專利名稱：一種具有降糖作用的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其制備方法，具體來說，本發(fā)明涉及一種具有降糖作用的藥物組合物及其制備方法背景技術(shù)糖尿病是一組由于遺傳和環(huán)境因素相互作用，胰島素相對或絕對缺乏以及靶組織對胰島素敏感性降低(胰島素抵抗)引起的碳水化合物、脂肪及蛋白質(zhì)紊亂綜合癥，是一種持續(xù)高血糖為特征的、慢性、全身性代謝性疾病。發(fā)病后若未得到有效治療，隨著病程的延長，可出現(xiàn)廣泛的微血管及大血管病變，出現(xiàn)神經(jīng)、泌尿、循環(huán)等多系統(tǒng)的病理改變。
上世紀(jì)80年代以來，全球和我國的糖尿病患者人數(shù)顯著增加，2003年全球糖尿病病人超過1.94億。有研究者預(yù)測到2010年全世界的糖尿病患者將達(dá)2億1千萬。其潛在的最大增長人群在亞洲，約占總增長的65％以上。中國糖尿病患病率近年上升3倍以上，20歲以上人群中糖尿病患者由1980年的1.0％上升到1996年的3.2％，患病人數(shù)占全球糖尿病病人的約1/5。研制用于糖尿病防治的藥物一直是新藥開發(fā)中的熱點和難點之一。
目前，II型糖尿病的口服治療藥物包括胰島素或胰島素類似物、磺脲類藥物以及最近發(fā)展起來的通過改變ATP依賴的鉀通道促進(jìn)胰島素分泌的非磺脲類藥物、雙胍類或噻唑烷二酮類藥物。這些藥物，其有效性是非常確實的，而且也非常經(jīng)濟(jì)，但這種治療方法存在一些潛在的缺點。首先，它們可能增加發(fā)生低血糖的危險性，高胰島素血癥被認(rèn)為可能導(dǎo)致動脈粥樣硬化狀態(tài)，此類藥物的另外一個缺點是常導(dǎo)致體重增加。
目前II型糖尿病的口服治療藥物中有一種α-葡萄糖苷酶抑制劑，其作用機(jī)理是干擾飲食中碳水化合物的迅速消化和吸收從而達(dá)到減少胰島素的需要量目的。這種方式的治療方法存在一些潛在的優(yōu)勢，包括不會增加體重，在某些情況下甚至?xí)p少體重，同時不會有高胰島素血癥，而且當(dāng)單獨治療的時候，不會有低血糖的危險。
阿卡波糖(Acarbose)是第一個被用于臨床應(yīng)用α-葡萄糖苷酶抑制劑，最近發(fā)現(xiàn)的小腸刷狀緣α-葡萄糖苷酶抑制劑包括米格列醇(miglitol)、伏格列波糖(voglibose)、emiglitate等。對于我國傳統(tǒng)的中藥，在α-葡萄糖苷酶抑制劑的研究開發(fā)方面尚不多見。
本發(fā)明的目的是提供一種藥物組合物及其制備方法。本發(fā)明的目的還提供一種藥物組合物的制藥用途。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥配比為桑葉1～6重量份 葛根1重量份；優(yōu)選桑葉4重量份 葛根1重量份；桑葉3重量份 葛根1重量份；桑葉5重量份 葛根1重量份；上述本發(fā)明藥物組合物可以制成臨床可接受的任何劑型，如丸劑、散劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸、口服液體制劑。
本發(fā)明藥物組合物的制備方法為原藥材經(jīng)過粉碎后，兩藥分別或合并用水、酸水(0.01～1.0mol/L的鹽酸)、甲醇或乙醇，或含水醇類等常規(guī)提取溶劑提取；提取溶劑為原藥重量的8～30倍，可重復(fù)提取1～5次，然后濾去藥渣；濾液(分別或合并)在常壓或減壓下進(jìn)行濃縮至一定濃度，加1～4倍體積的醇，使雜質(zhì)沉淀，或用1～5mol/L的氫氧化鈉、氨水調(diào)PH值至堿性，再通過離心或過柱除去雜質(zhì)。過柱可利用大孔樹脂和陰陽離子交換樹脂進(jìn)一步純化，大孔樹脂的型號可選用D101，D3520、D201、D301等非極性的大孔樹脂；經(jīng)過上述工藝所得的提取液可以通過減壓干燥或噴霧干燥制得干粉，可加入常規(guī)敷料制成片劑、膠囊劑和顆粒劑、丸劑、散劑。
實驗例1用反轉(zhuǎn)腸囊技術(shù)評價桑葉葛根組合物對α-葡萄糖苷酶抑制劑抑制作用反轉(zhuǎn)腸囊技術(shù)可用于研究小腸酶在溫育瓶中對底物的作用。本研究的實驗?zāi)康氖峭ㄟ^此方法對DNJ及受試藥物桑葛組合物的α-葡萄糖苷酶抑制作用進(jìn)行評價。底物的準(zhǔn)備與給藥將1％的淀粉溶液加熱溶解后，按一定比例加入α-淀粉酶，混均，37℃水浴鍋中反應(yīng)10min，反應(yīng)結(jié)束后與碘液無顯色反應(yīng)，說明淀粉已經(jīng)完全被分解為寡糖。每個25ml的三角瓶中加入此溶液6ml，再加入各濃度的受試藥物備用。
腸囊的制備斷頭處死雄性大鼠，在十二指腸上端切開并取出小腸。借助不銹鋼針將小腸反轉(zhuǎn)，剪成7-8cm的小段，每段小腸的一端用手術(shù)線結(jié)扎，在另一端將1ml Krebs-Henseleit緩沖液灌入小腸后結(jié)扎，完成了此段腸囊的制備。將各腸囊置于冰冷的Krebs-Henseleit緩沖液中備用。
酶促反應(yīng)的進(jìn)行及樣品的收集提前將搖床預(yù)熱到37℃?zhèn)溆?。待所有的腸囊制備完畢，將它們隨機(jī)加到各三角瓶中，在搖床上以37℃的溫度，30轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速進(jìn)行反應(yīng)。2h后取出各三角瓶，每瓶加入10μl 1mol/L HCl終止反應(yīng)。然后從三角瓶中取出腸囊，切開腸囊并使腸囊內(nèi)的液體與三角瓶內(nèi)的液體混合，混均后收集樣品0.5ml，4℃冰箱保存。
樣品中葡萄糖的測定及結(jié)果評價在不同濃度的α-葡萄糖苷酶抑制劑存在的條件下，葡萄糖的釋放以無抑制劑時葡萄糖的百分比表示。以抑制百分率對不同抑制劑濃度作圖，得劑量反應(yīng)曲線。
用反轉(zhuǎn)腸囊技術(shù)評價α-葡萄糖苷酶抑制劑同豬小腸粘膜葡萄糖苷酶抑制模型一樣也是一種體外實驗，從實驗結(jié)果分析，桑葉葛根提取物對葡萄糖苷酶有較強(qiáng)的抑制作用，隨著SG濃度的增加，其對葡萄糖苷酶的抑制也隨之增加，其抑制曲線的R值較高，說明其相關(guān)性較好。
用反轉(zhuǎn)腸囊技術(shù)評價桑葉葛根提取物對葡萄糖苷酶的抑制作用

實驗例2桑葉葛根組合物對豬小腸粘膜葡萄糖苷酶抑制作用稱取實施例1中的桑葉葛根組合物，配成所需濃度，利用離體豬小腸粘膜葡萄糖苷酶抑制模型在體外測定對豬小腸粘膜葡萄糖苷酶的抑制。
桑葉葛根組合物豬小腸粘膜葡萄糖苷酶

從上表的結(jié)果可以分析，本發(fā)明組合物對離體豬小腸粘膜葡萄糖苷酶顯示了較強(qiáng)的抑制活性實驗例3桑葉和葛根中藥組合物(SG)中兩味藥材配比的確定桑葉和葛根降糖復(fù)方作為一種α-葡萄糖苷酶抑制劑，通過降低碳水化合物的消化和葡萄糖的吸收來抑制餐后高血糖。應(yīng)用常規(guī)的離體豬小腸粘膜葡萄糖苷酶抑制模型對兩味藥材不同配比的提取物進(jìn)行體外活性實驗，篩選出活性較高的配比。反應(yīng)體系由豬小腸粗酶、抑制劑SG提取液和底物麥芽糖組成，反應(yīng)結(jié)束后用葡萄糖試劑盒測定葡萄糖的相對量，計算抑制率。結(jié)果見以下圖表。最終確定桑葉與葛根藥材比例為4∶1。
桑葛樣品按不同比例配制

桑葛不同比例對粗酶的抑制活性

注桑葉葛根的提取方法采用水提醇沉的方法數(shù)字1-6表示復(fù)方中桑葛的配比。
實驗例4桑葉葛根組合物(SG)對正常大鼠口服淀粉耐量實驗的影響實驗動物選用180g左右的Wistar大鼠，♂，分為對照組和給藥組，每組5只。對照組每天給予1.44g/kg劑量的桑葉葛根組合物，對照組給予同樣體積的蒸餾水，連續(xù)給藥10天，禁食一夜后，第11天進(jìn)行口服淀粉耐量實驗。剪尾取血，立即測定血糖，作為空腹血糖，然后實驗大鼠同時給予受試藥(對照組給予蒸餾水)及2g/kg的淀粉溶液，以后依次在30min、60min、120min時剪尾測定血糖。實驗結(jié)果如下桑葉葛根組合物對正常大鼠淀粉耐量試驗的影響

**p＜0.01，與對照組比較，n＝5從以上結(jié)果分析對照組大鼠在給予淀粉溶液30-60min出現(xiàn)血糖峰值，而給藥組在給予淀粉后血糖峰值變得平緩，表明本發(fā)明所提取桑葉葛根組合物對正常大鼠的腸道α-葡萄糖苷酶有抑制作用。
實驗例5桑葉葛根組合物對鏈脲佐菌素致血糖升高小鼠糖耐量的影響桑葉葛根組合物，配制成80mg/ml的水溶液。小鼠受試劑量3200mg、1600mg、800mg/kg；阿卡波糖拜耳醫(yī)藥保健有限公司產(chǎn)品，批號102967，小鼠受試劑量50mg/kg。鏈脲佐菌素SIGMA公司產(chǎn)品，造模劑量150mg/kg，腹腔注射。分組與給藥小鼠隨機(jī)分為六組對照組、模型組、阿卡波糖50mg/kg組、受試藥3200mg、1600mg、800mg/kg組。各組灌胃給藥，給藥一次，造模后2周開始給藥，共給藥17次。對照組灌胃給予等量飲用水。造模方法除對照組外，各組小鼠禁食12小時后，腹腔注射鏈脲佐菌素150mg/kg，回籠飼養(yǎng)，2周后造模成功。
取禁食12小時小鼠，尾尖放血一滴，置于穩(wěn)捷血糖試紙上，用穩(wěn)捷基礎(chǔ)血糖儀測餐前血糖。灌胃給藥同時給與淀粉溶液10g/kg，給藥容積0.3ml/10g，于灌胃給藥后30，80，120min后尾尖放血，測餐后血糖。計算各給藥組曲線下面積、各時間點血糖均值、標(biāo)準(zhǔn)差，與對照組相比較，行t檢驗，比較藥效。曲線下面積＝(餐后30min血糖+餐前血糖)/2×30min+(餐后30min血糖+餐后80min血糖)/2×50min+(餐后120min血糖+餐后80min血糖)/2×40min實驗結(jié)果表明造模后小鼠基礎(chǔ)血糖明顯高于對照組，受試藥灌胃給藥17天后，小鼠基礎(chǔ)血糖值較模型組小鼠為低，其中受試藥3200mg/kg組小鼠血糖與模型組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，灌胃給予淀粉后30、80、120min，各組小鼠血糖明顯升高，但對照組、各給藥組血糖升高幅度均低于模型組，其中受試藥3200mg、1600mg/kg組小鼠各時間點血糖于模型組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01，P＜0.05)。受試藥3200mg、1600mg/kg組小鼠血糖變化曲線下面積與模型組相比亦有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。
受試藥對STZ所致糖尿病小鼠糖耐量的影響

*p＜0.05，**p＜0.01，與模型組相比。
實驗例6桑葉和葛根組合物對α-葡萄糖苷酶抑制的增效作用桑葉提取物和葛根提取物(濃度為0.1g生藥/ml)應(yīng)用豬小腸粘膜葡萄糖苷酶模型測定體外抑制葡萄糖苷酶活性實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，桑葉提取物和葛根提取物在體外均有葡萄糖苷酶抑制作用，二者按一定比例復(fù)配后這種抑制作用有明顯的增強(qiáng)。
桑葉和葛根降糖組合物作為一種α-葡萄糖苷酶抑制劑，通過降低碳水化合物的消化和葡萄糖的吸收來抑制餐后高血糖。應(yīng)用豬小腸粘膜葡萄糖苷酶模型對兩味藥材不同配比的提取物進(jìn)行體外活性實驗，篩選出活性較高的配比。反應(yīng)體系由豬小腸粗酶、抑制劑SG提取液和底物麥芽糖組成，反應(yīng)結(jié)束后用葡萄糖試劑盒測定葡萄糖的相對量，計算抑制率。結(jié)果見以下圖表。實驗結(jié)果表明桑葉提取物和葛根提取物以1-6∶1比例混合時豬小腸粘膜葡萄糖苷酶均有抑制作用，以4∶1比例混合時對豬小腸粘膜葡萄糖苷酶的抑制活性最高。
桑葛不同比例三組樣品對粗酶的抑制活性

注桑葉葛根的提取方法采用水提醇沉的方法數(shù)字1-6表示復(fù)方中桑葛的配比。


圖1桑葉葛根組合物對α-葡萄糖苷酶抑制劑抑制作用曲線2桑葉葛根組合物對正常大鼠淀粉耐量試驗的影響曲線3小鼠血糖變化曲線圖實施例1桑葉12公斤，葛根3公斤，一提加水225L，微沸狀態(tài)保持2小時，過濾，二提濾渣再加200L水，微沸狀態(tài)保持1小時，過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮，至濃縮液的體積為50L，以上濃縮液加入95％乙醇100L，邊加入邊攪拌，置冷庫(5-10℃)醇沉48小時，離心取上清液，減壓濃縮揮去乙醇得到體積為5.5L的濃縮液。噴霧干燥得到提取物1.1公斤，出膏率為7％。制成片劑。
實施例2桑葉15公斤，一提加水300L，微沸狀態(tài)保持2小時，過濾，二提濾渣再加200L水，微沸狀態(tài)保持1小時，過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮，至濃縮液的體積為50L，過001×7陽離子交換樹脂，用0.5N的氨水洗脫，收集洗脫液，濃縮；過大孔樹脂和離子交換樹脂進(jìn)一步純化；減壓濃縮揮去乙醇得到濃縮液；葛根3公斤，一提30％乙醇30L，回流提取2小時，過濾，二提濾渣再加30％乙醇30L，回流提取1小時，過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮，濃縮液上D101大孔樹脂，用50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮揮去乙醇得到濃縮液；合并兩次濃縮液，噴霧干燥得到本發(fā)明組合物，將噴霧干燥得到的桑葉葛根提取物加入木糖醇或麥芽糖醇、甜葉菊素，干法制粒，經(jīng)過整粒后，制成各種規(guī)格的顆粒劑。
實施例3桑葉12公斤，一提加0.05mol/l的鹽酸225L冷浸2小時，過濾，二提加0.05mol/l的鹽酸180L冷浸1.5小時，合并兩次濾液，用0.2mol/l的氫氧化鈉調(diào)PH值至9，放置過夜，離心收集沉淀，烘干，粉碎得桑葉提取物；葛根3公斤，一提30％乙醇30L，回流提取2小時，過濾，二提濾渣再加30％乙醇30L，回流提取1小時，過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮，濃縮液上D101大孔樹脂，用50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮揮去乙醇得到濃縮液，噴霧干燥，得葛根提取物；合并兩種提取物，將桑葉葛根提取物干壓后制粒成形，直接填裝膠囊，分將在密閉鋁塑包裝中，制成各種規(guī)格的膠囊劑。
實施例4桑葉葛根中藥復(fù)方中指標(biāo)成分的高效液相色譜法(HPLC)精密稱取實施例1的桑葉葛根提取物50mg，置10ml具塞離心管中，精密加入重蒸水10ml，稱定重量，超聲使其溶解，放冷，再稱定重量，用重蒸水補(bǔ)足減少的重量，搖勻，精密量取0.1ml置15ml具塞離心管中，以下的步驟按對照品溶液制備進(jìn)行操作；分別精密吸取對照品與供試品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀進(jìn)行含量測定。測定結(jié)果表明中試放大的桑葉葛根提取物樣品中DNJ的含量為3.52mg/g，另一指標(biāo)成分葛根素的HPLC測定按2002版藥典的方法進(jìn)行，其含量為48.4mg/g。
實施例5桑葉12公斤，葛根4公斤，一提加水225L，微沸狀態(tài)保持2小時，過濾，二提濾渣再加200L水，微沸狀態(tài)保持1小時，過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮，至濃縮液的體積為50L，以上濃縮液加入95％乙醇100L，邊加入邊攪拌，置室溫20-25℃醇沉48小時，離心取上清液，減壓濃縮揮去乙醇得到體積為5.5L的濃縮液。噴霧干燥得到提取物1.1公斤，出膏率為7％。將桑葉葛根提取物干壓后制粒成形，直接填裝膠囊，分將在密閉鋁塑包裝中，制成各種規(guī)格的膠囊劑。
權(quán)利要求
1.一種具有降糖作用的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥制成的桑 葉1～6重量份葛 根1重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥制成的桑 葉4重量份 葛 根1重量份。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥制成的桑 葉3重量份 葛 根1重量份。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥制成的桑 葉5重量份 葛 根1重量份。
5.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為原藥材經(jīng)過粉碎后，兩藥分別或合并用水、0.01～1.0mol/L的鹽酸、甲醇或乙醇，或含水醇類等常規(guī)提取溶劑提取；提取溶劑為原藥重量的8～30倍，可重復(fù)提取1～5次，然后濾去藥渣；濾液(分別或合并)在常壓或減壓下進(jìn)行濃縮至一定濃度，可加1～4倍體積的醇，使雜質(zhì)沉淀或用1～5mol/L的氫氧化鈉、氨水調(diào)PH值至堿性，再通過離心或過柱除去雜質(zhì)；過柱可利用大孔樹脂和陰陽離子交換樹脂進(jìn)一步純化，大孔樹脂的型號可選用D101，D3520、D201、D301等非極性的大孔樹脂；經(jīng)過上述工藝所得的提取液可以通過減壓干燥或噴霧干燥制得干粉，可加入常規(guī)敷料制成片劑、膠囊劑和顆粒劑。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為桑葉和葛根，一提加水225L，微沸狀態(tài)保持2小時，過濾，二提濾渣再加200L水，微沸狀態(tài)保持1小時，過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮，至濃縮液的體積為50L，以上濃縮液加入95％乙醇100L，邊加入邊攪拌，醇沉48小時，離心取上清液，減壓濃縮揮去乙醇得到體積為5.5L的濃縮液；噴霧干燥得到提取物，制成片劑、膠囊劑和顆粒劑。
7.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于治療糖尿病是指抑制α-葡萄糖苷酶。
全文摘要
本發(fā)明公開一種具有降糖作用的藥物組合物，該藥物組合物是由如下原料藥制成的桑葉1～6重量份、葛根1重量份。該藥物組合物用于治療糖尿病，具有抑制α－葡萄糖苷酶的作用。
文檔編號A61K9/20GK1813910SQ200510007230
公開日2006年8月9日 申請日期2005年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月5日
發(fā)明者段震文, 郭樹仁, 何大林 申請人:北京北大維信生物科技有限公司