專利名稱：：一種用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品和飲料
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說是涉及一種組合物，更具體地說是涉及一種用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物。
背景技術(shù)：
：(一)白內(nèi)陣概況白內(nèi)障是最常見的致盲原因之一，是嚴重影響人類健康的常見病、多發(fā)病。臨床研究表明，在各類白內(nèi)障病例中，由老化所引起的老年性白內(nèi)障占有絕大部分的比例。老年性白內(nèi)障為雙眼病，但兩眼發(fā)病可有先后。根據(jù)白內(nèi)障開始形成的部位，老年性白內(nèi)障分為皮質(zhì)性白內(nèi)障(corticsalcataract)、核性白內(nèi)障(nuclearcataract)和囊性白內(nèi)障(subcapsularcataract),其中皮質(zhì)性白內(nèi)障是老年性白內(nèi)障最常見的類型。老年性白內(nèi)障是老年人視力下降的主要原因，該病主要表現(xiàn)為在晶體老化過程中逐漸出現(xiàn)變性渾濁，又稱變性白內(nèi)障。在美國85歲以上的老年人中，患病率約占95%。全世界特別是中國，面臨人口快速增長的巨大壓力及老齡化趨勢加重的嚴峻局面，更加需要大力加強對白內(nèi)障發(fā)病機理及影響因素的研究，以努力控制和減緩由此帶來的白內(nèi)障發(fā)病率上升的趨勢。(二)白內(nèi)障的形成原理及其病因?qū)W研究ift^L晶狀體的功能是將光線聚焦到視網(wǎng)膜上產(chǎn)生視覺。晶狀體的主要成分是水和蛋白質(zhì)，晶狀體干重的80%90%是蛋白質(zhì)，所述的蛋白質(zhì)包括a、e及Y三大族晶體蛋白。晶狀體的透明度是由恒定的水分含量、高濃度的蛋白質(zhì)以及復(fù)雜的新陳代謝來保持的，即每種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和它們彼此之間的相互作用是維持晶狀體透明性的分子基礎(chǔ)；也就是說，晶體蛋白的有序排列是維持晶狀體空間結(jié)構(gòu)的物質(zhì)基礎(chǔ)，即如果晶體蛋白組成發(fā)生改變，則會影響、破壞此種正常結(jié)構(gòu)。在晶狀體發(fā)育成長過程中，晶體蛋白受機體自身自然老化及諸多外界因素的影響，會發(fā)生不同的修飾變性晶體蛋白的質(zhì)和量會發(fā)生改變，水溶性成份不斷轉(zhuǎn)變?yōu)樗蝗苄猿煞?，影響其水溶性，進而影響晶狀體的正常結(jié)構(gòu)和透光性，最終導(dǎo)致老年性白內(nèi)障的形成。也就是說，在人體衰老過程中，一旦晶狀體中的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)受到破壞，則晶狀體由清澈透明變?yōu)榛鞚岵煌该?，進而影響晶狀體的正常結(jié)構(gòu)及透光性，并逐步演變?yōu)槔夏晷园變?nèi)障。晶狀體的透光性主要是取決于晶狀體中水溶性蛋白組分的質(zhì)和量，尤其是幾種主要的結(jié)構(gòu)蛋白如eB2(定義可參見文獻AartsHJ,LubsenNH,SchoenmakersJG..Crystallingeneexpressionduringratlensdevelopment.EurJBiochem，1989,183(1):31-36)、y5,6(yC，yD)、yw、Y2,3和伴侶蛋白aA2及0lB2。水溶性晶體蛋白的質(zhì)和量的改變，直接影響晶體的透光性以及白內(nèi)障的形成。因此，維持晶狀體的透光性，一方面，需保持晶狀體中足夠的水溶性蛋白的量，這主要取決于機體內(nèi)部晶體蛋白的基因不遭受突變，能夠?qū)嵤┱１磉_即可，如需要某種晶體蛋白進行高表達或低表達，則可釆用基因工程方法，激活或抑制相應(yīng)的基因；另一方面，需要盡力遏制、減緩晶體蛋白由水溶性蛋白向水不溶性蛋白的轉(zhuǎn)變。晶體的透光性不僅需要足夠量的水溶性成份來維持，而且還需要考慮晶狀體的特殊代謝方式晶體蛋白自生成之日起，不斷被后生成的晶體蛋白向晶體的核心部擠壓，并儲存在不同的晶體結(jié)構(gòu)層。因此，無論水溶性蛋白組分還是水不溶性組分，均無法代謝到體外。不過水溶性成份的積累有助于構(gòu)建晶體從內(nèi)到外層的正常結(jié)構(gòu)；而水不溶性成份的漸次積累，則會逐漸增大晶體的光散射，不利于透光性，也就是說，它是老年性白內(nèi)障形成的物質(zhì)基礎(chǔ)。哺乳動物自出生后，由于晶體暴露在外，易受體內(nèi)外多種因素的影響而發(fā)生變異。綜合文獻相關(guān)晶體蛋白的結(jié)構(gòu)特點，研究發(fā)現(xiàn)影響其蛋白結(jié)構(gòu)的主要因素為翻譯后修飾(posttranslationalmodification,簡稱PTM)，即許多晶體蛋白在翻譯后可通過酶的催化或在酶控制下反應(yīng)而發(fā)生的修飾，其主要包括糖基化、氧化、氨甲?；?、磷酸化、乙酰化、羥基化、脫酰胺、消旋和切除作用等。晶狀體蛋白質(zhì)周圍存在許多活性分子，包括糖、來源于尿中的氰酸鹽、糖皮質(zhì)激素和具有活性的其他代謝產(chǎn)物等，這些均可在非酶環(huán)境下攻擊蛋白質(zhì)。(三)白內(nèi)障的治療現(xiàn)狀白內(nèi)障是世界性致盲性疾病。臨床診療方面，目前對于白內(nèi)障的唯一有效治療手段是外科手術(shù)。盡管白內(nèi)障手術(shù)已日臻完善，但不可避免的手術(shù)并發(fā)癥和社會經(jīng)濟問題仍十分嚴重，如手術(shù)后數(shù)年內(nèi)后發(fā)性白內(nèi)障、繼發(fā)性青光眼或角膜損傷等發(fā)生率較高，通常難以根除。尋找有效的預(yù)防和藥物治療方法，早期控制白內(nèi)障，仍然是該領(lǐng)域的研究熱點。預(yù)防和藥物治療白內(nèi)障主要有兩種途徑，即減少白內(nèi)障發(fā)病的危險因素和應(yīng)用抗白內(nèi)障藥物。與白內(nèi)障發(fā)病相關(guān)的主要危險因素有糖尿病、青光眼、近視、長期應(yīng)用皮質(zhì)類固醇、嚴重腹瀉、紫外線輻射、大量飲酒和吸煙等。Taylor等總結(jié)為6個"D"，即陽光輻射、飲食、藥物、糖尿病、脫水和原因不明。減少這些可能的危險因素是一種積極的預(yù)防手段。在藥物應(yīng)用方面，現(xiàn)巳研制出數(shù)十種藥物用于臨床，用于維持晶體的透光性延緩或治療白內(nèi)障。由于缺乏對于白內(nèi)障生成機理的完善依據(jù)，研制并仍在使用的諸多藥物，仍存在不少的缺陷，例如有效率較低、針對性差等。因此，雖然名目繁多的抗白內(nèi)障藥物在世界各國廣泛應(yīng)用，但是尚存在很多問題。白內(nèi)障的藥物治療仍然面臨著嚴峻的挑戰(zhàn)盡管有數(shù)十種抗白內(nèi)障藥物已被廣泛臨床使用，但證明其有效性的直接證據(jù)甚少。由于白內(nèi)障的發(fā)生是各種因素綜合的結(jié)果，其發(fā)病原因還沒有定論。當(dāng)前，各科研組織多是針對某一發(fā)病因素，或是對抗發(fā)病過程中眼的某些生理生化變化進行抗白內(nèi)障藥物的研究開發(fā)。如今己經(jīng)用于白內(nèi)障治療的藥物主要有以下幾類①醛糖還原酶抑制劑(AR1S)是第一類被系統(tǒng)地研究并進行臨床實驗的抗白內(nèi)障藥物，使用該藥物是基于1962年提出的滲透壓學(xué)說和早期糖尿病性大鼠晶狀體以及高糖孵育環(huán)境下，晶狀體中大量的山梨醇沉積的證據(jù)。代表藥物有卡他林(Catalin)和法可立辛(Phacolysin)，通過抑制晶狀體中多元醇的積累，起到緩解糖性白內(nèi)障的作用，同時二者與晶體蛋白的結(jié)合力都很強，可保護晶體蛋白不受因色氨酸代謝異常而產(chǎn)生的醌亞氨酸的損傷；但臨床應(yīng)用及實驗室驗證表明，ARIS治療糖性白內(nèi)障并非有效，而且ARIS的副作用嚴重，其藥物機制"名不符實"。②針對白內(nèi)障發(fā)生的自由基氧化學(xué)說而開發(fā)的抗氧化藥物抗氧化的藥物品種很多，包括谷胱甘肽、?；撬帷⒕S生素E、維生素c、e胡蘿卜素，以及帶有還原性琉基的各類化合物等。谷胱甘肽和藥物前體隨著老化和白內(nèi)障的形成，晶狀體中谷胱甘肽的水平降低，故增加谷胱甘肽會有益于治療白內(nèi)障。谷胱甘肽是一種三肽(Y谷氨酰胺、半胱氨酸、氨基乙酸)，它在晶狀體中的水平將會被三肽自身、或者一種藥物前體如酯、或者被氨基酸組分激活。谷胱甘肽可抑制糖基化。許多實驗采用谷胱甘肽的酯和它的二肽前體，抑制各種實驗性白內(nèi)障的形成，但一般要比誘發(fā)白內(nèi)障的因子同時或提前使用，可能的原因是簡單地減少誘發(fā)因子的攻擊或影響該因子的吸收。例如，谷胱甘肽單異丙基酯或提前一小時應(yīng)用谷胱甘肽和Y谷氨酰胺半胱氨酸酯，可抑制ButhionineSulphonimine誘導(dǎo)的白內(nèi)障的發(fā)生；較亞硒酸鈉提前30分鐘應(yīng)用谷胱甘肽和單異丙基酯，可減少硒性白內(nèi)障的發(fā)生；在X射線輻射大鼠前注射半胱氨酸、硫脲、谷胱甘肽和半胱胺可減少輻射的副作用；X射線輻射大鼠一天后，谷胱甘肽單異丙基酯能保護X射線輻射誘導(dǎo)的白內(nèi)障形成。半胱氨酸是谷胱甘肽限制性底物，故使用半胱氨酸(或藥物前體)可抑制白內(nèi)障，如果能減少硫基或雙硫基團，雙硫化合物是較好的抗白內(nèi)障藥物。但目前臨床試驗甚少。?；撬崤；撬峥梢种瓢肴樘切园變?nèi)障，阻止晶狀體蛋白的糖基化和氧化。若飲食中增加?；撬崽娲?，可減少由于晶狀體細胞的損害導(dǎo)致的Y晶體蛋白向玻璃體的滲漏，被認為是一種較好的抗氧化劑和抗白內(nèi)障藥物。?；撬崾且环N磺基氨基酸，在人體中大量存在，其具有抗氧化作用，能保護細胞和組織免受氧化損傷。晶狀體具有蓄積?；撬岬哪芰Γ诰铙w中?；撬峒s占非蛋白質(zhì)水解氨基酸的50%，是晶狀體中重要的氨基酸。隨著白內(nèi)障病程的發(fā)展，晶狀體中午磺酸的含量顯著降低。國內(nèi)外的一些研究小組近年來進行了一系列系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)?；撬釋單徕c性白內(nèi)障的抑制作用與其抗氧化特性有關(guān)，而?；撬崮軌蝾A(yù)防或延緩糖尿病性白內(nèi)障的作用機制主要為抗氧化作用；膜穩(wěn)定作用；降血糖作用；滲透壓調(diào)節(jié)作用。?；撬岬目寡趸饔煤蜐B透壓調(diào)節(jié)作用對白內(nèi)障的防治具有一定的可行性。由美國國家眼科研究所資助的大規(guī)模年齡相關(guān)性眼病研究(簡稱AREDS),對5000例進行為期510年的隨訪調(diào)査，目的是揭示大劑量抗氧化劑和鋅添加劑的攝入對年齡相關(guān)性眼病包括白內(nèi)障的防治作用。最近的報道對年齡5580歲的3640例，長期服用維生素類藥物的情況進行調(diào)査，平均隨訪6.3年，結(jié)果建議55歲以上有可疑年齡相關(guān)性黃斑變性，應(yīng)服用抗氧化劑，如維生素c、維生素E、e胡蘿卜素和鋅，但大量攝入營養(yǎng)僅可提供很有限的抗白內(nèi)障作用?？寡趸瘎┰絹碓蕉嗟脑囼炞C實了，在白內(nèi)障發(fā)生發(fā)展中，氧化損傷作用是各個層次上生理生化變化的樞紐，所以對各種抗氧化劑的研究成為抗白內(nèi)障藥物開發(fā)的焦點。日本學(xué)者研究了一系列還原性硫醇衍生物，發(fā)現(xiàn)它們可與游離基快速反應(yīng)，阻斷谷胱甘肽被氧化，恢復(fù)晶狀體的正常狀態(tài)。其中，雙硫倫(Disulfimm，簡稱DSF)是這類藥物中具有較高活性的一種前體藥物，脂溶性的DSF透過角膜上皮后，可以轉(zhuǎn)化為其單體二乙二硫氨甲酸(Diethyldithjocarbamateacid,簡稱DDC)發(fā)揮抗白內(nèi)障作用，對于急性硒性大鼠白內(nèi)障模型具有明顯的延緩白內(nèi)障發(fā)生發(fā)展的作用，并能減輕氧化造成的損傷。但是，單純應(yīng)用維生素類對于抗氧化劑的預(yù)防和治療白內(nèi)障的作用有限，臨床資料缺乏可比性。③針對因眼組織能量新陳代謝失調(diào)，特別是制造不足而導(dǎo)致的白內(nèi)障而開發(fā)的能量補充劑，主要含有維生素B卜維生素B2、維生素B6、煙酰氨、腺嘌呤核苷、琥珀酸、遍多酸、維生素C、維生素E、ATP、兒茶酚、細胞色素C等成分。④針對鈣離子過多引起的白內(nèi)障而應(yīng)用于白內(nèi)障治療的Ca離子拮抗劑維拉帕米，能夠阻斷細胞鈣離子的內(nèi)流，降低白內(nèi)障眼組織中的鈣離子的濃度。⑤針對Mallard反應(yīng)為發(fā)病機理的藥物，如布洛芬、DETAPAC等。⑥中草藥制劑，如八味地黃丸、珍珠明日液及雪葉蓮擠壓汁和美國金縷梅的浸出液等；⑦氨基酸制劑Phakan，含有谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、精氨酸、肌醇、鹽酸吡哆醛等。⑧阿司匹林阿司匹林是二十世紀最偉大的發(fā)明之一，作為治療藥物不斷有新的用途出現(xiàn)。研究表明，阿斯匹林也具有抗白內(nèi)障的作用。通過動物實驗研究阿司匹林的作用機理，認為阿司匹林抗白內(nèi)障機制有4種(A)抑制非酶性蛋白質(zhì)糖基化，即阿司匹林與晶體蛋白中賴氨酸殘基結(jié)合，阻止葡萄糖與賴氨酸的非酶性糖基化反應(yīng)，并可防止晶體蛋白聚合物形成；(B)抑制晶體蛋白的氨基甲?；?，阿司匹林的乙?；c晶體蛋白的氨基酸基團結(jié)合，阻斷了氨基酸殘基甲?；磻?yīng)，使蛋白分子表面的正常電荷配布免遭破壞，從而維持了晶體蛋白的正常結(jié)構(gòu)；(C)抑制脂質(zhì)過氧化，阿司匹林的乙?；蓛?yōu)先奪取晶體蛋白的活性氨基位點，避免了脂質(zhì)過氧化給晶體帶來的損害；(D)阿司匹林通過抑制膜上的環(huán)氧化酶使晶體細胞膜上的鈣通道失活，從而防止晶體蛋白多肽鏈的聚合反應(yīng)。阿司匹林類藥物廉價方便，副作用較少，有潛在的治療老年性白內(nèi)障的臨床應(yīng)用價值，但該藥物適應(yīng)癥甚廣，有部分病人對該藥有依賴性，長期較大劑量的口服亦會有副作用，如臨床個案發(fā)現(xiàn)，長期大劑量應(yīng)用阿司匹林會導(dǎo)致胃出血。⑨糖基化抑制劑蛋白質(zhì)糖基化學(xué)說一糖基化反應(yīng)。此學(xué)說的核心是還原糖醛基與蛋白質(zhì)中自由氨基(賴氨酸或精氨酸的。NH2或蛋白質(zhì)分子的N端游離的-NH2)發(fā)生非酶性糖基化反應(yīng)(Maillard反應(yīng))，生成含Schiff氏堿基對的中間產(chǎn)物，在經(jīng)過一系列緩慢的Amadori結(jié)構(gòu)重排后，形成有酮胺結(jié)構(gòu)特征的各種Arnadori產(chǎn)物，再經(jīng)脫水和分子重排后，最終形成有熒光和蛋白質(zhì)交聯(lián)特性的各種糖基化終產(chǎn)物(簡稱AGE)。糖基化抑制劑——氨基胍氨基胍(aminoguanidine)是一種親核肼的衍生物，70年代認為可抑制糖基化末端產(chǎn)物的形成以及抑制二胺氧化酶、一氧化氮合成酶和過氧化氫酶活性。近年的研究表明，氨基胍、1，3—二氨基胍和甲基氨基胍可抑制醛糖還原酶。但在半乳糖性白內(nèi)障模型中，這3種化合物并無醛糖還原酶抑制劑的作用。氨基胍是糖基化抑制劑，被用于糖尿病并發(fā)癥的治療，包括白內(nèi)障，它能夠與糖基化的化合物結(jié)合，在糖基化各個時期抑制早期和晚期糖基化產(chǎn)物。氨基胍可抑制輕度糖尿病性大鼠晶狀體的混濁，可降低鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病大鼠主動脈、腎小球和腎小管血液中熒光值，減少尿中白蛋白的分泌，但不能降低腎皮質(zhì)已升高的山梨醇水平。氨基胍的主要作用是抑制糖基化，而不是改變生物化學(xué)過程。氨基胍還可抑制鈣依賴的Calpain(內(nèi)肽酶)蛋白水解酶介導(dǎo)的晶狀體蛋白質(zhì)的水解，阻止遺傳性Shumiya大鼠白內(nèi)障。該藥物已用于臨床試驗，其衍生物和清除糖基化交聯(lián)因子正在研究中。⑩Calpain抑制劑硒性白內(nèi)障是快速、有效和重復(fù)性良好的白內(nèi)障模型，己廣泛應(yīng)用于白內(nèi)障發(fā)病機制和評價抗白內(nèi)障藥物的研究。蛋白質(zhì)水解酶誘導(dǎo)的晶體蛋白的切除作用，特別是鈣依賴的Calpain蛋白水解酶LP82和MCalpain的激活，在該白內(nèi)障發(fā)病中起重要作用。Calpain蛋白水解酶抑制劑E64可延遲大鼠硒性白內(nèi)障的形成，但必須在亞硒酸鈉應(yīng)用前；E64在離體孵育晶狀體中可抑制晶狀體的混濁，其它還包括E64D和SJA6017等。但重要的問題是在白內(nèi)障晶狀體中尚未發(fā)現(xiàn)Calpain誘導(dǎo)的局部晶體蛋白的水解。鈣依賴的Calpain蛋白水解酶在幼鼠晶狀體中的含量遠遠超過了人的含量，所以它與人白內(nèi)障的發(fā)病存在不同的機制。Calpain抑制劑主要是實驗室研究結(jié)果，尚無臨床資料。糖基化抑制劑、谷胱甘肽和藥物前體、相分離抑制劑和Calpain抑制劑等的研究雖有較大進展，但仍需要臨床研究的進一步驗證。此外，還有許多有希望成為抗白內(nèi)障的藥物正在開發(fā)和研制中。(四)白內(nèi)障治療藥物研究的;SJJb迭勢白內(nèi)障的發(fā)生是多因素共同作用而導(dǎo)致的綜合結(jié)果，其病理變化是多水平多層次的。隨著研究手段的不斷提高，對白內(nèi)障發(fā)病機理的研究也將日益深入，同時對治療白內(nèi)障藥物的開發(fā)針對性也就越強。理想的白內(nèi)障治療藥物應(yīng)該能夠恢復(fù)晶體的正常代謝和促進晶體混濁的吸收，但至今為止尚無一個藥能夠達到上述要求，盡管如此，任何有希望的抑制白內(nèi)障發(fā)病的措施都顯示出研究的價值，而我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的寶庫還有待我們?nèi)ラ_發(fā)。現(xiàn)臨床上多種用于治療白內(nèi)障的藥物，由于缺乏對于白內(nèi)障生成機理的完善依據(jù)，使仍在廣泛使用的諸多藥物存在不少缺陷有些效率較低、針對性差，有些還有較大的副作用。為此，亟待進一步探明白內(nèi)障發(fā)病機理、找出影響晶體透光性的易感蛋白，作為治療和預(yù)防白內(nèi)障的有效靶點，設(shè)計有針對性的藥物，以達延緩晶體老化和預(yù)防、治療白內(nèi)障的目的。(五)^JSt蘇糖醉的研究概況二硫蘇糖醇(d池iothreitol，簡稱DTT,分子量154),全稱1，4-二巰基-DL-蘇糖醇(l,4-(Hthio-DL-threitol)。二硫蘇糖醇為白色針狀結(jié)晶，微吸潮，易溶于水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和乙醚；在37。C、0.67Pa時能升華；熔點4343。C，沸點125130°C(0.27kPa);在空氣中緩慢氧化。二硫蘇糖醇一般以玻管瓶密封包裝，4t:干燥保存。二硫蘇糖醇是常用還原劑，可還原蛋白內(nèi)及蛋白分子間的二硫鍵，目前一般作為蛋白質(zhì)巰基保護劑，用于蛋白質(zhì)二硫鍵的裂解和順序分析。例如，針對胱氨酸中的二硫鍵，后者在維持蛋白質(zhì)分子的正常構(gòu)象中起著重要作用，并在穩(wěn)定蛋白質(zhì)的構(gòu)象上起很大的作用；破壞蛋白質(zhì)的二硫鍵，一般都會使其三維結(jié)構(gòu)松散及生物活性減弱或喪失。氧化劑和還原劑都可打開二硫鍵。使用還原劑如巰基化合物(R-SH)也能打開二硫鍵，生成半胱氨酸殘基及相應(yīng)的二硫化物這里常使用的還原劑有巰基乙醇(mercaptoethanol),二硫蘇糖醇(dithiothreitol，縮寫為DTT)等，其中最有用的是二硫蘇糖醇及其異構(gòu)體二硫赤蘚糖醇(d他ioerythritol)。反應(yīng)中，二硫蘇糖醇形成一個含分子內(nèi)二硫鍵的穩(wěn)定六元環(huán)，因此平衡向右方移動。反應(yīng)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>三氧化二砷(arsenictrioxide,As203)是中藥吡霜的主要有效成分，具有強烈的毒性，應(yīng)用三氧化二砷治療白血病的研究成果，被稱是中國醫(yī)生對世界血液學(xué)研究的一大貢獻。該藥對腫瘤細胞有誘導(dǎo)分化和促進凋亡作用，研究表明，加入巰基保護劑二硫蘇糖醇等可抑制其誘導(dǎo)細胞凋亡的作用。有報道稱，不同濃度二硫蘇糖醇對急性運動小鼠心、肝、腎組織脂質(zhì)過氧化水平均有影響不同濃度二硫蘇糖醇均具有抗脂質(zhì)過氧化作用，但不同濃度DTT對不同組織在不同時期的脂質(zhì)過氧化水平影響不同。經(jīng)文獻檢索等，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)有較好應(yīng)用效果的組合物在用于預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病方面的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題是公開了一種用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。也就是說，本發(fā)明意在明確該組合物的組成以及在抗白內(nèi)障方面應(yīng)用的活性，進而將該組合物用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品。所述的抗白內(nèi)障產(chǎn)品是指用于預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究晶體蛋白變性及其相關(guān)疾病或白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品，是包括相應(yīng)的藥物、試劑、食品等中的一種或多種，優(yōu)選藥物；所述的白內(nèi)障及其相關(guān)疾病包括各類白內(nèi)障疾病及其相關(guān)疾病等中的一種或多種，優(yōu)選老年性白內(nèi)障(包括皮質(zhì)性白內(nèi)障、核性白內(nèi)障和囊性白內(nèi)障等中的一種或多種)及其相關(guān)疾病等中的一種或多種，進一步優(yōu)選皮質(zhì)性白內(nèi)障及其相關(guān)疾病等中的一種或多種。(一)技術(shù)構(gòu)思1、概述自主開發(fā)創(chuàng)新藥物是中國目前的一項緊迫任務(wù)，中國醫(yī)藥學(xué)具有悠久的歷史，在預(yù)防和治療疾病方面也積累了豐富的經(jīng)驗，因此尋找有效的活性成分或者其組合物是一條有效的途徑，也是中國創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢之所在。在白內(nèi)障疾病的病因?qū)W研究方面，特別是以往在有關(guān)晶體蛋白受不同外界因素影響的研究方面，對晶體蛋白發(fā)生質(zhì)和量的改變，大多不作細分，如宏觀描述e晶體蛋白。但是，發(fā)明人認為，晶體蛋白隨老化進程，不同組分應(yīng)該有不同的表達趨勢、消長規(guī)律不一，不細分落實到具體蛋白，則難以定向研究各自晶體蛋白的特性。晶狀體的老化是一種不可避免的自然生理進程，即隨著年齡的增長，晶狀體逐漸老化。但是，我們?nèi)匀豢梢酝ㄟ^探討老年性白內(nèi)障的形成機理，采用合理的控制方法或治療手段，延緩晶狀體的老化進程。有關(guān)白內(nèi)障的病因?qū)W研究，尚遠遠滯后于臨床需要。本發(fā)明就是通過對白內(nèi)障疾病的系統(tǒng)研究，特別是通過研究晶狀體各主要晶體蛋白隨老化進程的時相性改變研究，即晶體蛋白的水溶性及水不溶性組分隨機體老化的時相性改變，發(fā)現(xiàn)了晶體蛋白溶解性的變化規(guī)律，即晶體蛋白水溶性及水不溶性組分的消長變化規(guī)律，著重探討在此過程中特殊晶體蛋白的表達及其生理、生化特性，篩選可致晶體變性及誘發(fā)老年性白內(nèi)障的易感蛋白；研究其對晶體老化及誘發(fā)老年性白內(nèi)障發(fā)生的作用機理，正確判斷老化的進程，探索穩(wěn)定晶體蛋白正常結(jié)構(gòu)及透光性的有效措施，并據(jù)此設(shè)計合理的抗易感晶體蛋白變性的組合物；從而實現(xiàn)延緩晶體老化及老年性白內(nèi)障發(fā)生的目標(biāo)。2、設(shè)計該組合物用于抗白內(nèi)障產(chǎn)品的理論設(shè)想與研究基礎(chǔ)理想的藥物應(yīng)該是長期有效，副作用小，全身或局部應(yīng)用藥物應(yīng)能維持晶狀體的透明性，明確晶狀體中藥物的水平，有效的藥物運輸方法，同時具備安全有效地檢測手段。一些因子有限的自我生存能力和生物半衰期可能會妨礙其臨床使用。也許尋找單一的保護因子來治療一種已明確為多因素致病的白內(nèi)障，本身是一種錯誤，該領(lǐng)域的研究仍然面臨困難。本發(fā)明據(jù)此推測，藥物治療白內(nèi)障的有效手段，可能是聯(lián)合用藥的方法。為此，本發(fā)明將根據(jù)前期的研究結(jié)果，努力篩選出晶體中最易遭受變性影響的晶體蛋白組分作為靶蛋白，并根據(jù)靶蛋白的結(jié)構(gòu)特點，設(shè)計保護性組合物，以達延緩晶體老化及預(yù)防、治療老化性白內(nèi)障的目的。本發(fā)明根據(jù)晶體蛋白的時相改變，發(fā)現(xiàn)了表達特殊及分布特殊的晶體蛋白eB2隨機體老化進程的變化規(guī)律，即水溶性eB2/aA2數(shù)值在大鼠老化進程中呈現(xiàn)漸進性升高，水不溶性eB2/aA2數(shù)值亦隨大鼠老化進程而升高，但升高的幅度不及水溶性成分。設(shè)計抗晶體蛋白變性、維護其結(jié)構(gòu)與功能的藥物應(yīng)主要針對那些含量大，且對于外界因素更為敏感的晶體蛋白，如eB2既是更為合適的靶蛋白。本發(fā)明從晶體蛋白的生物化學(xué)結(jié)構(gòu)特征著手，研究物理、化學(xué)等因素誘導(dǎo)晶體蛋白變性的機理；并據(jù)此研制抗晶體蛋白變性的組合物，此組合物可作為能夠保護晶體蛋白不受或少受促變異影響的外用藥物；該組合物能夠采用脂質(zhì)體作為晶體角膜的導(dǎo)入體；并先期用于硒(亞硒酸鈉Na2SeCb)誘導(dǎo)的SD大鼠白內(nèi)障模型，模擬老年性白內(nèi)障的病理變化，裂隙燈每日觀察、記錄晶體透光性改變進程，觀察療效；進而探討臨床應(yīng)用的前景，期望該組合物能夠?qū)τ谘泳徍椭委熇夏晷园變?nèi)障，尤其針對大部分初發(fā)期的老年性白內(nèi)障治療產(chǎn)生積極影響。本發(fā)明經(jīng)研究還發(fā)現(xiàn)，二硫蘇糖醇能夠有效抑制eB2等晶體蛋白的受熱變性；并且，在已受熱變性的eB2晶體蛋白及其他多種蛋白溶液中，加入適量的DTT溶液，還可以降低蛋白受熱后變性程度。也就是說，DTT的適量加入，可以有效抑制eB2晶體蛋白的受熱聚集變性作用，為抗晶體蛋白變性產(chǎn)品的研制，奠定了良好基礎(chǔ)，并具有創(chuàng)新性。根據(jù)文獻檢索、實驗研究和臨床實踐，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)該組合物制備的以該靶蛋白為靶點的抗白內(nèi)障產(chǎn)品具有顯著的效果。(二)設(shè)計組合物的實IH^據(jù)1、本發(fā)明重點討論三種主要晶體蛋白0B2、<iA2、aB2(1)晶體蛋白中eB2相對含量最高；aA2、aB2則是晶體中兩種重要的伴侶蛋白(Chaperone)。(2)通常賴氨酸基團(簡稱Lys)是最易遭受糖基化修飾的部位，蛋白所含Lys的多少，與糖基化的易感性有密切聯(lián)系；而半胱氨酸(簡稱Cys)則是遭受氧化修飾的敏感部位，所含Cys數(shù)目，亦與氧化修飾的易感性有密切聯(lián)系。(3)蛋氨酸(簡稱Met)及絲氨酸(簡稱Ser)基團也是容易遭受氧化修飾的部位，規(guī)律性不及Lys，故此，重點討論晶體蛋白所含Lys及Ser數(shù)目與蛋白變性的關(guān)系。2、含量較髙的大鼠晶體蛋白氨基黢組成分析(見表l)表1、大鼠主要水溶性晶體蛋白氨基酸組成分析<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>3.PB2蛋白表達特性(變化規(guī)律)(1)大鼠主要水溶性晶體蛋白隨老化進程呈時相改變①時相性改變伴隨大鼠老化進程，18種主要晶體蛋白組分，其中7種蛋白的相對含量呈現(xiàn)明顯時相改變(A)晶體蛋白相對含量呈升高趨勢的有eB2、QB2、aA2;(B)呈降低趨勢的有P7(e,)、e8、Y2，3、Y5，6(YC，YD);(c)大致保持穩(wěn)定的主要有eAhpa3、eB5;(D)其它主要晶體蛋白改變規(guī)律性不強。②主要晶體蛋白定量分析結(jié)果(A)eB2相對含量隨老化呈年齡依賴性升高(r=0.938，p<0.01)。(B)伴侶蛋白aA2及ciB2相對含量隨老化呈漸進性升高(f0.8卯，p<0.05;產(chǎn)0.930,p<0.01)。(C)eB2相對含量隨晶體老化的變化趨勢與伴侶蛋白aA2及ctB2呈顯著正相關(guān)(r=0.949，p<0.01;r=0.986,p<0.01)。(D)PB2/aA2比值(n=10)在大鼠老化進程中呈漸進性升高。③主要晶體蛋白定性分析結(jié)果(A)各年齡組大鼠水溶性蛋白RQ值大致持平。(B)晶體蛋白的翻譯后修飾自大鼠出生8周后，便已明顯可見。(C)進入中老年后，水溶性Y組分大量丟失。研究結(jié)果啟示，PB2相對含量隨老化呈"反常"年齡依賴性升高的現(xiàn)象，該結(jié)果不同于以往e族蛋白水溶性成份隨老化逐漸下降的觀點。(2)大鼠主要非水溶性晶體蛋白隨老化進程呈時相改變①尿溶晶體蛋白eB2隨老化進程均呈漸進性升高；而主要伴侶蛋白組分aA2的相對含量則大致保持穩(wěn)定。②aA2、0B2尿溶性成分隨老化變化幅度不及水溶性成份中明顯。③尿溶性晶體蛋白aA2的翻譯后修飾產(chǎn)物aA,自大鼠8周齡起，呈極顯著增加。④aB2的翻譯后修飾產(chǎn)物aB,，自大鼠8周齡起亦呈顯著增加。PB2自大鼠8周齡起出現(xiàn)明顯降解產(chǎn)物，表現(xiàn)在eB2蛋白點下方出現(xiàn)多個蛋白點，且增長幅度遠大于在水溶性中的表現(xiàn)。⑥Y組分進入老齡后，有較明顯的下降趨勢。研究結(jié)果表明，eB2組分在非水溶性(或稱尿素溶，簡稱WIP)成分中，亦呈現(xiàn)大幅升高趨勢。但是，eB2的兩種升高趨勢，對于晶體蛋白的透光性卻具有截然不同的作用前者水溶性成份的升高，有助于維持晶體的正常結(jié)構(gòu)和良好的透光性；而后者非水溶性成分的升高則是一種有害因素的積累，晶體中此種WIP含量的漸次積累，是影響晶體透光性和誘發(fā)老年性白內(nèi)障的主要途徑。4、上述蛋白表達特性的意義(1)晶體蛋白隨機體老化進程，受外界因素影響，其晶體蛋白將在水溶性與水不溶性之間發(fā)生重新分布某些蛋白無論在水溶性還是在水不溶性組分，均呈現(xiàn)高水平(PB2、aA2、aB2)，但在兩相中升高幅度不盡一致；而有些蛋白則隨老化大量從水溶性轉(zhuǎn)變?yōu)樗蝗苄?eB2之外的其他PL組分、PL及Y族)。(2)綜合晶體蛋白在水溶性及尿溶性組分中的分布結(jié)果，可見eB2同e族其他組分，尤其是PL組分(PA2，PA3;PB3)有明顯不同①水溶性組分中，進入中老年后(大鼠8個月i.5年)，除eB2及eA,外，其余組分均呈下降；②而在尿溶部分，幾乎所有eL組分，均在8周后呈大幅升高趨勢，反映了eL族成分隨老化進程，易受外界因素影響，大量成分由水溶性變?yōu)樗蝗苄浴?3)eB2晶體蛋白作為晶體中相對含量最大的組分之一，即可在水溶性組分高水平，又能夠以更快的幅度轉(zhuǎn)化為水不溶性的成分，強烈提示控制該蛋白由水溶性向水不溶性的轉(zhuǎn)變，將是影響晶體結(jié)構(gòu)及透光性的決定因素之一。(4)自大鼠8周齡起，"伴侶蛋白"ciA2、結(jié)構(gòu)蛋白eB2及其兩種伴侶蛋白的翻譯后修飾產(chǎn)物(iAi和ciB,均顯著升高，突出反映了大鼠進入成年期后，水不溶性晶體蛋白的分布發(fā)生明顯的量變和質(zhì)變；亦提示進入成熟期后，晶體遭受內(nèi)部及外界負面影響的機率增大，晶體蛋白變性程度增加；進入老年階段后，甚至?xí)霈F(xiàn)劇增現(xiàn)象。因此，應(yīng)盡早注意采取合適的措施，保護晶體蛋白少受變性影響。(二)組合物本發(fā)明對該組合物在白內(nèi)障的預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究等方面進行了多方面的理論探討和實驗研究。晶狀體的功能是將光線聚焦到視網(wǎng)膜上產(chǎn)生視覺。晶狀體的主要成分是水和蛋白質(zhì)，它的透明度是由恒定的水分含量、高濃度的水溶性蛋白質(zhì)以及晶體蛋白的正確結(jié)構(gòu)和復(fù)雜的新陳代謝來保持的。晶狀體干重的80%90%是蛋白質(zhì)，每種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和它們彼此之間的相互作用是維持晶狀體透明性的分子基礎(chǔ)。a族晶體蛋白具有特殊的分子伴侶(MolecularChaperone)作用，對于維持晶狀體的正常結(jié)構(gòu)起著關(guān)鍵作用；另外以0B2為代表的高含量的晶體結(jié)構(gòu)蛋白亦對晶狀體的結(jié)構(gòu)及其正常透光性起著舉足輕重的作用。所謂分子伴侶，是指一類能夠介導(dǎo)其它蛋白質(zhì)的正確折疊和裝配，以保護該蛋白質(zhì)的活性，但它本身卻不是有功能的最終裝配產(chǎn)物的組成成分。但是，a族晶體蛋白是一種特殊的具有分子伴侶作用的蛋白，它不僅具有分子伴侶活性，而且也是晶體中最重要的結(jié)構(gòu)蛋白之一。a族晶體蛋白的含量在老化過程中變化趨勢，直接影響其分子伴侶活性的改變；隨著老化進程，通常a族晶體蛋白分子伴侶作用減弱，而在白內(nèi)障晶體中，則顯現(xiàn)大量a族晶體蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)榉撬苄缘母叻肿恿拷宦?lián)聚合物。本發(fā)明根據(jù)有關(guān)晶體蛋白的時相改變研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了表達特殊及分布特殊的晶體蛋白eb2隨老化進程的變化規(guī)律，并推測抑制eb2晶體蛋白由水溶性向水不溶性的轉(zhuǎn)變，既是延緩、治療老年性白內(nèi)障的有效途徑。據(jù)此設(shè)計了新型抗晶體蛋白變性及老年性白內(nèi)障的組合物，該組合物的設(shè)計具有很強的臨床應(yīng)用前景，能夠有效延緩晶體老化，特別適用于預(yù)防、診斷、檢測、治療和研究老年性白內(nèi)障。1、組合物設(shè)計的步驟(D選擇靶蛋白根據(jù)大鼠PB2隨老化進程的變化規(guī)律，即水溶性eB2/aA2數(shù)值在大鼠老化進程中呈現(xiàn)漸進性升高，水不溶性eB2/ciA2數(shù)值亦隨大鼠老化進程而升高，但升高的幅度不及水溶性成分的規(guī)律，eB2就可成為控制、延緩晶狀體自然老化及老年性白內(nèi)障發(fā)生的有效靶蛋白。(A)a族晶體蛋白具有分子伴侶蛋白作用對于維持其他晶體蛋白的穩(wěn)定性具有積極作用(BloemendalH，deJongW,JaenickeR,etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfunctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485和AugusteynRC.alpha-crystallin:areviewofitsstructureandfiinction.ClinExpOptom.2004Nov;87(6):356-366);遭受翻譯后修飾的a族晶體蛋白的分子伴侶作用會大大下降(BloemendalH,deJongW，JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfunctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485和HookDW,HardingJJ.Theeffectofmodificationofalpha-crystallinbyprednisolone-21-hemisuccinateandfructose6-phosphateonchaperoneactivity.DevOphthalmol.2002;35:150-160)。有文獻報道晶體蛋白遭受糖基化修飾的難易順序依次為a〉e>Y(vanBoekelMA，HoendersHJ.Glycationofcrystallinsinlensesfromaginganddiabeticindividuals.FEBSLett.1992Dec7;314(1):l國4和SwamyMS，AbrahamA，AbrahamEC.Glycationofhumanlensproteins:preferentialglycationofalphaAsubunits.ExpEyeRes.1992Mar;54(3):337-345),其主要原因之一，在于aA、aB分別含有較多的賴氨酸(簡稱Lys)殘基(分別為7個、10個，表1)。通常大多數(shù)活化的Lys基團是糖基化的攻擊目標(biāo)(AhmedN，ThornalleyPJ,DawczynskiJ,etal.Methylglyoxal-derivedhydroimidazoloneadvancedglycationend-productsofhumanlensproteins.InvestOphthalmolVisSci.2003Dec;44(12):5287-5292和BiemelKM,FriedlDA，LedererMO.Identificationandquantificationofmajormaillardcross-linksinhumanserumalbuminandlensprotein.Evidenceforglucosepaneasthedominantcompound.JBiolChem.2002Jul12;277(28):24907-24915);糖基化修飾使天然蛋白變性，高級結(jié)構(gòu)被破壞，易發(fā)生聚合，使a族的分子伴侶降低；但是，aA、ciB晶體蛋白的最大優(yōu)勢在于含有最少量的半胱氨酸(簡稱Cys)基團(分別含1個，0個Cys;Cys含有極易被氧化的巰基)，不被氧化形成分子內(nèi)二硫鍵。此外，a族晶體蛋白作為分子伴侶蛋白，大量用于與非天然P及Y晶體蛋白的結(jié)合(BloemendalH，deJongW,JaenickeR,etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfonctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485)，有利于維持后兩種晶體蛋白一定程度分子聚合物的水溶性。因此，有文獻建議將ci族晶體蛋白作為白內(nèi)障，尤其是皮質(zhì)性白內(nèi)障(老年性白內(nèi)障的主要類型之一)治療的靶蛋白(BloemendalH，deJongW,JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfimctionlenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485)。(B)現(xiàn)有文獻大多提示Y族晶體蛋白在晶狀體中主要作用，是以所謂惰性充填物的形式，維持晶狀體的堅實、橢圓形的基本形狀(BloemendalH,deJongW,JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfimctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485和NorledgeBV，HayRE,BatemanOA，etal.Towardsamolecularunderstandingofphaseseparationinthelens:acomparisonoftheX-raystructuresoftwohighTcgamma-crystallins,gammaEandgammaF，withtwolowTcgamma-crystallins，gammaBandgammaD.ExpEyeRes.1997Nov;65(5):609-630)，以及維持晶體蛋白的短程有序結(jié)構(gòu)、保持晶狀體的透光性(BloemendalH，deJongW,JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfimctionoflenscrystallins.ProgBi叩hysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485和BasakA，BatemanO，SlingsbyC，etal.High-resolutionX-raycrystalstructuresofhumangammaDcrystallin(1.25A)andtheR58Hmutant(1.15A)associatedwithaculeiformcataract.JMolBiol.2003May16;328(5):1137-1147);具有較強的抗熱變性及其他修飾的能力；在水溶性成份中常以單體形式存在(BloemendalH，deJongW，JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfunctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485)，而非ct及e族晶體蛋白所表現(xiàn)的多聚體甚至高聚體形式存在；在幾種白內(nèi)障病理條件下，Y族晶體蛋白常表現(xiàn)為選擇性滲出(CenedellaRJ，AugusteynRC.Onthecompositionandoriginoftheurea-solublepolypeptidesoftheU18666AcataractCurrEyeRes.1990Sep;9(9):805-818)或合成減少(UedaY,DuncanMK，DavidLL.Lensproteomics:theaccumulationofcrystallinmodificationsinthemouselenswithage.InvestOphthalmolVisSci.2002Jan;43(1):205-215),而不是以水不溶性成分沉積于晶狀體中。(C)PB2作為e族中的特殊成分，具有諸多特性一方面含量最高(BloemendalH，deJongW，JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfiinctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485以及李聞捷，Joseph-FuSC.大鼠主要水溶性晶體蛋白在老化進程中的時相變化[J].中國病理生理雜志，2004，20(1):22-26);另一方面，無論在水溶性或水不溶性成份中，均保持高濃度；此外，PB2晶體蛋白含有最多的賴氨酸殘基(簡稱Lys，13個，見表l)，容易遭受糖基化修飾(AhmedN，ThornalleyPJ，DawczynskiJ，etal.Methylglyoxal-derivedhydroimidazoloneadvancedglycationend-productsofhumanlensproteins.InvestOphthalmolVisSci.2003Dec;44(12):5287-5292和BiemelKM,FriedlDA,LedererMO.Identificationandquantificationofmajormaillardcross-linksinhumanserumalbuminandlensprotein.Evidenceforglucosepaneasthedominantcompound.JBiolChem.2002Jul12;277(28):24907-24915)，蛋白所含Lys的多少，與糖基化的易感性有密切聯(lián)系；同時，eB2晶體蛋白分子結(jié)構(gòu)含有2個半胱氨酸(簡稱Cys，見表1),而Cys則是遭受氧化修飾的敏感部位(ChenSJ，SunTX，AkhtarNJ,etal.OxidationofhumanlensrecombinantalphaA-crystallinandcysteine-deficientmutants.JMolBiol.2001Jan26;305(4):969-976和HansonSR,ChenAA，SmithJB,etal.ThiolationofthegammaB-crystallinsinintactbovinelensexposedtohydrogenperoxide.JBiolChem.1999Feb19;274(8):4735-4742)，所含Cys數(shù)目，亦與氧化修飾的易感性有密切聯(lián)系。在一定條件下，cys可被氧化形成分子內(nèi)二硫鍵，或與其他e族成分交換亞基，形成雜合二聚體及分子間二硫鍵(BloemendalH，deJongW，JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfimctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485)。文獻結(jié)果表明eB2晶體蛋白穩(wěn)定性差(y〉a〉e)(BloemendalH，deJongW，JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfUnctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485和MacdonaldJT，PurkissSmithMA，etal.Unfoldingcrystallins:Thedestabilizingroleofa{beta}-hairpincysteinein{beta}B2-crystallinbysimulationandexperiment.ProteinSci.2005May;14(5):1282-1292)，是最易遭受變性修飾的成分之一。(D)綜合分析d、P、Y三類晶體蛋白的特征以及本發(fā)明的實驗結(jié)果本發(fā)明得出的重要推論在于相對于a晶體蛋白(BloemendalH，deJongW，JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfunctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485)，eB2是更為脆弱的晶體蛋白成分，更加適合作為白內(nèi)障尤其是老年性白內(nèi)障預(yù)防、診斷、檢測、研究和治療的靶蛋白。②聯(lián)合用藥根據(jù)現(xiàn)有治療白內(nèi)障單一藥物成分有效性較差這一特點，釆用多種有效成分聯(lián)合用藥方式?，F(xiàn)有資料表明，白內(nèi)障為多因素影響而致病，尚難以用單一藥物有效治療(FernandezV，F(xiàn)ragosoMA,BillotteC，etal.Efficacyofvariousdrugsinthepreventionofposteriorcapsuleopacification:experimentalstudyofrabbiteyes.JCataractRefractSurg.2004Dec;30(12):2598-2605和HardingJJ.CancataractbepreventedEye.1999Jun;13(Pt3b):454-456);針對部分業(yè)已證實的老年性白內(nèi)障發(fā)病的影響因素，設(shè)計幾種藥物成分、聯(lián)合用藥，是較為合理的治療手段。③預(yù)防為主自然老化是一項不可避免的生理過程，我們無法阻止老化進程對于晶狀體正常功能的負面影響，晶體蛋白的明顯變性修飾發(fā)生于生命周期的較早期(發(fā)生于SD大鼠出生后第68周(UedaY，DuncanMK,DavidLL.Lensproteomics:theaccumulationofcrystallinmodificationsinthemouselenswithage.InvestOphthalmolVisSci.2002Jan;43(1):205-215以及李聞捷，Joseph-FuS,C.晶體蛋白eB2對眼晶體老化的影響[J].中國病理生理雜志,2004,20(10):1905-1卯7);因此，對于老年性白內(nèi)障的治療，應(yīng)以預(yù)防為主；此外，可以創(chuàng)造條件，增強自我防護措施，尋找延緩晶狀體老化、維持晶狀體正常功能的方法、步驟，提早預(yù)防，人在中年起，即需努力關(guān)注、維護晶體蛋白少受各種變性修飾。④藥物外用老年性白內(nèi)障不同于其他機體內(nèi)部器官的疾患，晶狀體透過前房房水及角膜，極易與外界環(huán)境、物質(zhì)起作用。因此，對于老年性白內(nèi)障的預(yù)防及治療，外用藥物可以方便、直接地發(fā)揮作用；用藥量少、副作用低。2、組合物配方的設(shè)計根據(jù)晶體蛋白eB2及ciA、aB氨基酸組成分析及特點(見表l)，結(jié)合有關(guān)文獻，設(shè)計抗晶體蛋白變性組合物的配方。對于eB2的保護而言，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點，主要應(yīng)從三方面考慮①抗糖基化修飾是PB2最主要的保護措施之一根據(jù)糖基化作用機理，在抗晶體蛋白變性的組合物中，加入一定量的阿司匹林(HennisA，WuSY，NemesureB，etal.RiskfactorsforincidentcorticalandposteriorsubcapsularlensopacitiesintheBarbadosEyeStudies.ArchOphthalmol.2004Apr;122(4):525-530和HardingJJ.Viewingmolecularmechanismsofageingthroughalens.AgeingResRev.2002Jun;1(3):465-479)和游離的賴氨酸(SulochanaKN,PunithamR，RamakrishnanS.Beneficialeffectoflysineandaminoacidsoncataractogenesisinexperimentaldiabetesthroughpossibleantiglycationoflensproteins.ExpEyeRes.1998Nov;67(5):597-601和RamakrishnanS，SulochanaKN，PunithamR.Freelysine,glycine,alanine,glutamicacidandasparticacidreducetheglycationofhumanlensproteinsbygalactose.IndianJBiochemBiophys.1997Dec;34(6):518-523)以及谷氨酸、丙氨酸(RamakrishnanS,SulochanaKN,PunithamR.Freelysine,glycine,alanine,glutamicacidandasparticacidreducetheglycationofhumanlensproteinsbygalactose.IndianJBiochemBiophys.1997Dec;34(6):518-523和RamakrishnanS,SulochanaKN,PunithamR,etal.Freealanine,asparticacid,orglutamicacidreducetheglycationofhumanlensproteins.GlycoconjJ.1996Aug;13(4):519-523)、吡眵醛-氨基胍(ChenAS,TaguchiT，SugiuraM，etal.Pyridoxal-aminoguanidineadductismoreeffectivethanaminoguanidineinpreventingneuropathyandcataractindiabeticrats.HormMetabRes.2004Mar;36(3):183-187)以及鍺132(UnakarNJ，TsuiJ,JohnsonM.Effectofpretreatmentofgermanium-132onNa(+)-K(+)-ATPaseandgalactosecataracts.CurrEyeRes.1997Aug;16(8):832-837)等，均具有一定的抑制糖基化的作用。②增強抗氧化能力是保護PB2的另外一項重要措施加入一定量牛磺酸(KilicF，BhardwajR，CaulfeildJ,etal.Modellingcorticalcataractogenesis22:isinvitroreductionofdamageinmodeldiabeticratcataractbytaurineduetoitsantioxidantactivityExpEyeRes.1999Sep;69(3):291-300和AnthrayoseCV,ShashidharS.Studiesonproteinandtaurineinnormal,senileanddiabeticcataractoushumanlenses.IndianJPhysiolPharmacol.2004Jul;48(3):357-360)以及還原性谷胱甘肽(LouMF.Redoxregulationinthelens.ProgRetinEyeRes.2003Sep;22(5):657-682)、阿司匹林等，可以大幅度降低晶體蛋白被氧化的程度。③增強蛋白抵抗受熱聚集變性能力是保護PB2的第三項重要措施本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，DTT的適量加入，可以有效抑制eB2晶體蛋白的受熱聚集變性作用，為抗晶體蛋白變性組合物的研制，奠定了良好基礎(chǔ)，并具有創(chuàng)新性。阿司匹林阿司匹林(Aspirin;或乙酰水楊酸，Acetylsalicylicacid，分子量186.16)是二十世紀最偉大的發(fā)明之一，作為治療藥物不斷有新的用途出現(xiàn)。研究表明，阿斯匹林具有抗白內(nèi)障的作用。通過動物實驗研究阿司匹林的作用機理，認為阿司匹林抗白內(nèi)障機制有4種1)抑制非酶性蛋白質(zhì)糖基化，即阿司匹林與晶體蛋白中賴氨酸殘基結(jié)合，阻止葡萄糖與賴氨酸的非酶性糖基化反應(yīng)，并可防止晶體蛋白聚合物形成；2)抑制晶體蛋白的氨基甲酰化，阿司匹林的乙酰基與晶體蛋白的氨基酸基團結(jié)合，阻斷了氨基酸殘基甲?；磻?yīng)，使蛋白分子表面的正常電荷配布免遭破壞，從而維持了晶體蛋白的正常結(jié)構(gòu)；3)抑制脂質(zhì)過氧化，阿司匹林的乙?；蓛?yōu)先奪取晶體蛋白的活性氨基位點，避免了脂質(zhì)過氧化給晶體帶來的損害；4)阿司匹林通過抑制膜上的環(huán)氧化酶使晶體細胞膜上的鈣通道失活，從而防止晶體蛋白多肽鏈的聚合反應(yīng)。?；撬崤；撬?氨基乙磺酸，Taurine,分子量125.14)可抑制半乳糖性白內(nèi)障，阻止晶狀體蛋白的糖基化和氧化。若飲食中增加?；撬崽娲?，可減少由于晶狀體細胞的損害導(dǎo)致的Y晶體蛋白向玻璃體的滲漏，被認為是一種較好的抗氧化劑和抗白內(nèi)障藥物。牛磺酸是一種磺基氨基酸，在人體中大量存在，其具有抗氧化作用，能保護細胞和組織免受氧化損傷。晶狀體具有蓄積?；撬岬哪芰Γ诰铙w中牛磺酸約占非蛋白質(zhì)水解氨基酸的50%，是晶狀體中重要的氨基酸。隨著白內(nèi)障病程的發(fā)展，晶狀體中?；撬岬暮匡@著降低。牛磺酸能夠預(yù)防或延緩糖尿病性白內(nèi)障的作用機制主要為抗氧化作用、膜穩(wěn)定作用、降血糖作用、滲透壓調(diào)節(jié)作用。?；撬岬目寡趸饔煤蜐B透壓調(diào)節(jié)作用對白內(nèi)障的防治具有一定的可行性。游離氨基酸賴氨酸(Lysine,分子量146)和谷氨酸是正常晶體中存在的游離氨基酸，在白內(nèi)障時含量降低，由于它們自身易被糖化可以有效地清除晶體內(nèi)的葡萄糖，從而競爭性抑制晶體蛋白的糖化作用。Ramakrishnan等發(fā)現(xiàn)游離丙氨酸和天門冬氨酸也有相似作用。它們與其它的抑制劑相比，由于無毒性，因而更具進一步實驗和研究的意義。谷胱甘肽隨著老化和白內(nèi)障的形成，晶狀體中谷胱甘肽(Glutathione,簡稱GSH，分子量308.33)的水平降低，故增加谷胱甘肽會有益于治療白內(nèi)障。谷胱甘肽可抑制糖基化，許多實驗采用谷胱甘肽的酯和藥物前體如它的二肽前體，抑制各種實驗性白內(nèi)障的形成，但一般要比誘發(fā)白內(nèi)障的因子同時或提前使用，可能的原因是簡單地減少誘發(fā)因子的攻擊或影響該因子的吸收。GSH是晶狀體中重要的抗氧化防御屏障。小熱休克蛋白家族成分(sHSP，主要包括aA、aB等)通過降低細胞內(nèi)活性氧水平，提高細胞內(nèi)GSH含量而增加晶狀體的抗氧化能力。氨基胍氨基胍(Aminoguanidine)是一種親核肼的衍生物，70年代認為可抑制糖基化末端產(chǎn)物的形成以及抑制二胺氧化酶、一氧化氮合成酶和過氧化氫酶活性。近年的研究表明，氨基胍、1,3-二氨基胍和甲基氨基胍可抑制醛糖還原酶。氨基胍可抑制晶體糖化產(chǎn)生的Amadori產(chǎn)物上的碳?；姆磻?yīng)性，從而抑制晚期糖化產(chǎn)物生成和蛋白的交聯(lián)。鍺132(Germanium，132Ge):Unakar等對半乳糖性白內(nèi)障的研究中，發(fā)現(xiàn)132Ge氨基酸衍生物可抑制晚期糖化產(chǎn)物的形成，并可逆轉(zhuǎn)糖化蛋白成溶解狀態(tài)或阻止白內(nèi)障的發(fā)生。二琉蘇糖醉二硫蘇糖醇(D他iothreitol，簡稱DTT，分子量154)是常用還原劑，可還原蛋白內(nèi)及蛋白分子間的二硫鍵；但在我們實驗中，發(fā)現(xiàn)該化合物可有效抑制PB2等晶體蛋白的受熱變性；并且，在已受熱變性的PB2晶體蛋白及其他多種蛋白溶液中，加入適量的DTT溶液，還可以降低蛋白受熱后變性程度。3、組合物配方因此，本發(fā)明的組合物包括三方面的成分一是抗糖基化修飾的物質(zhì)，是包括阿司匹林、游離氨基酸、谷胱甘肽和藥物前體、吡哆醛-氨基胍、1，3-二氨基胍、甲基氨基胍或鍺m等中的一種或多種，所述的游離氨基酸是包括賴氨酸、谷氨酸、丙氨酸或天門冬氨酸等中的一種或多種，優(yōu)選阿司匹林或賴氨酸等中的一種或多種；二是抗氧化作用的物質(zhì)，是包括牛磺酸、阿司匹林或還原性谷胱甘肽等中的一種或多種，優(yōu)選?；撬?；三是抗熱變性能力的物質(zhì)，是包括二硫蘇糖醇(簡稱DTT)等中的一種或多種，優(yōu)選二硫蘇糖醇；三方面的成分含量范圍分別是19%60%、39%80%和0.1%2.0%，優(yōu)選29%40%、59%70%和0.6%1.2%。該組合物配成溶液后是高滲、無色透明的液體，例如其水溶液是高滲的藥物溶液，該組合物水溶液優(yōu)選pH7.37.5。根據(jù)增加效果、劑型應(yīng)用等實際情況的需要等，還可以進一步增加維生素(如維生素C、維生素E)等組分，含量范圍是10%30%,并根據(jù)用法、用途和使用的實際需要在醫(yī)藥專業(yè)的許可范圍內(nèi)進行適當(dāng)調(diào)整。(四)用途1、橛述本發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑、食品等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。本發(fā)明通過藥理活性篩選證明，該組合物是預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的合適產(chǎn)品。2、使用方法與要求本發(fā)明所述的組合物可以單獨或與其它活性組分再進一步聯(lián)合使用，包括用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑、食品等，尤其是藥物。在具體使用方面，本發(fā)明所述的組合物能夠單獨使用，還能夠與其他許多化學(xué)物質(zhì)一起使用。無論這些化學(xué)物質(zhì)是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協(xié)同放大作用、拮抗或緩解組合物的副作用等，這些化學(xué)物質(zhì)是包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類用藥等中的一種或多種；優(yōu)選包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體或者食品等中的一種或多種；進一步優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。本文使用的"醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體"包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質(zhì)、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑或吸收延遲劑等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其組合物中的一種或多種。在許多情況下，在該組合物中最好包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化鈉等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體還可以包含少量的輔助物質(zhì)，例如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液等中的一種或多種，它們增強了該組合物的有效期或效力。從具體的分類上看，所說的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體是指醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括賦形劑，如淀粉或水等中的一種或多種；潤滑劑，如甘油或硬脂酸鎂等中的一種或多種；崩解劑，如微晶纖維素等；填充劑，如淀粉或乳糖等中的一種或多種；粘接劑，如預(yù)膠化淀粉、糊精、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯垸酮等中的一種或多種；滲透壓調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；稀釋劑，如水等；崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉等中的一種或多種；吸收促迸劑，如季銨化合物等；表面活性劑，如十六烷醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；潤滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或聚乙二醇等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑或甜味劑等中的一種或多種。例如，將含活性組分的該組合物溶解、混懸或乳化于適宜的水性溶劑中(例如，蒸餾水、生理鹽水或格林溶液等中的一種或多種)或油性溶劑中(例如，植物油例如橄欖油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一種或多種)中，即可制得注射制劑，其中溶劑中可含有分散劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一種或多種)、滲透壓調(diào)節(jié)劑(例如，氯化鈉、甘油、D9—甘露糖、D一山梨醇或葡萄糖等中的一種或多種)。在這種情況下，如有必要，可加入添加劑，例如增溶劑(例如，水楊酸鈉或醋酸鈉等中的一種或多種)、穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白等)、止痛劑(例如，苯甲醇等)等。本發(fā)明所述及的組合物還可以聯(lián)合使用的形式進一步與其他化合物形成新的組合物，特別是與用其它化學(xué)物質(zhì)如藥物對動物尤其是哺乳動物包括人或其他動物進行治療所用的新的組合物或者是類似的新的組合物。所述哺乳動物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種，優(yōu)選人、小鼠、大鼠、猴、豬、兔或犬等中的一種或多種，進一步優(yōu)選人、大鼠或猴等中的一種或多種。例如，可以將本發(fā)明所述的組合物加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發(fā)明組合物和藥學(xué)上可接受的載體。該組合物或其形成的新的組合物特別是藥物組合物可以有各種形式，包括例如液體、半固體和固體等劑量形式中的一種或多種；其中所說的藥物組合物包括治療有效量的組合物為活性成分，以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。該新的藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)生產(chǎn)方法制成各種劑型，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進行白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療或科學(xué)研究。該新的藥物組合物一般必須無菌且在生產(chǎn)儲存條件下穩(wěn)定?？梢詫⒃撔碌乃幬锝M合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)體或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。通過將所需量的該新的藥物組合物與所需上述成分的一種或組合一起加入適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒔又M行除菌過濾制備無菌注射液。一般而言，通過將該新的藥物組合物加入含有基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分的無菌溶媒中制備分散液。在用于制備無菌注射液的無菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。例如，通過諸如卵磷脂的包衣、在分散液的情況下通過保持所需顆粒大小和通過使用表面活性劑，可以保持溶液的適當(dāng)流動性。通過在該新的藥物組合物中包括延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽或明膠)可以達到注射組合物的延長吸收。用于患者時，本發(fā)明所述的新的藥物組合物劑量為520mg/kgd，該劑量或用量通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。本發(fā)明所述的組合物及其新的藥用組合物可以包括"治療有效量"或"預(yù)防有效量"的本發(fā)明組合物。"治療有效量"是指在必要的劑量和時間下有效達到所需治療效果的量。該組合物的治療有效量可以根據(jù)諸如個體的病況、年齡、性別和體重以及該組合物在該個體引起所需反應(yīng)的能力等因素而變化。治療有效量亦指該組合物的有益治療效果超過其任何毒性或有害效果的量。"預(yù)防有效量"是指在必要劑量和時間下有效達到所需預(yù)防效果的量。因為預(yù)防劑量用于患病前或疾病早期的受治療者，預(yù)防有效量通常小于治療有效量。本發(fā)明組合物的治療或預(yù)防有效量的典型的非限制性范圍是520mg/kg,更優(yōu)選為510mg/kg。應(yīng)注意，劑量值將根據(jù)欲減輕的疾病類型和嚴重性變化，也就是說用于患者時，本發(fā)明所述的組合物劑量或用量，通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。另外，應(yīng)理解，對于任何特定受治療者，應(yīng)隨著時間根據(jù)個體需要和給與或監(jiān)督給與所述組合物的人的專業(yè)判斷調(diào)整特定劑量制度，并且本文設(shè)定的劑量范圍僅為例證性的，并不會限制要求保護的組合物的范圍或?qū)嵺`。也就是說，需要根據(jù)治療的對象、給藥途徑、所治療疾病和狀況等，變化本發(fā)明組合物的每次和/或每日的劑量或用量。例如，經(jīng)靜脈給予哺乳動物，尤其是成年人(如體重60kg)，所述組合物的單劑量約為50200mg，優(yōu)選約100mg，優(yōu)選每日給藥13次。可以調(diào)整劑量單位，以提拱最佳所需反應(yīng)(例如，治療或預(yù)防應(yīng)答)。例如，可以單次大劑量給藥，可以在一段時間內(nèi)給予幾個均分量或根據(jù)治療情況的迫切性按比例降低或增加劑量。配制易于給藥和劑量統(tǒng)一的劑量單位形式的非腸道組合物尤其有利。本文使用的劑量單位形式，指適于欲治療的哺乳動物受治療者的單元劑量的物理分離單位；每個單位含有預(yù)定量的計算用于與所需藥用載體一同產(chǎn)生所需治療效果的活性物組合物。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格，由以下確定并直接取決于以下(a)該組合物的獨特特征和欲達到的特定治療或預(yù)防效果，和(b)在混合這種用于治療個體敏感性組合物的技術(shù)中的內(nèi)在限制。3、藥物劑型和給藥途徑本發(fā)明所述的組合物及其新的藥物組合物制備的用于預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品，其中按照飲料、食品
技術(shù)領(lǐng)域：
的要求制備的產(chǎn)品能夠用于預(yù)防、保護和治療白內(nèi)障及其相關(guān)疾??；按照醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
的要求制備的產(chǎn)品能夠用于患者的治療或保健，既能夠單獨直接用于制備治療或保健的藥物，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進行混合或組合，直接或間接用于制備治療或保健的藥物。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。在本發(fā)明中，所需物料包括本發(fā)明的原料、上述配套使用的化學(xué)物質(zhì)等，均應(yīng)根據(jù)實際情況和需要，采用食品級或藥用級的物料。本發(fā)明所述的組合物及其新的藥物組合物，可以用本領(lǐng)域已知的各種方法給藥，盡管在許多治療用途中推薦的給藥途徑/給藥方式是眼藥水外用或經(jīng)球旁注射法行眼內(nèi)注射法給藥。但是，技術(shù)人員會理解給藥途徑/給藥方式隨所需的結(jié)果而變化。在某些具體實施中，該活性化合物可以與保護該化合物免于快速釋放的載體一同制備，例如空釋制劑，包括移植物傳遞系統(tǒng)、透皮貼傳遞系統(tǒng)或微囊傳遞系統(tǒng)等中的一種或多種。此外，還可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一種或多種。制備這種制劑的許多方法均已申請專利或一般為本領(lǐng)域技術(shù)人員所矢卩(參見例如SustainedandControlledreleaseDrugDeliverySystems,J.R.Robinson編輯，MarcelDekker,Inc.,紐約，1978)。本發(fā)明所述的組合物及其新的藥物組合物，通常通過眼藥水外用或經(jīng)球旁注射法行眼內(nèi)注射法給藥等中的一種或多種方式，施用于需要這種治療的患者。例如，導(dǎo)入途徑如下(1)眼藥水外用h特殊化學(xué)試劑如DTT既有抗晶體蛋白交聯(lián)的作用，又可幫助組合物的其他成分順利透過晶狀體的角膜上皮，并進一步部分滲透到晶狀體內(nèi)層，對較新形成的繼發(fā)性晶狀體纖維起作用；延緩形成水不溶性高分子聚合物，增強晶狀體抵抗修飾、變異的能力；維護晶體蛋白的水溶性及晶狀體的透光性。(2)眼藥水外用2:上述組合物還可通過與脂質(zhì)體載體相配伍，形成滲透能力更強的導(dǎo)入藥物的方式。含脂質(zhì)體作為介質(zhì)，便于將藥物滲透過角膜上皮，并進一步滲透于晶狀體作用，幫助晶體內(nèi)層己形成高分子聚合物(簡稱HM)的蛋白成分緩解相互交聯(lián)的壓力，部分恢復(fù)水溶性狀態(tài)；協(xié)助新生成的eB2等蛋白增強抵抗修飾、變異的能力，維護蛋白的水溶性及晶狀體的透光性。(3)球旁注射法對于較為嚴重的老年性白內(nèi)障患者，亦可采用經(jīng)球旁注射法行眼內(nèi)注射法，緩解癥狀。如果要用于口服時，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑或膠囊等中的一種或多種。在實施時，本發(fā)明組合物可以與例如惰性稀釋劑或可同化的食用載體一同口服。該組合物(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或軟殼明膠膠囊、壓制成片劑或直接加入受治療者的膳食中。關(guān)于口服治療給藥，可以將所述組合物與賦形劑一起加入并以可食片劑、頰含片劑、錠劑、膠囊、懸液、糖漿或糯米紙囊劑等等中的一種或多種形式使用。為了以非腸道給藥之外給予本發(fā)明組合物，可能需要用防止其失活的材料對該組合物包衣或與該組合物一同給予。亦可以將補充的活性化合物加入該組合物中。在具體實施時，將本發(fā)明組合物與一種或多種可以用于治療疾病的其它治療藥物共配制和/或共給予。這種聯(lián)合使用，可以優(yōu)越地利用較低劑量的該給予的治療藥物，因此避免可能的毒性或與各種單一療法相關(guān)的并發(fā)癥。如果要制成液體制劑如水劑、油懸浮劑或其它液體制劑中的一種或多種，如糖漿、酊劑或酏劑等中的一種或多種；用于腸胃外給藥時，可將其制成注射用的溶液劑、水劑或油性懸浮劑等中的一種或多種。以上所述的使用形式中，優(yōu)選的形式是滴眼劑或注射劑等中的一種或多種，進一步優(yōu)選滴眼劑外用給藥。本發(fā)明的主要適合對象是中老年人群，選擇滴眼劑用于預(yù)防，則每天滴眼一次，抑制蛋白變性、延緩晶體老化、控制老年性白內(nèi)障于初發(fā)期。綜上所述，本發(fā)明對該組合物進行了理論探索，經(jīng)過大量的實驗研究特別是長期的藥理學(xué)試驗，發(fā)現(xiàn)所述及的組合物有顯著的預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的活性。因此，該組合物特別是其形成的新的藥物組合物可用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品，優(yōu)選藥物和食品，進一步優(yōu)選以本發(fā)明組合物為原料制備而成的藥物。(五)技術(shù)特長本發(fā)明有針對性地研究組合物，并對該組合物進行了優(yōu)選和拓展，該組合物外用阿司匹林，過去為內(nèi)服藥；特殊化學(xué)試劑如DTT的藥用開發(fā)用于保護蛋白及藥物載體，例如增加了二硫蘇糖醇的藥用；并且是多藥協(xié)同，能夠有35種不同效用的協(xié)同；針對性強，該組合物以eB2靶蛋白為主要靶蛋白，兼顧其他；藥物釋放快，特殊化學(xué)試劑如DTT既具有晶體蛋白受熱聚集變性的作用，又是有效的自由基清除劑，另外還可增加組合物的滲透能力；副作用小，外用為主，所需劑量?。环项A(yù)防為主的原則，目前尚無能夠使晶狀體代謝恢復(fù)正常和使混濁吸收的藥物；本發(fā)明通過實驗研究結(jié)果，證實蛋白變性等影響晶狀體透光性的不利因素，自成年的早期便逐年增加，故需盡早防治，預(yù)防為主；用藥方便，眼藥水為主，隨時可用；適應(yīng)人群廣泛，包括中老年易感人群，血糖高及糖尿病患者易罹患其他類型的白內(nèi)障人群，高原地區(qū)紫外線強烈地區(qū)居民，易受強紫外線照射、高發(fā)皮質(zhì)性白內(nèi)障，直接面對高溫物品人群如煉鋼爐前工等，高熱易致晶體蛋白熱變性。該組合物藥理作用較強，性質(zhì)穩(wěn)定，使用制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的效果明顯，故其更適于預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)，為預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病提供了一種新的藥物來源。同時，本發(fā)明還有針對性地深入研究二硫蘇糖醇，并對二硫蘇糖醇進行了優(yōu)選和拓展，對二硫蘇糖醇的藥用用途進行開發(fā)，能夠用于保護蛋白及藥物載體；二硫蘇糖醇以eB2為主要靶蛋白，既具有晶體蛋白受熱聚集變性的作用，又是有效的自由基清除劑，另外還可增加組合物的滲透能力；副作用小，外用為主；藥物釋放快，所需劑量小，符合預(yù)防為主的原則，目前尚無能夠使晶狀體代謝恢復(fù)正常和使混濁吸收的藥物。二硫蘇糖醇藥理作用較強，性質(zhì)穩(wěn)定，使用制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的效果明顯，故其更適于預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)，為預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病提供了一種新的藥物來源。(六)水糸li晶體蛋白在老化悉擇中的變化趨勢的實驗研究采用雙向電泳法研究水溶性晶體蛋白在老化進程中的變化趨勢，可以從宏觀上檢測晶體蛋白的量變規(guī)律；有助于尋找和聚焦在此過程中發(fā)生異常變化的晶體蛋白；并進而探討其與晶體老化及其老年性白內(nèi)障發(fā)生的內(nèi)在關(guān)聯(lián)性；為研究抗晶體蛋白變性及維持晶狀體的透光性提供可靠的實驗依據(jù)。以往研究有關(guān)晶體蛋白受不同外界因素的影響，發(fā)生質(zhì)和量的改變，大多不作細分，如僅宏觀描述e晶體蛋白，而非eB2或PB3。但是，晶體蛋白隨老化進程，不同組分會有不同的表達趨勢，消長規(guī)律不一，不細分落實到具體蛋白，難以定向研究各自晶體蛋白的特性。利用高精度的雙向電泳分析方法，不僅可以將晶體蛋白分成a、e及Y三大族，還可以將每個蛋白族區(qū)別出不同的蛋白亞基或組分，大大有益于逐一探討不同晶體蛋白的性質(zhì)與功能。故此，本發(fā)明，采用常規(guī)動物飼養(yǎng)及蛋白質(zhì)生物化學(xué)提取方法，采集SD大鼠不同年齡段(從出生第1天至第8天，2周，8周，8個月及1.5年)的完整眼晶體；分別提取不同年齡段大鼠晶狀體中的水溶性晶體蛋白；雙向電泳，染色，脫色(并在實踐中，研制了新型凝膠蛋白的染色、脫色方法)，用掃描儀對凝膠上主要蛋白質(zhì)斑點進行定量分析；并按文獻編碼方式命名主要晶體蛋白組分，分析其相對含量變化規(guī)律；歸納出了4種晶體蛋白的時相變化模式，并發(fā)現(xiàn)了eB2晶體蛋白的異常高表達。1、材料和方法(1)試劑兩性載體(ampholinepH3.510.0)購自Pharmacy公司；丙烯酰胺(acrylamide)、N，N，-甲叉雙丙烯酰胺(bisacrylamide)、疏水膜(polyvinylidenedifiioride，PVDF)及電泳蛋白標(biāo)準(商品號161-0367)購自Bio-Rad公司；其余試劑均購自Sigma公司。(2)實驗儀器掃描系統(tǒng)采用圖像密度儀[Videodensitometer,應(yīng)用軟件為Bio-scannerVGA(l)CameraHi-Res2-DScanning,(2)Hi-ResView&Process2-DDataZeineh,美國];等電聚焦采用多用電泳儀(MultiphorII，LKB公司，瑞典)；SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)采用微量蛋白分析系統(tǒng)(MiniProtein3System,Bio-Rad公司，美國)。(3)動物準備常規(guī)飼養(yǎng)出生后ld、8d、2周、8周、8個月及1.5年的SD大鼠，每組(620)只，分別由美國新澤西醫(yī)學(xué)及牙科大學(xué)(UMDNJ)動物中心及第二軍醫(yī)大學(xué)動物中心提供。(4)晶體蛋白提取緩沖液①晶體蛋白提取儲存液(0.4M磷酸鹽緩沖液，l.OMNaCl，0.2%NaN3,PH6.8)10.8gNaH2P04，45.64gNa2HP04,58.4gNaCl，2.0gNaN3，1MEDTA,加水至1L。②晶體蛋白提取應(yīng)用液使用前用蒸餾水將儲存液l:10稀釋，并加入3mM(0.21ml/L)的2—巰基乙醇，和0.025mM(4ml/L)的PMSF。(5)晶體蛋白柱層析緩沖液同晶體蛋白提取應(yīng)用液。(6)等電聚焦(IEF)相關(guān)試劑的配制①電極液陽極為1MH3P04(85。/。濃磷酸6.8mL加蒸餾水至lOOmL);陰極為1MNaOH(4gNaOH加蒸餾水至lOOrnL)。②固定液5%磺基水楊酸，10%(或15%)三氯乙酸。③上樣緩沖液9M尿素，1%2—巰基乙醇。(7)SDS-PAGE相關(guān)試劑的配制①0.8X的瓊脂糖0.8g瓊脂糖，25mLTris-HCl(0.5MPH6.8),1.0ml10%SDS，加蒸餾水至100mL。用前高溫融化后灌膠用。②考馬斯亮蘭R-250染色液10%(v/v)乙酸，0.025%(w/v)考馬斯亮蘭R-250，蒸餾水定容至1L?；旌蟣h后，用Whatman1號濾紙過濾，室溫保存(或可改用發(fā)明人改進的染液及脫色方法，已發(fā)表論文)。③5X電泳緩沖液0.125MTris堿(15.1g)，0.96M甘氨酸(72.0g)，0.5%SDS(5.0g),加蒸餾水至1L。使用前稀釋至1XSDS電泳緩沖液。④樣品緩沖液25mL(0.5MPH6.8)，L0mL10%SDS，加蒸餾水至96mL，使用前加入4%的2—巰基乙醇。(8)晶狀體的采集將大鼠用C02或斷頸法處死，仔細剝離眼晶狀體，置于Whatman3MM濾紙上輕輕沾去污物，分別將眼晶狀體儲存于-80'C備用(6個月內(nèi)使用)。但對于剛出生l天的大鼠，眼晶狀體發(fā)育尚未十分完備，晶體外層囊膜靭性較差，而晶體內(nèi)部的纖維結(jié)構(gòu)骨架剛性不足。操作稍有不慎，即易導(dǎo)致外層囊膜的破裂，使晶體蛋白散落，而無法進行下一步提取工作；另外，對于老年性晶體(如出生1.5年的大鼠)，則會由于晶體膜蛋白的修飾變性，使晶體膜的脆性增加，易使細胞膜破裂；同時，在老年化的眼晶體中，積聚了大量的高分子量聚合物(HMW)及其它修飾變性成分，伴隨晶狀體核逐漸濃縮、擴大，影響了晶狀體的彈性，操作時也需要多加小心。取出晶狀體后，小心置于潮濕度適中的Whatman3MM濾紙上，沾去污物備用。(9)晶體蛋白的分離和純化對應(yīng)各大鼠實驗組，每次實驗根據(jù)晶體大小分別取14對眼晶狀體，質(zhì)量約(5070)mg，溶化后加入lml0.04mol/L、pH6.8的磷酸鹽緩沖液(含O.lmol/LNaCl，lmmol/LEDTA，3mmol/LP-巰基乙醇)，用玻璃勻漿器(Dounce勻漿器)研磨，10000Xg離心20min取上清；將沉淀物重復(fù)上述步驟共3次，合并上清測定蛋白濃度；部分上清液經(jīng)柱(SephadexG-200)分離，部分可直接用于雙向電泳分離；剩余沉淀物留作水不溶性(8M尿素)蛋白成分的提取用。(10)晶體蛋白柱層析SephadexG-200,常規(guī)操作，第一次分離后，將各個蛋白收集峰分別再次行層析分離。(11)晶體蛋白濃度測定參照Lowry方法。(12)等電聚焦(雙向電泳第l項)參考文獻進行操作，上樣量為70pg。①配膠尿素7,2g，兩性載體1.5ml，丙稀酰胺/Bis溶液3.5ml，雙蒸水8.0ml，將尿素溶解混勻后，用雙蒸水定容至20ml。負壓抽真空15分鐘后加入TEMED15ul以及10%AP50ul，輕輕混勻后立即倒入20ml的一次性注射器內(nèi)(應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡)。②灌膠先將兩層玻璃板按照"下層板一支持膜(GelBondPAGFilm,親水面向上)一上層板"的順序固定好，然后將注射器內(nèi)的溶液緩緩注入支持膜與上層玻璃板之間，使膠與支持膜結(jié)合在一起。③凝固灌好的膠板可室溫靜置過夜凝固，但要注意周圍的濕度，防止膠干燥皺縮。④取膠待膠完全凝固后，從槽子的一角輕輕翹起，然后緩慢的將整個上層玻璃板取下，取出支持膜。⑤等電聚焦準備將已制備好的上述凝膠連同支持膜放于電泳儀的冷卻板上，分別在陰極、陽極處放置一條用1MNaOH(-)及1MH3P04浸泡過的濾紙條，并在膠的陰極附近依次放置4X5mm小濾紙片，供上樣用。按每個濾紙片上樣7090ug/1020ul的蛋白質(zhì)。⑥等點聚焦500V30min使濾紙中的樣品完全進入膠中之后，升電壓至650V，此后，每隔5min電壓上調(diào)50V，直至電壓升至1200V。維持1200V電泳11.5h后，取下上樣濾紙片(樣品已滲入凝膠)，繼續(xù)1200V電泳4h,使電流值盡量小，23mA。⑦固定及保存仔細取下膠及支持膜，放入固定液中固定1530分鐘，取出，用蒸餾水反復(fù)沖洗干凈，通風(fēng)櫥自然風(fēng)干，置于保鮮膜內(nèi)-2(TC保存。(13)SDS-PAGE電泳(雙向電泳第2項)SDS-PAGE的膠濃度為12%T，交聯(lián)度為2.67%C，常規(guī)操作制備分離膠及濃縮膠；將第一項等點聚焦樣品支持膜取出，按照上樣部位及電泳方向，裁成寬0.8X長7.0cm的第二項上樣條，緩沖液中浸泡10min，按與第一項電泳方向成9(TC方向，置于SDS-PAGE的濃縮膠中，進行第二項垂直電泳；電泳完畢，取下凝膠，分別行染色、脫色，待掃描定量檢測。每組大鼠的晶體蛋白至少電泳10次以上。(14)凝膠蛋白掃描定量檢測凝膠經(jīng)考馬斯亮藍G250染色并經(jīng)適當(dāng)脫色后，用圖像密度儀掃描，并用2-D圖譜分析軟件進行分析(Zeineh,美國)選體積較大、蛋白集中、灰度最深的點作為參照點(該點灰度值視為最大)，以無蛋白處的凝膠黑度作為背景，測定主要晶體蛋白的體積及灰度等項指標(biāo)，給出相對定量值(relativequantity,RQ)。(15)電印跡采用半干式電印跡方法，并采用發(fā)明人自行改進的一種新型的半干式電印跡方法，提高了轉(zhuǎn)移效率和質(zhì)量。(16)雙向電泳分析大鼠晶體蛋白的命名原則國際上混用兩種命名方式，一種是由英國Ranaekers，F(xiàn)及美國Jos印h-FuS.C等人所采用的方式；另一種是以美國人David,L.L等人為代表的方式。從近幾年國際有關(guān)眼科學(xué)的多份雜志所采用的命名方式看，后一種命名方式正被越來越多的人員采用。本發(fā)明所用晶體蛋白命名，除將核心研究內(nèi)容eB2晶體蛋白按照DavidL.L等人的方式命名，以便于文獻檢索外；其余命名均仍沿用Joseph-FuS.C教授等人的命名方式；同時也便于采用Joseph-Fu實驗室的電泳模式進行雙向分析。2、結(jié)果(1)8周鼠齡晶體蛋白柱層析SephadexG-200柱(直徑2X高45cm)層析分離，將水溶性晶體蛋白(1020mg)，分成a、P、Y3大類、5個分離峰以洗脫組分出現(xiàn)的先后順序，依次為a、PH、PL卜eL2及y峰。(2)大鼠不同年齡組水洛性晶體蛋白雙向電泳圖譜按文獻[1]將晶體蛋白提取液進行等電聚焦，大鼠晶體蛋白按等電點(pi)不同可分成58個條帶；切下等電聚焦凝膠條帶(每條約8mm寬，7cm長，未經(jīng)染色)，微型SDS-PAGE分析；結(jié)果顯示，經(jīng)等電聚焦的一個條帶(等電點相同)又進一步分成多個相對分子質(zhì)量不等的蛋白斑點；凝膠經(jīng)考馬斯亮藍G250染色后，作蛋白半定量掃描檢測，不同年齡組晶體蛋白掃描讀數(shù)值總和大致相同，各組數(shù)據(jù)均取10次電泳測定均值。注意PB2在Joseph-FuS,C的系統(tǒng)中被命名為PB4。(3)晶體蛋白柱層析不同組分所含主要成分將各個收集峰分別作雙向電泳分析，最后將各個組電泳結(jié)果疊加，可將晶體蛋白分成三大類(a、e、y)，每大類中又分成不同的亞型，極個別可疑的蛋白點，通過WesternBlot分析確認結(jié)果與分布情況。(4)時相改變本部分研究發(fā)現(xiàn)，伴隨大鼠老化進程，18種主要晶體蛋白組分，其中7種蛋白的相對含量呈現(xiàn)明顯時相改變①晶體蛋白相對含量呈升高趨勢的有eB2、aB2、aA2;②呈降低趨勢的有e7(e!)、h、Y2,3、Ys,6(YC，YD);③大致保持穩(wěn)定的主要有eAhpa3、pb5;④其它主要晶體蛋白改變規(guī)律性不強。(3)主要晶體蛋白定量及統(tǒng)計學(xué)分析(SPSS11.0軟件)①eB2相對含量隨老化呈年齡依賴性升高(r=0.938,p<0.01)。②伴侶蛋白aA2及aB2相對含量隨老化呈漸進性升高(r=0.890，p<0.05;r=0.930，p<0.01)。eB2相對含量隨晶體老化的變化趨勢與伴侶蛋白aA2及aB2呈顯著正相關(guān)(r=0.949,p<0.01;r=0.986,p<0.01)。④eB2相對分子質(zhì)量約24000，等電點約6.4，是e族晶體蛋白中含量最高的一種蛋白成分，在大鼠老化進程中相對含量升高幅度最大。⑤aA2相對分子質(zhì)量約20000，等電點約4.9，是具有分子伴侶(MolecularChaperone)作用的主要晶體蛋白，維持晶狀體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，老化進程中亦呈輕度升高，相對含量始終處于高水平。⑥eB2/aA2比值U=10)在大鼠老化進程中呈漸進性升高。(5)主要晶體蛋白定性分析①各年齡組大鼠水溶性蛋白RQ值大致持平。②晶體蛋白的翻譯后修飾自大鼠出生8周后，便已明顯可見。③進入中老年后，水溶性Y組分大量丟失。3、討論a晶體蛋白分子量最小，在非變性的柱層析分離時，通常以(cia-cib)高聚體(約40個亞基，分子量30120萬KD)的形式存在。故分子篩作用下，首先被洗脫下來；其次才是表觀分子量較小的eH組分(68個亞基)，以及eL,組分(介于eH和eL2組分的聚合程度之間)和PL2晶體蛋白組分(均質(zhì)或異質(zhì)二聚體；homodimer/heterodimer);最后洗脫下來的是單體(monomer)Y組分。不同年齡段晶體蛋白水溶性成份RQ值在總體大致持平的情況下，各年齡段晶體蛋白的主要區(qū)別在于不同組分蛋白的構(gòu)成及相互比例不同，反映出晶體的發(fā)育完善程度及晶體蛋白的水溶性成分隨老化修飾變性及丟失程度的不同，是直接影響晶體透光性和折射率的物質(zhì)基礎(chǔ)。晶體蛋白的翻譯后修飾尤其是e族自大鼠出生8周后，便已明顯可見。該結(jié)果與國外近年報道的大鼠晶體蛋白的翻譯后修飾始自出生后6周的結(jié)論十分相近，只不過，兩家所選的檢測點不同；但是，國外的文獻，所選檢測點較少，并且時間跨度比本文范圍短的多。進入中老年后，水溶性Y組分大量丟失。Y族晶體蛋白在晶體中的作用，主要是起結(jié)構(gòu)蛋白作用，維持晶體的基本外形及其內(nèi)部功能；進入中老年后，水溶性成分的大量丟失，可能與該組分的選擇性丟失至晶體的玻璃體或合成能力下降有關(guān)。本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)不同的晶體蛋白在生長發(fā)育的不同階段，其表達量會有重大差異；而且，不同晶體蛋白的變化趨勢不盡相同。因此，研究晶體蛋白變化，不易籠統(tǒng)表述a、e或Y晶體，而應(yīng)當(dāng)具體落實到各個蛋白組分，如aA2、aB2及eB2等。eB2水溶性成份隨老化進程呈漸進性升高的啟示該發(fā)現(xiàn)與以往有些研究報道不同。主要在于，過去有些文獻研究晶體蛋白，不細分e族蛋白具體成分，得出了e族晶體蛋白水平隨老化而逐漸下降結(jié)論；而在本實驗中則發(fā)現(xiàn)eB2隨老化進程其相對含量非降反而升高。原因在于不同晶體蛋白可呈現(xiàn)不同的時相性改變；此外，晶體結(jié)構(gòu)蛋白基因也可發(fā)生改變。一個已知基因在哺乳動物整個一生中并不總處于活性狀態(tài)，晶體蛋白基因的相對表達是可以改變的。發(fā)現(xiàn)eB2相對含量隨老化呈"反常"年齡依賴性升高的現(xiàn)象，為我們的后續(xù)研究提供了強烈啟示。該發(fā)現(xiàn)既不同于以往P族蛋白水溶性成份隨老化逐漸下降的觀點，又給我們提出了一個重要課題。既然本部分研究發(fā)現(xiàn)了晶體蛋白水溶性成份存在重要的時相性改變，為我們的研究打開了一扇窗口，我們不禁還想了解晶體中這些蛋白成分在非水溶性組分中又是如何分配的？由此，實驗進入第二部分研究。(七)非水溶性晶體蛋白在老化悉艮中的變化趁勢的實驗研究正常成熟的晶狀體(簡稱lens),形如雙凸透鏡，富有彈性，是由晶狀體囊膜和晶狀體纖維組成。其中，囊膜為一層透明而具有彈性的均質(zhì)玻璃膜，由囊膜上皮細胞分泌產(chǎn)生，包圍晶體；晶狀體纖維則是晶體的主要成分，由赤道部上皮細胞向前后伸展、延長而成，其排列短程有序(Short-rangeorder),形似濃稠液體或玻璃體，這樣的排列，導(dǎo)致晶體透明、透光。晶狀體囊和晶狀體纖維均含有一定量的水不溶性蛋白成分，主要是構(gòu)成晶狀體囊的膜蛋白和晶狀體纖維的骨架蛋白，以此維持晶狀體的形態(tài)及其他物理和光學(xué)特性；而水溶性晶體蛋白則是晶體透明介質(zhì)的主要成份，并且也是晶體纖維細胞內(nèi)的水溶性成分，對于維持晶體的透光性及折射能力起重要作用，尤其水溶性a族蛋白具有伴侶蛋白作用，扶助晶體纖維搭建網(wǎng)格結(jié)構(gòu)以及維持e及Y族晶體蛋白成分在晶體介質(zhì)中的短程有序。隨著老化進程，a族蛋白的伴侶蛋白作用逐漸下降，大量a、e族蛋白成分，因受翻譯后修飾的影響，蛋白質(zhì)間發(fā)生交聯(lián)或聚集，首先形成水溶性的高分子量(WS-HMW)聚合物，進而逐漸演變?yōu)樗蝗苄?WI)的成份，并在晶體內(nèi)累積，直至形成大小不一的光散射中心，影響晶體的透光性和折射能力，成為誘發(fā)老年性白內(nèi)障的物質(zhì)基礎(chǔ)。為了進一步了解在水溶性成份中表達十分特殊的eb2和a族蛋白在水不溶相中的改變，我們采用與上述相類似的研究方法，收集眼晶體，首先提取水溶性晶體蛋白(WSP);隨后在已提取過水溶性晶體蛋白的沉淀物中，加入8M的尿素緩沖液，進一步提取水不溶性蛋白組分(尿素溶性蛋白，USP)，雙向電泳分析，獲得了一些新發(fā)現(xiàn)。結(jié)果表明，eB2在水不溶相中亦呈高水平，反映出該蛋白的易變性以及對于維持晶體透光性和折射能力的重要性，同時還提示eB2在水溶相中的高水平，可能是以eb2單組分、二聚體以及高分子聚合物(HMW)形式存在的，因為后者容易進一步轉(zhuǎn)變?yōu)樗蝗苄猿煞?，使USP成分升高；另外，對于以往文獻中報道的某些現(xiàn)象，如a族蛋白的伴侶蛋白作用隨老齡化而逐漸下降等，也提供了實驗解釋"伴侶蛋白"a族成分隨著老化進程，亦會大量出現(xiàn)在USP組分中，并且最主要的伴侶蛋白aA2自中年后，呈現(xiàn)出大量衍生物,反映出伴侶蛋白遭受變性程度加大，使其分子伴侶作用逐漸下降。同時觀測水溶性及水不溶性組分的分布規(guī)律，兩相中的結(jié)果相輔相成，有助于進一步驗證、完善老年性白內(nèi)障形成的機理。本發(fā)明對晶體蛋白分析多用定性描述；僅定量檢測了上述表達特殊的eB2及另一種主要"伴侶蛋白"aA2。1、材料和方法(1)試劑兩性載體(ampholinepH3.510.0)購自Pharmacy公司；丙烯酰胺(acrylamide)、N，N，-甲叉雙丙烯酰胺(bisacrylamide)、疏水膜(polyvinylidenedifiioride，PVDF)及電泳蛋白標(biāo)準(商品號161-0367)購自Bio-Rad公司；其余試劑均購自Sigma公司。(2)實驗儀器掃描系統(tǒng)采用成像儀Fluor-SMultiimager(Bio-Rad，美國)及2-D圖譜分析軟件(Quantityone-4.20，Bio-Rad,美國)；等電聚焦采用多用電泳儀(MultiphorII，LKB公司，瑞典)；SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)采用微量蛋白分析系統(tǒng)(MiniProtein3System,Bio-Rad公司，美國)。(3)動物準備常規(guī)飼養(yǎng)出生后1d、8d、2周、8周、8個月及1.5年的SD大鼠，每組(620)只，分別由美國新澤西醫(yī)學(xué)及牙科大學(xué)(簡稱UMDNJ)動物中心及第二軍醫(yī)大學(xué)動物中心提供。(4)8M尿素緩沖液8M尿素，含4%CHAPS,3%二巰基乙醇，40mMTris堿，pH6.87.2。(5)晶狀體的采集將大鼠用C02或斷頸法處死，仔細剝離眼晶狀體，置于Whatman3MM濾紙上輕輕沾去污物，分別將取眼晶狀體儲存于-8(TC備用。但對于剛出生l天的大鼠，眼晶狀體發(fā)育尚未十分完備，晶體外層囊膜韌性較差，而晶體內(nèi)部的纖維結(jié)構(gòu)骨架剛性不足。操作稍有不慎，即易導(dǎo)致外層囊膜的破裂，使晶體纖維及內(nèi)容物散落，而無法進行下一步提取工作；另外，對于老年性晶體(如出生1.5年的大鼠)，則會由于晶體囊膜存在不同程度的變性和灶性變薄區(qū)，容易造成液化的晶體皮質(zhì)透過囊膜；同時，在老年化的眼晶體介質(zhì)中，積聚了大量的高分子量聚合物(簡稱HMW)及其它修飾變性成分，伴隨晶狀體核逐漸濃縮、擴大，影響了晶狀體的彈性，操作時需要格外小心，勿傷及囊膜。取出晶狀體后，小心置于潮濕度適中的Whatman3MM濾紙上，輕輕沾去污物備用。(6)尿溶性晶體蛋白的提取在提取完水溶性晶體蛋白成分得沉淀物中，加入0.5ml8M尿素緩沖液，至于冰上，用玻璃勻漿器(Dounce勻漿器)研磨，10000Xg離心20min取上清；將沉淀物重復(fù)上述步驟共3次，合并上清測定蛋白濃度；部分上清液經(jīng)柱(S印hadexG-200)分離，部分可直接用于雙向電泳分離；剩余殘留沉淀物還可再留作水不溶性(簡稱WI)蛋白成分的提取用。(7)尿溶性晶體蛋白濃度測定(參考文獻半定量考馬斯亮藍R-250濾紙點樣法)①0.P/。(W/V)考馬斯亮藍R-250染液(65份去離子水，25份異丙醇，10份醋酸)。②裁剪濾紙至合適大小，并用鉛筆在濾紙上輕輕劃出點樣點(直徑23mm)。③配制濃度梯度(20200ug)的蛋白質(zhì)(牛血清白蛋白)標(biāo)準液。④用微量加樣器，分5次每次lul，將各濃度標(biāo)準液加到濾紙所對應(yīng)的位置(待液體滲入濾紙后、晾干，再進行隨后的加樣，保持點樣點盡量小)。⑤點樣完畢，將濾紙浸沒于上述染液中，持續(xù)1530min，用去離子水漂洗干凈，完全晾干。⑥用打孔器(直徑45mm)，將干燥后的蛋白質(zhì)斑點取下，按不同濃度梯度依次放入帶蓋的10ml玻璃瓶中，加入0.1%SDS溶液2ml，搖床40100卬m轉(zhuǎn)速充分洗脫(l2h)。⑦將不同濃度的蛋白標(biāo)準品，于595nm處比色，用不含蛋白處的同等大小的濾紙浸泡液作為零對照，繪制標(biāo)準曲線。⑧將待測尿溶性晶體蛋白組分稀釋不同倍數(shù)，每種濃度至少重復(fù)3次以上；用同樣步驟檢測，與上述標(biāo)準曲線比較，即可得到待測樣品的大致濃度。(8)雙向電泳操作等電聚焦及SDS-PAGE電泳程序，同上文所述。等點聚焦每個條帶的上樣量仍為70SDS-PAGE電泳仍采用Mini-Gd系統(tǒng)；染色、脫色方法同第一部分；每組大鼠的晶體蛋白至少電泳10次以上；。(9)雙向電泳凝膠掃描定量SDS-PAGE凝膠經(jīng)考馬斯亮藍G250染色并適當(dāng)脫色后，用Fluor-SMultiimager(Bio-Rad,美國)成像儀及2-D圖譜分析軟件(Quantityone-4.20Bio-Rad,美國)，進行掃描定量。選體積較大、蛋白集中、灰度最深的點作為參照點(該點灰度值視為最大)，以無蛋白處的凝膠黑度作為背景，測定主要晶體蛋白的體積及灰度等項指標(biāo)，給出相對定量值(relativequantity,RQ)。(10)晶體蛋白的命名尿素溶性成分的雙向電泳圖譜中，各晶體蛋白的命名方式同第一部分中的說明。尤需注意本發(fā)明重點討論的eB2晶體蛋白，在Joseph-FuSC命名體系中被稱為eB4。2、結(jié)果(1)不同年齡(自出生1天1.5年)大鼠尿素溶性晶體蛋白的雙向電泳圖譜獲得了與水溶性晶體蛋白雙向電泳圖譜基本相同的電泳圖譜；但是，不同年齡段晶體蛋白組分的分布，與在水溶相中不同。注意0B2在Joseph-FuS,C的系統(tǒng)中被命名為PB4。(2)雙向電泳定量分析尿溶晶體蛋白0B2隨老化進程均呈漸進性升高；而主要伴侶蛋白組分aA2的相對含量則大致保持穩(wěn)定。(3)雙向電泳定性分析①ctA2、PB2尿溶性成分隨老化變化幅度不及在水溶性成份中明顯。②尿溶性晶體蛋白aA2的翻譯后修飾(Deamidation)產(chǎn)物aA,自大鼠8周齡起，呈極顯著增加。③aB2的翻譯后修飾(脫酰胺)產(chǎn)物ciB,，自大鼠8周齡起亦呈顯著增加。PB2自大鼠8周齡起出現(xiàn)明顯降解(Truncated)產(chǎn)物，表現(xiàn)在PB2蛋白點下方出現(xiàn)多個蛋白點，且增長幅度遠大于在水溶性中的表現(xiàn)。⑤Y組分進入老齡后，有較明顯的下降趨勢。3、討論雙向電泳結(jié)果可見部分大鼠水不溶性晶體蛋白隨老化進程，同樣伴有時相性改變。尤其是aA2及eB2，無論在水溶性還是在尿溶性成分的分布中，均呈高水平。反映出此兩種晶體蛋白作為晶狀體中主要成分，在維持晶體正常結(jié)構(gòu)與功能方面，具有重要作用一方面，a組分可通過與晶體膜以及細胞骨架蛋白相結(jié)合，起維持晶狀體形狀、彈性及透光功能等特性；另一方面，e晶體蛋白則在構(gòu)建晶體蛋白的短程有序(short-rangeorder)、保持晶狀體的透光性方面具有重要作用；此外，這兩種晶體蛋白代謝活躍，均容易從水溶性轉(zhuǎn)變?yōu)樗蝗苄裕?，這兩種轉(zhuǎn)變的方式不同eB2的轉(zhuǎn)化是由于該蛋白易受翻譯后的修飾變性，是一種被動過程，而a族蛋白的轉(zhuǎn)化則是在發(fā)揮分子伴侶的過程中，為保護其他晶體蛋白少受變性影響，尤其是，在其他類晶體蛋白已經(jīng)遭受某種變性影響時，水溶性受到影響，a族蛋白則會主動與其結(jié)合，維持HMW的水溶性，表現(xiàn)出某種主動接受攻擊的自我犧牲境界。eB2成分大幅升高的提示一方面eB2水溶性成分的增加，可以部分彌補其他P族組分水溶性成份下降給晶體造成的不利影響，有助于維持晶體透光性，尤其是維持其折射率；但在尿溶性成分中eB2亦呈快速升高趨勢，則反映出隨老化進程eB2水溶性的升高，有可能是以水溶性高分子量聚合物(WS-HMW)方式存在的，而WS-HMW容易進一步轉(zhuǎn)化為水不溶性成分，綜合提示eB2晶體蛋白對于老年性白內(nèi)障的發(fā)生具有密切關(guān)系，似為白內(nèi)障病因?qū)W的敏感蛋白！大鼠自8周齡起，"伴侶蛋白"aA2、結(jié)構(gòu)蛋白eB2及其兩種伴侶蛋白的翻譯后修飾產(chǎn)物(iA,和ciB,均顯著升高的現(xiàn)象，突出反映了大鼠進入成年期后，水不溶性晶體蛋白的分布發(fā)生明顯的量變和質(zhì)變；亦提示進入成熟期后，晶體遭受內(nèi)部及外界負面影響的機率增大，晶體蛋白變性程度增加；進入老年階段后，甚至?xí)霈F(xiàn)劇增現(xiàn)象。因此，應(yīng)盡早注意采取合適的措施，保護晶體蛋白少受變性影響。大鼠進入老齡(1.5年)后，Y組分有較明顯的下降趨勢表明，水溶相中Y組分在老齡化時所呈大量下降，并非是由于轉(zhuǎn)化為水不溶性成分所致，而是可能通過在白內(nèi)障形成后所常出現(xiàn)的所謂選擇性滲出(Selectiveleakage)至玻璃體有關(guān)；大量Y組分的丟失，與晶狀體的結(jié)構(gòu)破壞亦有重要關(guān)聯(lián)。以上二部分的研究結(jié)果還說明在大鼠老化(出生1天到1.5年)進程中，水溶性晶體蛋白總量未見明顯改變，提示當(dāng)水溶性晶體蛋白總量發(fā)生明顯下降時，白內(nèi)障似己達較嚴重程度。另外，大鼠老化進程中其水不溶性晶體蛋白總量變化較大，主要表現(xiàn)為自大鼠出生至幼年期(l天2周)總的水不溶性蛋白含量均較低；接近成熟期(第8周起)時，其水不溶性晶體蛋白含量呈漸進性升高。據(jù)此假設(shè)①隨著老化進程，大鼠部分水溶性晶體蛋白(尤其e組分)受變性修飾，易聚合成高分子化合物，演變?yōu)樗蝗苄?；②在嚴重白?nèi)障發(fā)生之前，新生的晶體蛋白可補充由于水不溶性蛋白的漸進性累積所造成的水溶性蛋白成分的損失，使水溶性晶體蛋白總量保持相對穩(wěn)定。③當(dāng)晶狀體老化到一定程度，新生晶體蛋白的量不足以彌補由于水不溶性蛋白形成加快所造成的水溶性蛋白的損失，使晶狀體結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變，導(dǎo)致不透明性，誘發(fā)白內(nèi)障。綜合晶體蛋白在水溶性及尿溶性組分中的分布結(jié)果，可見eB2同e族其他組分，尤其是eL組分(eA2，pa3;eB3)有明顯不同①水溶性組分中，進入中老年后(大鼠8個月i.5年)，除eB2及eAi外，其余組分均呈下降，與文獻報道該組蛋白成分抗熱變性能較低、容易發(fā)生非特異性熱聚集(28聚合體)，最終導(dǎo)致水不溶性晶體蛋白的形成相符；②而在尿溶部分，幾乎所有eL組分，均在8周后呈大幅升高趨勢，反映了eL族成分隨老化進程，易受外界因素影響，大量成分由水溶性變?yōu)樗蝗苄裕籃eB2晶體蛋白在水溶性及水不溶性兩項中的分布特點，反映出該蛋白分布的兩重性，控制其在水溶性中的含量、努力延緩向水不溶性成分的轉(zhuǎn)化，對于老年性白內(nèi)障的預(yù)防及治療具有重要作用?？傊?，哺乳動物自出生后，由于晶體所在的眼球暴露在外，晶狀體又位于眼球前段，各種有害因素易于影響晶狀體的正常代謝，使晶狀體蛋白質(zhì)發(fā)生變性，不溶性蛋白相應(yīng)增多，透明晶狀體出現(xiàn)混濁，發(fā)生白內(nèi)障；防止晶體蛋白水溶性成份的減少以及水不溶性成分的增加，是防止和延緩老年性白內(nèi)障的必由之路。晶體蛋白伸展(Unfolding)可以導(dǎo)致蛋白之間的錯誤裝配(wrongassembleis)或改變相互關(guān)系，進而導(dǎo)致老年性白內(nèi)障的形成(BloemendalH，deJongW，JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfunctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485和MacdonaldJT，PurkissSmithMA，etal.Unfoldingcrystallins:Thedestabilizingroleofa{beta}-haiipincysteinein{beta}B2-crystallinbysimulationandexperiment.ProteinSci.2005May;14(5):1282-1292);但是，對于處于較為嚴重的老年性白內(nèi)障時，大量晶體蛋白處在由水溶性低聚體向水不溶性高聚體的轉(zhuǎn)化過程中，并已在晶體皮質(zhì)中積聚了較多的水不溶性晶體蛋白成分。嘗試加入DTT(常用還原劑，可以還原蛋白之間的二硫鍵，造成蛋白多肽的伸展(CarverJA，LindnerRA，LyonC，etal.Theinteractionofthemolecularchaperonealpha-crystallinwithunfoldingalpha-lactalbumin:astructuralandkineticspectroscopicstudy.JMolBiol.2002May3;318(3):815-827和SinghR,RaoChM.Chaperone-likeactivityandsurfacehydrophobicityof70Sribosome.FEBSLett.2002Sep11;527(1-3):234-238)，推測反而可以起到緩解晶體蛋白進一步形成不溶性高聚合體的傾向，有助于維持晶體蛋白的水溶性；我們的第三部分實驗證實了這一點，并提示外用該中性化合物，將有助于晶體蛋白的抗受熱變性，起到延緩晶體老化及維持晶狀體正常功能的作用，對于預(yù)防和治療老年性白內(nèi)障具有積極作用。PB2基因為晚期基因(BloemendalH，deJongW,JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfunctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485);PB2晶體蛋白在出生后逐步增加，屬于繼發(fā)性纖維成分的代表之一；因此，PB2晶體蛋白主要處在外圍皮質(zhì)的晶狀體纖維中，外用抗晶體蛋白變性的藥物，容易發(fā)揮作用。為了維持晶體的透光性、延緩或治療白內(nèi)障，現(xiàn)已研制出數(shù)十種藥物用于臨床。但是，白內(nèi)障的藥物治療仍然面臨著嚴峻的挑戰(zhàn)盡管有數(shù)十種抗白內(nèi)障藥物已被廣泛臨床使用，但證明其有效性的直接證據(jù)甚少(FernandezV,FragosoMA,BillotteC,etal.E伍cacyofvariousdrugsinthepreventionofposteriorcapsuleopacification:experimentalstudyofrabbiteyes.JCataractRefractSurg.2004Dec;30(12):2598-2605和HardingJJ.CancataractbepreventedEye.1999Jun;13(Pt3b):454-456)。本發(fā)明設(shè)計的新型的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，綜合考慮了晶體蛋白變性主要途徑，抓住主要易感蛋白PB2作為靶蛋白，針對性強；組合物外用為主，使用方便，具有較強的創(chuàng)新性和臨床應(yīng)用潛在價值。白內(nèi)障疾病巳成為影響中國人口生活質(zhì)量的重要致病原因，本發(fā)明的組合物安全低毒，其原料來源豐富、價廉，制備工藝簡單，且使用范圍較廣，因此容易推廣應(yīng)用，研制預(yù)防、診斷、保護和治療白內(nèi)障等方面產(chǎn)品特別是治療白內(nèi)障疾病的藥物，能夠在較短的時間內(nèi)產(chǎn)生顯著的社會效益和經(jīng)濟效益?？傊?，本發(fā)明積極適應(yīng)了現(xiàn)代健康、醫(yī)療需求，以及科研領(lǐng)域的工作需要和人性化服務(wù)的需要，是用于預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究白內(nèi)障及其相關(guān)疾病等方面的安全原料。圖1是表示0B2晶體蛋白與其它幾種蛋白受熱聚集變性比較；圖2是表示不同SB2晶體蛋白含量對于ADH受熱聚集效應(yīng)的影響；圖3是表示不同DTT含量對于ADH受熱聚集效應(yīng)的影響；圖4是表示不同DTT含量對eB2晶體蛋白受熱聚集效應(yīng)的抑制作用。具體實施例方式本發(fā)明研究了二硫蘇糖醇的新的藥理作用，以及現(xiàn)有物質(zhì)組成的組合物的新的藥理作用和新的用途，提供了一種能夠用于制備白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的預(yù)防、診斷、保護、研究和治療等產(chǎn)品的原料，便于醫(yī)療行業(yè)和相關(guān)行業(yè)如食品、飲料等領(lǐng)域的安全使用。(一)組合物配方及其使用方法其中之一的配方是llmmol/Llllmmol/L(即1376mg/L13765mg/L)?；撬帷?2mmol/L120mmol/L(即1752mg/L17520mg/L)賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L(即38mg/L385mg/L)DTT;由?；撬?、游離賴氨酸和DTT為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天13次，每次l滴。其中之二的配方是llmmol/Llllmmol/L(即2048mg/L20477mg/L)阿司匹林、12mmol/L120mmol/L(即1752mg/L17520mg/L)賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L(即38mg/L385mg/L)DTT;由阿司匹林、游離賴氨酸和DTT為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天13次，每次1滴。其中之三的配方是llmmol/Llllmmol/L(即1376mg/L13765mg/L)牛磺酸、23mmol/L230mmol/L(即3358mg/L33580mg/L)賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L(即38mg/L385mg/L)DTT、llmmol/Llllmmol/L(即2048mg/L20477mg/L)阿司匹林；由阿司匹林、?；撬帷⒂坞x賴氨酸和DTT為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次l滴。其中之四的配方是llmmol/Llllmmol/L(即2048mg/L20477mg/L)阿司匹林、12mmol/L120mmol/L(即1752mg/L17520mg/L)賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L(即38mg/L385mg/L)DTT、llmmol/Llllmmol/L(即3392mg/L33916mg/L)GSH;由阿司匹林、游離賴氨酸、DTT和GSH為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次1滴。其中之五的配方是llmmol/Lmmmol/L(即1376mg/L13765mg/L)?；撬?、12mmol/L120mmol/L(即1752mg/L17520mg/L)賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L(即38mg/L385mg/L)DTT、llmmol/Llllmmol/L(即3392mg/L33916mg/L)GSH;由?；撬?、游離賴氨酸、DTT和GSH為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次1滴。其中之六的配方是11mmol/Llllmmol/L(即1376mg/L13765mg/L)?；撬?、23mmol/L230mmol/L(即3358mg/L33580mg/L)賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L(即38mg/L385mg/L)DTT、11mmol/Llllmmol/L(即3392mg/L33916mg/L)GSH、11mmol/Llllmmol/L(即2048mg/L20477mg/L)阿司匹林；由阿司匹林、牛磺酸、游離賴氨酸、DTT和GSH為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次1滴。(二)白內(nèi)陣動物棋型1、先期用于硒(亞硒酸鈉Na2Se03)誘導(dǎo)的SD大鼠白內(nèi)障模型(BluntDS,TakemotoL.InhibitionofselenitecataractbyS-diethylsuccinylglutathioneisopropylester.CurrEyeRes.2000Apr;20(4):341-345)，模擬老年性白內(nèi)障的病理變化，裂隙燈每日觀察、記錄晶體透光性改變進程，觀察療效；2、用半乳糖誘導(dǎo)SD大鼠糖性白內(nèi)障模型(HuangWQ，ZhangJP,FuSC.Differentialeffectsofgalactose-inducedcataractogenesisonthesolublecrystallinsofratlens.ExpEyeRes.1990Jul;51(1):79-85)。通過上述的白內(nèi)障動物模型，能夠探討該組合物的臨床應(yīng)用前景，期望該組合物能夠?qū)τ谘泳徍椭委熇夏晷园變?nèi)障及糖性白內(nèi)障，尤其針對大部分初發(fā)期的老年性白內(nèi)障治療產(chǎn)生積極影響。在本發(fā)明中，以上所述的具體實施方式和以下所述的實施例均是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來限制發(fā)明的范圍。下面通過實施例對本發(fā)明作詳細描述。實施例1、熱諒"導(dǎo)變性實驗本發(fā)明用熱誘導(dǎo)變性實驗，分析eB2的生物化學(xué)特性；探討eB2的受熱變性的敏感性程度、eB2對于其它蛋白受熱聚集變性的影響(類比a族晶體蛋白的分子伴侶作用)以及特殊化合物二硫蘇糖醇對于eB2晶體蛋白熱變性的保護作用。(一)材料和方法1.試劑乙醇脫氫酶(簡稱ADH)、DTT購自Sigama公司；eB2晶體蛋白為本室自行表達、純化。2.儀器Bio-RadSmartspec3000型光度計；DK-60型電熱恒溫水槽；1.0ml石英比色杯(下部為狹縫池，0.5ml即可比色檢測)。3.蛋白溶液配制(1)0.4mg/mlADH、DTT、Lysozyme、牛血清白蛋白(簡稱BSA)溶液配制分析天平準確稱取化合物純品，用0.1MPBS緩沖液溶解并定容；用市售蛋白定量檢測試劑盒檢測比對。(2)0.4mg/mleB2晶體蛋白溶液配制本室自行表達、純化的PB2晶體蛋白溶液，采用上述同種市售蛋白定量檢測試劑盒定量測定。(3)以上述蛋白濃溶液為基礎(chǔ)，稀釋成不同濃度并按實驗要求配成不同混合液。4.檢測分別將蛋白溶液以及蛋白混合液各0.5ml，加入1.0ml石英杯中，以未加熱前液體的吸光度調(diào)整零點；樣品置于50'C恒溫水槽，保溫5min，取出立即檢測溶液吸光度(簡稱OD)改變；依次循環(huán)保溫、檢測，持續(xù)5060min;儀器可以同時選擇設(shè)定三個波長(參照有關(guān)文獻，本實驗設(shè)定為360nm;450nm;532nm)進行檢測。(二)結(jié)果1、0B2晶體蛋白熱不穩(wěn)定性及與其它幾種蛋白受熱聚集變性程度比較(1)eB2晶體蛋白50'C孵育5min后，即發(fā)生較明顯混濁，表現(xiàn)為受熱變性的髙敏感特性。(2)ADH相對于eB2晶體蛋白熱變性程度稍差，但遠不及BSA及Lysozyme穩(wěn)定。(3)BSA及Lysozyme在50。C孵育50min，基本未發(fā)生明顯變性(見表2、圖l)。表2、PB2晶體蛋白與其它幾種蛋白受熱聚集變性比較<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>2、PB2晶體蛋白對于ADH受熱聚集效應(yīng)的影響(1)eB2晶體蛋白以及ADH有關(guān)的五種蛋白溶液，在5(TC加熱至10min左右，均開始出現(xiàn)混濁，OD值開始明顯升高(見表3)。(2)加入eB2晶體蛋白對ADH熱聚集產(chǎn)生協(xié)同促進作用(見圖2)。(3)eB2晶體蛋白濃度對于ADH熱聚集作用具有劑量依賴性，加入eB2量越大越容易導(dǎo)致ADH溶液快速出現(xiàn)蛋白沉淀及兩相分離(見圖2)。3、DTT對于ADH受熱聚集效應(yīng)的影響(篩選對PB2晶體蛋白的保護性化合物)(1)ADH的熱穩(wěn)定性較PB2晶體蛋白強，5(TC加熱10min后，吸光度開始增加，但遠低于eB2晶體蛋白的吸光度增加值(見表4、圖3)。表3、不同PB2晶體蛋白含量對于ADH受熱聚集效應(yīng)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>時間(見表4、圖3)。(3)DTT對于ADH受熱聚集效應(yīng)具劑量依賴性ADH:DTT為5:l時，已可極有效抑制ADH受熱變性(見表4、圖3)。4、dtt對于6b2晶體蛋白受熱聚集效應(yīng)的影響(1)eB2晶體蛋白溶液受熱5min，即發(fā)生明顯變性；受熱15min時，吸光度達最大值；其后吸光度逐漸下降，并出現(xiàn)蛋白小顆粒與緩沖液水相的緩慢相分離(見表5、圖4)。表5、不同DTT含量對于(iB2晶體蛋白受熱聚集效應(yīng)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>(2)DTT對于eB2晶體蛋白溶液的熱變性效應(yīng)具有效的抑制作用一方面，表現(xiàn)為相應(yīng)的吸光度值減小；另一方面，表現(xiàn)在延遲蛋白與水相的相分離時間(見表5、圖4)。(3)DTT對于eB2晶體蛋白溶液的熱變性效應(yīng)具有劑量依賴性PB2與DTT含量比值為25:l時，抑制效應(yīng)較低，己基本接近單純eB2水平；當(dāng)比值為12.5:l5:l范圍內(nèi)，可有效抑制eB2熱變性；當(dāng)比值為2.5:l時，DTT可保護eB2晶體蛋白在5(TC孵育50min后，仍未見明顯熱變性聚集作用，蛋白溶液保持清亮、透明(見表5、圖4)。(三)討論文獻報道，eL組分的晶體蛋白(主要包括pa1/3、pa2、eA4及eBh.eB3)，易受熱變性，若沒有a族晶體蛋白的伴侶蛋白保護，置于50'C孵育10分鐘，即可導(dǎo)致蛋白變性(HejtmancikJF,WingfieldPT,SergeevYV.Beta-crystallinassociation.ExpEyeRes.2004Dec;79(6):377-383;BatemanOA,SarraR,vanGenesenST，etal.Thestabilityofhumanacidicbeta-crystallinoligomersandhetero-oligomers.ExpEyeRes.2003Oct;77(4):409-422)，表現(xiàn)為發(fā)生熱聚集及散射光強度的增加；eB2作為e族蛋白中的主要成分(BloemendalH,deJongW,JaenickeR，etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfiinctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485),現(xiàn)有文獻中有的報道十分穩(wěn)定(ZhangZ，DavidLL,SmithDL，etal.ResistanceofhumanbetaB2-crystallintoinvivomodification.ExpEyeRes.2001Aug;73(2):203-211;ZhangZ,SmithDL，SmithJB.Humanbeta-crystallinsmodifiedbybackbonecleavage,deamidationandoxidationarepronetoassociate.ExpEyeRes.2003Sep;77(3):259-272)，而更多地則認為PB2十分不穩(wěn)定(SrivastavaOP，SrivastavaK.eB2國crystallinundergoesextensivetruncationduringaginginhumanlenses.BRC,2003Jan;301(1):44-49;MiesbauerLR，ZhouX，YangZ，etal.Post-translationalmodificationsofwater-solublehumanlenscrystallinsfromyoungadults.JBiolChem.1994Apr29;269(17):12494-12502;SathishHA,KoteicheHA，McHaourabHS.BindingofdestabilizedbetaB2-crystallinmutantstoalpha-crystallin:theroleofafoldingintermediate.JBiolChem.2004Apr16;279(16):16425-16432)。在本發(fā)明的實驗條件下，PB2表現(xiàn)為極易受熱聚集變性、eB2的加入還對ADH等蛋白的熱不穩(wěn)定性產(chǎn)生明顯協(xié)同促進作用。但值得注意的是，該組分同其他蛋白組分之間的相互比例，將對蛋白的熱變性程度產(chǎn)生重大影響。從晶體蛋白結(jié)構(gòu)考慮，似乎也更支持eB2的熱不穩(wěn)定性。因為，在所有e族晶體蛋白中，eB2所含的半胱氨酸(Cys)數(shù)量最少(僅有3個)，而其他P族成分含Cys數(shù)量(48個Cys)均超過eB2，Cys基團含有極易被氧化的巰基，在受熱環(huán)境中易遭受氧化修飾，形成二硫鍵，導(dǎo)致蛋白質(zhì)間的交聯(lián)，影響其水溶性，并容易導(dǎo)致熱聚集，從而表現(xiàn)出熱不穩(wěn)定性。eB2保持其水溶性的重要性在于作為e族晶體蛋白中含量最多的一種結(jié)構(gòu)蛋白，保持其水溶性不僅有利于維持晶狀體的透光性，而且通過與其他e晶體蛋白分子間亞基交換，有助于保持其他e族晶體蛋白成分的水溶性(BloemendalH，deJongW,JaenickeR,etal.Ageingandvision:structure,stabilityandfunctionoflenscrystallins.ProgBiophysMolBiol.2004Nov;86(3):407-485;ZhangZ,SmithDL,Smith瓜Humanbeta-crystallinsmodifiedbybackbonecleavage,deamidationandoxidationarepronetoassociate.ExpEyeRes.2003S??；77(3):259-272)。本實驗研究的最重要的發(fā)現(xiàn)，在于加入適量(eB2:DTT為12.5:15:l范圍內(nèi))的DTT可以有效抑制eB2的熱聚集變性；而抑制eB2晶體蛋白從水溶性向水不溶性的轉(zhuǎn)變，則是抑制老年性白內(nèi)障的有效措施之一。實施例2、組合物的配方之一?；撬豳嚢彼岫蛱K糖醇由?；撬帷⒂坞x賴氨酸和次，每次1滴。11蘭ol/L(即1376mg/L)12腿ol/L(即1752mg/L)2.5mmol/L(即385mg/L);二硫蘇糖醇為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天13實施例3、組合物的配方4LJi牛磺酸賴氨酸二硫蘇糖醇由?；撬帷⒂坞x賴氨酸和:次，每次i滴。lllmmol/L(即13765mg/L)120mmol/L(即17520mg/L)0.25mmol/L(即38mg/L);二硫蘇糖醇為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天13實施例4、組合物的配方4L^阿司匹林11mmol/L(即2048mg/L)賴氨酸12mmol/L(即1752mg/L)二硫蘇糖醇0.25mmol/L(即38mg/L);由阿司匹林、游離賴氨酸和二硫蘇糖醇為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天13次，每次1滴。實施例5、組合物的配方之四阿司匹林lllmmol/L(即20477mg/L)賴氨酸120mmol/L(即17520mg/L)二硫蘇糖醇2.5mmol/L(即385mg/L);由阿司匹林、游離賴氨酸和二硫蘇糖醇為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天13次，每次l滴。實施例6、組合物的配方U?；撬豳嚢彼岫蛱K糖醇阿司匹林llmmol/L(即:1376mg/L)23mmol/L(即3358mg/L)2.5mmol/L(即385mg/L)llmmol/L(即2048mg/L);由阿司匹林、?；撬帷⒂坞x賴氨酸和二硫蘇糖醇為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次l滴。實施例7、組合物的配方之六牛磺酸111mmol/L(即13765mg/L)賴氨酸230mmol/L(即33580mg/L)二硫蘇糖醇2.5mmol/L(即385mg/L)阿司匹林111mmol/L(即20477mg/L);由阿司匹林、?；撬?、游離賴氨酸和二硫蘇糖醇為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次1滴。實施例8、組合物的配方之七阿司匹林11mmol/L(即2048mg/L)賴氨酸12mmol/L(即1752mg/L)二硫蘇糖醇0.25mmol/L(即38mg/L)谷胱甘肽111mmol/L(即33916mg/L);由阿司匹林、游離賴氨酸、二硫蘇糖醇和谷胱甘肽為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次1滴。實施例9、組合物的配方4Lv、阿司匹林111mmol/L(即20477mg/L)賴氨酸120mmol/L(即17520mg/L)二硫蘇糖醇0.25mmol/L(即38mg/L)谷胱甘肽11mmol/L(即3392mg/L);由阿司匹林、游離賴氨酸、二硫蘇糖醇和谷胱甘肽為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次1滴。實施例10、組合物的配方之九?；撬?1mmol/L(即1376mg/L)賴氨酸12mmol/L(即1752mg/L)二硫蘇糖醇2.5mmol/L(即385mg/L)谷胱甘肽111mmol/L(即33916mg/L);由牛磺酸、游離賴氨酸、二硫蘇糖醇和谷胱甘肽為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次1滴。實施例ll、組合物的配方之十牛磺酸lllmmol/L(即13765mg/L)賴氨酸120mmol/L(即17520mg/L)二硫蘇糖醇2.5mmol/L(即385mg/L)谷胱甘肽lllmmol/L(即33916mg/L);由?；撬?、游離賴氨酸、二硫蘇糖醇和谷胱甘肽為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次1滴。實施例12、組合物的配方之十一?；撬?1醒ol/L(即1376mg/L)賴氨酸23mmol/L(即3358mg/L)二硫蘇糖醇0.25mmol/L(即38mg/L)谷胱甘肽llmmol/L(即3392mg/L)阿司匹林llmmol/L(即2048mg/L);由阿司匹林、?；撬帷⒂坞x賴氨酸、二硫蘇糖醇和谷胱甘肽為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次l滴。實施例13、組合物的配方之十二?；撬醠llmmol/L(即13765mg/L)賴氨酸230mmol/L(即33580mg/L)二硫蘇糖醇2.5mmol/L(即385mg/L)谷胱甘肽llmmol/L(即3392mg/L)阿司匹林lllmmol/L(即20477mg/L);由阿司匹林、?；撬帷⒂坞x賴氨酸、二硫蘇糖醇和谷胱甘肽為組合物，如果配成外用滴眼液，則每天35次，每次l滴。實施例14、組合物滴眼液的制備取上述得到的組合物45g，加入豬膽膏20g、馬來酸氯苯那敏0.5g、魚腥草素鈉8g，加入蒸餾水稀釋10倍，濾去不容物，裝瓶，滅菌，封口即得組合物滴眼液。實施例l5、組合物4Hi"刑的制備取組合物30g，加入右旋糖苷30g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至2000ml,加3.0g針用活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾；用0.22pm微孔濾膜過濾；灌裝到無菌的西林瓶中，每瓶2ml，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。實施例16、組合物IHi"刑的制備(1)處方注射用組合物半成品150g甘露醇400g注射用水加至10000ml共制成10000瓶(2)制備工藝按以上處方稱取處方量組合物，加入到適量注射用水中，攪拌使其溶解；加入處方量甘露醇，攪拌使完全溶解，加注射用水至全量；加入液體量的0.1%針用活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾；用0.22jxm微孔濾膜過濾；灌裝，半軋塞；冷凍干燥，壓塞軋蓋。共制得9735瓶，成品率為97.35%。實施例n、組合4HHf劑的制備取組合物60g，加500ml注射用水活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾分裝成1000瓶。實施例18、組合物IHf"刑的制備取組合物40g，加入乳糖50g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解;加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾；用0.22pm微孔濾膜過濾；噴霧干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。實施例19、組合物小針刑的制備取組合物5g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，用0.22nm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶10ml，滅菌即可。，攪拌使其溶解；加注射用水至lOOOml，加lg針用;用0.22pm微孔濾膜過濾；冷凍干燥得無菌粉末，實施例20、組合物小針刑的制備取組合物10g，加入丙二醇30g，加200ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分攪拌30分鐘；脫炭過濾；用0.22,微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶5ml，滅菌即可。實施例21、組合物氣化禍輸液的制備取組合物lg，加入氯化鈉90g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10000ml;用0.22^1111微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。備注在本發(fā)明的圖、表中的beta均表示e;BSA均表示牛血清白蛋白；ADH均表示乙醇脫氫酶；Lysozgme均表示溶菌酶；DTT均表示二硫蘇糖醇；Min均表示分鐘；A360nm均表示波長在360納米(簡稱nm)處。權(quán)利要求1.一種用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，該組合物包括抗糖基化修飾的物質(zhì)、抗氧化作用的物質(zhì)和抗熱變性能力的物質(zhì)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的抗白內(nèi)障產(chǎn)品是用于預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究晶體蛋白變性及其相關(guān)疾病或白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的抗白內(nèi)障產(chǎn)品是包括相應(yīng)的抗白內(nèi)障的藥物、試劑或者食品中的一種或多種。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的抗白內(nèi)障產(chǎn)品是相應(yīng)的抗白內(nèi)障藥物。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的白內(nèi)障及其相關(guān)疾病包括各類白內(nèi)障疾病及其相關(guān)疾病中的一種或多種。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的白內(nèi)障及其相關(guān)疾病是老年性白內(nèi)障及其相關(guān)疾病中的一種或多種。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的白內(nèi)障及其相關(guān)疾病是皮質(zhì)性白內(nèi)障及其相關(guān)疾病中的一種或多種。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的該組合物的抗糖基化修飾的物質(zhì)、抗氧化作用的物質(zhì)和抗熱變性能力的物質(zhì)的含量范圍分別是19%60%、39%80%和0.1%2.0%。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的該組合物的抗糖基化修飾的物質(zhì)、抗氧化作用的物質(zhì)和抗熱變性能力的物質(zhì)的含量范圍分別是29%40%、59%70%和0.6%1.2%。10.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的抗糖基化修飾的物質(zhì)是包括阿司匹林、游離氨基酸、谷胱甘肽和藥物前體、吡哆醛-氨基胍、1，3-二氨基胍、甲基氨基胍或鍺132中的一種或多種。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的游離氨基酸是包括賴氨酸、谷氨酸、丙氨酸或天門冬氨酸中的一種或多種。12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的抗糖基化修飾的物質(zhì)是包括阿司匹林或賴氨酸中的一種或多種。13.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的抗氧化作用的物質(zhì)是包括?；撬帷⑺酒チ只蜻€原性谷胱甘肽中的一種或多種。14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的抗氧化作用的物質(zhì)是?；撬?。15.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的抗熱變性能力的物質(zhì)是包括二硫蘇糖醇中的一種或多種。16.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的該組合物配成溶液后是髙滲、無色透明的液體。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的該組合物配成的水溶液是高滲的藥物溶液，pH7.37.5。18.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是llmmol/Llllmmol/L阿司匹林、12mmol/L120mmol/L賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L二硫蘇糖醇。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是11mmol/L阿司匹林、12mmol/L賴氨酸、0.25mmol/L二硫蘇糖醇，或者是lllmmol/L阿司匹林、120mmol/L賴氨酸、2.5mmol/L二硫蘇糖醇。20.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是llmmol/Llllmmol/L?；撬?、23mmol/L230mmol/L賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L二硫蘇糖醇、llmmol/Llllmmol/L阿司匹林。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是11mmol/L牛磺酸、23mmol/L賴氨酸、2.5mmol/L二硫蘇糖醇、11mmol/L阿司匹林，或者是lllmmol/L?；撬帷?30mmol/L賴氨酸、2.5mmol/L二硫蘇糖醇、lllmmol/L阿司匹林。22.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是llmmol/Llllmmol/L?；撬?、12mmol/L120mmol/L賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L二硫蘇糖醇。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是11mmol/L?；撬帷?2mmol/L賴氨酸、2.5mmol/L二硫蘇糖醇，或者是lllmmol/L?；撬帷?20腿ol/L賴氨酸、0.25mmol/L二硫蘇糖醇。24.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是llmmol/Llllmmol/L牛磺酸、12mmol/L120mmol/L賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L二硫蘇糖醇、11腿ol/Llll腿ol/L谷胱甘肽。25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是11mmol/L?；撬?、12mmol/L賴氨酸、2.5mmol/L二硫蘇糖醇、lllmmol/L谷胱甘肽，或者是lllmmol/L?；撬?、120mmol/L賴氨酸、2.5mmol/L二硫蘇糖醇、lllmmol/L谷胱甘肽。26.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是llmmol/Llllmmol/L阿司匹林、12mmol/L120mmol/L賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L二硫蘇糖醇、11mmol/Llllmmol/L谷胱甘肽。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是llmmol/L阿司匹林、12mmol/L賴氨酸、0.25mmol/L二硫蘇糖醇、lllmmol/L谷胱甘肽，或者是lllmmol/L阿司匹林、120mmol/L賴氨酸、0.25mmol/L二硫蘇糖醇、llmmol/L谷胱甘肽。28.根據(jù)權(quán)利要求19任一項所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是llmmol/Llllmmol/L牛磺酸、23mmol/L230mmol/L賴氨酸、0.25mmol/L2.5mmol/L二硫蘇糖醇、11mmol/Llllmmol/L谷胱甘肽、11mmol/Llllmmol/L阿司匹林。29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，其特征在于，所述的配方是llmmol/L?；撬?、23mmol/L賴氨酸、0.25腿ol/L二硫蘇糖醇、llmmol/L谷胱甘肽、llmmol/L阿司匹林，或者是lllmmol/L牛磺酸、230mmol/L賴氨酸、2.5mmol/L二硫蘇糖醇、llmmol/L谷胱甘肽、lllmmol/L阿司匹林。全文摘要本發(fā)明涉及一種能夠用于制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物。發(fā)明人根據(jù)晶體蛋白的時相改變，發(fā)現(xiàn)了表達特殊及分布特殊的晶體蛋白βB₂隨機體老化進程的變化規(guī)律，確定其為抗白內(nèi)障的更為合適的靶蛋白，并發(fā)現(xiàn)二硫蘇糖醇是能夠有效抑制βB₂等晶體蛋白受熱變性的物質(zhì)，進而以該靶蛋白為靶點，研制出抗糖基化修飾的物質(zhì)、抗氧化作用的物質(zhì)和抗熱變性能力的物質(zhì)形成的組合物，以制備相應(yīng)的抗白內(nèi)障產(chǎn)品。白內(nèi)障疾病已成為影響中國人口生活質(zhì)量的重要致病原因，本發(fā)明研制出可制備抗白內(nèi)障產(chǎn)品的組合物，提供了一種新的藥物來源，使用上預(yù)防為主、聯(lián)合用藥、藥物外用，應(yīng)用廣泛，是預(yù)防、診斷和治療晶體蛋白變性或白內(nèi)障及其相關(guān)疾病的有效產(chǎn)品，能夠產(chǎn)生顯著的社會效益和經(jīng)濟效益。文檔編號A61K31/616GK101337071SQ200510025839公開日2009年1月7日申請日期2005年5月16日優(yōu)先權(quán)日2005年5月16日發(fā)明者劉夢蕾,軍張,李聞捷申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)