專利名稱：一種主要用于肝臟疾病的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，涉及一種主要由枸杞子或其提取物、當歸或其提取物和甘草酸或其藥學上可接受的鹽制成的藥物組合物，及其制備方法。
2、背景技術肝炎是一種常見病和多發(fā)病，據(jù)不完全統(tǒng)計，我國肝炎患者和病毒攜帶者占總?cè)丝诘?0％。其中以病毒性肝炎為主，病毒性肝炎又可分為急性肝炎、慢性肝炎、重癥肝炎和膽型肝炎。肝炎是一種傳染性疾病，由于其流行性廣、危害性大、發(fā)病率高，是目前國內(nèi)外公認的疑難病癥之一。中國是乙型肝炎的高流行區(qū)，有超過40％的人受過乙型肝炎病毒(HBV)感染，有1億多人口為慢性HBsAg攜帶者。乙型肝炎治愈率僅為10％，絕大部分轉(zhuǎn)為慢性肝炎，嚴重的轉(zhuǎn)化為肝腹水、肝癌。其中，肝纖維化的形成和發(fā)展是影響預后和病情轉(zhuǎn)危的關鍵病理變化之一，也是臨床慢性肝病治療中最為復雜的疑難問題。國內(nèi)外近年來治療肝炎的藥物雖然有許多，但大多療效并不理想，治療后病情易反復，且價格又十分昂貴。至今，市場上仍缺少抗肝炎療效確切，副作用又較小的藥物。
枸杞子為茄科植物寧夏枸杞Lvcium barbarum L.的干燥成熟果實。味甘，性平，歸肝、腎經(jīng)，具有滋補肝腎、益精明目等功效。枸杞子含有枸杞多糖、多種氨基酸、微量元素、維生素、?；撬?、生物堿、揮發(fā)油等活性成分，一般認為其主要有效成分為枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides，LBP)。現(xiàn)代藥理試驗研究表明，枸杞子具有明顯抑制乙醇所致血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)升高的作用，對大量飲酒造成的肝損傷具有保護作用；枸杞水煎劑能有效降低四氯化碳引起的小鼠的ALT升高，對醋氨酚所致的肝損傷具有保護作用；枸杞粗多糖可明顯抑制四氯化碳引起的小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的升高，并能改善和恢復各病理指標；枸杞多糖可使四氯化碳所致的ALT值升高明顯降低，能改善酒精性肝病模型大鼠的線粒體形態(tài)、減輕肝細胞脂肪變性和炎癥壞死程度。
當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。味甘、辛，性溫，歸肝、心、脾經(jīng)，具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便等功效。當歸的化學成分可分為揮發(fā)油和水溶性物質(zhì)兩部分。揮發(fā)油中含藁本內(nèi)酯(ligustilide)和正丁烯基內(nèi)酯(n-butylidene phthalide)等30余種化合物，而以藁本內(nèi)酯含量為最多(約占揮發(fā)油的45％)，正丁烯內(nèi)酯則為特異香氣成分。水溶性成分中含阿魏酸、當歸多糖、菸酸、葉酸、亞葉酸、生物素、丁二酸、尿嘧啶和腺嘌呤等。現(xiàn)代藥理試驗研究表明，當歸對四氯化碳所致小鼠肝損傷具有保護作用，可減輕四氯化碳所致肝損傷大鼠的肝纖維化程度；當歸提取物對多種肝損傷有一定的保護作用；當歸多糖(Angelica sinensis polysaccharides，ASP)對小鼠四氯化碳肝損傷有良好的保護作用。
甘草酸(glycyrrbizie acid，GA)為豆科植物甘草、光果甘草、脹果甘草的根及根莖的主要有效成分之一，具有抗炎、抗病毒、保肝解毒及增強免疫功能等作用。甘草酸有糖皮質(zhì)激素樣藥理作用，能提高肝炎病人血清氫化可的松的濃度，降低慢性肝炎患者血清及外周單個核細胞中白介素-6和腫瘤壞死因子，減輕免疫病理反應，促進肝功能恢復，清除癥狀，縮小肝脾腫大，降酶快，退黃疸顯著。甘草酸單銨和甘草酸二銨分別為甘草酸的單銨鹽和二銨鹽。甘草酸單銨鹽A和甘草酸單銨鹽S已分別載入國家藥品標準化學藥品地方標準上升國家標準第十二冊和第十三冊(國家藥典委員會編)，其中規(guī)定按干燥品計算，含甘草酸單銨鹽(C42H61O16NH4)分別不得少于67.0％和73.0％。甘草酸單銨對各型急慢性肝炎、肝纖維化、中毒性肝炎、外傷性肝炎有一定的輔助治療作用。甘草酸二銨為20β-羧基-11氧代正齊墩果烷-12-烯-3β基-2-β-D-葡萄吡喃糖苷醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸二銨鹽，已載入國家藥品標準新藥轉(zhuǎn)正標準第43冊(國家藥典委員會編)，其中規(guī)定按干燥品計算，含C42H68N2O16應為97.0％～103.0％。甘草酸二銨是中藥甘草有效成分的第三代提取物，具有較強的抗炎、保護肝細胞膜及改善肝功能的作用；藥理實驗證明，小鼠口服能減輕因四氯化碳、硫代乙酰胺和D-氨基半乳糖引起的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶升高，還能明顯減輕D-氨基半乳酸對肝臟的形態(tài)損傷和改善免疫因子對肝臟形態(tài)的慢性損傷。
目前，利用枸杞子或其提取物、當歸或其提取物和甘草酸或其藥學上可接受的鹽的相互作用，配伍組方，制備用于治療肝臟疾病方面的藥物，尚未見報道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療肝臟疾病，延緩或減少肝炎向肝腹水或肝癌的轉(zhuǎn)化，提高肝炎患者的生命質(zhì)量，本發(fā)明提供了一種主要用于治療肝臟疾病的藥物組合物及其制備方法，主要由枸杞子或其提取物、當歸或其提取物和甘草酸或其藥學上可接受的鹽制成，對四氯化碳、醋氨酚所致的小鼠急性肝損傷、四氯化碳誘導的大鼠慢性肝損傷、酒精誘導的小鼠慢性肝損傷均具有顯著的保護作用，并且可顯著抑制鴨乙型肝炎病毒，產(chǎn)生了意想不到的效果。
本發(fā)明藥物組合物主要由枸杞子、當歸和甘草酸或其藥學上可接受的鹽制成，其重量份數(shù)為枸杞子50～1000份、當歸50～1000份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽1～50份，優(yōu)選為枸杞子100～500份、當歸100～500份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽2～30份，進一步優(yōu)選為枸杞子200份、當歸200份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽4～15份。
上述藥物組合物中甘草酸藥學上可接受的鹽可以為金屬鹽或有機氮鹽，金屬鹽可以是鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、鋅鹽，有機氮鹽可以是單銨鹽、二銨鹽；優(yōu)選為甘草酸單銨和甘草酸二銨。枸杞子、當歸、甘草酸單銨的最優(yōu)重量份數(shù)為枸杞子200份、當歸200份、甘草酸單銨4份，枸杞子、當歸、甘草酸二銨的最優(yōu)重量份數(shù)為枸杞子200份、當歸200份、甘草酸二銨15份。
上述藥物組合物中枸杞子、當歸可以用適宜的溶劑和方法單獨或混合提取加工得到提取物，總提取物再與甘草酸或其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的輔料混合制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型?！皢为毺崛　笔侵?，枸杞子、當歸每一味藥材分別通過不同的工藝單獨提取得到提取物，再將各提取物混合得到總提取物。“混合提取”是指，枸杞子、當歸兩味藥材一起提取得到總提取物。所得的總提取物中所含的主要有效成分為枸杞多糖和當歸多糖，主要有效成分的總含量最好不低于50％。
上述藥物組合物的制備方法中，所用的溶劑是指藥學上常用的溶劑，可以是水或乙醇等；所用的方法是指中藥提取的一般方法，可以是煎煮法、回流提取法、浸漬法、滲漉法或連續(xù)提取法等。例如，枸杞子可以用煎煮法、回流提取法、水提醇沉法提取制備得到枸杞多糖，當歸可以用煎煮法、浸漬法、水提醇沉法提取制備得到當歸多糖，枸杞子和當歸可以用煎煮法、回流提取法、水提醇沉法共提制備得到總多糖。
原料藥的具體制備方法如下本發(fā)明提供了一種枸杞子的優(yōu)選提取工藝(以多糖為主要有效成分)，如下取枸杞子藥材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇后棄去。藥渣加水煎煮三次，每次1小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，攪拌下加入濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，用4倍體積的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小時后，濾取沉淀，得粗多糖。粗多糖加適量水溶解，濾過，濾液加入2％活性炭，加熱至80℃并保溫20分鐘，趁熱濾過，濾液濃縮至相對密度1.14～1.16(60℃)，加4倍體積的乙醇沉淀，冷藏24小時后抽濾，沉淀用無水乙醇，丙酮，乙醚各洗滌一次，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的枸杞多糖得率為5～6％，多糖的含量不低于80％。
枸杞子還可以通過下述工藝提取制備，但不僅限于下述工藝工藝一取枸杞子藥材，置索氏提取器中，依次用石油醚、乙醚和80％的乙醇回流提取4小時，殘渣揮干溶劑后，再加水回流提取4小時，減壓濃縮至一半體積，加入0.1％活性炭脫色2次，抽濾，濾液加乙醇使含醇量達80％，冷藏過夜，濾過，沉淀依次用無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的枸杞多糖得率為6～8％，多糖的含量不低于50％。
工藝二取枸杞子藥材，加冷水浸提三次，每次1小時，第一次加水10倍量，第二、三次各加水8倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.10～1.12(60℃)，放冷，加乙醇使含乙醇量為70％，靜置過夜，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.12～1.14(60℃)，加3倍量水，充分攪拌，冷藏48小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.14～1.16(60℃)，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的枸杞多糖得率為7～10％，多糖的含量不低于30％。
本發(fā)明提供了一種當歸的優(yōu)選提取工藝(以當歸多糖為主要有效成分)，如下取當歸藥材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇后棄去。藥渣加水煎煮三次，每次1小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，攪拌下加入濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，用4倍體積的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小時后，濾取沉淀，得粗多糖。粗多糖加適量水溶解，濾過，濾液加入2％活性炭，加熱至80℃并保溫20分鐘，趁熱濾過，濾液濃縮至相對密度1.14～1.16(60℃)，加4倍體積的乙醇沉淀，冷藏24小時后抽濾，沉淀用無水乙醇、丙酮、乙醚各洗滌一次，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的當歸多糖得率為1～3％，多糖的含量不低于80％。
當歸還可通過下述工藝提取制備，但不僅限于下述工藝工藝一取當歸藥材，加10倍量85℃水浸提三次，每次2小時，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，加三氯甲烷-正丁醇提取殘余蛋白質(zhì)及油脂，60％乙醇中放置過夜，濾出沉淀，依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的當歸多糖得率為3～5％，多糖的含量不低于40％。
工藝二取當歸藥材，加水煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.10～1.12(60℃)，放冷，加乙醇使含乙醇量為65％，靜置過夜，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.12～1.14(60℃)，加3倍量水，充分攪拌，冷藏48小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.14～1.16(60℃)，加乙醇使含乙醇量為85％，靜置過夜，濾過，沉淀用無水乙醇，丙酮，乙醚各洗滌一次，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的當歸多糖得率為4～6％，多糖的含量不低于30％。
本發(fā)明提供了一種枸杞子和當歸共提的優(yōu)選工藝(以枸杞多糖和當歸多糖為主要有效成分)，如下取枸杞子、當歸藥材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇后棄去。藥渣加水煎煮三次，每次1小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，攪拌下加入濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，用4倍體積的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小時后，濾取沉淀，得粗多糖。粗多糖加適量水溶解，濾過，濾液加入2％活性炭，加熱至80℃并保溫20分鐘，趁熱濾過，濾液濃縮至相對密度1.14～1.16(60℃)，加4倍體積的乙醇沉淀，冷藏24小時后抽濾，沉淀用無水乙醇，丙酮，乙醚各洗滌一次，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的枸杞子當歸共提物得率為3～4％，總多糖的含量不低于80％。
枸杞子和當歸還可通過下述工藝共提，但不僅限于下述工藝工藝一取枸杞子、當歸藥材，置索氏提取器中，依次用石油醚、乙醚和80％的乙醇回流提取4小時，殘渣揮干溶劑后，再加水回流提取4小時，減壓濃縮至一半體積，加入0.1％活性炭脫色2次，抽濾，濾液加乙醇使含醇量達85％，冷藏過夜，濾過，沉淀依次用無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的枸杞子當歸共提物得率為4～6％，總多糖的含量不低于50％。
工藝二取枸杞子、當歸藥材，加水煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.10～1.12(60℃)，放冷，加乙醇使含乙醇量為65％，靜置過夜，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對密度為1.12～1.14(60℃)，放冷，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，加乙醇使含醇量達80％，冷藏過夜，濾過，沉淀用無水乙醇，丙酮，乙醚各洗滌一次，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備枸杞子當歸共提物得率為5～7％，總多糖的含量不低于30％。
本發(fā)明藥物組合物，還可以由枸杞多糖代替枸杞子、當歸多糖代替當歸投料制得。按照提取物相對于藥材的得率計算，本發(fā)明藥物組合物的各原料藥的重量份為枸杞多糖2.5～50份、當歸多糖1～20份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽1～50份，優(yōu)選為枸杞多糖5～25份、當歸多糖2～10份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽2～30份，進一步優(yōu)選為枸杞多糖10份、當歸多糖4份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽4～15份。
上述藥物組合物中甘草酸藥學上可接受的鹽可以為金屬鹽或有機氮鹽，金屬鹽可以是鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、鋅鹽，有機氮鹽可以是單銨鹽、二銨鹽；優(yōu)選為甘草酸單銨和甘草酸二銨。枸杞多糖、當歸多糖、甘草酸單銨的最優(yōu)重量份數(shù)為杞多糖10份、當歸多糖4份、甘草酸單銨4份，枸杞多糖、當歸多糖、甘草酸二銨的最優(yōu)重量份數(shù)為杞多糖10份、當歸多糖4份、甘草酸二銨15份。
上述藥物組合物中，枸杞多糖的主要有效成分的為多糖，多糖的含量不低于30％，最好不低于50％；當歸多糖的主要有效成分為多糖，多糖的含量不低于30％，最好不低于50％。枸杞多糖、當歸多糖均可參照前述方法制備。按上述配比得到的總提取物中的主要有效成分為枸杞多糖和當歸多糖，主要有效成分的總含量最好不低于50％。
本發(fā)明藥物組合物，藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。上述組成，若以克為單位，可以制成10～1000次用量的制劑，如作為水針或粉針，可制成10～1000支，每次用量1～10支。如作為片劑或膠囊劑，可制成10～1000片，每次服用1～10片。上述組成是按重量份作為配比的，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克或噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位。上述重量份數(shù)對于特殊病人，可以相應調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發(fā)明藥物組合物，可以制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型，以口服或胃腸外給藥的方式施用于需要這種治療的患者?？诜o藥時，可制成口服常釋劑型(如片、腸溶片、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊等)、緩釋控釋劑型(如緩釋片、控釋片、緩釋膠囊、控釋膠囊等)、口服液體劑(如口服溶液、糖漿等)、滴丸、顆粒劑等；胃腸外給藥時，可將其制成注射用的溶液、注射用水或油懸浮劑等。優(yōu)選劑型為注射劑和口服制劑，如粉針、水針、輸液、片、膠囊、顆粒等。
上述藥物組合物，可采用現(xiàn)有制藥領域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，必要時可以添加各種藥學上可接受的輔料，包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
上述藥物組合物在制成注射劑時，為了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶劑。輸液中可以加入氯化鈉、葡萄糖等用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑。粉針中可加入甘露醇等賦形劑。
本發(fā)明藥物組合物，主要用于制備抗肝臟疾病的藥物。藥理藥效研究表明，枸杞子或其提取物、當歸或其提取物、甘草酸或其藥學上可接受的鹽合并用藥對四氯化碳(CCl4)和醋氨酚所致的小鼠肝損傷、四氯化碳(CCl4)誘導的大鼠慢性肝損傷、酒精誘導的小鼠慢性肝損傷均具有顯著的保護作用，并可顯著抑制鴨乙型肝炎病毒(DHBV)；提示其在抗病毒性肝炎、藥物性肝損傷、脂肪肝、酒精肝方面將有顯著療效。
本發(fā)明藥物組合物，具有下列優(yōu)點(1)提供了一種新的復方抗肝炎藥物，滿足臨床急需。
(2)對本發(fā)明藥物組合物中藥物組份的用量進行了大量摸索研究，通過不同配比制成的注射液對四氯化碳(CCl4)致肝損傷小鼠血清ALT和AST水平的影響的研究，篩選出具有顯著療效的重量配比。
(3)藥理藥效研究表明，本發(fā)明藥物組合物對醋氨酚所致的小鼠肝損傷有顯著保護作用，能顯著降低血清ALT、GST水平和肝組織LPO水平；對四氯化碳誘導的大鼠慢性肝損傷有顯著保護作用，能顯著降低血清ALT和AST水平，顯著升高血清ALB水平，顯著減輕肝纖維化程度和降低纖維化發(fā)生率；對酒精誘導的小鼠慢性肝損傷也有顯著的保護作用，能顯著降低血清ALT、AST、TG水平，減輕肝組織病變；可以顯著抑制鴨乙型肝炎病毒(DHBV)，高劑量組的效果與陽性對照組的效果相當，并且停藥后無反跳現(xiàn)象。產(chǎn)生了意想不到的效果。
(4)本發(fā)明藥物組合物，可以以枸杞子、當歸、甘草酸或其藥學上可接受的鹽投料，也可以以枸杞多糖、當歸多糖、甘草酸或其藥學上可接受的鹽為原料，可制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型。
(5)對本發(fā)明藥物組合物制成的制劑或所用的提取物，進行了鑒別、含量測定、穩(wěn)定性研究等，有效成分明確、含量高，制劑穩(wěn)定性好，便于控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥安全。
(6)提供了優(yōu)選的制備工藝，簡便易行，且制劑質(zhì)量高，適應于工業(yè)化大生產(chǎn)。
以下通過試驗例來進一步闡述本發(fā)明所述藥物組合物的有益效果，這些試驗例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學試驗和穩(wěn)定性試驗。本發(fā)明藥物組合物具有下列有益效果，但不應將此理解為本發(fā)明藥物組合物僅具有下列有益效果。
以下試驗例中用GDG1代替以枸杞多糖、當歸多糖、甘草酸單銨為主要有效成分的藥物組合物，用GDG2代替以枸杞多糖、當歸多糖、甘草酸二銨為主要有效成分的藥物組合物。以下試驗例中所用的枸杞多糖為實施例1制備所得，所用的當歸多糖為實施例2制備所得，所用的枸杞子當歸共提物為實施例3制備所得。試驗例2～6中所用的GDG1注射液、GDG2注射液為實施例4制備所得。
試驗例1 枸杞子、當歸、甘草酸單銨甘草酸二銨并用藥對四氯化碳致小鼠肝損傷的影響受試動物 健康小鼠，240只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機分為24組，每組10只。
供試品 氯化鈉注射液(正常對照組)250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司枸杞注射液自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相當于原藥材2g)當歸注射液自制，2ml，含當歸多糖43mg(相當于原藥材2g)甘草酸單銨注射液自制，5ml:40mg甘草酸二銨注射液自制，10ml:150mg(枸杞子+當歸+甘草酸單銨)不同配比的注射液自制，見表1-1(枸杞子+當歸+甘草酸二銨)不同配比的注射液自制，見表1-1給藥劑量見表1-1。
試驗方法 小鼠隨機分為24組，每組10只，分別為正常對照組、模型組和各給藥組。正常對照組和模型組尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg，每日1次，連續(xù)7天；各給藥組按表1-1尾靜脈注射給藥，每日1次，連續(xù)7天。最后一次尾靜脈注射2h后，正常對照組腹腔注射花生油10ml/kg，其余各組均腹腔注射0.12％四氯化碳(CCl4)花生油溶液10ml/kg。16h后斷頭處死動物，取血，離心，取血清，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平。斷頭取血后，肝組織作常規(guī)病理組織學檢查。
試驗結(jié)果 見表1-1。與正常對照組相比較，模型組的血清ALT和AST水平均極顯著升高(p＜0.01)，病理組織學檢查發(fā)現(xiàn)肝組織明顯受損，并出現(xiàn)壞死，說明造模成功。與模型組相比較，各給藥組對CCl4誘導的小鼠肝損傷均具有保護作用，能降低血清ALT和AST水平，減輕肝組織病變和壞死；枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液對CCl4誘導的小鼠肝損傷的具有顯著的保護作用(p＜0.05)；枸杞50～1000份、當歸50～1000份、甘草酸單銨或甘草酸二銨1～50份制成的注射液對CCl4誘導的小鼠肝損傷均具有極顯著的保護作用(p＜0.01，p＜0.001)，枸杞子100～500份、當歸100～500份、甘草酸單銨或甘草酸二銨2～30份制成的注射液的保護作用更好，尤其以枸杞子200份、當歸200份、甘草酸單銨4份或甘草酸二銨15份制成的注射液的保護作用最好。
與枸杞注射液組相比較，各個配比的(枸杞子+當歸+甘草酸單銨)注射液和(枸杞子+當歸+甘草酸二銨)注射液對CCl4誘導的小鼠肝損傷的保護作用均具有顯著的保護作用(p＜0.05，p＜0.01)。與當歸注射液相比較，各個配比的(枸杞子+當歸+甘草酸單銨)注射液和(枸杞子+當歸+甘草酸二銨)注射液對CCl4誘導的小鼠肝損傷的保護作用均具有顯著的保護作用(p＜0.05，p＜0.01)。與甘草酸單銨注射液相比較，各個配比的(枸杞子+當歸+甘草酸單銨)注射液對CCl4誘導的小鼠肝損傷的保護作用均具有顯著的保護作用(p＜0.05，p＜0.01)。與甘草酸二銨注射液相比較，各個配比的(枸杞子+當歸+甘草酸二銨)注射液對CCl4誘導的小鼠肝損傷的保護作用均具有顯著的保護作用(p＜0.05)。
結(jié)論 試驗結(jié)果表明，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對CCl4誘導的小鼠肝損傷具有顯著的保護作用，并且，相同給藥劑量下，各個配比的(枸杞子+當歸+甘草酸單銨)注射液和(枸杞子+當歸+甘草酸二銨)注射液對CCl4誘導的小鼠肝損傷的保護作用均優(yōu)于枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液單獨使用的效果。提示，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨并用藥具有協(xié)同作用，在抗肝炎、肝損傷方面有顯著作用。
表1-1 枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對CCl4肝損傷小鼠的影響(平均值±標準偏差，n＝10)
與正常對照組相比較#p＜0.05，##p＜0.01；與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與枸杞注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與當歸注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01；與甘草酸單銨注射液組相比較ep＜0.05，fp＜0.01；與甘草酸二銨注射液組相比較gp＜0.05，hp＜0.01。
試驗例2 枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對醋氨酚致小鼠肝損傷的作用受試動物 健康小鼠，120只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機分為12組，每組10只。
供試品 氯化鈉注射液(正常對照組)250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司枸杞注射液自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相當于原藥材2g)當歸注射液自制，2ml，含當歸多糖43mg(相當于原藥材2g)甘草酸單銨注射液自制，5ml:40mg甘草酸二銨注射液自制，10ml:150mgGDG1注射液自制，5ml:193mg，含枸杞多糖110mg(相當于原藥材2g)、當歸多糖43mg
(相當于原藥材2g)、甘草酸單銨40mgGDG2注射液自制，5ml:293mg，含枸杞子當歸共提物143mg(相當于原藥材枸杞子2g、當歸2g)、甘草酸二銨150mg給藥劑量 見表1-2。
試驗方法 小鼠120只，隨機分為12組，每組10只，分別為正常對照組、模型組和各給藥組。除正常對照組外，其余各組動物均腹腔注射醋氨酚(AP)100ml/kg，禁食過夜。正常對照組和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg，每日1次，連續(xù)10天；各給藥組按表1-2尾靜脈注射給藥，每日1次，連續(xù)10天。最后一次尾靜脈注射6h后，正常對照組腹腔注射生理鹽水，其余各組均腹腔注射醋氨酚300mg/kg。16h后處死，取血和肝臟，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)和肝組織的過氧化脂質(zhì)(LPO)。
試驗結(jié)果 見表1-2。與正常對照組相比較，模型組的血清ALT、GST水平和肝組織LPO水平顯著升高(p＜0.01)，說明造模成功。與模型組相比較，各給藥組對醋氨酚致小鼠肝損傷均具有保護作用，降低血清ALT、GST水平和肝組織LPO水平；枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液對醋氨酚致小鼠肝損傷具有顯著的保護作用(p＜0.05)，各劑量GDG1注射液和GDG2注射液對醋氨酚致小鼠肝損傷具有極顯著的保護作用(p＜0.01，p＜0.001)。
表1-2枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對醋氨酚致小鼠肝損傷的作用(平均值±標準偏差，n＝10)
與正常對照組相比較#p＜0.05，##p＜0.01；與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與枸杞注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與當歸注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01；與甘草酸單銨注射液組相比較ep＜0.05，fp＜0.01；與甘草酸二銨注射液組相比較gp＜0.05，hp＜0.01。
結(jié)論試驗結(jié)果表明，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對醋氨酚致小鼠肝損傷具有顯著的保護作用，并且保護作用與給藥劑量相關，高劑量組效果最好；各劑量GDG1注射液和GDG2注射液對醋氨酚致小鼠肝損傷的保護作用均優(yōu)于枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液單獨使用的效果。提示，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥具有協(xié)同作用，在抗急性肝損傷、脂肪肝方面有顯著作用。
試驗例3 枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨聯(lián)合并用藥對大鼠慢性肝損傷的作用受試動物 健康大鼠，120只，體重180～200g，雌雄兼用，隨機分為12組，每組10只。
供試品 氯化鈉注射液(正常對照組)250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司枸杞注射液自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相當于原藥材2g)當歸注射液自制，2ml，含當歸多糖43mg(相當于原藥材2g)甘草酸單銨注射液自制，5ml:40mg甘草酸二銨注射液自制，5ml:150mgGDG1注射液自制，5ml:193mg，含枸杞多糖110mg(相當于原藥材2g)、當歸多糖43mg(相當于原藥材2g)、甘草酸單銨40mgGDG2注射液自制，5ml:293mg，含枸杞子當歸共提物143mg(相當于原藥材枸杞子2g、當歸2g)、甘草酸二銨150mg給藥劑量 見表1-3。
試驗方法 健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每周2次，共8周，作為正常對照組。其余大鼠，皮下注射40％四氯化碳(CCl4)花生油溶液3ml/kg，每周2次，共8周，誘導肝纖維化；隨后隨機分為11組，每組10只，分別為模型組和各給藥組。此后，正常對照組和模型組每日腹腔注射生理鹽水20ml/kg，每日1次，連續(xù)10周；各給藥組按表1-3腹腔注射給藥，每日1次，共10周。末次給藥24h后，下腔靜脈采血，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和白蛋白水平(ALB)；同時，取肝組織作常規(guī)病理組織學檢查。
試驗結(jié)果 見表1-3。與正常對照組相比較，模型組的血清ALT、AST水平均極顯著升高(p＜0.01)，血清ALB水平極顯著下降(p＜0.01)，病理組織學檢查發(fā)現(xiàn)試驗大鼠出現(xiàn)比較典型的肝纖維化，說明造模成功。與模型組相比較，各給藥組對肝纖維化大鼠均具有保護作用，能降低血清ALT和AST水平，升高血清ALB水平，減輕肝纖維化程度和纖維化發(fā)生率；枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液對肝纖維化大鼠具有顯著的保護作用(p＜0.05)；各劑量GDG1注射液和GDG2注射液對肝纖維化大鼠具有極顯著的保護作用(p＜0.01，p＜0.001)。
結(jié)論試驗結(jié)果表明，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對肝纖維化大鼠具有顯著的保護作用，并且保護作用與給藥劑量相關，高劑量組效果最好；各劑量GDG1注射液和GDG2注射液對肝纖維化大鼠的保護作用均優(yōu)于枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液單獨使用的效果。提示，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥具有協(xié)同作用，在抗肝纖維化、慢性肝損傷方面有顯著作用。
表1-3 枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對肝纖維化大鼠的影響(平均值±標準偏差，n＝10)
與正常對照組相比較#p＜0.05，##p＜0.01；與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與枸杞注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與當歸注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01；與甘草酸單銨注射液組相比較ep＜0.05，fp＜0.01；與甘草酸二銨注射液組相比較gp＜0.05，hp＜0.01。
試驗例4 枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨聯(lián)合并用藥對小鼠慢性酒精性肝損傷的作用受試動物 健康小鼠，120只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機分為12組，每組10只。
供試品 氯化鈉注射液(正常對照組)250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司枸杞注射液自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相當于原藥材2g)當歸注射液自制，2ml，含當歸多糖43mg(相當于原藥材2g)甘草酸單銨注射液自制，5ml:40mg甘草酸二銨注射液自制，10ml:150mgGDG1注射液自制，5ml:193mg，含枸杞多糖110mg(相當于原藥材2g)、當歸多糖43mg(相當于原藥材2g)、甘草酸單銨40mgGDG2注射液自制，5ml:293mg，含枸杞子當歸共提物143mg(相當于原藥材枸杞子2g、當歸2g)、甘草酸二銨150mg給藥劑量 見表1-4。
試驗方法 健康小鼠10只，灌胃給予蒸餾水12ml/kg，每天1次，共5周，作為正常對照組。其余小鼠，灌胃給予50％乙醇12ml/kg，每天1次，共5周；隨后隨機分為11組，分別為模型組和各給藥組。此后，正常對照組和模型組每日腹腔注射生理鹽水20ml/kg，每日1次，連續(xù)8周；各給藥組按表1-4腹腔注射給藥，每日1次，共8周。末次給藥24h后，下腔靜脈采血，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平；同時，取肝組織作常規(guī)病理組織學檢查。
試驗結(jié)果 見表1-4。與正常對照組相比較，模型組的血清ALT、AST、TG水平均顯著升高(p＜0.01)，病理組織學檢查發(fā)現(xiàn)肝組織明顯受損，肝細胞脂肪性病變、空泡變性、凋亡等，說明造模成功。與模型組相比較，各給藥組對小鼠慢性酒精性肝損傷均具有保護作用，能降低血清ALT、AST、TG水平，減輕肝組織病變；枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液對小鼠慢性酒精性肝損傷具有顯著的保護作用(p＜0.05)；各劑量GDG1注射液和GDG2注射液對小鼠慢性酒精性肝損傷具有極顯著的保護作用(p＜0.01，p＜0.001)。
表1-4 枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對小鼠慢性酒精性肝損傷的影響(平均值±標準偏差，n＝10)
與正常對照組相比較#p＜0.05，##p＜0.01；與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與枸杞注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01與當歸注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01；與甘草酸單銨注射液組相比較ep＜0.05，fp＜0.01；與甘草酸二銨注射液組相比較gp＜0.05，hp＜0.01。
結(jié)論 試驗結(jié)果表明，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對小鼠慢性酒精性肝損傷具有顯著的保護作用，并且保護作用與給藥劑量相關，高劑量組效果最好；各劑量GDG1注射液和GDG2注射液對小鼠慢性酒精性肝損傷的保護作用均優(yōu)于枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液單獨使用的效果。提示，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥具有協(xié)同作用，在抗酒精性肝損傷方面有顯著作用。
試驗例5 枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨聯(lián)合并用藥抗鴨乙型肝炎病毒的作用受試動物 1日齡北京鴨，雌雄兼用。
供試品 注射用阿昔洛韋(陽性對照組)0.25mg，湖北科益藥業(yè)股份有限公司枸杞注射液自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相當于原藥材2g)當歸注射液自制，2ml，含當歸多糖43mg(相當于原藥材2g)甘草酸單銨注射液自制，5ml:40mg甘草酸二銨注射液自制，10ml:150mg
GDG1注射液自制，5ml:193mg，含枸杞多糖110mg (相當于原藥材2g)、當歸多糖43mg(相當于原藥材2g)、甘草酸單銨40mgGDG2注射液自制，5ml:293mg，含枸杞子當歸共提物143mg(相當于原藥材枸杞子2g、當歸2g)、甘草酸二銨150mg給藥劑量 見表1-5。
試驗方法 1日齡北京鴨足靜脈注射DHBV-DNA陽性血清，每只0.2ml，感染后7天取血，分離血清，-20℃保存待檢。篩選出感染成功的陽性鴨72只，隨機分為12組，每組6只，分別為模型組、陽性對照組和各給藥組。感染后第13天開始，模型組每日靜脈注射生理鹽水20ml/kg，每日1次，連續(xù)2周；陽性對照組靜脈注射注射用阿昔洛韋30mg/kg，每日1次，連續(xù)2周；各給藥組按表1-5靜脈注射給藥，每日1次，連續(xù)2周。分別于給藥前、給藥第7天、給藥第14天和停藥后第3天，自鴨腿脛靜脈抽血，分離血清，-20℃保存待檢。用DHBV-DNA Dot Blot法檢測上述鴨血清，以雜交斑點吸光度(OD)值作為標本DHBV-DNA水平值。
試驗結(jié)果 見表1-5。與模型組相比較，各給藥組對鴨DHBV病毒均有顯著抑制作用(p＜0.05，p＜0.01，p＜0.001)。陽性對照注射用阿昔洛韋對鴨DHBV病毒有極顯著的抑制作用(p＜0.001)，但是停藥后DHBV水平又升高；枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液對鴨DHBV病毒均有顯著的抑制作用(p＜0.05)，但是停藥后甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液給藥組的DHBV水平又明顯升高；低劑量GDG1注射液和低劑量GDG2注射液對鴨DHBV病毒均有顯著的抑制作用(p＜0.05)，中、高劑量GDG1注射液和GDG2注射液有極顯著的抑制作用(p＜0.01)，并且停藥后DHBV水平無明顯升高。
表1-5枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對鴨DHBV-DNA的抑制作用(平均值±標準偏差，n＝6)
與模型組相比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與枸杞注射液組相比較ap＜0.05，bp＜0.01；與當歸注射液組相比較cp＜0.05，dp＜0.01；與甘草酸單銨注射液組相比較ep＜0.05，fp＜0.01；與甘草酸二銨注射液組相比較gp＜0.05，hp＜0.01。
結(jié)論 試驗結(jié)果表明，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥對鴨DHBV病毒具有顯著的抑制作用，并且抑制作用與給藥劑量相關，高劑量組效果最好；各劑量GDG1注射液和GDG2注射液對鴨DHBV病毒的抑制作用均優(yōu)于枸杞注射液、當歸注射液、甘草酸單銨注射液、甘草酸二銨注射液單獨使用的效果。給藥期間，高劑量組GDG1注射液和GDG2注射液對鴨DHBV病毒的抑制作用略低于陽性對照組注射用阿昔洛韋的效果，但是，停藥后GDG1注射液和GDG2注射液的效果明顯優(yōu)于注射用阿昔洛韋的效果。提示，枸杞子、當歸、甘草酸單銨或甘草酸二銨合并用藥具有協(xié)同作用，在抗病毒性肝炎方面有顯著作用，并且停藥后無反跳現(xiàn)象。
試驗例6 GDG1注射液、GDG2注射液穩(wěn)定性試驗供試品 GDG1注射液自制，5ml:193mg，含枸杞多糖110mg(相當于原藥材2g)、當歸多糖43mg(相當于原藥材2g)、甘草酸單銨40mgGDG2注射液自制，5ml:293mg，含枸杞子當歸共提物143mg(相當于原藥材枸杞子2g、當歸2g)、甘草酸二銨150mg考察項目 性狀、pH值、澄明度、有關物質(zhì)、標示含量。
長期試驗 置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置12個月。分別于第3個月、6個月、9個月、12個月，比較外觀后，測試各項指標，將結(jié)果與0個月比較；12個月末增加無菌和熱原檢查。
試驗結(jié)果 溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置12個月，各項指標均無明顯變化；長期試驗12個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論 上述考察結(jié)果表明，GDG1注射液、GDG2注射液的各項指標均比較穩(wěn)定，可以長期儲存，適應于工業(yè)大生產(chǎn)。
具體實施方式
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。以下實施例中各劑型的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
以下實施例中用GDG1代替以枸杞多糖、當歸多糖、甘草酸單銨為主要有效成分的藥物組合物，用GDG2代替以枸杞多糖、當歸多糖、甘草酸二銨為主要有效成分的藥物組合物。實施例4～10中所用的枸杞多糖為實施例1制備所得，所用的當歸多糖為實施例2制備所得，所用的枸杞子當歸共提物為實施例3制備所得。
實施例1 枸杞多糖的制備及鑒別和含量測定枸杞多糖的制備取枸杞子藥材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇后棄去。藥渣加水煎煮三次，每次1小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，攪拌下加入濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，用4倍體積的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小時后，濾取沉淀，得粗多糖。粗多糖加適量水溶解，濾過，濾液加入2％活性炭，加熱至80℃并保溫20分鐘，趁熱濾過，濾液濃縮至相對密度1.14～1.16(60℃)，加4倍體積的乙醇沉淀，冷藏24小時后抽濾，沉淀用無水乙醇，丙酮，乙醚各洗滌一次，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的枸杞多糖得率為5～6％，多糖的含量不低于70％。
分別制備三批枸杞多糖，得率見表2-1。
枸杞多糖的鑒別取本品50mg，加水5ml溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材0.5g，加水35ml，加熱煮沸15分鐘，放冷，濾過，濾液用醋酸乙酯15ml振搖提取，提取液濃縮至約1ml，制成對照藥材溶液。薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸(3∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。
分別對上述三批枸杞多糖進行鑒別試驗，結(jié)果均符合要求。
枸杞多糖的含量測定標準葡萄糖溶液的配制 精密稱取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。
標準曲線繪制 精確量取葡萄糖標準溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥試管中，分別加水使成2ml，再分別加入5％苯酚溶液1ml，搖勻，然后加濃H2SO45.0ml，充分搖勻，放置5分鐘，在60℃水浴中加熱20分鐘取出，迅速冷卻至室溫，同時作空白對照，在490nm波長處，測定其最大吸收度，繪制標準曲線，即得。
測定法 精密稱取本品40mg，加水溶解并定容到50ml容量瓶中，搖勻，備用。精確量取0.1ml，加水至2ml，按測定標準曲線同樣的方法測其吸收度值。并計算含量。
分別對上述三批枸杞多糖進行含量測定，結(jié)果見表2-1。
通過本工藝制備的枸杞多糖得率為5～6％，多糖的含量不低于80％。
表2-1 枸杞多糖的含量測定結(jié)果和得率
實施例2 當歸多糖的制備以及鑒別和含量測定當歸多糖的制備取當歸藥材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇后棄去。藥渣加水煎煮三次，每次1小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放靜置l2小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，攪拌下加入濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，用4倍體積的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小時后，濾取沉淀，得粗多糖。粗多糖加適量水溶解，濾過，濾液加入2％活性炭，加熱至80℃并保溫20分鐘，趁熱濾過，濾液濃縮至相對密度1.14～1.16(60℃)，加4倍體積的乙醇沉淀，冷藏24小時后抽濾，沉淀用無水乙醇，丙酮，乙醚各洗滌一次，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的當歸多糖得率為1～3％，多糖的含量不低于70％。
分別制備三批當歸多糖，得率見表2-2。
當歸多糖的鑒別取本品50mg，加水5ml溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材3g，加石油醚(30～60℃)30ml，浸漬并振搖約30分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加無水乙醇1ml使溶解，制成對照藥材溶液。薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。
分別對上述三批當歸多糖進行鑒別試驗，結(jié)果均符合要求。
當歸多糖的含量測定標準葡萄糖溶液的配制 精密稱取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。
標準曲線繪制 精確量取葡萄糖標準溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥試管中，分別加水使成2ml，再分別加入5％苯酚溶液1ml，搖勻，然后加濃H2SO45.0ml，充分搖勻，放置5分鐘，在60℃水浴中加熱20分鐘取出，迅速冷卻至室溫，同時作空白對照，在490nm波長處，測定其最大吸收度，繪制標準曲線，即得。
測定法 精密稱取本品40mg，加水溶解并定容到50ml容量瓶中，搖勻，備用。精確量取0.1ml，加水至2ml，按測定標準曲線同樣的方法測其吸收度值。并計算含量。
分別對上述三批當歸多糖進行含量測定，結(jié)果見表2-2。
通過本工藝制備的當歸多糖得率為1～3％，多糖的含量不低于80％。
表2-2 當歸多糖的含量測定結(jié)果和得率
實施例3 枸杞子當歸共提物的制備以及含量測定枸杞子當歸共提物的制備取枸杞子、當歸藥材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇后棄去。藥渣加水煎煮三次，每次1小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，攪拌下加入濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，冷藏放靜置12小時，離心20分鐘，棄去沉淀，取上清液，用4倍體積的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小時后，濾取沉淀，得粗多糖。粗多糖加適量水溶解，濾過，濾液加入2％活性炭，加熱至80℃并保溫20分鐘，趁熱濾過，濾液濃縮至相對密度1.14～1.16(60℃)，加4倍體積的乙醇沉淀，冷藏24小時后抽濾，沉淀用無水乙醇，丙酮，乙醚各洗滌一次，60℃以下真空干燥，即得。通過本工藝制備的枸杞子當歸共提物得率為3～4％，總多糖的含量不低于80％。
分別制備三批枸杞子當歸共提物，提取物得率見表2-3。
枸杞子當歸共提物的含量測定標準葡萄糖溶液的配制 精密稱取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。
標準曲線繪制 精確量取葡萄糖標準溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥試管中，分別加水使成2ml，再分別加入5％苯酚溶液1ml，搖勻，然后加濃H2SO45.0ml，充分搖勻，放置5分鐘，在60℃水浴中加熱20分鐘取出，迅速冷卻至室溫，同時作空白對照，在490nm波長處，測定其最大吸收度，繪制標準曲線，即得。
測定法 精密稱取本品40mg，加水溶解并定容到50ml容量瓶中，搖勻，備用。精確量取0.1ml，加水至2ml，按測定標準曲線同樣的方法測其吸收度值。并計算含量。
分別對上述三批枸杞子當歸共提物進行含量測定，結(jié)果見表2-3。
通過本工藝制備的枸杞子當歸共提物得率為3～4％，多糖的含量不低于80％。
表2-3 枸杞子當歸共提物的含量測定結(jié)果和得率
實施例4 GDG注射液的制備1、處方GDG1注射液處方枸杞多糖 110g(相當于原藥材2kg)當歸多糖 43g(相當于原藥材2kg)甘草酸單銨 40g鹽酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g注射用水 加至5000ml
共制備 1000支注中藥總提取物中主要有效成分總含量為83.36％。
GDG2注射液處方枸杞子當歸共提物143g(相當于原藥材枸杞子2kg、當歸2kg)甘草酸二銨 150g注射用水加至5000ml
共制備 1000支注中藥提取物中主要有效成分的含量為82.36％。
2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)取配液量80％的注射用水，加入聚山梨酯-80攪拌溶解，然后加入處方量的枸杞多糖、當歸多糖和甘草酸單銨、鹽酸半胱氨酸、甘氨酸，加熱攪拌溶解完全，補加注射用水至全量；或者將處方量的枸杞子當歸共提物和甘草酸二銨加入配液量40％的注射用水，加熱攪拌溶解完全，補加注射用水至全量；(3)加入配液量0.1％的針劑用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(7)將溶液灌裝、熔封于玻璃安瓿中；(8)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘；(9)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍溶液中檢漏；(10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實施例5 注射用GDG的制備1、處方；注射用GDG1處方枸杞子當歸共提物143g(相當于原藥材枸杞子2kg、當歸2kg)甘草酸單銨 40g鹽酸半胱氨酸30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g甘露醇 200g無菌注射用水加至3000ml
共制備 1000支注中藥提取物中主要有效成分含量為82.36％。
注射用GDG2處方枸杞多糖 110g(相當于原藥材2kg)當歸多糖 43g(相當于原藥材2kg)甘草酸二銨 150g甘露醇 200g無菌注射用水 加至3000ml
共制備 1000支注中藥總提取物中主要有效成分總含量為83.36％。
2、具體步驟(1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進行無菌處理；(2)按照處方量稱取原料和輔料；(3)取配液量80％的無菌注射用水，加入聚山梨酯-80攪拌溶解，然后加入枸杞子當歸共提物和甘草酸單銨、鹽酸半胱氨酸、甘氨酸，加熱攪拌溶解完全，再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補加無菌注射用水至全量；或者將處方量的枸杞多糖、當歸多糖和甘草酸二銨加入配液量40％的注射用水，加熱攪拌溶解完全，再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補加無菌注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針劑用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞；將樣品放入凍干機中冷凍干燥；-40℃預凍4小時，低溫真空干燥-40℃～0℃18小時，然后升溫至20℃真空干燥4小時；(9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例6 GDG氯化鈉注射液的制備1、處方GDG1氯化鈉注射液處方枸杞多糖110g(相當于原藥材2kg)當歸多糖43g(相當于原藥材2kg)甘草酸單銨 40g鹽酸半胱氨酸30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶注中藥總提取物中主要有效成分總含量為83.36％。
GDG2氯化鈉注射液處方枸杞多糖110g(相當于原藥材2kg)當歸多糖43g(相當于原藥材2kg)甘草酸二銨 150g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶注中藥總提取物中主要有效成分總含量為83.36％。
2、具體步驟(1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80攪拌溶解，然后加入枸杞子當歸共提物和甘草酸單銨、鹽酸半胱氨酸、甘氨酸，加熱攪拌溶解完全；將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全；或者將處方量的枸杞多糖、當歸多糖和甘草酸二銨加入配液量40％的注射用水，加熱攪拌溶解完全；將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全；(3)合并上述溶液，補加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針劑用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)灌裝于100ml的輸液瓶中；(9)115℃熱壓滅菌30分鐘；(10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實施例7 GDG葡萄糖注射液的制備1、處方GDG1葡萄糖注射液處方枸杞子當歸共提物 143g(相當于原藥材枸杞子2kg、當歸2kg)甘草酸單銨 40g鹽酸半胱氨酸 30g甘氨酸 400g聚山梨酯-80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶注中藥提取物中主要有效成分的含量為82.36％。
GDG2葡萄糖注射液處方枸杞子當歸共提物 143g(相當于原藥材枸杞子2kg、當歸2kg)甘草酸二銨150g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml
共制備1000瓶注中藥提取物中主要有效成分的含量為82.36％。
2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80攪拌溶解，然后加入枸杞子當歸共提物和甘草酸單銨、鹽酸半胱氨酸、甘氨酸，加熱攪拌溶解完全；將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全；或者將處方量的枸杞子當歸共提物和甘草酸二銨加入配液量40％的注射用水，加熱攪拌溶解完全；將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全；(3)合并上述溶液，補加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針劑用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)灌裝于100ml的輸液瓶中；(9)115℃熱壓滅菌30分鐘；(10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實施例8 GDG片的制備1、處方GDG1片處方枸杞多糖 110g(相當于原藥材2kg)當歸多糖 43g(相當于原藥材2kg)甘草酸單銨 40g蛋氨酸 40g甘氨酸 40g淀粉 50.0g預膠化淀粉 40.0g微晶纖維素 50.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 20.0g
共制備 1000片注中藥總提取物中主要有效成分總含量為83.36％。
GDG2片處方枸杞多糖 110g(相當于原藥材2kg)當歸多糖 43g(相當于原藥材2kg)甘草酸二銨 150g淀粉 50.0g預膠化淀粉 50.0g微晶纖維素 50.0g2％HPMC50％乙醇溶液適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 20.0g
共制備 1000片注中藥總提取物中主要有效成分總含量為83.36％。
2、具體步驟(1)將枸杞多糖、當歸多糖和甘草酸單銨(或甘草酸二銨)粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原料和輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將枸杞多糖、當歸多糖、甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素混合均勻，根據(jù)處方需要加入氨基酸，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(5)過20目篩制顆粒；顆粒在60℃的條件下烘干；(6)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻；(7)取樣，半成品化驗；(8)按照化驗確定的片重壓片；(9)成品全檢，包裝入庫。
實施例9 GDG膠囊的制備1、處方GDG1膠囊處方枸杞子當歸共提物 143g(相當于原藥材枸杞子2kg、當歸2kg)甘草酸單銨 40g蛋氨酸 40g甘氨酸 40g淀粉 50.0g預膠化淀粉 40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g
共制備 1000粒注中藥提取物中主要有效成分的含量為82.26％。
GDG2膠囊處方枸杞子當歸共提物 143g(相當于原藥材枸杞子2kg、當歸2kg)甘草酸二銨 150g淀粉 50.0g預膠化淀粉 50.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g
共制備 1000片注中藥提取物中主要有效成分的含量為82.26％。
2、具體步驟(1)將枸杞子當歸共提物和甘草酸單銨(或甘草酸二銨)粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原料和輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將枸杞子當歸共提物、甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素混合均勻，根據(jù)處方需要加入氨基酸，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(5)過20目篩制顆粒；(6)顆粒在60℃的條件下烘干；(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻；(8)取樣，半成品化驗；(9)按照化驗確定的裝量裝入膠囊；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例10 GDG的制備1、處方GDG1顆粒處方枸杞子當歸共提物143g(相當于原藥材枸杞子2kg、當歸2kg)甘草酸單銨 40g蛋氨酸 40g甘氨酸 40g糖粉1250.0g矯味劑 適量2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包注中藥提取物中主要有效成分的含量為82.26％。
GDG2顆粒處方枸杞子當歸共提物143g(相當于原藥材枸杞子2kg、當歸2kg)甘草酸二銨 150g糖粉1200.0g矯味劑 適量2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包注中藥提取物中主要有效成分的含量為82.26％。
2、具體步驟(1)將蔗糖粉碎過100目篩備用，枸杞子當歸共提物和甘草酸單銨(或甘草酸二銨)粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原料和輔料；(3)將枸杞子當歸共提物、甘草酸單銨(或甘草酸二銨)與糖粉、矯味劑以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(4)過20目篩制顆粒；(5)顆粒在60℃的條件下烘干；(6)干顆粒過18目篩整粒；(7)取樣，半成品化驗顆粒中主藥的含量，確定裝量；(8)包裝；成品全檢，包裝入庫。
權利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，該組合物主要由下列重量份的原料藥制成枸杞子50～1000份、當歸50～1000份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽1～50份。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，各原料藥的重量份為枸杞子100～500份、當歸100～500份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽2～30份。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，各原料藥的重量份為枸杞子200份、當歸200份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽4～15份。
4.如權利要求1～3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述的枸杞子、當歸可以用適宜的溶劑和方法單獨或混合提取加工得到提取物，總提取物再與甘草酸或其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的輔料混合加工制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型。
5.如權利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述的總提取物中所含的主要有效成分為枸杞多糖和當歸多糖，總提取物中所含的主要有效成分的總含量不低于50％。
6.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還可由下列原料藥制成枸杞多糖2.5～50份、當歸多糖1～20份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽1～50份。
7.如權利要求6所述的藥物組合物，其特在于，各原料藥的重量份為枸杞多糖5～25份、當歸多糖2～10份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽2～30份。
8.如權利要求6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的枸杞多糖中多糖的含量不低于30％，當歸多糖中多糖的含量不低于30％。
9.如權利要求1、2、3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的甘草酸藥學上可接受的鹽為單銨鹽、二銨鹽。
10.如權利要求1、2、3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，該組合物可與藥學上可接受的輔料混合制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，公開了一種新的治療肝臟疾病的藥物組合物及其制備方法，由枸杞子50～1000份、當歸50～1000份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽1～50份制成，也可以由枸杞多糖2.5～50份、當歸多糖1～20份、甘草酸或其藥學上可接受的鹽1～50份制成。可制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型，優(yōu)選為口服制劑和注射劑。本發(fā)明藥物組合物有效成分明確，含量確切，共同發(fā)揮病毒性肝炎、藥物性肝損傷、脂肪肝、酒精肝等功效，效果顯著，主要用于制備治療肝臟疾病的藥物。制備工藝簡便易行，制劑質(zhì)量高且穩(wěn)定，適應于工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號A61K31/7028GK1985927SQ20051004537
公開日2007年6月27日 申請日期2005年12月19日 優(yōu)先權日2005年12月19日
發(fā)明者黃振華 申請人:黃振華