專利名稱：治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑及其制備方法，屬于中藥的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種常見的內(nèi)分泌-代謝疾病，胰島素的絕對或相對不足是引起糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂的主要原因，血清葡萄糖含量持續(xù)增高，超過腎臟的重吸收能力，久而久之，引起微循環(huán)的血管、神經(jīng)病變，從而導致糖尿病患者一系列心腦血管改變。為了達到防治目的，許多發(fā)明人及藥品企業(yè)做了大量的研究，也提供了一些治療的產(chǎn)品；如芪蛭降糖膠囊，但是，這個產(chǎn)品中的制備工藝及藥物處方量沒有公開，所以無法指導生產(chǎn)；特別是它的配方中使用的水蛭這種藥材必須慎用，如果不確定其處方用量，會對人體產(chǎn)生毒副作用；另外現(xiàn)有產(chǎn)品的劑型比較落后，產(chǎn)品質(zhì)量不夠理想膠囊劑久貯益粘結(jié)；劑型品種不夠豐富，適用人群范圍窄，產(chǎn)品生物利用度、藥物穩(wěn)定性不理想；中國專利公報公開了專利申請?zhí)枮椤?7199360”、名稱為“治療糖尿病的藥物組合物”的專利申請，它存在的問題是組方極為復雜，生產(chǎn)質(zhì)量難于控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑及其制備方法；這種制劑能夠降低血糖，改善糖、脂代謝，提高血漿白蛋白水平，減少尿蛋白排出，增加肌肉蛋白貯備，提供必須氨基酸，從整體上改善腎小球疾病的蛋白質(zhì)代謝紊亂，抑制腎臟NO合成，同時可部分糾正糖尿病早期的腎臟高灌注、高濾過；抑制糖尿病大鼠腎皮質(zhì)轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)的過度表達，影響糖尿病的發(fā)生和發(fā)展；抑制腎臟肥大，改善腎功能，改善糖尿病的臨床癥狀，治療糖尿病及糖尿病引起的各種并發(fā)癥。另外，本發(fā)明提供的制劑比較明確的制劑劑型是顆粒劑、微丸、分散片，它們的崩解性好，生物利用度高，特別適合于老年人及吞服藥片或膠囊有困難的患者服用；本發(fā)明還提供軟膠囊、滴丸的制備方法，解決了藥物遇濕熱不穩(wěn)定的問題，還可以掩蓋藥物的不良口味、氣味，并且起到增加穩(wěn)定性、改善生物利用度的作用。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的按照重量組分計算，它主要是由黃芪80～120份、生地黃60～100份、黃精60～100份、水蛭40～80份制作而成。準確的說按照重量組分計算，它主要是由黃芪100份、生地黃83份、黃精83份、水蛭67份制作而成。本發(fā)明所述的制劑包括注射劑和口服制劑，其中注射劑包括注射液、粉針、凍干粉針、大輸液；口服制劑包括凝膠劑、片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、丸劑、微丸、散劑、滴丸劑、緩釋制劑、控釋制劑、凝膠劑、口服液體制劑、煎膏劑、浸膏劑和膜劑藥劑學上所有可以接受的劑型。準確的說所述的制劑是顆粒劑、分散片、軟膠囊劑、微丸、滴丸。本發(fā)明的制備方法是取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加水煎煮，過濾，合并濾液濃縮成稠膏，然后加入乙醇醇沉，靜置，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，然后分別制成不同的制劑。優(yōu)選的制備方法是取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加6-12倍量水煎煮1-3次，每次1-3小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達30-80％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，然后分別制成不同的制劑。具體的制備方法是取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，然后分別制成不同的制劑。
本發(fā)明所述制劑中的分散片劑這樣制備取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，加入2％CMS-Na，以濃度為12％淀粉漿為粘合劑，制軟材，過20目篩制粒，60℃烘干，20目整粒，加入3％CMS-Na、1％滑石粉、4％微粉硅膠，混合均勻，單沖式壓片機，2檔壓片力壓片，即得。
本發(fā)明所述制劑中的微丸劑這樣制備取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，將浸膏粉與微晶纖維素按3∶2的比例混合，置造粒機中，以1％L-HPC溶液為粘合劑，以水為潤濕劑，在主機轉(zhuǎn)速220r/min、噴漿泵轉(zhuǎn)速25r/min、供粉機轉(zhuǎn)速20r/min、噴氣流量15L/min、噴氣壓力0.5Mpa、鼓風流量10×20L/min、噴漿時間4min、滾圓時間3min，制丸，即得。
本發(fā)明所述制劑中的軟膠囊劑這樣制備取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，再按浸膏粉∶基質(zhì)＝1∶1.2，加入大豆油、黃蜂蠟、大豆卵磷脂的混合基質(zhì)，加熱熔融，混勻，得軟膠囊內(nèi)容物；膠液的制備以明膠∶甘油∶水＝1∶0.3∶0.5，取明膠加適量蒸餾水使其吸水膨脹，另將甘油及余下的水置煮膠鍋中加熱至70～80℃，混合均勻，加入膨脹的明膠攪拌，使之溶融成均勻的膠液，于70℃保溫3小時，靜置，除去上浮泡沫，用布袋濾過，于軟膠囊機中壓制成軟膠囊，壓制成軟膠囊，置滾桶干燥機中定型，整丸，干燥，即得。
本發(fā)明所述制劑中的滴丸劑這樣制備取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，以PEG4000為基質(zhì)，加入稠膏，藥物質(zhì)量∶基質(zhì)體積＝2∶5，攪拌均勻，密閉，保溫，用內(nèi)徑4.2mm、外徑5.2mm滴管，以每分鐘30～40滴的速度滴入甲基硅油∶液體石蠟＝3∶2的混合冷卻液中，冷卻柱高130cm，轉(zhuǎn)速15r·min-1，即得。
本發(fā)明所述制劑中的顆粒劑這樣制備取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏；稱取糊精或淀粉10---500g、食用橙香精1---100g，拌入上述水蛭細粉，混合均勻，采用噴霧干燥制粒機，噴入上述稠膏，制粒，整粒，即得顆粒劑。
本方中，黃芪補氣固表、利尿托毒為方中君藥；生地黃清熱涼血、養(yǎng)陰生津，黃精補氣養(yǎng)陰，健脾、潤肺、益腎，水蛭破血、逐瘀、通經(jīng)共為臣藥；諸藥相合，益氣養(yǎng)陰，活血化瘀，用于糖尿病證屬氣陰兩虛兼瘀者，證見口渴多飲，多尿易饑，體瘦乏力，自汗盜汗，面色晦暗，肢體麻木，舌暗有瘀斑等。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)，降低血糖，改善糖、脂代謝，提高血漿白蛋白水平，減少尿蛋白排出，增加肌肉蛋白貯備，提供必須氨基酸，從整體上改善腎小球疾病的蛋白質(zhì)代謝紊亂，抑制腎臟N0合成，可部分糾正糖尿病早期的腎臟高灌注、高濾過；抑制糖尿病大鼠腎皮質(zhì)轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)的過度表達，影響糖尿病的發(fā)生和發(fā)展；抑制腎臟肥大，改善腎功能，改善糖尿病的臨床癥狀，治療糖尿病及糖尿病引起的各種并發(fā)癥。本發(fā)明處方明確，安全合理，工藝簡單易行，并且本發(fā)明提供的微丸、分散片、顆粒劑崩解性好，生物利用度高，特別適合于老年人及吞服藥片或膠囊有困難的患者服用，分散片遇水可迅速崩解形成均勻的粘性懸液的水分散片，解決了生物利用度不高的問題；本發(fā)明的軟膠囊、滴丸，解決了藥物遇濕熱不穩(wěn)定的問題，還可以掩蓋藥物的不良口味、氣味，可以起到增加穩(wěn)定性、改善生物利用度的作用。本申請人在研制過程中發(fā)現(xiàn)，分散片需在19℃～21℃水中3min內(nèi)完全崩解，微丸圓整度不均勻，滴丸成型率低，軟膠囊崩解超限是本產(chǎn)品的關(guān)鍵問題，通過對輔料、工藝條件等大量影響因素進行了實驗篩選，使得產(chǎn)品的性能良好。當然，其他工藝條件也可行，但是以本發(fā)明的工藝條件最為簡單易行；得到的制劑對于糖尿病及其并發(fā)癥如高血壓、腎病、視網(wǎng)膜病變等有比較好的防治效果；而且本發(fā)明提供的制劑不良反應(yīng)小、可供病人長期使用；達到了發(fā)明的目的。
申請人進行了一系列實驗，以選擇本發(fā)明提供的藥物制劑的配方、制備工藝、使用的輔料種類及用量、比例等；保證其科學、合理、可行；得到的制劑具有有效的治療效果。
實驗例1提取工藝研究組別煎煮時間(h)煎煮次數(shù)(次)加水量(倍)黃芪甲苷％1116 0.022128 0.0631310 0.0842210 0.095226 0.056238 0.027318 0.0383210 0.069336 0.01結(jié)果表明，本發(fā)明的提取工藝加10倍量水煎煮2次，每次2小時，合理可行。
實驗例2成型工藝研究休止角測定采用固定漏斗法，將漏斗固定于水平放置的坐標紙上，漏斗下口距坐標紙的距離為3cm，將不同處方丸粒分別倒入漏斗，直到最下面形成的圓錐體尖端接觸到下面漏斗口為止，量取圓錐底部的直徑，計算出休止角，休止角小說明顆粒流動性好。
崩解時限檢查采用轉(zhuǎn)籃法，升降式崩解儀，片劑或膠囊劑取6片/粒，觀察通過篩網(wǎng)的情況。通過率高則崩解性好，更宜人體吸收。
溶化性檢查取顆粒劑10g，加熱水20倍，攪拌5分鐘，立即觀察。
片劑抗張強度的測定壓片后將片劑放置12h，用片劑四用儀測定片劑的徑向破碎力，計算片劑的抗張強度。
均一性為18-40目之間的丸重/總丸重×100％，收率P％＝W1/W×100％(其中18-24目丸的重量W1，投料總重量W)脆碎度片劑四用儀，測定片劑的徑向破碎力及脆碎度。
1、分散片劑成型工藝研究分散片遇水可迅速崩解形成均勻的粘性懸液的水分散片，解決了原劑型崩解性差，溶出緩慢的缺點，本申請人制得的分散片在19℃～21℃水中3min內(nèi)完全崩解，混懸性好、生物利用度高、分散均勻度。
①輔料篩選對本發(fā)明分散片制備工藝影響較大的因素(如崩解劑、粘合劑濃度)進行試驗，確定最佳處方。
組別CMS-Na(內(nèi)加)％CMS-Na(外加)％ 淀粉漿濃度％崩解時間(s)1138 12221210553111212442312255228 846211050733104083212439318 36②壓片力壓片力/檔 脆碎度％3 0.542 0.301 0.47結(jié)果表明，最佳工藝條件為加入2％CMS-Na，以濃度為12％淀粉漿為粘合劑，制軟材，過20目篩制粒，60℃烘干，20目整粒，加入3％CMS-Na、1％滑石粉、4％微粉硅膠，混合均勻，單沖式壓片機，2檔壓片力壓片。
2、微丸劑成型工藝研究微丸直徑小于2.5mm，類于顆粒性質(zhì)，生物利用度高，本申請人在研制本發(fā)明產(chǎn)品微丸時發(fā)現(xiàn)最大的困難就是吸濕性強而流動性差，可塑性差，用常規(guī)方法及輔料制備難以成型。
①稀釋劑比例稀釋劑浸膏粉∶稀釋劑休止角- - 42°淀粉 5∶238°4∶245°3∶240°1∶245°微晶纖維素5∶230°4∶228°3∶226°1∶229°②粘合劑濃度粘合劑濃度％休止角HPMC 0.5 40°1 35°2 39°L-HPC 0.5 28°1 24°2 27°③主機轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)速(r/min)粒徑分布200大量聚集塊和粉末220聚集塊破碎，粒徑變小250大量聚集塊和粉末300聚集塊破碎，粒徑變小結(jié)果表明，選擇主機轉(zhuǎn)速為250r/min。
④滾圓時間本實驗以微丸的圓整度(以平面臨界角φ表示)及18～24目的收率(f)為指標進行工藝條件的優(yōu)化篩選。圓整度的測定將一定量微丸置一平板上，將平板一側(cè)抬起，測量在微丸開始滾動前傾斜平面與水平面的夾角(φ)，該角越小，微丸的圓整度越好。
滾圓時間(min)2φ/° f/％230.582.5329.286.2533.965.0832.084.510 35.583.9⑤成丸工藝參數(shù)的優(yōu)化供粉機轉(zhuǎn)速(r/min)噴泵轉(zhuǎn)速(r/min) f/％51082.010 1576.315 2076.520 2588.525 3082.6結(jié)果表明，將浸膏粉與微晶纖維素按3∶2的比例混合，置造粒機中，以1％L-HPC溶液為粘合劑，以水為潤濕劑，在主機轉(zhuǎn)速220r/min、噴漿泵轉(zhuǎn)速25r/min、供粉機轉(zhuǎn)速20r/min、噴氣流量15L/min、噴氣壓力0.5Mpa、鼓風流量10×20L/min、噴漿時間4min、滾圓時間3min，為最佳工藝條件。
3、軟膠囊劑成型工藝研究①吸附基質(zhì)率考察藥粉∶基質(zhì)混懸液情況1∶1.0不均勻混懸液1∶1.2均勻混懸液1∶1.5均勻混懸液②輔料對成分的影響組別 黃芪甲苷(％)藥粉 0.022
加入基質(zhì)后0.020結(jié)果表明，最佳工藝條件為按藥粉∶基質(zhì)＝1∶1.2，藥粉加入基質(zhì)后黃芪甲苷含量無明顯變化。
4、滴丸成型工藝研究①不同基質(zhì)及冷卻劑對滴丸成型的影響組別 基質(zhì) 與藥物融合性冷卻劑滴制情況 成型情況1 PE64000易互融 液體石蠟 油滴狀快速滴出， 扁球形，鏈珠狀，下沉過快 丸較小2 PEG4000易互融 甲基硅油 油滴狀快速滴出， 扁球形，鏈珠狀，下沉過慢 丸較小3 PEG4000易互融 甲基硅油∶液體石蠟油滴狀快速滴出， 圓球形，無小氣3∶2 下沉適中 孔，丸較小4 PEG6000較難互融液體石蠟 滴速較慢，滴頭出現(xiàn)扁球形，鏈珠狀，堵塞，下沉過快丸較大5 PEG6000較難互融甲基硅油 滴速較慢，滴頭扁球形，鏈珠狀出現(xiàn)堵塞，下沉過慢丸較大6 PEG6000較難互融甲基硅油∶液體石蠟滴速較慢，滴頭出現(xiàn)扁球形，無小氣3∶2 堵塞，下沉適中孔，丸較大②不同藥物加入方式及比例對滴丸成型的影響組別 基質(zhì)藥物∶基質(zhì)藥物在基質(zhì)中 成型情況(g∶ml) 分散情況1PEG40003∶5很難分散均勻表面不光滑，顏色不均勻2PEG40003∶7分散均勻圓球形，光滑，顏色均勻，質(zhì)地較硬3PEG40002∶4分散均勻表面不光滑，顏色不均勻4PEG40002∶5分散均勻圓球形，光滑，顏色均勻，質(zhì)地較好5PEG40001∶3分散均勻圓球形，光滑，顏色不太均勻，質(zhì)地較軟③冷卻液柱高度、轉(zhuǎn)速與滴速的選擇組別 冷卻柱高(cm)轉(zhuǎn)速(r·min-1)滴速(滴·min-1)滴丸成型率(％)11201040～5080.1621201550～6090.5031202030～4078.3641301050～6042.8551301530～4095.3261302040～5058.0571401030～4060.3481401540～5064.0591402050～6068.02
結(jié)果表明，最佳工藝條件為以PEG4000為基質(zhì)，加入稠膏，藥物質(zhì)量∶基質(zhì)體積＝2∶5，攪拌均勻，密閉，保溫，用內(nèi)徑4.2mm、外徑5.2mm滴管，以每分鐘30～40滴的速度滴入甲基硅油∶液體石蠟＝3∶2的混合冷卻液中，冷卻柱高130cm，轉(zhuǎn)速15r·min-1。
5、顆粒劑成型工藝研究5.1提取工藝條件的優(yōu)選5.1.1.定量評價指標的設(shè)定方中黃芪為君藥，其主要有效成分為以黃芪甲苷為代表的皂苷類成分，水溶性較好，易溶于正丁醇，原質(zhì)量標準中即對正丁醇浸出物作為檢查指標之一，因此以正丁醇浸出物作為評價指標，優(yōu)選水提工藝。
5.1.2正丁醇浸出物的測定方法正交試驗所得干膏，各取10g，精密稱定，分別加水50ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，再用氨試液洗滌2次，每次20ml，正丁醇提取液置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥至恒重，稱定正丁醇浸出物量。
5.1.3水提取工藝的優(yōu)選影響水提取效果的主要因素有浸泡時間、加水量、煎煮時間和煎煮次數(shù)等。為建立水提取工藝的正交設(shè)計，首先考察了煎煮次數(shù)的影響。
5.1.3.1水提工藝煎煮次數(shù)的選擇試驗方法 按處方組成比例，稱取黃芪50g，地黃41.5g，黃精41.5g，水蛭30.15g，生藥共163.15g，加入10倍量水，煎煮2小時，提取液減壓濃縮至相對密度為1.20~1.30(90℃)的稠膏，加入95％的乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.30(75℃)稠膏，真空干燥，照正丁醇浸出物的測定方法，測定第一、二次煎煮及第三次煎煮的浸膏得率和正丁醇浸出物量。試驗結(jié)果見下表。
煎煮次數(shù)的選擇試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明，以浸膏得率為考察指標，第三次煎煮所占比例為4.01％；以正丁醇浸出物量為考察指標，第三次煎煮所占比例僅為2.78％。說明兩次煎煮已基本提取完全，這也與原劑型工藝一致，故采用水煎煮兩次的工藝。
5.1.3.2水提取工藝的正交設(shè)計對于加水量、浸泡時間、煎煮時間等主要工藝參數(shù)，采用正交試驗方法進行篩選，以優(yōu)選出最佳工藝條件。
選用三水平的L9(34)表安排試驗，因素水平設(shè)計如下水提取因素水平表

表頭設(shè)計

5.1.3.3試驗方法及結(jié)果按處方組成比例，稱取黃芪50g，地黃41.5g，黃精41.5g，水蛭30.15g，生藥共163.15g，按L9(34)表規(guī)定的條件及上述的試驗安排，分別制備9份樣品，每份樣品經(jīng)相同條件下的醇沉、濃縮、干燥，取干浸膏進行分析測定。以正丁醇浸出物量為定量評價指標，其測定及分析結(jié)果見下表。
正交設(shè)計的試驗結(jié)果及分析

分析結(jié)果①直觀分析 從極差分析結(jié)果看，極差R值大小顯示，各因素作用主次為C＞B＞A，C因素(煎煮時間)水平3時的R值最高，說明水平3的提取率高于水平1和水平2；B因素(浸泡時間)水平2和水平3時的R值相當，但均高與水平1，說明水平2和水平3的提取率高于水平1；A因素(加水量)水平2時的R值最高，說明水平2的提取率高于水平1和水平3。因此，從直觀分析看，A2B2C3組合或A2B3C3組合可作為最佳提取條件。
②方差分析 方差分析結(jié)果表明C因素(煎煮時間)對正丁醇浸出物的提取率具有非常顯著的影響(P＜0.01)，而B因素(浸泡時間)和A因素(加水量)對正丁醇浸出物的提取率也影響顯著(P＜0.05)。因此，從方差分析看，A2B3C3組合可作為最佳提取條件。
③綜合分析結(jié)論 從上述兩種方法進行分析的結(jié)果來看，盡管A2B2C3組合可縮短生產(chǎn)周期，但B因素也為顯著影響因素，故確定提取工藝為A2B3C3組合，即稱取藥材，加入10倍量水，浸泡2小時后，加熱煎煮2次，每次2小時。
5.1.4工藝驗證由于優(yōu)選的工藝未包括在正交設(shè)計表的9次試驗中，故對其進行驗證試驗，即取同一批藥材，依所定提取工藝條件進行試驗并測定，結(jié)果見下表。
驗證試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明，驗證試驗重復3次，結(jié)果基本穩(wěn)定，與正交試驗結(jié)果一致。根據(jù)以上試驗分析，確定最佳提取工藝條件，即加水10倍量，浸泡2小時后，煎煮2次，每次2小時，從而證明所確定的提取工藝合理、穩(wěn)定可行。
5.1.5分離除雜本品中各藥味中均含有大分子淀粉、蛋白質(zhì)及粘液質(zhì)等成分，為提高藥物濃度，縮小服用體積，盡可能除去無用物質(zhì)，參照原制劑工藝，采用乙醇沉淀法。即制備工藝中水煎液濃縮至相對密度為1.2～1.3(90℃)，加入95％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，濾除沉淀，即可達到除雜目的。
5.1.6濃縮與干燥為防止有效成分長時間受熱破壞，采用三效減壓濃縮設(shè)備進行濃縮，參照原制劑工藝，醇沉液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.30(75℃)的稠膏。由于本品中含糖份較多，吸濕性很強，一般干燥、制粒較為困難，故考慮采用噴霧干燥一步制粒。這樣不僅干燥效率高、節(jié)省時間，而且干燥物外觀較好，且有效成分破壞少，便于制粒。
5.2制劑工藝研究枛輔料的選擇根據(jù)本品實際需要，選用糊精為主要輔料；由于本品含有水蛭，味腥，故選擇食用橙香精為嬌味劑。試驗時，稱取一定量的糊精和食用橙香精，與10％的水蛭原藥粉混勻，將相對密度為1.30的稠膏噴入其中，以制粒難易程度、輔料用量、口感等幾方面考察，通過試驗確定輔料合理的加入量，確定合適的制劑工藝條件。輔料選擇試驗及結(jié)果見下表。
制劑工藝條件比較

由以上試驗結(jié)果可知1倍處方量藥材經(jīng)提取后，噴入250g的糊精中即可制粒，加入食用橙香精15g，口感良好，制成顆粒1200g。另外，為了更好的保證療效，保護有效成分不受破壞，方便患者服用，本品采用鋁塑復合膜為包裝材料，防止本品受潮、受熱、見光等影響其穩(wěn)定性。
實驗例3對比實驗①溶出度考察采用小杯小漿法測定了體外溶出度，取片劑12片置有100ml37℃±0.5℃的0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液的小溶出杯中，每杯放2片，共6杯(微丸、滴丸則每杯放1丸)，立即啟動小漿并開始計時，轉(zhuǎn)速為50轉(zhuǎn)/分，分別在5min，10min，30min，45min，60min取樣，取樣量10ml(每次取樣后同時補充10ml37℃±0.5℃的0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液)，并經(jīng)0.45um濾膜過濾，注入高效液相色譜儀，測定黃芪甲苷的含量。
平均溶出量(％)時間(min)普通片劑滴丸劑微丸劑5 29.044.2 56.41050.485.5 89.03081.299.0 99.84587.099.5 100.06089.5100.098.9②崩解時間考察組別 崩解時間膠囊劑30min軟膠囊24min分散片30sec結(jié)果表明，本發(fā)明制劑性能良好。
實驗例4對II型糖尿病大鼠胰島素和C肽分泌的影響健康3月齡Wistar純系雄性大鼠(封閉群)40只，體重200～250g，隨機分成兩組。一組，20只僅尾靜脈注射25mg/kg體重鏈脲佐菌素。2周后測糖耐量，選20只異常者加喂高脂、高糖、高熱量飼料，為II型糖尿病模型組。另一組20只大鼠不注射STZ，正?；A(chǔ)飲食，為正常對照組。實驗第8周模型組與正常組動物分別靜脈取血測定空腹甘油三酯與膽固醇含量，并進行葡萄糖耐量實驗。以模型組中體重變化顯著，糖耐量異常，葡萄糖負荷后2h血糖值≥11.1mmol/L，甘油三酯、膽固醇濃度升高，與正常組存在顯著差異者為成功模型。模型組動物隨機分為兩組模型給藥組(A組)、模型對照組(B組)將正常組動物隨機分為兩組正常對照組(C組)、正常給藥組(D組)每組動物10只。A組及D組每日給予本發(fā)明軟膠囊30mg/kg；B組及C組每日以蒸餾水灌胃灌胃20d后分別測定空腹、口服葡萄糖后30、60、120min的胰島素和C肽水平。標本采集及胰島素和C肽測定將15ml試管預置于0℃冰水中。大鼠乙醚淺麻醉，尾靜脈取血12ml加入裝有40000U/ml抑肽酶20μl的冰冷試管中混勻，4℃下4000rpm離心10min，分離血清，于-25℃冰箱內(nèi)保存。
①模型組與正常組膽固醇、甘油三酯，空腹及口服葡萄糖后血糖值(x±s)分組 模型組對照組體重(kg)0.40±0.120.38±0.25甘油三酯(mmol/L)1.97±0.150.56±0.10膽固醇(mmol/L) 1.91±1.011.49±0.12空腹血糖(mmol/L)8.40±1.057.15±0.96口服葡萄糖2h血糖(mmol/L)14.43±2.73 7.63±1.50②對正常組大鼠空腹及口服葡萄糖后胰島素、C肽濃度的影響C組與D組在空腹及口服葡萄糖30min后胰島素C無顯著差異。
③模型給藥組與模型對照組空腹及口服葡萄糖后胰島素濃度(μIU/ml)分組 模型給藥組(A組) 模型對照組(B組)空腹 64.67±8.1058.60±11.2530min 69.31±9.4564.56±14.1360min 83.10±10.02 66.15±17.50120min 68.52±6.0388.40±12.13結(jié)果表明，本發(fā)明制劑具有良好恢復胰島功能的作用。
實驗例5治療大鼠糖尿病腎病的實驗研究選用150～190g的健康雄性Wistar大鼠30只，隨機分為正常對照組、糖尿病組和本發(fā)明微丸治療組，每組10只，分籠喂養(yǎng)，隨意飲水，將糖尿病組大鼠，禁食10h，用鏈脲佐菌素溶于0.1mol/L檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液(pH4.5)，配成1％的溶液，按50mg/kg單次腹腔注射，5d后取尾靜脈血，用血糖儀測定血糖，血糖≥16.7mmol/L為糖尿病大鼠(成模率100％)。正常對照組注射相應(yīng)體積的檸檬酸檸檬酸緩沖液。將本發(fā)明滴丸、膠囊劑組用生理鹽水溶解成0.5g/L溶液，治療組每日上午按70mg·kg-1·d-1劑量灌胃，糖尿病組胃飼等量的生理鹽水，繼續(xù)喂養(yǎng)至12周后采集標本，代謝籠收集24h尿，測24h尿蛋白排泄量(UPE)。稱質(zhì)量后麻醉，右心房取血測內(nèi)皮素，放免法測定胰島素，用CX7自動生化分析儀測血尿素氮(BUN)，并計算內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)，結(jié)果用體質(zhì)量校正。取雙腎，右腎部分以4％多聚甲醛固定，常規(guī)制片，光鏡檢查，用圖像分析儀測定MGPA和MGV，左腎用于組織ET含量測定。
正常對照組糖尿病組 本發(fā)明滴丸組 膠囊劑組MGPA 51.14±3.5665.26±4.2552.10±2.1259.24±1.09MGV 430.4±36.5648.2±23.2459.5±36.8501.2±15.0BUN 7.26±0.65 11.30±1.438.12±1.02 10.17±1.22Ccr 5.10±0.75 2.62±0.12 4.23±0.24 4.83±0.71UPE 9.24±1.20 42.78±10.10 18.35±1.4719.09±1.05結(jié)果表明，MGPA、MGV、BUN、Ccr和24h尿蛋白排泄量均較糖尿病腎病大鼠顯著改善，作用不低于膠囊劑組。
具體的實施方式(實施例中的份為重量；如公斤、克等)本發(fā)明的實施例1黃芪80份、生地黃60份、黃精60份、水蛭40份，取36份水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏，取剩余4份水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，加入2％CMS-Na，以濃度為12％淀粉漿為粘合劑，制軟材，過20目篩制粒，60℃烘干，20目整粒，加入3％CMS-Na、1％滑石粉、4％微粉硅膠，混合均勻，單沖式壓片機，2檔壓片力壓片，即得分散片，本產(chǎn)品口服、一日三次、每次2片。
本發(fā)明的實施例2黃芪120份、生地黃100份、黃精100份、水蛭80份，取72份的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏；取剩余8份水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，將浸膏粉與微晶纖維素按3∶2的比例混合，置造粒機中，以1％L-HPC溶液為粘合劑，以水為潤濕劑，在主機轉(zhuǎn)速220r/min、噴漿泵轉(zhuǎn)速25r/min、供粉機轉(zhuǎn)速20r/min、噴氣流量15L/min、噴氣壓力0.5Mpa、鼓風流量10×20L/min、噴漿時間4min、滾圓時間3min，制丸，即得微丸。
本發(fā)明的實施例3黃芪100份、生地黃83份、黃精83份、水蛭67份，取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏；取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，再按浸膏粉∶基質(zhì)＝1∶1.2，加入大豆油、黃蜂蠟、大豆卵磷脂的混合基質(zhì)，加熱熔融，混勻，得軟膠囊內(nèi)容物；膠液的制備以明膠∶甘油∶水＝1∶0.3∶0.5，取明膠加適量蒸餾水使其吸水膨脹，另將甘油及余下的水置煮膠鍋中加熱至70～80℃，混合均勻，加入膨脹的明膠攪拌，使之溶融成均勻的膠液，于70℃保溫3小時，靜置，除去上浮泡沫，用布袋濾過，于軟膠囊機中壓制成軟膠囊，壓制成軟膠囊，置滾桶干燥機中定型，整丸，干燥，即得軟膠囊。
本發(fā)明的實施例4黃芪100份、生地黃83份、黃精83份、水蛭67份，取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏；取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，以PEG4000為基質(zhì)，加入稠膏，藥物質(zhì)量∶基質(zhì)體積＝2∶5，攪拌均勻，密閉，保溫，用內(nèi)徑4.2mm、外徑5.2mm滴管，以每分鐘30～40滴的速度滴入甲基硅油∶液體石蠟＝3∶2的混合冷卻液中，冷卻柱高130cm，轉(zhuǎn)速15r·min-1，即得滴丸。
本發(fā)明的實施例5黃芪100份、生地黃83份、黃精83份、水蛭67份，取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加6倍量水煎煮2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，制粒，壓片，即得片劑。
本發(fā)明的實施例6黃芪100份、生地黃83份、黃精83份、水蛭67份，取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏；稱取糊精或淀粉10---500g、食用橙香精1---100g，拌入上述水蛭細粉，混合均勻，采用噴霧干燥制粒機，噴入上述稠膏，制粒，整粒，即得顆粒劑。
本發(fā)明的實施例7黃芪80份、生地黃60份、黃精60份、水蛭40份，取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏；取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，加入乙醇制粒，裝膠囊，即得膠囊劑。
本發(fā)明的實施例8黃芪80份、生地黃60份、黃精60份、水蛭40份，取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加12倍量水煎煮1小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入40％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，加入注射用水、糖漿，即得口服液。
本發(fā)明的實施例9黃芪120份、生地黃100份、黃精100份、水蛭80份，取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加12倍量水煎煮3次，每次3小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏；取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，加入卡波姆，攪勻，即得凝膠劑。
本發(fā)明的實施例10黃芪120份、生地黃100份、黃精100份、水蛭80份，取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成相對密度為1.0-1.50(75℃)的稠膏；取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，加入微晶纖維素，制粒，壓片，即得口崩片。
權(quán)利要求
1.一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑，其特征在于按照重量組分計算，它主要由黃芪80～120份、生地黃60～100份、黃精60～100份、水蛭40～80份或相應(yīng)重量份它們的提取物制作而成。
2.按照權(quán)利要求1所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑，其特征在于按照重量組分計算，它主要由黃芪100份、生地黃83份、黃精83份、水蛭67份或相應(yīng)重量份它們的提取物制作而成。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑，其特征在于所述的制劑包括注射劑和口服制劑，其中注射劑包括注射液、粉針、凍干粉針、大輸液；口服制劑包括口服凝膠劑、片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、丸劑、微丸、散劑、滴丸劑、緩釋制劑、控釋制劑、凝膠劑、口服液體制劑、煎膏劑、浸膏劑和膜劑藥劑學上所有可以接受的劑型。
4.按照權(quán)利要求3所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑，其特征在于所述的制劑是分散片、軟膠囊劑、顆粒劑、微丸或滴丸。
5.如權(quán)利要求1～4中任意一項所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑的制備方法，其特征在于取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加水煎煮，過濾，合并濾液濃縮成稠膏，然后加入乙醇醇沉，靜置，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，然后分別制成不同的制劑。
6.按照權(quán)利要求5所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑的制備方法，其特征在于取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加6-12倍量水煎煮1-3次，每次1-3小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達30-80％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成75℃時測相對密度為1.0-1.50的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，然后分別制成不同的制劑。
7.按照權(quán)利要求5或6所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑的制備方法，其特征在于取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成75℃時測相對密度為1.0-1.50的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，加入2％CMS-Na，以濃度為12％淀粉漿為粘合劑，制軟材，過20目篩制粒，60℃烘干，20目整粒，加入3％CMS-Na、1％滑石粉、4％微粉硅膠，混合均勻，單沖式壓片機，2檔壓片力壓片，即得分散片劑。
8.按照權(quán)利要求5或6所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑的制備方法，其特征在于取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成75℃時測相對密度為1.0-1.50的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，將浸膏粉與微晶纖維素按3∶2的比例混合，置造粒機中，以1％L-HPC溶液為粘合劑，以水為潤濕劑，在主機轉(zhuǎn)速220r/min、噴漿泵轉(zhuǎn)速25r/min、供粉機轉(zhuǎn)速20r/min、噴氣流量15L/min、噴氣壓力0.5Mpa、鼓風流量10×20L/min、噴漿時間4min、滾圓時間3min，制丸，即得微丸劑。
9.按照權(quán)利要求5或6所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑的制備方法，其特征在于取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成75℃時測相對密度為1.0-1.50的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，再按浸膏粉∶基質(zhì)＝1∶1.2，加入大豆油、黃蜂蠟、大豆卵磷脂的混合基質(zhì)，加熱熔融，混勻，得軟膠囊內(nèi)容物；膠液的制備以明膠∶甘油∶水＝1∶0.3∶0.5，取明膠加適量蒸餾水使其吸水膨脹，另將甘油及余下的水置煮膠鍋中加熱至70～80℃，混合均勻，加入膨脹的明膠攪拌，使之溶融成均勻的膠液，于70℃保溫3小時，靜置，除去上浮泡沫，用布袋濾過，于軟膠囊機中壓制成軟膠囊，壓制成軟膠囊，置滾桶干燥機中定型，整丸，干燥，即得軟膠囊劑。
10.按照權(quán)利要求5或6所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑的制備方法，其特征在于取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成75℃時測相對密度為1.0-1.50的稠膏，取剩余水蛭粉碎同上述稠膏混合均勻，干燥、粉碎，以PEG4000為基質(zhì)，加入稠膏，藥物質(zhì)量∶基質(zhì)體積＝2∶5，攪拌均勻，密閉，保溫，用內(nèi)徑4.2mm、外徑5.2mm滴管，以每分鐘30～40滴的速度滴入甲基硅油∶液體石蠟＝3∶2的混合冷卻液中，冷卻柱高130cm，轉(zhuǎn)速15r·min-1，即得滴丸劑。
11.按照權(quán)利要求5或6所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑的制備方法，其特征在于取90％的水蛭、全量的黃芪、全量的生地黃、全量的黃精，加10倍量水煎煮2次，每次2小時，過濾，合并濾液濃縮成在90℃測定比重為1.2～1.5的稠膏，然后加入90％乙醇，攪拌均勻，使含醇量達50％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至盡，濃縮成75℃時測相對密度為1.0-1.50的稠膏，稱取糊精或淀粉10-500g、食用橙香精1-100g，拌入上述水蛭細粉，混合均勻，采用噴霧干燥制粒機，噴入上述稠膏，制粒，整粒，即得顆粒劑
全文摘要
本發(fā)明是一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的芪蛭降糖制劑及其制備方法，它主要是由黃芪、生地黃、黃精、水蛭制作而成的；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能降低血糖，改善糖、脂代謝，提高血漿白蛋白水平，減少尿蛋白排出，增加肌肉蛋白貯備，提供必須氨基酸，從整體上改善腎小球疾病的蛋白質(zhì)代謝紊亂，抑制腎臟NO合成，可部分糾正糖尿病早期的腎臟高灌注、高濾過；抑制糖尿病大鼠腎皮質(zhì)轉(zhuǎn)化生長因子－β(TGF－β)的過度表達，影響糖尿病的發(fā)生和發(fā)展；抑制腎臟肥大，改善腎功能，改善糖尿病的臨床癥狀，治療糖尿病及糖尿病引起的各種并發(fā)癥。本發(fā)明處方明確，安全合理，工藝簡單易行，制劑的不良反應(yīng)小、可供病人長期使用。
文檔編號A61K9/00GK1733251SQ200510200470
公開日2006年2月15日 申請日期2005年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月13日
發(fā)明者周霞 申請人:貴陽云巖西創(chuàng)藥物科技開發(fā)有限公司