專利名稱：蛇床內(nèi)酯的醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說是蛇床內(nèi)酯(cnidilide)的醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
蛇床內(nèi)酯(cnidilide)，又名蛇床酞內(nèi)酯、化學(xué)名為正丁基四氫苯酞。蛇床內(nèi)酯是從藁本、川芎、芹菜籽等植物中提取的3-烴基苯酞類化合物。
蛇床內(nèi)酯分子結(jié)構(gòu)式近年國(guó)內(nèi)外多側(cè)重于藁本內(nèi)酯等幾個(gè)具代表性的3-烴基苯酞類化合物的研究，而對(duì)于蛇床內(nèi)酯的藥理活性研究則較少，已有文獻(xiàn)報(bào)道的蛇床內(nèi)酯藥理活性有以下幾方面降低血液粘稠度Naito Takashi，Kubota Kiyoshi，Shimoda Yumi，et al.Effects of constituentsof a Chinese crude drug，Ligustici Chuanxiong Rhizoma，on vasoconstriction and bloodviscosity.Nat Med，49(3)288-92、松弛肌肉Ozaki Yukihiro，Sekita Setsuko，HaradaMasatoshi.Centrally acting muscle relaxant effect of phthalides(ligustilide，cnidilide and senkyunolide)obtained from Cnidium officinale Makino.Yakugaku Zasshi，109(6)402-6。關(guān)于蛇床內(nèi)酯抗心腦缺血方面的活性則未見報(bào)道。
心腦血管疾病是危害人類生命與健康的常見病和多發(fā)病，具有發(fā)病率高、致殘率、死亡率高和復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，是中老年人致死、致殘的主要疾病。我國(guó)心腦血管病患者人數(shù)呈逐年上升趨勢(shì)，年齡呈年輕化趨勢(shì)。新型有效的防治心腦血管病藥物的開發(fā)已刻不容緩。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了蛇床內(nèi)酯在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。具體為蛇床內(nèi)酯在制備治療或預(yù)防缺血性心臟病與缺血性腦血管病的藥物中的應(yīng)用。其中缺血性心臟病包括心絞痛、心肌梗死；缺血性腦血管病包括短暫性腦缺血發(fā)作、腦梗塞。
我們的研究結(jié)果表明蛇床內(nèi)酯能改善模型大鼠心肌缺血及腦缺血，從而為蛇床內(nèi)酯治療缺血性心腦血管疾病提供藥效學(xué)支持。
本發(fā)明提供了蛇床內(nèi)酯在制備治療或預(yù)防腦缺血/再灌注損傷的藥物中的應(yīng)用。
蛇床內(nèi)酯是一種已知的具有藥物活性的物質(zhì)，因此，可以按常規(guī)制劑方法，將其制備成臨床適用的任何一種藥劑，例如片劑、膠囊劑、顆粒劑等口服固體制劑、口服液體制劑、注射劑等。
在制備上述制劑的過程當(dāng)中，可以將蛇床內(nèi)酯與任何一種適用于制備成臨床藥劑的賦型劑混合使用，制備成藥物制劑。
通過本發(fā)明，蛇床內(nèi)酯可有效用于預(yù)防或治療缺血性心腦血管疾病，并且副作用小。
由于蛇床內(nèi)酯在制備治療或預(yù)防缺血性心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用是發(fā)明人的首次發(fā)現(xiàn)，因此，無論是蛇床內(nèi)酯單獨(dú)使用為活性成分制成的藥劑，還是利用蛇床內(nèi)酯的抗心腦缺血活性與其他活性成分配合使用制成的藥劑，均在本專利的保護(hù)范圍之內(nèi)。
本發(fā)明通過下列實(shí)施方式證明了蛇床內(nèi)酯在治療或預(yù)防缺血性心腦血管疾病方面的用途，但不僅限于這些實(shí)施例。
具體實(shí)施例方式制備例1取傘形科植物灰綠葉當(dāng)歸(Angelica glauca Edgew.)的干燥根莖，粉碎成粗粉，CO2超臨界萃取，萃取壓力為25MPa、萃取溫度為40℃、萃取時(shí)間為6小時(shí)、CO2流量為2L/Kg當(dāng)歸·h，萃取液過濾，濾液靜置，取油層，即得灰綠葉當(dāng)歸精油。精油收率平均約為1.5％。
硅膠柱層析分離蛇床內(nèi)酯，精油與柱層析硅膠比例為1∶10，以石油醚(30-60℃)乙醚梯度洗脫劑，收集蛇床內(nèi)酯組分，回收溶劑，即得。
制備例2取傘形科植物新疆藁本(Conioselinum vaginatum Thell)的干燥根莖，粉碎成粗粉，CO2超臨界萃取，萃取壓力為25MPa、萃取溫度為40℃、萃取時(shí)間為6小時(shí)、CO2流量為2L/Kg當(dāng)歸·h，萃取液過濾，濾液靜置，取油層，即得新疆藁本精油。精油收率平均約為1.5％。
硅膠杜層析分離蛇床內(nèi)酯，精油與柱層析硅膠比例為1∶10，以石油醚(30-60℃)乙醚梯度洗脫劑，收集蛇床內(nèi)酯組分，回收溶劑，即得。
試驗(yàn)例1蛇床內(nèi)酯對(duì)大鼠局部腦缺血損傷的影響1試驗(yàn)材料
1.1動(dòng)物Wistar大鼠共90只，SPF級(jí)，體重250～300g。購(gòu)自昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，自由飲水進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)2-3d，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在(24±1)℃，相對(duì)濕度為40％-80％。
1.2藥品、試劑及設(shè)備蛇床內(nèi)酯按制備例2方法制備。
尼莫地平注射液規(guī)格10mg/50ml/瓶，拜爾醫(yī)藥保健有限公司生產(chǎn)。
紅四氮唑美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。
10％水合氯醛溶液規(guī)格100ml。購(gòu)自海南省人民醫(yī)院。
2分組與給藥將Wistar大鼠隨機(jī)分為9組，每組10只，具體如下(1)假手術(shù)組(等容量溶劑)；(2)模型對(duì)照組(等容量溶劑)；(3)蛇床內(nèi)酯低劑量組(5mg/kg，ig)；(4)蛇床內(nèi)酯中劑量組(10mg/kg，ig)；(5)蛇床內(nèi)酯高劑量組(20mg/kg，ig)；(6)蛇床內(nèi)酯低劑量組(2.5mg/kg，iv)；(7)蛇床內(nèi)酯中劑量組(5mg/kg，iv)；(8)蛇床內(nèi)酯高劑量組(10mg/kg，iv)；(9)尼莫地平組(Nim，1.5mg/kg)。
給藥方法灌胃給藥造模前一周開始。腹腔注射給藥術(shù)后靜脈注射相應(yīng)藥物(給藥體積1ml/200g)。
3試驗(yàn)方法大鼠禁食12小時(shí)后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，夾閉頸內(nèi)、頸總動(dòng)脈，頸外動(dòng)脈近心端及遠(yuǎn)心端結(jié)扎，中間剪斷。將頸外動(dòng)脈游離端拉至與頸內(nèi)動(dòng)脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24mm尼龍線，長(zhǎng)度5.0cm)由頸外動(dòng)脈插入至顱內(nèi)，遇輕微阻力時(shí)停止，插入深度約為2cm。結(jié)扎頸外動(dòng)脈開口，并打開頸總動(dòng)脈動(dòng)脈夾，消毒縫合傷口，造成左側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血模型；假手術(shù)組僅進(jìn)行右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈的分離(以上實(shí)驗(yàn)均在23℃～25℃進(jìn)行)。24小時(shí)后按文獻(xiàn)劉小光，徐理納，一種能評(píng)價(jià)溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動(dòng)脈模型，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1995，30662所述方法及標(biāo)準(zhǔn)觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對(duì)稱伸向地面，計(jì)為0分，如手術(shù)對(duì)側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲計(jì)為1分，肘屈曲計(jì)為2分，肩內(nèi)旋計(jì)為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內(nèi)旋者，計(jì)為4分。(B)將動(dòng)物置于平地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動(dòng)，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對(duì)等且有力，計(jì)為0分，如向手術(shù)對(duì)側(cè)推動(dòng)時(shí)阻力下降者，根據(jù)下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計(jì)為1，2和3分。(C)將動(dòng)物雙前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對(duì)等且有力者計(jì)為0分。同樣根據(jù)手術(shù)對(duì)側(cè)肌張力下降程度不同計(jì)為1，2和3分。(D)動(dòng)物有不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈者，計(jì)為1分。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，滿分為11分，分?jǐn)?shù)越高，表示動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重。
行為評(píng)分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經(jīng)染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國(guó)航空航天大學(xué)病理圖像分析軟件求梗塞面積比。數(shù)據(jù)用X±s表示，以組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
4.結(jié)果如表1所示，缺血24小時(shí)后，大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的25％左右；灌胃或注射給予不同劑量的蛇床內(nèi)酯，動(dòng)物行為障礙有不同程度的減輕，大鼠腦缺血區(qū)也有明顯好轉(zhuǎn)，且呈劑量依賴性。
表1蛇床內(nèi)酯對(duì)大鼠局部腦缺血損傷的影響(n＝10，X±s)

注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
試驗(yàn)例2蛇床內(nèi)酯對(duì)大鼠腦缺血/再灌注損傷的影響1試驗(yàn)材料1.1動(dòng)物Wistar大鼠共90只，SPF級(jí)，體重250～300g。購(gòu)自昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，自由飲水進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)2-3d，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在(24±1)℃，相對(duì)濕度為40％-80％。
1.2藥品、試劑及設(shè)備蛇床內(nèi)酯按制備例2方法制備。
尼莫地平注射液規(guī)格10mg/50ml/瓶，拜爾醫(yī)藥保健有限公司生產(chǎn)。
10％水合氯醛溶液規(guī)格100ml。購(gòu)自海南省人民醫(yī)院。
2分組與給藥將Wistar大鼠隨機(jī)分為9組，每組10只，具體如下(1)假手術(shù)組(等容量溶劑)；(2)模型對(duì)照組(等容量溶劑)；(3)蛇床內(nèi)酯低劑量組(5mg/kg，ig)；(4)蛇床內(nèi)酯中劑量組(10mg/kg，ig)；(5)蛇床內(nèi)酯高劑量組(20mg/kg，ig)；(6)蛇床內(nèi)酯低劑量組(2.5mg/kg，iv)；(7)蛇床內(nèi)酯中劑量組(5mg/kg，iv)；(8)蛇床內(nèi)酯高劑量組(10mg/kg，iv)；(3)尼莫地平組(Nim，1.5mg/kg)。
給藥方法灌胃給藥造模前一周開始。注射給藥術(shù)后10min靜脈注射相應(yīng)藥物(給藥體積1ml/200g)。
3試驗(yàn)方法禁食12小時(shí)后，按實(shí)驗(yàn)例1所述方法造成左側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血；缺血2小時(shí)后，抽出尼龍線，造成大鼠腦缺血/再灌注損傷；再灌22小時(shí)后，按按實(shí)驗(yàn)例1所述方法進(jìn)行行為評(píng)分、腦片染色。數(shù)據(jù)用X±s表示，以組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
4結(jié)果如表2所示，缺血2小時(shí)再灌22小時(shí)后，大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的25％左右；灌胃或注射給予不同劑量的蛇床內(nèi)酯，動(dòng)物行為障礙有不同程度的減輕，大鼠腦缺血區(qū)也有明顯好轉(zhuǎn)，且呈劑量依賴性。
表2蛇床內(nèi)酯對(duì)大鼠腦缺血/再灌注損傷的影響(n＝10，X±s)

注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
試驗(yàn)例3蛇床內(nèi)酯對(duì)大鼠心肌缺血的影響1試驗(yàn)材料1.1動(dòng)物
Wistar大鼠共90只，SPF級(jí)，體重250～300g。購(gòu)自昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，自由飲水進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)2-3d，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在(24±1)℃，相對(duì)濕度為40％-80％。
1.2藥品、試劑及設(shè)備蛇床內(nèi)酯按制備例2方法制備。
烏拉坦山東齊魯興華制藥有限公司生產(chǎn)。
丹參注射液規(guī)格2ml/支，云南個(gè)舊生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。
氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站提供。
2分組與給藥將Wistar大鼠隨機(jī)分為9組，每組10只，具體如下(1)假手術(shù)組(等容量溶劑)；(2)模型對(duì)照組(等容量溶劑)；(3)蛇床內(nèi)酯低劑量組(5mg/kg，ig)；(4)蛇床內(nèi)酯中劑量組(10mg/kg，ig)；(5)蛇床內(nèi)酯高劑量組(20mg/kg，ig)；(6)蛇床內(nèi)酯低劑量組(2.5mg/kg，iv)；(7)蛇床內(nèi)酯中劑量組(5mg/kg，iv)；(8)蛇床內(nèi)酯高劑量組(10mg/kg，iv)；(3)丹參注射液組。
給藥方法灌胃給藥造模前一周開始。注射給藥術(shù)后各組動(dòng)物靜脈滴注(用輸液泵注射)相應(yīng)藥物(給藥體積3ml，30min滴完)。
3試驗(yàn)方法禁食12小時(shí)后，iv烏拉坦(1.2g/kg)麻醉，測(cè)肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左緣1cm處，剪開胸壁肌肉及二條肋骨，迅速打開胸腔，暴露心臟，在動(dòng)脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈，立即將心臟放回，排擠出胸腔空氣，用止血鉗閉合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。記錄術(shù)后0，2，6h心電圖，隨后取出心臟，以冷生理鹽水洗凈后，-20℃冰箱冷凍過夜。次日，將冷凍的心臟由結(jié)扎處至心尖部等厚切成5片，浸入新鮮配制的0.5％N-BT磷酸緩沖液(pH7.4)中。37℃水浴振搖10～15min。用濾紙吸干切片表面的染色液，分離染色部分和未染色部分，稱重，記算梗死面積。心肌梗死百分比(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。
4結(jié)果如表3所示，灌胃中高劑量與靜脈給藥各劑量的蛇床內(nèi)酯均明顯減少結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所致大鼠急性心肌缺血引起的心肌梗死面積，并可降低由心肌缺血造成的肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高。蛇床內(nèi)酯對(duì)心肌具有保護(hù)作用，能降低缺血引起的心肌損傷。
表3蛇床內(nèi)酯對(duì)大鼠心肌缺血損傷的影響(n＝10，X±s)

注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
權(quán)利要求
1.蛇床內(nèi)酯在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1所述的心腦血管疾病，具體包括缺血性心臟病與缺血性腦血管病。
3.權(quán)利要求2所述的缺血性心臟病包括心絞痛、心肌梗死。
4.權(quán)利要求2所述的缺血性腦血管病包括短暫性腦缺血發(fā)作、腦梗塞。
5.蛇床內(nèi)酯在制備治療或預(yù)防腦缺血/再灌注損傷的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
蛇床內(nèi)酯在制備治療缺血性心臟病與缺血性腦血管病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101036641SQ200610034369
公開日2007年9月19日 申請(qǐng)日期2006年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月13日
發(fā)明者吳巍, 邵萌, 滕厚雷, 劉軍鋒, 翟大偉 申請(qǐng)人:海南盛科天然藥物研究院有限公司