專利名稱：逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用植物在逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性(MDR)方面的應(yīng)用，本發(fā)明還進(jìn)一步涉及逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑以及包括該增效劑的抗真菌藥物組合物。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，隨著廣譜抗生素、皮質(zhì)類固醇激素、免疫抑制劑、化療藥物的廣泛使用，器官移植和導(dǎo)管技術(shù)的廣泛開展，以及HIV感染人數(shù)的劇增，真菌的感染率和致死率也大幅增加。Alvarez-Lerma等對(duì)641個(gè)重癥監(jiān)護(hù)病房的1562病例調(diào)查發(fā)現(xiàn)，有15.9％的患者可分離出致病真菌，7.7％的患者并發(fā)真菌臨床感染，其中白念珠菌占68.9％。Wisplinghoff等對(duì)美國(guó)49個(gè)醫(yī)院內(nèi)24179例血液感染的病例調(diào)查發(fā)現(xiàn)，有9.5％的病例由真菌感染引起。
目前，唑類藥物被認(rèn)為是治療多種淺部真菌病、皮下組織真菌病及深部真菌病的一線藥物，該類藥具有臨床療效顯著、安全、服用方便、組織滲透性好等優(yōu)點(diǎn)，在臨床上預(yù)防和治療各種真菌感染發(fā)揮著重要的作用?，F(xiàn)有的唑類抗真菌藥物包括氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、伏立康唑等。但隨著唑類藥物的長(zhǎng)期、廣泛使用，逐漸出現(xiàn)了對(duì)唑類藥物耐藥的菌株，且有明顯增多趨勢(shì)，因耐藥菌株感染導(dǎo)致的治療失敗也與日俱增。Wroblewska等從臨床分離的851株白念珠菌中發(fā)現(xiàn)，有37.2％的菌株對(duì)氟康唑耐藥，47.6％的菌株對(duì)伊曲康唑耐藥。Gomez-Lopez等從臨床分離的338株曲霉中發(fā)現(xiàn)，有3.8％的菌株對(duì)伊曲康唑耐藥。
因此，有必要提供一種增效劑，來(lái)逆轉(zhuǎn)真菌對(duì)唑類藥物的耐藥性，提高真菌對(duì)唑類藥物的敏感性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人在大量實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，意想不到地發(fā)現(xiàn)，藥用植物如漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪、欖香烯等，能在體外下調(diào)哺乳動(dòng)物唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)基因mRNA的表達(dá)，使藥物外排泵P糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的合成減少，抗真菌藥物被泵出減少，細(xì)胞內(nèi)藥物積聚增加，從而逆轉(zhuǎn)了P-gp介導(dǎo)的真菌細(xì)胞對(duì)唑類藥物的耐藥性。因而這類藥用植物具有逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性(MDR)的功能，可以采用這類藥用植物逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性來(lái)治療哺乳動(dòng)物真菌感染。
因此，一方面，本發(fā)明提供了漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪和/或欖香烯等在治療哺乳動(dòng)物真菌感染時(shí)、用于逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性方面的用途。
上述的真菌感染既包括原發(fā)或繼發(fā)的淺部真菌病，也包括深部真菌病。其中，原發(fā)或繼發(fā)的淺部真菌病包括但不限于皮膚癬菌病如頭癬、體癬、股癬、足癬、手癬；皮膚粘膜念珠菌??；皮膚其它真菌病如花斑癬、糠秕孢子菌毛囊炎、毛結(jié)節(jié)菌病、須癬、黑癬、疊瓦癬、柱頂孢感染、甲真菌病等。深部真菌病包括但不限于隱球菌病、孢子絲菌病、念珠菌病、著色芽生菌病、暗色絲孢霉病、透明絲孢霉病、曲霉病、毛霉病、芽生菌病、馬爾尼菲青霉病、擬青霉病、組織胞漿菌病、球孢子菌病、副球孢子菌病、羅伯真菌病、鼻孢子菌病、蟲霉病或無(wú)綠藻病。除了上述列舉的真菌感染之外，也包括新發(fā)現(xiàn)的病原體為真菌的其它哺乳動(dòng)物真菌感染。
另一方面，本發(fā)明還提供了一種逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的增效劑，該增效劑中包括一種或一種以上的、選自于漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪和欖香烯中的物質(zhì)。此處，漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪和欖香烯等既可以是這些物質(zhì)的單體(如化學(xué)提純物)，也可以是這些物質(zhì)的單體的來(lái)源植物。
進(jìn)一步地，本發(fā)明的增效劑還可以包括一種或一種以上的藥理上可以接受的賦形劑。這種賦形劑無(wú)特別限制，而且增效劑的劑型也沒有特別限制，可以為起局部治療效果的外用劑型，如軟膏、溶液、凝膠劑、涂膜劑、氣霧劑、洗劑等，也可以為起全身治療效果的劑型，如含化劑、片劑、膠囊、丸劑、糖漿、懸浮劑、咀嚼口膠、糯米紙囊劑、注射劑或其它有利于藥物吸收利用的劑型。
本發(fā)明的增效劑可以與抗真菌的藥物配合使用。
再一方面，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種抗真菌的藥物組合物，該藥物組合物包括(a)一種或一種以上的選自于漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪和欖香烯中的物質(zhì)；以及(b)一種或一種以上的唑類抗真菌藥物。
在上述的藥物組合物中，唑類抗真菌藥物與本發(fā)明的增效劑混合在一起，作為一體的藥物銷售、使用，從而方便了某些場(chǎng)合的患者。制備唑類抗真菌藥物可以為氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、伏立康唑、三氮唑類或咪唑類化合物或其它唑類抗真菌藥物，只要其藥物外排泵P糖蛋白(P-gp)的合成受漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪、欖香烯等影響而減少即可。
類似地，上述的藥物組合物可以進(jìn)一步包括一種或一種以上的藥理上可以接受的賦形劑。其所用的賦形劑也無(wú)特別限制，所采取的劑型也沒有特別限制，同樣可以既為起局部治療效果的外用劑型，如軟膏、溶液、凝膠劑、涂膜劑、氣霧劑、洗劑等，或者為起全身治療效果的劑型，如含化劑、片劑、膠囊、丸劑、糖漿、懸浮劑、咀嚼口膠、糯米紙囊劑、注射劑或其它有利于藥物吸收利用的劑型。
本發(fā)明將逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑與唑類藥物抗真菌藥物同時(shí)使用，治療哺乳動(dòng)物真菌感染，不僅可以增加治療的有效率，減少病死率，同時(shí)還可以減少唑類藥物抗真菌藥物的使用劑量，減輕其不良反應(yīng)。
以下，結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、臨床實(shí)驗(yàn)以及本發(fā)明增效劑和藥物組合物的具體實(shí)施方式
，來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明，但這些描述只是用于解釋本發(fā)明，而不是將本發(fā)明限制為這些方式。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的發(fā)明人對(duì)具有逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑及其臨床應(yīng)用進(jìn)行了長(zhǎng)期研究，發(fā)現(xiàn)它們?cè)趯?shí)驗(yàn)室及臨床上均具有良好的逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性作用。
藥理實(shí)驗(yàn)本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑漢防己甲素＞2μg/mL時(shí)，對(duì)白念珠菌菌絲相有抑制作用，且呈濃度依賴性，見表1。漢防己甲素≥4.5μg/mL時(shí)，受試菌的存活率≤8.6％；漢防己甲素≤2μg/mL時(shí)，菌的存活率＞95％，視覺法觀察其濁度與正常生長(zhǎng)對(duì)照孔無(wú)差異。氟康唑單獨(dú)及與漢防己甲素聯(lián)合使用時(shí)對(duì)各受試菌菌絲相的MIC見表2。16株白念珠菌菌絲相，氟康唑單獨(dú)及聯(lián)合漢防己甲素(2μg/mL)時(shí)，其MIC范圍分別為0.250～64μg/mL或0.125～8μg/mL，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，t＝2.088，P＝0.054，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但與漢防己甲素聯(lián)合使用后，氟康唑的MIC終點(diǎn)清晰，“拖尾現(xiàn)象”消失，顯微鏡下計(jì)數(shù)白念珠菌菌絲相抑制率大于95％。下面的表1為漢防己甲素單獨(dú)使用時(shí)16株白念珠菌(CA-1，CA-2，......，CA-17)菌絲相的活細(xì)胞數(shù)及存活率，表2為氟康唑及其聯(lián)合漢防己甲素對(duì)白念珠菌菌絲相的MIC(μg/mL)。
表1

表2

MIC1為本實(shí)驗(yàn)測(cè)定氟康唑?qū)?6株白念珠菌菌絲相的MIC；MIC2為本實(shí)驗(yàn)中氟康唑聯(lián)合漢防己甲素(2μg/mL)時(shí)對(duì)受試菌的MIC。
本發(fā)明的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)(表3-5)，按照于FITC道獲得的10000個(gè)細(xì)胞產(chǎn)單參數(shù)直方圖分析，未加入及加入漢防己甲素者，蓄積實(shí)驗(yàn)后白念珠菌酵母相Rh123陽(yáng)性細(xì)胞率分別為26.47％及70.98％(已去除本底陽(yáng)性率，χ2＝62921，P＝0.000)，因此加入漢防己甲素后，白念珠菌酵母相細(xì)胞內(nèi)Rh123積蓄顯著增多。而未加入及加入漢防己甲素時(shí)，外排實(shí)驗(yàn)后白念珠菌酵母相Rh123陽(yáng)性細(xì)胞率分別為6.72％及60.00％(已去除本底陽(yáng)性率，χ2＝77127，P＝0.000)，因此加入漢防己甲素后，Rh123外排顯著減少。其中，表3為加入與未加入漢防己甲素16株白念珠菌酵母相細(xì)胞Rh123陽(yáng)性率比較(％)，表4給出了蓄積實(shí)驗(yàn)兩種方法白念珠菌酵母相Rh123陽(yáng)性細(xì)胞率實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表5給出了外排實(shí)驗(yàn)兩種方法白念珠菌酵母相Rh123陽(yáng)性細(xì)胞率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表3

C為本底對(duì)照；A1、A2為未加入漢防己甲素時(shí)，蓄積實(shí)驗(yàn)及外排實(shí)驗(yàn)后各菌Rh123陽(yáng)性細(xì)胞率；B1、B2為加入漢防己甲素時(shí)，蓄積實(shí)驗(yàn)及外排實(shí)驗(yàn)后各菌Rh123陽(yáng)性細(xì)胞率。
表4

表5

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，使用漢防己甲素13mg/kg體重時(shí)，能增強(qiáng)氟康唑治療小鼠陰道念珠菌病的效果，真菌學(xué)治愈率達(dá)90％，且無(wú)明顯的局部刺激，無(wú)毒性。表6給出了漢防己甲素對(duì)氟康唑的增效作用(小鼠陰道念珠菌病模型)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
表6

每組動(dòng)物10只，分別于第0、3、7天給藥3次，劑量如表中。表中為第8天的結(jié)果。
人體實(shí)驗(yàn)本發(fā)明的發(fā)明人在進(jìn)行初步人體實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪、欖香烯確實(shí)能增強(qiáng)唑類藥物抗真菌活性，逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性，從而提高唑類藥物治療真菌病的效果。表7給出了逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑與唑類抗真菌藥物同時(shí)使用治療人真菌感染的初步臨床試驗(yàn)結(jié)果。具體做法是按照單純隨機(jī)抽樣的原則，選取同等數(shù)量的病人數(shù)分別作為單純使用唑類藥物治療組(A組)、唑類藥物+植物增效劑治療組(B組)。觀察其真菌學(xué)治愈率、臨床治愈率、總有效率、復(fù)發(fā)率。
表7 逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑與唑類抗真菌藥物同時(shí)使用治療人真菌感染的初步臨床試驗(yàn)結(jié)果

本研究中應(yīng)用的唑類抗真菌藥物為氟康唑，給藥方式150mg，qw。療程陰道念珠菌病3周、足癬4周、體癬和股癬2周、甲真菌病16周。觀察真菌學(xué)治愈率、臨床治愈率、總有效率的時(shí)間陰道念珠菌病、足癬、體癬、股癬為停藥后14天，甲真菌病為停藥后4周。觀察復(fù)發(fā)率的時(shí)間陰道念珠菌病、足癬、體癬、股癬為停藥后12周，甲真菌病為停藥后24周。漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪、欖香烯為霜?jiǎng)┗蛩▌?，均為外用?br> 實(shí)施例根據(jù)給藥途徑不同，逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑以及含該增效劑的藥物組合物可按如下配方進(jìn)行配制1、局部用藥(1)將逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑以O(shè).01-5％比例與脂溶性介質(zhì)(如凡士林)配成軟膏外涂患部；或以同樣比例加適量乳化劑(如磷脂，藥物∶磷脂＝10-100∶1)配成水溶液外涂或沖洗患病部；或者制成其它劑型，如凝膠劑、涂膜劑、噴霧劑、洗劑、含化劑等。
(2)漢防己甲素軟膏劑的制備選取提純的藥用漢防己甲素粉劑，與加熱融化的凡士林按照1％(w∶w)的比例制成軟膏。
(3)漢防己甲素涂膜劑的制備選取提純的藥用漢防己甲素粉劑，將其與磷脂按50∶1的比例混勻，加水制成水溶液，成為涂膜劑，用于病灶局部使用。
2、系統(tǒng)用藥(1)將逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑壓片(含糖衣片)，或制成膠囊、丸劑、糖漿、懸浮劑、咀嚼口膠、糯米紙囊劑，每片含藥量為50-500mg；或制成注射劑。
(2)川芎嗪膠囊劑的制備選取提純的藥用川芎嗪粉劑，與藥用葡萄糖粉按照1∶10的比例混勻，制成膠囊，以備口服使用。
3、藥用植物增效劑+唑類抗真菌藥的制備(1)分別選取提純的藥用漢防己甲素粉劑與氟康唑粉，與加熱融化的凡士林分別按照1％(w∶w)的比例制成軟膏，用于病灶局部使用。
(2)選取提純的藥用漢防己甲素粉劑與氟康唑粉，二者按1∶10～1∶20的比例混合后，再與藥用葡萄糖粉按照1∶10的比例混勻，制成膠囊，以備口服使用。
權(quán)利要求
1.漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪或欖香烯在治療哺乳動(dòng)物真菌感染時(shí)用于逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性方面的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的真菌感染包括原發(fā)或繼發(fā)的淺部真菌病和深部真菌病。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述的原發(fā)或繼發(fā)的淺部真菌病為頭癬、體癬、股癬、足癬、手癬、皮膚粘膜念珠菌病、花斑癬、糠秕孢子菌毛囊炎、毛結(jié)節(jié)菌病、須癬、黑癬、疊瓦癬、柱頂孢感染或甲真菌病。
4.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述的深部真菌病為隱球菌病、孢子絲菌病、念珠菌病、著色芽生菌病、暗色絲孢霉病、透明絲孢霉病、曲霉病、毛霉病、芽生菌病、青霉病、擬青霉病、組織胞漿菌病、球孢子菌病、副球孢子菌病、羅伯真菌病、鼻孢子菌病、蟲霉病或無(wú)綠藻病。
5.一種逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的增效劑，其特征在于，所述的增效劑包括一種或一種以上的、選自于漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪和欖香烯中的物質(zhì)。
6.如權(quán)利要求5所述的增效劑，其特征在于，所述的增效劑進(jìn)一步包括一種或一種以上的藥理上可以接受的賦形劑。
7.如權(quán)利要求5所述的增效劑，其特征在于，所述增效劑的劑型為軟膏、溶液、凝膠劑、涂膜劑、氣霧劑、洗劑、含化劑、片劑、膠囊、丸劑、糖漿、懸浮劑、咀嚼口膠、糯米紙囊劑或注射劑。
8.一種抗真菌的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物包括(a)一種或一種以上的選自于漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪和欖香烯中的物質(zhì)；以及(b)一種或一種以上的唑類抗真菌藥物。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，所述的唑類抗真菌藥物為氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、益康唑、克霉唑、聯(lián)苯芐唑、酮康唑、伏立康唑、三氮唑類或咪唑類化合物。
10.如權(quán)利要求8或9所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物進(jìn)一步包括一種或一種以上的藥理上可以接受的賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了漢防己甲素、苦參堿、川芎嗪或欖香烯在治療哺乳動(dòng)物真菌感染時(shí)用于逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性方面的用途、逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的增效劑以及含有該增效劑的藥物組合物。本發(fā)明將逆轉(zhuǎn)唑類藥物抗真菌活性多藥耐藥性的藥用植物增效劑與唑類藥物抗真菌藥物同時(shí)使用，治療哺乳動(dòng)物真菌感染，不僅可以增加治療的有效率，減少病死率，同時(shí)還可以減少唑類藥物抗真菌藥物的使用劑量，減輕其不良反應(yīng)。
文檔編號(hào)A61K31/4164GK101032486SQ20061003416
公開日2007年9月12日 申請(qǐng)日期2006年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月8日
發(fā)明者張宏, 張革化 申請(qǐng)人:張宏, 張革化