīng)圖解7主要合成的化合物類型主要有R2代表＝O、NOH或NOCOR6；R3代表CH2OH、CH2OCOOR6；R4代表COOR6。
反應(yīng)圖解8
PCC為氯鉻酸吡啶PCC氧化劑，Jone’s氧化劑為H2CrO4/H2SO4/丙酮。由反應(yīng)圖解8可以得到的化合物類型有R2代表＝O；R3代表CHO或COOH。
本發(fā)明合成的部分化合物的結(jié)構(gòu)見表1表1部分化合物結(jié)構(gòu)(R1為H)

本發(fā)明的23-羥基白樺酸衍生物可以和堿形成藥學(xué)上可接受的鹽。所述堿可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰等。
藥理試驗證明，本發(fā)明的23-羥基白樺酸衍生物具有抗腫瘤作用，可以用于制備抗腫瘤藥物。優(yōu)選治療的腫瘤疾病是肝癌、肺癌、胃癌、黑色素瘤、宮頸癌、乳腺癌、白血病或腦瘤。
下面是本發(fā)明的部分化合物的藥理學(xué)試驗及數(shù)據(jù)一、體外MTT篩選方法1 取處于指數(shù)生長期狀態(tài)良好的細(xì)胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使貼壁細(xì)胞脫落，計數(shù)2～4×104個/ml，制成細(xì)胞懸液。
2 取細(xì)胞懸液接種于96孔板上，180μl/孔，置恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
3 換液，加入受試藥物，20μl/孔，培養(yǎng)48小時。
4 將MTT加入96孔板中，20μl/孔，培養(yǎng)箱中反應(yīng)4小時。
5 吸去上清液，加入DMSO，150μl/孔，平板搖床上振搖5分鐘。
6 用酶聯(lián)免疫檢測儀在波長為570nm處測定每孔的吸光值，并計算細(xì)胞抑制率

表2

表3


表4

表5

表6

2.Skehan，P；Storeng，R；Scudiero，D；Monks，A；McMahon，J；Vistica，D Warren，JT；Bokesch，H；Kenney，S；Boyd，MR.New colorimetric cytotoxicity assay foranticancer drug screening.J.natl cancer inst.1990，821107-12。

注表1～表8中BA為白樺酸，23HBA為23-羥基白樺酸。
細(xì)胞系代號表示為BGC-823表示人低分化胃腺癌細(xì)胞 BEL-7402表示人肝癌細(xì)胞A549表示人肺癌細(xì)胞 SF-763表示人腦瘤細(xì)胞SMMC-7721表示人肝癌細(xì)胞 MDA-MB-231表示人乳腺癌細(xì)胞HL-60表示人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞 HO-8910表示人卵巢癌細(xì)胞B16表示小鼠黑色素瘤細(xì)胞 HELA表示人宮頸癌細(xì)胞上述試驗表明，本發(fā)明的部分化合物對于不同的腫瘤均有一定的抑制作用，并且作用強(qiáng)于23-羥基白樺酸。
二、體內(nèi)抗腫瘤試驗化合物BY-59對小鼠H22肝癌的實驗治療作用選用18-22克雌性ICR小鼠及生長良好的7-11天的H22瘤種，接種于小鼠右側(cè)腋部皮下，約4.5-5×106細(xì)胞/只，接種24小時后隨機(jī)分籠，腹腔給藥。按不同劑量連續(xù)給藥4天或給2天停2天再給2天。第8天處死動物，稱體重、瘤重，計算各組平均瘤重，按下公式求出腫瘤抑制率并進(jìn)行T檢驗。

結(jié)果見表9。表9顯示化合物BY-59 20mg/kg對小鼠H22肝癌的腫瘤生長抑制作用大大高與23-羥基白樺酸。
表9

注23HBA為23-羥基白樺酸細(xì)胞計數(shù)后，檢測腫瘤細(xì)胞凋亡百分率(表5)，不同比活度ReO4-組和188Re-DTPA-DG組間差異有顯著性(P＜0.01)，ReO4-組和188Re-DTPA-DG組不同比活度間差異有顯著性(P＜0.01)。188Re-DTPA-DG能使腫瘤細(xì)胞凋亡發(fā)生增加，能有效治療腫瘤。
表5 不同組肺癌A549細(xì)胞凋亡百分率(x±s)

實施例33，23-二乙?；?28-白樺酸甲酯(SZ1)用5ml精制干燥的二氯甲烷將實施例2方法制備的BYA-2(0.1g，0.17mmol)溶于10ml茄形瓶中，滴加甲醇5ml，室溫攪拌6h。飽和食鹽水(5ml×3)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[石油醚(60℃～90℃)∶乙酸乙酯＝12∶1(v∶v)]，得白色粉末狀固體0.092g，總收率90.0％，mp 110～112℃。
ESI-MS593[M+Na]+1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.78(s，3H，CH3)，0.83(s，3H，CH3)，0.87(s，3H，CH3)，0.89(s，3H，CH3)，1.68(s，3H，CH3)，1.99(s，3H，CH3)，2.04(s，3H，CH3)，2.94～3.01(m，1H，C19-H)，3.64(s，3H，CH3-O)，3.59～3.68(d，1H，23-H)，3.79～3.83(d，1H，23-H)，4.57(s，1H，29-H)，4.71(s，1H，29-H)，4.71～4.77(m，1H，3-H)實施例43，23-二乙酰基-28-正丁酰胺白樺酸(XA1)將實施例2方法制備的BYA-2(0.1g，0.17mmol)溶于干燥的二氯甲烷5ml中，滴加正丁胺3ml，再滴加0.05ml三乙胺，室溫攪拌7h。9％鹽酸洗滌pH至4-5，飽和食鹽水(5ml×3)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[二氯甲烷∶丙酮＝60∶1(v∶v)]，得白色粉末狀固體0.093g，總收率85.0％，mp 115～117℃。
ESI-MS612[M+H]+1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.77(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.90～0.93(m，9H，3CH3)，1.65(s，3H，CH3)，1.99(s，3H，CH3)，2.04(s，3H，CH3)，3.13～3.15(m，1H，C19-H)，3.25～3.32(m，2H，CH2-N)，3.63～3.66(d，1H，23-H)，3.80～3.84(d，1H，23-H)，4.56(s，1H，29-H)，4.70(s，1H，29-H)，4.70～4.77(m，1H，3-H)，5.52～5.56(t，1H，H-N)實施例5
3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸酰胺甘氨酸甲酯(BY-19-3)將甘氨酸甲酯鹽酸鹽(0.07g，0.54mmol)，DMAP(0.012g，0.1mmol)溶于10ml干燥的二氯甲烷中，滴加實施例2的BYA-2(0.1g，0.17mmol)的二氯甲烷溶液，室溫攪拌12h。9％鹽酸洗滌pH至7，飽和食鹽水(5ml×3)洗滌，Na2SO4干燥，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[石油醚∶丙酮＝5∶1(v∶v)]，得白色固體0.062g，總收率55％，mp109-111℃。
ESI-MS628.3[M+H]+1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.80(s，3H，CH3)，0.87(s，3H，CH3)，0.91(s，3H，CH3)，0.96(s，3H，CH3)，1.58(s，3H，CH3)，2.01，2.06(s，各3H，3,23-COOCH3)，3.09(m，1H，C19-H)，3.76(s，3H，COOCH3)，3.76(dd，2H，23-H)，4.00(t，2H，N-CH2)，4.66(d，2H，29-H)，4.75(m，1H，3-H)，6.05(t，1H，CONH)實施例63，23-O-二乙?；?30-羥基-28-白樺酸乙酯(BYA-4-3)將3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙酯(0.1g，0.17mmol)，m-CPBA(0.03g，0.18mmol)溶解在10ml氯仿中，加熱回流反應(yīng)6h，用飽和NaHCO3(10ml*2)洗滌，然后再用10ml水洗滌，最后用飽和食鹽水10ml洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1(v∶v)]，得白色固體0.05g，總收率47％，mp110-111℃。
ESI-MS623.5[M+Na]+1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.80(s，3H，CH3)，0.87(s，3H，CH3)，0.93(s，3H，CH3)，0.96(s，3H，CH3)，1.58(s，3H，CH3)，2.01，2.06(s，各3H，3,23-COOCH3)，2.89(m，1H，C19-H)，3.76(dd，2H，23-H)，4.12(m，4H，30-CH2和28-COOCH2)，4.76(m，1H，3-H)，4.94(d，2H，29-H)實施例73，23-二羥基-28-白樺酸正戊酯(BY-61)將3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸正戊酯(0.1g，0.16mmol)溶于THF和甲醇的混合溶液6ml(v/v＝1∶1)，加入4M的NaOH溶液2ml，加熱回流反應(yīng)4小時，用10％HCl調(diào)PH至7，有固體析出，過濾，得到白色固體0.08g,，產(chǎn)率95％，mp76-78℃。
ESI-MS543.4[M+H]+1HNMR(300Hz，DMSO-D6)，δ(ppm)0.51(s，3H，CH3)，0.77(s，3H，CH3)，0.84(s，3H，CH3)，0.93(s，3H，CH3)，1.65(s，3H，CH3)，2.90(m，1H，C19-H)，3.76(s，3H，COOCH3)，3.18(dd，2H，23-H)，3.45(m，1H，3-H)，4.02(m，2H，28-COOCH2)，4.10(d，1H，3-OH)，4.57(t，1H，23-OH)，4.60(d，2H，29-H)實施例8
3，23-二羥基-28-苯甲酰胺白樺酸(I1)將3，23-O-二乙酰基-28-苯甲酰胺白樺酸(0.13g，0.20mmol)溶解于3mlTHF和1.5ml的CH3OH中，向其中滴加1.5ml的NaOH水溶液(1mol/L)，反應(yīng)液室溫攪拌過夜，減壓濃縮除去有機(jī)溶劑，加入50ml的乙酸乙酯稀釋。有機(jī)相用5％鹽酸水溶液洗滌至水層顯弱酸性，再用水洗三次，飽和食鹽水洗兩次，無水Na2SO4干燥兩小時。減壓濃縮至干，硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶3(v∶v)洗脫，得到白色固體0.10g，產(chǎn)率為95％，mp 144-146℃。
ESI-MS528[M+H]+1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)0.85(3H，s，CH3)，0.86(3H，s，CH3)，0.94(3H，s，CH3)，0.96(3H，s，CH3)，1.67(3H，s，CH3)，3.09～3.19(2H，m，N-CH2)，3.26～3.32(1H，m，C19-H)，3.40(1H，d，23-H)，3.58～3.63(1H，m，3-H)，3.70(1H，d，23-H)，4.58and 4.72(1H each，brs，29-H)，5.57(1H，t，N-H).
實施例93，23，30-三羥基-28-白樺酸乙酯(BY-65)將3，23-O-二乙?；?30-羥基-28-白樺酸乙酯(0.05g，0.083mmol)溶解于3mlTHF和1.5ml的CH3OH中，向其中滴加1.5ml的NaOH水溶液(4mol/L)，回流反應(yīng)5h，加水稀釋，調(diào)PH至7，有固體析出，過濾，得到白色固體0.04g，產(chǎn)率為95％，mp 248-250℃(dec)ESI-MS539.3[M+Na]+1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.86(s，3H，CH3)，0.87(s，3H，CH3)，0.91(s，3H，CH3)，0.96(s，3H，CH3)，1.25(s，3H，CH3)，2.89(m，1H，C19-H)，3.56(dd，2H，23-H)，3.61(m，1H，3-H)，4.13(m，4H，30-CH2和28-COO CH2)，4.93(d，2H，29-H)實施例103，23-二羥基-28-白樺酸酰胺甘氨酸(BY-26)將3，23-O-二乙?；?28-白樺酸酰胺甘氨酸甲酯(0.06g，0.096mmol)溶解于3mlTHF和1.5ml的CH3OH中，向其中滴加1.5ml的NaOH水溶液(4mol/L)，回流反應(yīng)5h，加水稀釋，調(diào)PH至4-5，有白色固體析出，過濾，得到白色固體0.048g，產(chǎn)率為95％，mp 213-215℃ESI-MS528.4[M-H]1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.52(s，3H，CH3)，0.77(s，3H，CH3)，0.83(s，3H，CH3)，0.91(s，3H，CH3)，1.62(s，3H，CH3)，2.90(m，1H，C19-H)，3.20(dd，2H，23-H)，3.29-3.73(m，4H，3-H和3-OH，23-OH，28-NCH2)，4.13(m，4H，30-CH2和28-COO CH2)，4.59(d，2H，29-H)，7.86(t，1H，28-CONH)實施例11
3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺甘氨酸酰胺甘氨酸甲酯(BY-63-3)將3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺甘氨酸(0.1g，0.19mmol)溶解在10ml二氯甲烷中，加入EDC(0.06g，0.38mmol)，HOBT(0.06g，0.48mmol)，甘氨酸甲酯鹽酸鹽(0.035g，0.29mmol)，室溫反應(yīng)過夜，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[石油醚∶丙酮＝5∶1(v∶v)]，得白色固體0.09g，總收率80％，mp213-215℃。
ESI-MS601.3[M+H]+1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.85(s，3H，CH3)，0.88(s，3H，CH3)，0.91(s，3H，CH3)，0.96(s，3H，CH3)，1.68(s，3H，CH3)，3.05(m，1H，C19-H)，3.55(dd，2H，23-H)，3.61(m，1H，3-H)，3.75(s，1H，COOCH3)，3.94-4.06(m，4H，28-NCH2*2)，4.66(d，2H，29-H)，6.33(t，1H，28-CONH)，6.66(t，1H，28-CONH)實施例123，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇單酯(BY-8)用5ml精制干燥的二氯甲烷將3，23-O-二乙?；?28-白樺酰氯溶于10ml茄形瓶中，加入大過量的乙二醇，室溫攪拌6h。飽和食鹽水(5ml×3)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[石油醚(60℃～90℃)∶乙酸乙酯＝3∶1(v∶v)]，得白色固體0.07g，總收率70.0％，mp 85-87℃。
ESI-MS601.6[M+H]+1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.80(s，3H，CH3)，0.87(s，3H，CH3)，0.93(s，3H，CH3)，0.96(s，3H，CH3)，1.68(s，3H，CH3)，2.01(s，3H，CH3)，2.06(s，3H，CH3)，2.98(m，1H，C19-H)，3.76(dd，2H，23-H)，3.83(m，2H，28-CH2OH)，4.23(m，2H，28-COOCH2)，4.66(d，2H，29-H)，4.74～4.77(m，1H，3-H)實施例133，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇琥珀酸雙酯(BY-44)將3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸酯乙基醇(0.07g，.0.12mmol)，丁二酸酐(0.05g，0.5mmol)，DMAP(0.012g，0.1mmol)溶解在10ml二氯甲烷中，室溫反應(yīng)16h，用10％HCl(2*10ml)，用水10ml洗滌，最后用10ml飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[石油醚(60℃～90℃)∶乙酸乙酯∶乙酸＝50∶50∶0.4(v∶v)]，得淡黃色固體0.057g，總收率70.0％，mp 78-80℃。
ESI-MS699.3[M-H]-1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.81(s，3H，CH3)，0.87(s，3H，CH3)，0.91(s，3H，CH3)，0.96(s，3H，CH3)，1.68(s，3H，CH3)，2.01(s，3H，CH3)，2.06(s，3H，CH3)，2.66(m，4H，28-OCOCH2CH2COO)，3.00(m，1H，C19-H)，3.76(dd，2H，23-H)，3.75(m，2H，28-CH2OH)，4.29(m，4H，28-COOCH2CH2O)，4.66(d，2H，29-H)，4.73(m，1H，3-H)實施例143，23-O-二琥珀酸單?；讟逅?BY-24-2)將23-羥基白樺酸(0.1g，0.21mmol)，丁二酸酐(0.12g，1.2mmol)，DMAP(0.05g，0.4mmol)溶解在10ml吡啶中，加熱至90℃。反應(yīng)48h，反應(yīng)液倒入冷水中，用10％HCl調(diào)PH至4-5，有固體析出，過濾，濾餅用二氯甲烷溶解制沙，柱層析[石油醚(60℃～90℃)∶乙酸乙酯∶乙酸＝50∶50∶0.4(v∶v)]，得淡黃色固體0.09g，總收率75％，mp 153-155℃。
ESI-MS671.3[M-H]-1HNMR(300Hz，DMSO-D6)，δ(ppm)0.75(s，3H，CH3)，0.83(s，3H，CH3)，0.86(s，3H，CH3)，0.94(s，3H，CH3)，1.64(s，3H，CH3)，2.45(m，8H，3，23-COCH2CH2CO)，2.90(m，1H，C19-H)，3.70(dd，2H，23-H)，4.62(d，2H，29-H)，4.67(m，1H，3-H)，12.10(s，3H，3，23，28-COOH)實施例153-羥基-23-O-三苯基甲醚白樺酸(BY-34-1)將23-羥基白樺酸(0.1g，0.21mmol)，三苯基氯硅烷(0.12g，0.42mmol)，DMAP(0.014g，0.12mmol)，溶解在10ml吡啶中，加熱至90℃。反應(yīng)24h，反應(yīng)液倒入冷水中，用10％HCl調(diào)PH至4-5，有固體析出，過濾，濾餅用二氯甲烷溶解制沙，柱層析[石油醚(60℃～90℃)∶乙酸乙酯＝3∶1(v∶v)]，得灰白色固體0.10g，總收率65％，mp200-202℃。
ESI-MS737[M+Na]+1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.71(s，3H，CH3)，0.82(s，3H，CH3)，0.89(s，3H，CH3)，1.00(s，3H，CH3)，1.69(s，3H，CH3)，2.99～3.00(m，1H，C19-H)，2.77～2.80(d，1H，23-H)，3.18～3.21(d，1H，23-H)，3.59～3.65(m，1H，3-H)，4.61(s，1H，29-H)，4.74(s，1H，29-H)，7.23～7.46(m，15H，3ArH)實施例163-O-鄰苯二甲酸單酰基-23-O-三苯基甲醚白樺酸(BY-30-3)將3-羥基-23-O-三苯基甲醚-28-白樺酸(0.1g，0.14mmol)，鄰苯二甲酸酐(0.04g，0.28mmol)，DMAP(0.012g，0.1mmol)，溶解在10ml吡啶中，加熱至90℃。反應(yīng)24h，反應(yīng)液倒入冷水中，用10％HCl調(diào)PH至4-5，有固體析出，過濾，濾餅用二氯甲烷溶解制沙，柱層析[石油醚(60℃～90℃)∶乙酸乙酯∶乙酸＝50∶50∶0.4(v∶v)]，得灰白色固體0.07g，總收率60％。
ESI-MS885.5[M+Na]+
實施例173-O-鄰苯二甲酸單?；?23-羥基白樺酸(BY-30-4)將3-O-(2-酸苯甲酸酯)-23-O-三苯基甲醚-28-白樺酸(0.07g，0.08mmol)溶解在10ml氯仿中，加入2ml甲酸，回流反應(yīng)4h，蒸干，加水，有固體析出，過濾，濾餅用二氯甲烷溶解制沙，柱層析[石油醚(60℃～90℃)∶乙酸乙酯∶乙酸＝50∶50-0.4(v∶v)]，得黃色固體0.035g，總收率65％，mp 280℃(dec)。
ESI-MS647.4[M-H]+1HNMR(300Hz，DMSO-D6)，δ(ppm)0.74(s，3H，CH3)，0.84(s，3H，CH3)，0.89(s，3H，CH3)，0.96(s，3H，CH3)，1.65(s，3H，CH3)，2.95(m，1H，C19-H)，3.91(d，1H，23-H)，4.24(d，1H，23-H)，4.56(s，1H，29-H)，4.69(s，1H，29-H)，4.82(m，1H，3-H)，7.23～7.61(m，4H，ArH)實施例183-O-苯甲酸酯-23-三苯基甲醚白樺酸(LD-34)用10ml吡啶將3-羥基-23-O-三苯基甲醚-28-白樺酸(0.1g，0.14mmol)溶于25ml圓底燒瓶中，加入苯甲酰氯(0.1ml，0.86mmol)，再加入DMAP(0.012g，0.1mmol)，室溫攪拌2h。20ml乙酸乙酯稀釋，9％鹽酸洗滌pH至4-5，飽和食鹽水(10ml×3)洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[石油醚(60℃～90℃)∶乙酸乙酯＝10∶1(v∶v)]，得白色粉末狀固體0.08g，收率70％ESI-MS841[M+Na]+實施例193-羥基-23-O-苯甲酸酯白樺酸(XB3a)將3-O-苯甲酸酯-23-三苯基甲醚-28-白樺酸(0.08g，0.097mmol)溶于10ml干燥的二氯甲烷中，滴加1ml甲酸，室溫攪拌30min。飽和NaHCO3溶液洗滌pH至7-8，飽和食鹽水(10ml×3)洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[石油醚(60℃～90℃)∶乙酸乙酯＝8∶1(v∶v)]，得白色粉末狀固體0.033g，收率55.6％，mp 144～145℃。
ESI-MS575[M-H]-1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.88(s，3H，CH3)，0.89(s，3H，CH3)，1.02(s，6H，2CH3)，1.72(s，3H，CH3)，3.03～3.09(m，1H，C19-H)，3.42～3.50(d，1H，23-H)，3.62～3.65(t，1H，3-H)，3.73～3.74(d，1H，23-H)，4.65(s，1H，29-H)，4.77(s，1H，29-H)，7.49～8.05(m，5H，ArH)實施例203-酮-23-醛白樺酸(Y1)將23-羥基白樺酸(0.12g，0.25mmol)溶于10ml二氯甲烷25ml中，加入載于氧化鋁的PCC(0.66g，0.5mmol)，室溫攪拌。15min后，反應(yīng)液由黃橙色變?yōu)樽厣?。繼續(xù)攪拌5.5h，停止反應(yīng)，傾出上清液。加入無水乙醚10ml，充分?jǐn)嚢?5min，傾出上清液。以同樣的方法用無水乙醚再處理兩次。合并有機(jī)層，流經(jīng)一硅膠短柱，濃縮制砂。柱層析[二氯甲烷∶丙酮＝100∶1(v∶v)]，得白色粉末狀固體0.082g，收率70.5％，mp 210～212℃。
1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.97～1.25(m，9H，3CH3)，1.27(s，3H，CH3)，1.70(s，3H，CH3)，2.99～3.03(m，1H，C19-H)，4.62(s，1H，29-H)，4.75(s，1H，29-H)，9.34(s，1H，H-C＝O)Anal.C30H44O4Found(％)C 76.32 H 9.74Calcd(％)C 76.88 H 9.46實施例213-酮-23-酸白樺酸(Y2)將23-羥基白樺酸(0.12g，0.25mmol)溶于10ml丙酮25ml中，滴加新鮮制備的Jones氧化劑，直到反應(yīng)液短時間內(nèi)不再變?yōu)榫G色，再加入一倍量的氧化劑，冰浴下攪拌1.5h。加入1ml甲醇充分?jǐn)嚢?5min，溶液由黃褐色變?yōu)榫G色。再加入10ml水，然后將有機(jī)溶劑蒸干。乙酸乙酯(10ml×3)提取水層，合并。飽和食鹽水(10ml×3)洗滌合并的有機(jī)層，無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮制砂。柱層析[二氯甲烷∶丙酮＝120∶1(v∶v)]，得白色粉末狀固體0.073g，收率60.7％，mp 218～220℃。
ESI-MS439[M-COOH]-1HNMR(300Hz，CDCl3)，δ(ppm)0.96～1.02(m，12H，4CH3)，1.69(s，3H，CH3)，2.98～3.03(m，1H，C19-H)，4.61(s，1H，29-H)，4.74(s，1H，29-H)實施例223-羥基-23-O-叔丁基二甲基硅醚-28-白樺酸甲酯(XP-5)將3，23-二羥基-28-白樺酸甲酯(0.23g，0.47mmol)，DMAP(0.10g，0.82mmol)溶解在10ml干燥的CH2Cl2中，迅速加入叔丁基二甲基氯硅烷(TBSCl)(0.13g，0.86mmol)，室溫攪拌過夜，加入2ml水分解過量的TBSCl，攪拌半小時，再加入40ml CH2Cl2稀釋反應(yīng)液。有機(jī)相依次用5％鹽酸水溶液(3×20ml)、水(2×20ml)和飽和食鹽水(2×20ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥兩小時，減壓濃縮至干。硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯＝16∶1(v∶v)洗脫，得到0.26g白色粉末狀固體，產(chǎn)率92％，mp156～158℃。
ESI-MS623[M+Na]+1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)0.065(3H，s，SiCH3)，0.068(3H，s，SiCH3)，0.84(3H，s，CH3)，0.86(3H，s，CH3)，0.90(9H，s，3×CH3)，0.91(3H，s，CH3)，0.95(3H，s，CH3)，1.68(3H，s，CH3)，2.18～2.24(2H，m，2-H2)，2.97～3.01(1H，m，C19-H)，3.33(1H，d，23-H)，3.54～3.60(1H，m，3-H)，3.63(1H，d，23-H)，3.66(3H，s，OCH3)，4.59and 4.73(1H eaeh，brs，29-H).
實施例223-酮-23-O-叔丁基二甲基硅醚-28-白樺酸甲酯(XP-6)將3-羥基-23-O-叔丁基二甲基硅醚-28-白樺酸甲酯(0.22g，0.37mmol)溶解于10ml干燥的二氯甲烷中，室溫下，加入PCC(0.24g，1.11mmol)，攪拌3小時，黑色混合物用40ml無水乙醚稀釋，直接加入0.5g硅膠室溫減壓濃縮至干，硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯＝30∶1(v∶v)洗脫，得到0.14g的白色粉末狀固體，產(chǎn)率64.5％，mp137～139℃。
ESI-MS599[M+H]+1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ0.01(6H，s，2×SiCH3)，0.84(3H，s，CH3)，0.85(3H，s，CH3)，0.87(9H，s，3×CH3)，0.96(3H，s，CH3)，0.98(3H，s，CH3)，1.69(3H，s，CH3)，2.97～3.01(1H，m，C19-H)，3.29(1H，d，J＝9.2Hz，23-H)，3.57(1H，d，J＝9.2Hz，23-H)，3.67(3H，s，OCH3)，4.60 and 4.74(1Heach，brs，29-H).
實施例233-酮-23-羥基-28-白樺酸甲酯(I1)將3-酮-23-O-叔丁基二甲基硅醚-28-白樺酸甲酯(0.16g，0.27mmol)溶于5ml的THF中，向其中滴加1ml四丁基氟化銨的THF溶液(0.5mol/L)，室溫攪拌3小時，減壓濃縮至干，硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1(v∶v)洗脫，得0.11g白色固體，產(chǎn)率90％，mp186～188℃。
ESI-MS485[M+H]+1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)0.97(6H，s，2×CH3)，1.00(3H，s，CH3)，1.04(3H，s，CH3)，1.68(3H，s，CH3)，2.25～2.29(1H，m，2-H)，2.55～2.63(1H，m，2-H)，3.00～3.04(1H，m，C19-H)，3.40(1H，d，23-H)，3.62(1H，d，23-H)，3.67(3H，s，OCH3)，4.60 and 4.73(1Heach，brs，29-H).
實施例243-肟基-23-羥基-28-白樺酸甲酯(III)將3-酮-23-OH白樺酸甲酯(0.30g，0.60mmol)，鹽酸羥胺(0.3g，4.20mmol)溶解于10ml吡啶中，50℃攪拌4小時，反應(yīng)液冷卻至室溫后，加入40ml乙酸乙酯稀釋。分離有機(jī)層，并依次用5％鹽酸水溶液(3×20ml)、水(2×20ml)、飽和食鹽水(2×20ml)洗滌。有機(jī)層用無水Na2SO4干燥兩小時后，減壓濃縮至干。硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1(v∶v)洗脫，得0.29g白色粉末狀固體，產(chǎn)率95％，mp114～116℃。
ESI-MS500[M+H]+1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)0.92(6H，s，2×CH3)，0.95(3H，s，CH3)，1.02(3H，s，CH3)，1.68(3H，s，CH3)，2.96～3.12(2H，m；2-H，C19-H)，3.49(1H，d，23-H)，3.64(1H，d，23-H)，3.66(3H，s，OCH3)，4.60 and 4.73(1H each，br s，29-H).
實施例253-酮-23-乙?；?28-白樺酸甲酯(II1)將3-酮-23-OH白樺酸甲酯(0.06g，0.12mmol)，DMAP(0.014g，0.12mmol)和乙酸酐(0.06g，0.6mmol)溶解于5ml干燥的CH2Cl2中，室溫攪拌10h，加入20ml CH2Cl2稀釋。有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液洗3次，5％鹽酸水溶液洗2次，水洗2次，飽和食鹽水洗1次，無水Na2SO4干燥2小時，減壓濃縮至干，柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1(v∶v)洗脫，得到白色粉末狀固體0.062g，產(chǎn)率99％，mp58～60℃。
ESI-MS527[M+H]+1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)0.94(3H，s，CH3)，0.96(3H，s，CH3)，0.98(3H，s，CH3)，0.99(3H，s，CH3)，1.68(3H，s，CH3)，2.02(3H，s，COCH3)，2.42～2.50(2H，m，2-H2)，2.95～3.04(1H，m，C19-H)，3.67(3H，s，OCH3)，4.00～4.10(2H，m，23-H2)，4.60，4.74(1Heach，brs，29-H).
實施例263-乙酰基肟基-3-O-乙?；?28-白樺酸甲酯(III1)將3-肟基-23-羥基-28-白樺酸甲酯(0.1g，0.20mmol)和乙酸酐(0.2g，2mmol)溶解于5ml的無水吡啶中，90℃油浴反應(yīng)過夜，反應(yīng)時間24小時。冷卻至室溫，加入40ml乙酸乙酯稀釋。分離有機(jī)層，然后依次用5％鹽酸水溶液(3×20ml)，飽和NaHCO3水溶液(3×20ml)、水(2×20ml)、飽和食鹽水(2×20ml)洗滌。有機(jī)層用無水Na2SO4干燥兩小時后，減壓濃縮至干，粗產(chǎn)品經(jīng)柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1(v∶v)洗脫，得白色固體0.11g，產(chǎn)率95％，mp156～160℃。
ESI-MS606[M+Na]+1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)0.85(3H，s，CH3)，0.95(3H，s，CH3)，0.96(3H，s，CH3)，1.16(3H，s，CH3)，1.68(3H，s，CH3)，2.05(3H，s，CH3-CO)，2.17(3H，s，CH3-CO)，2.58～2.66(2H，m，2-H2)，3.00(1H，m，C19-H)，3.67(3H，s，OCH3)，4.08(1H，d，23-H)，4.18(1H，d，23-H)，4.61and 4.74(1H each，br s，29-H).
實施例273，23-二羥基-28-白樺酸丙烯酯(BY-59)
用5ml精制干燥的二氯甲烷將實施例2方法制備的BYA-2(0.1g，0.17rnmol)溶于10ml茄形瓶中，滴加丙烯醇2ml，室溫攪拌6h。飽和食鹽水(5ml×3)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干用乙醇重結(jié)晶，過濾，濾餅溶于THF和甲醇的混合溶液8ml(v/v＝1∶1)，加入NaOH溶液(4mol/L)2ml，加熱回流反應(yīng)4小時，加水稀釋，用10％HCl調(diào)PH至7，有固體析出，過濾，濾餅用丙酮溶解濃縮制砂。柱層析[石油醚(60～90℃)∶乙酸乙酯＝1∶1(v∶v)]，得白色粉末狀固體0.07g，總收率75.5％，mp111-112℃ESI-MS513.3[M+H]+1HNMR(300Hz，DMSO-D6)，δ(ppm)0.51(s，3H，CH3)，0.77(s，3H，CH3)，0.83(s，3H，CH3)，0.93(s，3H，CH3)，1.65(s，3H，CH3)，2.90(m，1H，C19-H)，3.18(dd，2H，23-H)，3.45(m，1H，3-H)，4.55(m，2H，28-COOCH2)，，4.60(d，2H，29-H)，5.27(m，2H，CH＝CH2)，5.92(m，1H，CH＝CH2)實施例28取實施例27方法制得的化合物50mg與淀粉500mg，糊精500mg混合，用適量30％乙醇作濕潤劑，制成軟材，常規(guī)方法制粒，加入2mg硬脂酸鎂混合，制成片劑。
權(quán)利要求
1.通式I的23-羥基白樺酸衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1代表H、Br、Cl或F；R2代表OH、OR6、OCOR6、OSO2R6、OSO2NH2、NH2、NHCH2OR6、NHR6、N(R6)2、NOR6、OCOR6NHR6、NHCOR6、NHCOR6(COOH)X、NHSO2R6、NHNHR6、NHNHCH(OH)R6、OCOR6COOH、OCOCH(OH)CH(Ph)R7、OCOCOOR6、NOSO3H、NOR6或NHOR6；R3代表H、CH2OH，CHO、COOH、CH2OR6、CH2OCOR6、CH2OSO2R6、CH2OCOR6NHR6、CH2NHCOR6、CH2NHCOR6(COOH)X、CH2NHSO2R6X、CH2NHNHR6、CH2NHNHCH(OH)R6、CH2OCOR6COOH、CH2OCOCH(OH)CH(Ph)R7、CH2OCOCOOR6、CH2NOSO3R6、CH2NOR6或CH2NHOR6；R4代表與R3相同的基團(tuán)，或者代表COOM、COCl、CON3、CONH2、COOR6、CONR6、CON(R6)2、COOR6COZ、COOR6OX、COO(CH2)mCH＝CH(CH2)nOR6、COO(CH2)mC≡C(CH2)nOR6、COOCOCH＝C(R6)2、COOCOR6、COOR6OCOR6、COOR6OCOR6COOH、CONHR6NHCOR6COOH，CONHR6COOR6、CONHR6CONHR6COOR6、COOR6CHO、COOCH2CH＝NOA、COOCH2CH2NHOA、COOCH2CH＝NR6、COOCH2CH2NHNHR6或COOCH2CH2N(R6)2；R5代表CH2＝C-CH3、CH2＝C-CH2OH、CH3CHCH3或CH2＝C-CH2Br；R6代表H、非取代或X取代的C1-C10直鏈或支鏈的烷烴、烯烴、炔烴、環(huán)烷烴、苯基、芐基、萘基；并且，當(dāng)R2為OH、R4為COOH或CH2OH時，R6不為H；R7代表NH2或NHR6X；X代表H、Cl、Br、F、I、CN、NH2，NO2、CF3、OH、OCH3、COOH，COOCH3，C1-C10直鏈或支鏈的烷烴、烯烴、炔烴、環(huán)烷烴、苯基、芐基、萘基；Z代表OH、OR6、鹵素、N3或NH2；A代表H、CH3、SO2C6H4CH3、OCOR6或R6；M代表Na、K、Li；m＝1-8，n＝1-8。
2.權(quán)利要求1的23-羥基白樺酸衍生物，其中R1代表H；R2代表OH、OCOR6、OCOR6COOH、＝O、NOH、NOCOR6、OCOCOOR6；R3代表H、CH2OH、CH2OCOR6、CH2OCOR6COOH、CH2OCOC6H5、CHO、COOH、CH2OCOCOOR6；R4代表COOH、CONHR6、 COOR6、COOR6OH、COO(CH2)4OCOR6、COOR6OCOR6COOH、CONHR6NHCOR6COOH，CONHR6COOCH3、CONHR6COOH、CONHR6CONHR6COOR6，CONHR6CONHR6COOH或CH2OH；R5代表CH2＝C-CH3或CH2＝C-CH2OH；R6代表H、非取代或X取代的C1-C10直鏈或支鏈的烷烴、烯烴、炔烴、環(huán)烷烴、苯基、芐基、萘基；并且，當(dāng)R2為OH、R4為COOH或CH2OH時，R6不為H；X代表H、Cl、Br、F、I、CN、NH2，NO2、CF3、OH、OCH3、COOH，COOCH3，C1-C10直鏈或支鏈的烷烴、烯烴、炔烴、環(huán)烷烴、苯基、芐基或萘基。
3.權(quán)利要求2的23-羥基白樺酸衍生物，為下列任一結(jié)構(gòu)的化合物3，23-O-二乙?；?30-羥基-28-白樺酸甲酯；3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺甘氨酸；3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺丙氨酸；3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺谷氨酸；3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺纈氨酸；3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺亮氨酸；3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺苯丙氨酸；3，23-O-二琥珀酸單?；讟逅?；3，23-O-二苯乙?；讟逅?；3-酮-23-醛白樺酸；3-O-鄰苯二甲酸單?；?23-羥基-白樺酸；3-羥基-23-O-苯甲?；讟逅幔?，23-O-二乙酰基-28-白樺酸酰胺甘氨酸甲酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸酰胺谷氨酸二甲酯；3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸酰胺丙氨酸甲酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸酰胺亮氨酸甲酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸酰胺苯丙氨酸甲酯；3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸酰胺纈氨酸甲酯；3，23-二羥基-28-白樺酸正辛酯；3，23-二羥基-28-白樺酸正己酯；3，23-二羥基-28-白樺酸正庚酯；3，23-二羥基-28-白樺酸環(huán)己酯；3，23-二羥基-28-白樺酸丙烯酯；3，23-二羥基-28-白樺酸丙炔酯；3，23-二羥基-28-白樺酸丁二醇單酯；3，23-二羥基-28-白樺酸乙二醇單酯；3，23-二羥基-28-白樺酸己二醇單酯；3，23-二羥基-28-白樺酸丁炔二醇單酯；3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸正丁酰胺；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸異丙酰胺；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸環(huán)己酰胺；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸二正丁酰胺；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸苯乙酰胺；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸二乙酰胺；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸(3，4-亞甲二氧)苯乙酰胺；3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸(α-甲基)芐酰胺；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸甲酯；3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸異丁酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸異丙酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸丙烯酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸丙炔酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇單酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸丁二醇單酯；3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸丁炔二醇單酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸己二醇單酯；3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸丁二醇丁二酸雙酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸丁二醇戊二酸雙酯；3，23-O-二乙酰基-28-白樺酸己二醇戊二酸雙酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇丁二酸雙酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇戊二酸雙酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇鄰苯二甲酸雙酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸己二醇丁二酸雙酯；3，23-O-二乙?；?28-白樺酸乙二醇順丁烯二酸雙酯；3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺甘氨酸酰胺甘氨酸甲酯。
4.權(quán)利要求1、2或3的23-羥基白樺酸衍生物的制備方法，當(dāng)R2為OCOR6或OCOR6COOH、＝O；R3為CH2OCOR6、CH2OCOR6COOH、CH2OCOC6H5、CHO或COOH時，制備步驟包括a、用大過量的酸酐或酰氯或氧化劑處理23-羥基白樺酸4-48個小時，溫度為室溫至120C；b、向步驟a的溶液中加入水；c、用有機(jī)溶劑萃取，得到有機(jī)層，其中，氧化劑為氯鉻酸吡啶或H2CrO4/H2SO4/丙酮，有機(jī)溶劑為二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯；當(dāng)R2為OCOR6；R3為CH2OCOR6；R4為COOR6OH、COO(CH2)4OCOR6或COOR6OCOR6COOH時，制備步驟包括a、將3，23-O-二?；?17-酰氯白樺酸衍生物溶解在二醇中，反應(yīng)1-48小時，得到3，23-O-二?；?28-白樺酸二醇單酯衍生物；b、將a產(chǎn)物溶解在鹵代有機(jī)溶劑中，加入酸酐或二酸酐和有機(jī)堿，反應(yīng)1-48小時，得到3，23-O-二?；?28-白樺酸二醇單酸雙酯或3，23-O-二?；?28-白樺酸二醇二酸雙酯，其中鹵代有機(jī)溶劑為二氯甲烷、氯仿或四氯化碳；R2、R3、R4、R6的定義如權(quán)利要求1。
5.權(quán)利要求1、2或3的23-羥基白樺酸衍生物的制備方法，當(dāng)R2為OH或OCOR6；R3為CH2OH、CH2OCOR6；R4為CONHR6COOCH3、CONHR6COOH、CONHR6CONHR6COOR6或CONHR6CONHR6COOH時，制備步驟包括a.將氨基酸酯或氨基酸酯鹽酸鹽溶解在鹵代有機(jī)溶劑中，加入3，23-O-二酰基-28-白樺酸酰氯反應(yīng)1-48小時，得到3，23-O-二?；?28-白樺酸酰氨氨基酸酯；b.將a產(chǎn)物溶解在鹵代有機(jī)溶劑或四氫呋喃與甲醇的溶液中，加入1-8mol/L的強(qiáng)堿溶液，回流反應(yīng)1-8小時，得到3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺氨基酸；c.將縮合劑、有機(jī)堿以及氨基酸酯或氨基酸酯鹽酸鹽及上述產(chǎn)物溶解在鹵代溶劑中，反應(yīng)1-48小時，得到3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺氨基酸酰胺氨基酸酯；d.將c產(chǎn)物溶解在鹵代有機(jī)溶劑或醚與甲醇的溶液中，加入1-8mol/L的強(qiáng)堿溶液，回流反應(yīng)1-8小時，得到3，23-二羥基-28-白樺酸酰胺氨基酸酰胺氨基酸；其中鹵代溶劑為二氯甲烷、氯仿或四氯化碳；強(qiáng)堿溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液；縮合劑為N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、N-(3-二甲基胺丙基)-N′-乙基碳二亞胺；有機(jī)堿為4-二甲基胺吡啶、1-羥基-苯并-三氮唑或N-甲基嗎啉；當(dāng)R2為OH或OCOR6；R3為CH2OH或CH2OCOR6；R4為COOR6；R5為CH2＝C-CH2OH時，制備步驟包括a.將3，23-O-?；?28-羧酸酯白樺酸與間氯過氧苯甲酸溶解在鹵代溶劑中，回流反應(yīng)4-10小時，得到3，23-O-二?；?30-羥基-28-羧酸酯白樺酸；b.將a產(chǎn)物溶解在鹵代有機(jī)溶劑或四氫呋喃與甲醇的溶液中，加入1-8mol/L的強(qiáng)堿溶液，回流反應(yīng)1-8小時，得到3，23，30-三羥基-17-羧酸酯白樺酸；其中鹵代溶劑為二氯甲烷、氯仿或四氯化碳；強(qiáng)堿溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液；R2、R3、R4、R6的定義如權(quán)利要求1。
6.權(quán)利要求1、2或3的23-羥基白樺酸衍生物的制備方法，當(dāng)R2為OH、OCOR6、OCOR6COOH、＝O、NOH或NOCOR6；R3為OH時，制備步驟包括a、用三苯基氯甲烷或二甲基叔丁基氯硅烷保護(hù)23-OH白樺酸或28-COOR6；b、適量的酸酐或酰氯或氧化劑處理a所得產(chǎn)品4-48個小時，溫度為室溫至120℃；c、向步驟b的溶液中加入水；d、用有機(jī)溶劑萃取，得到有機(jī)層；e、將d產(chǎn)物在甲酸溶液中脫去保護(hù)基團(tuán)，得到3-O-?；?23-羥基-28-白樺酸或3-酮-23-羥基-28-白樺酸；f、將e產(chǎn)物3-酮-23-羥基-28-白樺酸酯，鹽酸羥胺溶解于吡啶中，室溫至70℃攪拌至反應(yīng)完全；g、將f產(chǎn)物用有機(jī)溶劑萃取，得到有機(jī)層；其中氧化劑為氯鉻酸吡啶或H2CrO4/H2SO4/丙酮；有機(jī)溶劑為二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯；R2、R3、R6的定義如權(quán)利要求1。
7.藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1、2或3的通式I的23-羥基白樺酸衍生物及藥學(xué)上可接受的載體。
8.權(quán)利要求1、2或3的23-羥基白樺酸衍生物用于制備治療腫瘤疾病的藥物的用途。
9.權(quán)利要求8的用途，其中腫瘤疾病是肝癌、肺癌、胃癌、黑色素瘤、宮頸癌、乳腺癌、白血病或腦瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及天然藥物及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類經(jīng)修飾的23－羥基白樺酸衍生物(I)，R
文檔編號A61K31/56GK1861627SQ20061004027
公開日2006年11月15日 申請日期2006年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月12日
發(fā)明者吳曉明, 徐進(jìn)宜, 畢毅, 周金培, 張陸勇, 袁貹濤, 李丹, 徐萍 申請人:中國藥科大學(xué)