專利名稱：Pi－3激酶抑制劑前藥的制作方法
背景技術(shù)：
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及PI-激酶抑制劑和使用這些前藥的方法。
2.現(xiàn)有技術(shù)描述PI-3激酶是脂質(zhì)激酶的大家族，激酶在D3位置磷酸化磷脂酰肌醇以產(chǎn)生重要第二信使，磷脂酰肌醇3’-磷酸酯。PI-3激酶家族的成員根據(jù)序列同源性和酶催化形成的產(chǎn)物分成3個種類。I類PI-3激酶由2個亞單元組成110kd催化亞單元和85kd調(diào)節(jié)亞單元。I類PI-3激酶包含在細胞因子、整合蛋白、生長因子和免疫受體的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)事件下游，這建議了該途徑的控制將導(dǎo)致重要的治療效果。
I類PI-3激酶的抑制引起細胞凋亡，在體內(nèi)阻斷腫瘤引起的血管生成，增加某些腫瘤的放射敏感度。LY294002(2-(4-嗎啉基)-8-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮)(化合物1)是已知的I類PI-3激酶的特異抑制劑，已顯示具有抗癌性質(zhì)。
(化合物1)然而，LY294002的抗癌應(yīng)用由于其缺乏水溶性和其差的藥物動力學嚴重受到限制，此外，LY294002沒有組織特異性，已顯示在動物中迅速代謝。由于這些因素，LY294002將需要以頻繁的頻率給藥，因此同時抑制正常細胞中的PI-3激酶的效力，從而導(dǎo)致不需要的副作用。
因此繼續(xù)需要具有改善的藥物動力學和藥效學性質(zhì)的I類PI-3激酶抑制劑。本發(fā)明滿足了這些需求，并提供其它相關(guān)優(yōu)點。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及含有季銨氮的前化合物，其中季銨氮的一個鍵是可水解的，在所述鍵水解后得到下式化合物 其中，R1和R2分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、羥基、鹵素、烷氧基、雜環(huán)、氰基、氨基，或連接在一起形成任選取代的環(huán)脂族基團或任選取代的芳基；R3表示H、任選取代的脂族基團和任選取代的芳基；和R4和R5分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、雜環(huán)、芳氧基、羧基或連接在一起形成任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基。
前化合物可以是下式 其中環(huán)A是苯并；Z1和Z2分別是S或O；R1和R2分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、羥基、鹵素、烷氧基、雜環(huán)、氰基、氨基，或連接在一起形成任選取代的環(huán)脂族基團或任選取代的芳基；R3表示H、任選取代的脂族基團和任選取代的芳基；和
R4和R5分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、雜環(huán)、芳氧基、羧基或連接在一起形成任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基；R6表示H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、烷氧基、羧基、氨基、雜環(huán)、芳氧基，并且被靶向藥物任選取代；和L表示連接基團。
靶向藥物可以是維生素、肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)體、骨搜尋試劑或軟骨搜尋試劑。
本發(fā)明還涉及下式的中間體化合物 其中X表示鹵素基團，優(yōu)選Cl或I；Y表示-CH2-、CH(CH3)-、-CH(Ph)-、-C(CH3)(COOH)-或CH(CH(CH3)2)-；Z1和Z2分別是S或O；和n是0-1。
本發(fā)明還涉及前化合物治療與PI-3激酶活性有關(guān)的癥狀、炎性疾病、與年齡有關(guān)的黃斑變性、與變異PTEN有關(guān)的癥狀、高血壓、胰腺炎、潰瘍、分裂白細胞功能的癌癥、誘導(dǎo)細胞凋亡、提高腫瘤細胞的化學敏感性、提高腫瘤細胞的放射敏感性、抑制腫瘤誘導(dǎo)的血管生成、抑制與非癌癥有關(guān)的血管生成過程、改善斯滕特固定膜性質(zhì)、在患者全細胞中抑制磷脂酰肌醇的用途，其包括向需要的患者給藥有效量的含有本發(fā)明前化合物的組合物。前化合物可通過緩慢IV輸液向患者給藥。
本發(fā)明還涉及抑制起源細胞分化的方法，其包括使起源細胞與有效量的含有本發(fā)明的前化合物的組合物接觸。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的前化合物的純化方法，其包括將前化合物加入含有至少0.1％(v/v)酸的溶液中，含有前化合物的溶液被色譜分離，優(yōu)選通過HPLC以分離前化合物。
附圖的簡要說明附

圖1顯示EDTMP、DOTMP、ABDTMP、BAD、MTX-BP和CF-BP的化學結(jié)構(gòu)。
附圖2顯示有效骨靶向藥物的化學結(jié)構(gòu)。
附圖3顯示用于改性骨靶向藥物中的膦酸酯的化學反應(yīng)。
附圖4顯示烷基化反應(yīng)以改性骨靶向藥物中的膦酸酯。
附圖5顯示用于改性EDTMP和DOTMP的原理。
附圖6顯示通過LY294002在J774細胞中的噬菌細胞的抑制。柱顯示噬菌細胞系數(shù)或?qū)κ删毎憫?yīng)呈陽性的細胞百分數(shù)。噬菌細胞系數(shù)是在每100 J774細胞中發(fā)現(xiàn)的sRBC′s(羊血紅細胞)的數(shù)量，噬菌細胞％是吞噬至少1個sRBC的J774細胞％。誤差條表示平均值的標準背離。
附圖7顯示化合物1126(A036-33)的UV和ELS色譜。
附圖8顯示化合物1126(A036-33)的正質(zhì)譜。
附圖9顯示Avβ3靶向PI3激酶抑制劑廢除在Matrigel上EDC-CBF1內(nèi)皮細胞的管形成。
詳細描述在公開和描述本發(fā)明的化合物、產(chǎn)物和組合物和方法之前，應(yīng)理解用于本文的術(shù)語僅用于描述特定實施方案，并不構(gòu)成限制。必須注意，在用于說明書和所附的權(quán)利要求時，單數(shù)形式“a”、“an”和“the”包括復(fù)數(shù)指示物，除非上下文另外清楚地指示。
在整個說明書中，在引用出版物時，這些出版物公開的內(nèi)容引入本申請作為參考以更充分描述本發(fā)明涉及的現(xiàn)有技術(shù)狀況。
1.定義用于本文的術(shù)語“支鏈的”是指含有1-24骨架原子的基團，其中基團的骨架鏈含有一個或多個來自主鏈的次要支鏈。本文優(yōu)選的支鏈基團含有1-12個骨架原子。支鏈基團的實例包括，但不限于，異丁基、叔丁基、異丙基、-CH2CH2CH(CH3)CH2CH3、-CH2CH(CH2CH3)CH2CH3、-CH2CH2C(CH3)2CH3、-CH2CH2C(CH3)3等。
用于本文的術(shù)語“非支鏈的”是指含有1-24骨架原子的基團，其中基團的骨架鏈在直線上延伸。本文優(yōu)選的非支鏈基團含有1-12個骨架原子。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“環(huán)”或“環(huán)狀”是指帶有一個或多個閉合環(huán)的基團，是不飽和或飽和的，具有3-12個骨架原子，優(yōu)選3-7個骨架原子的環(huán)。
用于本文的術(shù)語“低級”是指帶有1-6個骨架原子的基團。
用于本文的術(shù)語“飽和”是指其中骨架原子的所有可獲得的價鍵連接于其它原子的基團，飽和基團的典型實例包括，但不限于，丁基、環(huán)己基、哌啶等。
用于本文的術(shù)語“不飽和”是指其中兩個相鄰骨架原子的至少一個可獲得的價鍵不連接于其它原子的基團。不飽和基團的典型實例包括，但不限于，，-CH2CH2CH＝CH2、苯基、吡咯等。
用于本文的術(shù)語“脂族基團”是指非支鏈、支鏈或環(huán)烴基，它可以取代的或未取代的，它可以是飽和或不飽和的，但不是芳香烴。術(shù)語“脂族基團”還包括含有置換烴骨架的一個或多個碳的氧、氮、硫或磷原子的脂族基團。
用于本文的術(shù)語“芳族”是指具有4n+2非定域π電子云的非支鏈、支鏈或環(huán)烴基，它可以是取代或未取代的。術(shù)語芳族還包括含有置換烴骨架一個或多個碳的氮原子的芳香基團。芳香基團的實例包括，但不限于，苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、(異)噁唑基等。
用于本文的術(shù)語“取代的”是指帶有由碳或合適雜原子除去一個或多個氫或其它原子，用其它基團置換的基團。本文優(yōu)選的取代基團是被1-5個，最優(yōu)選1-3個取代基取代的。帶有兩個取代基的原子用“二”表示，而帶有超過兩個取代基的原子用“多”表示。該取代基的典型實例包括，但不限于，脂族基團、芳族基團、烷基、烯基、炔基、芳基、烷氧基、鹵代、芳氧基、羰基、酰基、氰基、氨基、硝基、含磷酸根基團、含硫基團、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、?；被?、脒基、亞氨基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、烷基亞硫?；⑷谆?、疊氮基、雜環(huán)基、烷基諾、雜芳基、脲氨基、硫代脲氨基、馬來酰亞氨基、肟基、亞胺酸、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、二烷基氨基、芳基環(huán)烷基、芳基羰基、芳基烷基羰基、芳基環(huán)烷基羰基、芳基氧膦基、芳基烷基氧膦基、芳基環(huán)烷基氧膦基、芳基膦?；?、芳基烷基膦?；?、芳基環(huán)烷基膦?；?、芳基磺?；⒎蓟榛酋；?、芳基環(huán)烷基磺?；⑺鼈兊慕M合和取代。
用于本文的術(shù)語“未取代”是指不含有連接于它或?qū)ζ淙〈娜魏纹渌鶊F的基團。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“烷基”是指支鏈或非支鏈，飽和脂族基團。烷基的典型實例包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、辛基、癸基、十四烷基、十六烷基、二十烷基、二十四烷基等。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“烯基”是指支鏈或非支鏈的，含有至少一個可出現(xiàn)在延著鏈的任何穩(wěn)定點的碳-碳雙鍵的不飽和脂族基團。烯基的典型實例包括，但不限于，乙烯基、E-和Z-戊烯基、癸烯基等。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“炔基”是指支鏈或非支鏈的，含有至少一個可出現(xiàn)在延著鏈的任何穩(wěn)定點的碳-碳三鍵的不飽和脂族基團。烯基的典型實例包括，但不限于，乙炔基、丙炔基、炔丙基、丁炔基、己炔基、癸炔基等。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“芳基”是指取代或未取代的芳基基團，它可任選與其它芳香或非芳香環(huán)基稠合。芳基的典型實例包括，但不限于，苯基、芐基、萘基、次芐基、二甲苯基、苯乙烯、苯乙烯基、苯乙基、亞苯基、苯三基等。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“烷氧基”是指通過單環(huán)末端醚鏈鍵合的烷基、烯基或炔基。烷氧基的實例包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、2-丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、正己氧基、2-己氧基、3-己氧基、3-甲基戊氧基、氟代甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氯甲氧基、二氯甲氧基和三氯甲氧基。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“芳氧基”是指通過單環(huán)端醚鏈鍵合的芳基。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“鹵素”、“鹵化物”或“鹵代”是指氟“F”、氯“Cl”、溴“Br”、碘“I”和砹“At”。鹵代基團的典型實例包括，但不限于，氯乙酰氨基、溴乙酰氨基、碘乙酰氨基等。
結(jié)合用于本文的術(shù)語“雜”是指包括一個或多個除碳或氫外的任何無毒的原子的基團。雜基團的典型實例包括，但不限于，含有包括，但不限于氮、氧、硫和磷的雜原子的那些基團。
用于本文的術(shù)語“雜環(huán)”是指含有雜原子的環(huán)狀基團。雜環(huán)的典型實例包括，但不限于，吡啶、哌啶、嘧啶、噠嗪、哌嗪、吡咯、吡咯烷酮、吡咯烷、嗎啉、硫代嗎啉、吲哚、異吲哚、咪唑、三唑、四唑、呋喃、苯并呋喃、二苯并呋喃、噻吩、噻唑、苯并噻唑、苯并唑、苯并噻吩、喹啉、異喹啉、吖庚因(azapine)、萘并吡喃、呋喃并苯并吡喃酮等。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“羰基”或“羧基”是指含有碳-氧雙鍵的基團。含有羰基的基團的典型實例包括，但不限于，醛(即甲?；?、酮(即?；?、羧酸(即羧基)、酰胺(即酰氨基)、亞酰胺(即亞酰氨基)、酯、酐等。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“?；笔侵赣蒀H2＝C(Q)C(O)O-表示的基團，其中Q是脂族或芳族基團。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“氰基”、“氰酸鹽”或“氰化物”是指含氮雙鍵。氰基的典型實例包括，但不限于，異氰酸酯、異硫代氰酸酯等。
單獨或結(jié)合用于本文的術(shù)語“氰基”是指含有骨架氮原子的基團，氨基的典型實例包括，但不限于烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、烷基芳基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；?、酰脲基等。
用于本文的術(shù)語“含磷酸根基團”是指含有至少一個氧化狀態(tài)的磷原子的基團。典型實例包括，但不限于，膦酸、次膦酸、磷酸酯、亞膦基、膦基、氧膦基、氧亞膦基、二氧磷基、膦酰基、正膦基、次膦基、氧磷基等。
用于本文的術(shù)語“含硫基團”是指含有硫原子的基團。典型實例包括，但不限于，巰基、氧硫基、亞磺基、亞硫?；?、磺基、磺酰基、硫代、硫氧代等。
用于本文的術(shù)語“任選”或“任選地”是指隨后描述的事件或情況會或不會發(fā)生，該描述包括其中所述事件或情況發(fā)現(xiàn)的場合和其中不發(fā)生的場合。例如短語“任選取代的烷基”是指會或不會被取代的烷基，描述同時包括未取代烷基和其中存在取代的烷基。
在用于涉及本文提供的化合物、產(chǎn)物或組合物時使用的術(shù)語“有效量”是指化合物、產(chǎn)物或組合物的足夠數(shù)量以提供所需的結(jié)果。所需的確切數(shù)量將根據(jù)使用的特定化合物、產(chǎn)物或組合物、其給藥模式等變化。因此，不總是能夠詳細說明確切的“有效量”，然而，合適的有效量可由本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員通過本文公開的內(nèi)容僅使用常規(guī)實驗確定。
用于本文的術(shù)語“合適的”是與本文提供的用于所述用途的化合物、產(chǎn)物或組合物相容的基團，用于所述用途的適宜性可由本領(lǐng)域技術(shù)人員僅使用常規(guī)實驗確定。
用于本文的術(shù)語“可水解的”是指基團是否能夠或傾向于水解(分子或基團分裂成兩個或多種新分子或基團)。
2.化合物本發(fā)明提供化合物，其斷裂季胺的一個鍵得到下式的化合物 (化合物2)其中，環(huán)A是苯并；Z1和Z2獨立地是S或O；R1和R2分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、羥基、鹵素、烷氧基、雜環(huán)、氰基、氨基，或連接在一起形成任選取代的環(huán)脂族基團或任選取代的芳基；
R3表示H、任選取代的脂族基團和任選取代的芳基；和R4和R5分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、雜環(huán)、芳氧基、羧基或連接在一起形成任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基。
優(yōu)選季胺的一個鍵斷裂得到LY294002(化合物1)。
本發(fā)明還提供下式的化合物 (化合物3)其中環(huán)A是苯并；Z1和Z2分別是S或O；R1和R2分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、羥基、鹵素、烷氧基、雜環(huán)、氰基、氨基，或連接在一起形成任選取代的環(huán)脂族基團或任選取代的芳基；R3表示H、任選取代的脂族基團和任選取代的芳基；和R4和R5分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、雜環(huán)、芳氧基、羧基或連接在一起形成任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基；R6表示H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、烷氧基、羧基、氨基、雜環(huán)、芳氧基，并且被靶向藥物任選取代；和L表示連接基團。
在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的化合物2-3是其中R1-環(huán)A-R2選自如下基團的那些化合物
和 在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的化合物2-3是其中R4-N-R5選自如下基團的那些化合物
和 在另一實施方案中，本發(fā)明的化合物2-3是其中R6選自如下基團的那些化合物
a.連接在另一實施方案中，本發(fā)明的化合物3是其中連接基團是可水解的那些化合物。前藥的連接基團可通過酶裂解或優(yōu)選通過在包括，但不限于，活體動物中的含水條件的生理條件下水解生成化合物2。在生理條件下連接基團的水解速率優(yōu)選為約1分鐘半衰期至約48小時半衰期。
b.水解用于本文的術(shù)語“可水解的”是指基團是否能夠或傾向于以約1分鐘半衰期至約48小時半衰期的速率水解(即由于水分子的凈插入，分子或基團分裂成兩個或多個新的分子或基團)。
連接基團可以是可水解或酶裂解得到化合物2的任何基團，在優(yōu)選實施方案中，連接基團是下式 其中Z3和Z4分別是S或O；和R7表示-CH2-、CH(CH3)-、-CH(Ph)-、-C(CH3)(COOH)-或CH(CH(CH3)2)-。
前藥的連接基團水解產(chǎn)生化合物2的典型實例在(方案1)中說明，其中Z3和Z4分別是O。R6酯的水解或酶裂解得到半胺醛(hemiaminal)，其裂解釋放R7醛從而產(chǎn)生含有游離叔胺的化合物2。可同時選擇R6和R7以得到轉(zhuǎn)化回游離叔胺的不同速率，例如，增加在R6或R7的取代或其組合，可增加對水解的穩(wěn)定性。除本文公開的改變R6或R7外，可改變季胺穩(wěn)定性的其它因素可在N.Bodor，Journal ofMedicinal Chemistry 1980，vol 23#5 pp 469-480“SoftDrugs.1.Labile Quaternary Ammonium Salts as SoftAntimicrobials”和G.Brouillette等；Journal ofPharmaceutical Sciences，1996，vol 85#6，pp620-623中找到，上述文獻的內(nèi)容列為本文參考文獻。
方案1化合物2 c.靶向藥物在另一實施方案中，本發(fā)明的化合物是其中R6還含有與其共價連接的一個或多個靶向藥物(T)。靶向藥物使得本發(fā)明的前藥選擇性地輸送到細胞的特殊類型、組織、器官或細胞外結(jié)構(gòu)。如上所述，使用化合物1(LY294002)治療，由于化合物是非組織特異的，具有差的生物可利用度、迅速代謝和副作用。因此，人們十分需要將藥物的位置限制于治療區(qū)域或至少防止其到達會導(dǎo)致副作用的組織，以確保使用任何特定時間有效，但不是過量的藥物數(shù)量。靶向藥物的使用使得本發(fā)明的前藥集中于治療位置而不是均勻分布于全部身體內(nèi)或過早代謝或太快排泄。一旦被輸送到治療位置，連接基團會如上所述酶裂解或水解以產(chǎn)生化合物2。此外，使用靶向藥物可限制給藥所需的劑量以達到在治療位置中藥物的有效濃度。使用靶向藥物還會引起更少的劑量或甚至不同的給藥方法的結(jié)果以在治療位置獲得藥物的有效濃度。
靶向藥物優(yōu)選經(jīng)共價鍵連接于本發(fā)明的化合物，共價鍵可通過如下方法形成，其包括，但不限于，靶向藥物的親核或親電基團與連接基團上的親電或親核(分別)基團共價反應(yīng)。
在本發(fā)明的一項實施方案中，本發(fā)明的化合物2-3是其中R6-T是選自如下基團的那些化合物
可以與本發(fā)明的前藥反應(yīng)的靶向藥物包括，但不限于，碳水化合物、維生素、肽、蛋白質(zhì)、核苷、核苷酸、核酸、脂質(zhì)體、脂質(zhì)、骨搜尋試劑和軟骨搜尋試劑。靶向藥物可以是分子，它通過受體結(jié)合于所需組織，任選通過受體傳遞過程輸送到細胞。這種靶向藥物的典型實例包括，但不限于，二氮雜，它結(jié)合于大腦的神經(jīng)膠質(zhì)細胞中存在的末梢苯并二氮雜卓類受體(PBR)。該二氮雜卓的典型實例在G.Trapani等，Bioconjugate Chem.2003，vol 14，pp830-839“Peripheral Benzodiazepine Receptor Ligand-MelphalanConjugates for Potential Selective Drug Delivery to BrainTumors”，其內(nèi)容列為本文參考文獻。
可用作靶向藥物的典型維生素包括，但不限于，葉酸酯、維生素B12或維生素C。術(shù)語“葉酸鹽”包含能夠與葉酸酯受體結(jié)合的葉酸衍生物?？捎米靼邢蛩幬锏娜~酸酯典型實例包括，但不限于，葉酸、亞葉酸、喋酰谷氨酸和葉酸酯受體結(jié)合喋啶，例如四氫喋呤、二氫葉酸酯、四氫葉酸酯和其去氮雜(deaza)和二去氮雜類似物。其它合適的葉酸酯是葉酸酯類似物，包括，但不限于，氨基喋呤、氨甲喋呤(甲氨喋呤)、N10-甲基葉酸酯、2-去氨基-羥基葉酸酯、去氮雜類似物，例如1-去氮雜甲氨喋呤或3-去氮雜甲氨喋呤和3’5’-二氯-4-氨基-4-脫氧-N10-甲基喋酰谷氨酸(二氯甲氨喋呤)。適用于共價連接本發(fā)明化合物的結(jié)合分子與葉酸酯的方法在US 6,576,239、5,820,847、5,688,488、5,108,921、5,635,382和5,416,016中披露，其內(nèi)容列為本文參考文獻。適用于共價連接本發(fā)明化合物的結(jié)合分子與維生素C的方法在S.Manfrdini J.Med.Chem.Vol 45，pp559-562，2002中披露，其內(nèi)容列為本文參考文獻。
可用作靶向藥物的典型肽和肽模擬物包括，但不限于，選自RGDs、c(RGDfK)、玻璃體結(jié)合蛋白、纖維結(jié)合素、生長激素抑制素受體激動劑和生長激素受體拮抗劑的含RGD肽。結(jié)合avb3整合素受體并用作拮抗劑的分子可如US6,552,079、6,426,353B、WO 2002/40505A2和US公開2002/0055499、2002/0061885、2002/0065291、2002/0072500、2002/0072518和W.Arap等，Science vol 279，number 16，1998，pp 377-380、RJ Kok等，Biojonjugate Chem.2002，vol13，pp128-135、DA Sipkins等Nature Medicine vol 4，number5，1998 pp623-626、PM Winter等Cancer Research 2003，vol 63，pp5838-5843和JD Hood等Science vol 296，pp2404-2407中所述用作靶向藥物，上述文獻的內(nèi)容列為本文參考文獻?？捎米靼邢蛩幬锏牡湫偷鞍踪|(zhì)包括，但不限于，抗體或其片段，例如腫瘤特異單克隆抗體或其片段?？捎米靼邢蛩幬锏牡湫凸撬褜ぴ噭┌?，但不限于，膦酸酯、膦酸、氨基甲基膦酸、磷酸酯、多磷酸酯和羥基磷灰石結(jié)合多肽。其它肽包括氯毒素(SU6,429,187B1)和組織因子(G.M.Lanza等“Targeted Antiproliferative Drug Delivery to VascularSmooth Muscle Cells with a Magnetic Resonance ImagingNanoparticle Contrast Agent”；Circulation，2002 volume 106pp2842-2847)。
其它合適的靶向藥物包括抗體?？贵w可分類成IgG、IgM、IgA、IgD或IgE或其片段或衍生物，包括Fab、F(ab’)2、Fd和單鏈抗體、diabodies、特異抗體、雙功能抗體和其衍生物?？贵w可以是單克隆抗體、多克隆抗體、親和純化抗體或它們的混合物，其顯示對所需抗原決定部位或其產(chǎn)生的序列充分的結(jié)合特異性。抗體還可以是嵌合抗體，抗體會定向于各種抗原決定子，包括與腫瘤、組織相容性和其它細胞表面抗原、細菌、真菌、病毒、酶、毒素、藥物和生物學活性分子相關(guān)的物質(zhì)。與腫瘤有關(guān)的，抗體可特異反應(yīng)的抗原包括，但不限于，該抗原是并包括，但不限于，癌胚抗原(CEA)、粘源素，例如TAG-72、人體乳脂球抗原、前列腺血清抗原(PSA)、前列腺特異膜抗原(PSMA)、PS(磷脂酰絲氨酸)和受體，包括，但不限于，IL-2、EGF、VEGF和鐵傳遞蛋白受體。其它與腫瘤有關(guān)的典型抗原包括，但不限于，與在Zalcberg and McKenzie，J.Clin.Oncology，Vol.3；pp.876-82(1985)、WO 01/68709A1和US公開2004/0009122A1中描述的抗原有關(guān)的腫瘤，上述文獻內(nèi)容列為本文參考文獻。
其中合適的靶向藥物包括葡萄糖、半乳糖、甘露糖、甘露糖6-磷酸酯、荷爾蒙(例如胰島素、生長激素等)、生長因子或細胞因子(例如TGFβ、EGF、胰島素類生長因子等)、YEE(GalNAcAH)sub.3或衍生物、鈷胺素、α-2巨球蛋白、無唾液酸糖蛋白、白蛋白、texaphyrin、metallotexaphyrin、抗體片段(例如Fab)、單鏈抗體可變區(qū)域(scFv)、鐵傳遞蛋白、任何維生素和任何輔酶。
靶向藥物還可以是向骨骼輸送前藥的試劑。骨靶向藥物包括，但不限于，EDTMP DOTMP和ABEDTMP，它們在US4,937,333、4,882,142、5,064,633和WO-94/00143中披露，其內(nèi)容列為本文參考文獻。DOTMP和EDTMP可通過任何方法，包括，但不限于，附圖3中所示的偶合化學和附圖4中所示的烷基化化學連接于連接部分，其中R基團可帶有與連接部分的親核或親電(分別)基團反應(yīng)的合適親電或親核基團。偶合化學的其它詳細資料在Tetrahedron 1999，55，pp12997-13010中提供，其內(nèi)容引入本文作為參考。烷基化化學的其它詳細資料在Proc.SPIE-Int.Soc.Opt.Eng.1999，3600(Biomedical Imagn.Reporters Dyes & Instrumental，pp99-106、US 5,177,054、JMed.Chem.1994，37，498-511、Tetrahedron Letters，1989，30#51pp7141-7144；和US5,955,453中提供，其內(nèi)容列為本文參考文獻。
靶向藥物可用作向骨骼輸送前藥作為本發(fā)明化合物緩慢釋放貯存位置。靶向藥物可以是經(jīng)連接于季胺的酸斷裂連接基團連接于本發(fā)明化合物的骨搜尋(促骨的)部分。酸斷裂連接基團的實例包括，但不限于，原酸-酰胺連接基團。在酸性條件下，蛋白質(zhì)-ACL-3酰胺連接基團容易斷裂釋放酰胺官能團的天然氨基，如WO-94/00143中所述，其內(nèi)容列為本文參考文獻。在包含在酸性傳遞的機理中的破骨細胞骨吸收過程中，限制前藥與骨的連接會斷裂以釋放本發(fā)明的化合物。
用于向骨骼輸送前藥的靶向藥物可以是結(jié)合切口受體的分子。切口信號在各種造血譜系的展開和分化中起關(guān)鍵作用。如Jundt等，Blood，102(11)928a(2003)中所討論，配位體誘導(dǎo)的切口信號是用于多骨髓瘤細胞的新生長因子，認為這些相互反應(yīng)有助于多骨髓瘤的體內(nèi)淋巴瘤形成(lymphomagenesis)。
骨靶向藥物會對羥基磷灰石(骨骼的主要成分)中的鈣具有高親和力，本發(fā)明的化合物可定位于在除骨之外的身體區(qū)域中的鈣沉積，例如在動脈、心臟、腎或膽囊中的鈣沉積。然而骨靶向藥物理想地選擇性地結(jié)合骨組織。本發(fā)明的骨靶向藥物被患者的骨組織吸引，優(yōu)選結(jié)合于具有比非骨組織較高親和力的骨骼上，保持結(jié)合一定時間長度，從而向骨環(huán)境輸送組合物。換句話說，骨靶向藥物優(yōu)選用與對于于非骨組織的骨靶向藥物相比至少大2倍的親和力(例如親和力大至少3倍，至少5倍，至少10倍或至少25倍)結(jié)合于骨組織。骨靶向藥物可逆地結(jié)合骨組織，這意味著骨靶向藥物最終由骨骼釋放，排出體內(nèi)。
骨靶向藥物可保持結(jié)合于骨組織足夠的時間以使得季銨化前藥被水解，從而將活性藥物輸送到目標細胞(例如骨髓細胞)。骨靶向藥物可保持結(jié)合于骨骼約1天(例如約2天，約3天或約7天)至約1年(例如約330天，約365天或約400天)，隨后骨靶向藥物被排出體外。骨靶向藥物可保持結(jié)合于骨骼約7天(例如約7天，約14天或約21天)至約6個月(例如約90天，約120天或約150天)。例如，骨靶向前藥可保持結(jié)合于骨骼30天，期間釋放藥物。在約45天后，骨靶向藥物將由骨骼脫落，最終排泄。因此用于本發(fā)明的骨靶向藥物可基于對骨骼組織的結(jié)合動力學篩選，候選的骨靶向藥物可通過在例如多孔板上體外測定對骨骼組織(例如羥基磷灰石)的親和力確定。候選骨靶向藥物還可通過評定候選骨靶向藥物由身體排泄的速率和時間在體內(nèi)篩選。在這方面，骨靶向藥物優(yōu)選經(jīng)腎由身體排出。
需要的骨靶向藥物選自磷酸酯、膦酸酯、二膦酸酯、羥基二膦酸氫酯、氨基亞甲基膦酸和酸性縮氨酸。本發(fā)明的骨靶向藥物可攜帶一個、超過一個或這些基團的混合物。例如骨靶向藥物可以是膦酸酯，這意味著骨靶向藥物可含有一個膦酸酯、兩個膦酸酯、或三個或更多膦酸酯。用于本發(fā)明的一種合適骨靶向藥物是EDTMP(乙二胺-N，N，N’，N’-四(亞甲基膦酸)，其化學結(jié)構(gòu)在附圖1中顯示，目前FDA認可(QuadrametTM)為放射性153Sm配合物，用于向骨轉(zhuǎn)移瘤輸送選擇性放射劑量用于減輕疼痛。EDTMP是膦酸酯，其含有四個膦酸基團，因此是四膦酸酯?；衔?，例如153Sm-EDTMP選擇性定位于骨骼中腫瘤以相對于正常骨骼超過10∶1的比率存在的地方，可能是因為在metastatic區(qū)域中鈣代謝流通量非常高。據(jù)報道，153Sm-EDTMP被造骨細胞骨轉(zhuǎn)移瘤中迅速被骨骼吸收，由血漿清除。據(jù)報道，未堆積在骨骼中的化合物部分被迅速排泄，在給藥后6小時內(nèi)排泄幾乎完成(Jimonet et al.，Heterocycles，36，2745(1993))。疼痛減輕被認為是由于來自同位素的放射物結(jié)合于造骨細胞骨轉(zhuǎn)移瘤，對周圍轉(zhuǎn)移瘤腫瘤細胞有某些效果。另一臨床有用的骨靶向體系是DOTMP(其化學結(jié)構(gòu)在附圖1中顯示，目前在III期臨床試驗(稱為STR，骨骼靶向放射)，作為放射性156Ho配合物，用于選擇性地向骨髓輸送大劑量放射物，用于治療多發(fā)性骨髓瘤。應(yīng)注意放射性166Ho-DOTMP配合物定位在骨骼體系中，照射周圍包括惡性骨髓瘤細胞的骨髓。與153Sm-EDTMP一樣，未定位于骨骼的膦酸酯通過尿清除，排出體外。通常骨骼吸收為約20-約50％的注射劑量，帶有腫瘤滲透的在骨骼區(qū)域中的定位由Bayouth等，J.Nucl.Med.，36，730(1995)的附圖7說明。
骨靶向藥物優(yōu)選是多膦酸，多膦酸已被證實成功地將生物活性分子靶向定位于骨骼組織。例如多氨基膦酸，例如ABDTMP(其化學結(jié)構(gòu)如附圖1中所示)與生長因子(以模擬骨形成)的結(jié)合成功地導(dǎo)致生長因子向大鼠骨骼的靶向定位(參見例如國際專利申請WO 94/00145)。同樣，骨靶向藥物偶合于蛋白質(zhì)，例如結(jié)合于人血清白蛋白的二膦酸酯成功地在體外(Biotechnol.Prog，16，258(2000))和體內(nèi)(Biotechnol.Prog，16，1116(2000))將蛋白質(zhì)輸送到骨骼。骨搜尋試劑的利用擴展超出將蛋白質(zhì)輸送到骨骼，包括，例如小治療分子。產(chǎn)生了含有骨搜尋二膦酸酯和烷基化試劑，例如BAD(其化學結(jié)構(gòu)在附圖1中示出)的共軛物(參見例如Wingen等，J.CancerRes.Clin.Onel.，111，209(1986))。在此分子中，烷基化試劑不是特異地與其目標(DNA)相互作用，因此，不需要斷裂二膦酸酯(即骨搜尋試劑)和烷基化部分。使用BAD在大鼠骨肉瘤模型中二膦酸酯-烷基化試劑顯示效力。另一系列的研究用共價連接于二膦酸酯的抗葉酸酯抗腫瘤藥甲氨喋呤進行，它稱為MTX-BP，在附圖1中顯示(參見例如Stutz等，Eur.J.Med.Chem.，27，825(1992)、Stutz等，Eur.J.Med.Chem.，28，899(1993)和Hosain等，J.Nucl.Med.，37，105(1996))。使用Tc-99m標記的MTX-BP，經(jīng)測定在4小時后約15％的注射劑量被定位于骨架，約61％的劑量被排泄(Hosain，上述)。在移植骨髓瘤的動物模型中，與單獨使用甲氨喋呤相比，MTX-BP還顯示超過5倍的抗癌活性(Stutz，1992，上述)。使用共軛物CF-BP，羧基熒光素基團與附加的二膦酸酯，描述了類似的工作，所述物質(zhì)的化學結(jié)構(gòu)在附圖1中顯示(Fujisaki等，Journal of Drug Targeting，4，117(1994))。在此分子中，CF基團是熒光素標記用于定量藥物動力學和生物分布，它經(jīng)酯鍵連接于骨靶向藥物，其在體內(nèi)易于水解。在靜脈注射的大鼠中的研究顯示CF-BP定位在骨骼中，用作經(jīng)過酯鍵普通水解產(chǎn)生CF的緩慢釋放機理(Fujisaki，上述)。
在另一實施方案中，骨搜尋試劑可以是肽，例如(Asp)6和(Glu)6。在骨骼和牙質(zhì)中大量存在的糖蛋白骨連接素的富酸肽序列對羥基磷灰石具有強親和力(Fujisawa等，Biochimica et Biophysica Acta，53，1292(1996))。因此，含有酸性氨基酸的肽配位體是理想的骨搜尋試劑的候選者。事實上，在連接于生物素時，(Glu)10成功地匯集標記的抗生蛋白鏈酶素到羥基磷灰石(在Chu和Orgel，Bioconjugate Chem.，8，103(1997)，和國際專利申請WO 98/35703)。此外，共軛于的(Asp)6的熒光素硫代異氰酸酯的生理半衰期中在大腿骨中是14天(Kasugai，Journal of Bone and mineral Research，15(5)，936(2000)，對用于本發(fā)明的骨靶向藥物，它是一個可接受的半衰期。同樣，輸送雌二醇-(Asp)6共軛于骨骼已在切除卵巢的動物中證實，并伴隨著骨質(zhì)疏松(osteoporectic)型骨損失的抑制(Kasugai等，Journal of Boneand Mineral Research(Suppl 1)，14，S534(1999))。人們相信約束于骨骼的(Asp)6在破骨細胞傳遞的骨再吸收過程中代謝，因此酸性肽配位體不僅提供一種化合物向骨骼匯集的手段，而且提供向骨細胞和周圍組織緩慢釋放化合物的機理。
骨靶向藥物的其它實例包括，但不限于，氨基-和羥基-烷基膦酸和二膦酸、包括阿侖特羅、氨羥二磷酸二鈉、4-氨基丁基膦酸、1-羥基乙烷-1，1-二膦酸和氨基亞甲基二膦酸的羥基二膦酸、磷酸酯，例如肌醇六磷酸、和氨基亞甲基膦酸，例如N，N-二(甲基膦酰基)-4-氨基-苯甲酸和次氮基三(甲基膦酸)。部分骨靶向藥物的非限制實例示于附圖2中。
骨靶向藥物優(yōu)選是氨基亞甲基膦酸。“氨基亞甲基膦酸”是指化合物，其含有一個-NCH2PO3H基團，其中氨基帶有與其連接的1、2或3個亞甲基膦酸基團，可進一步被其它化學基團取代。氨基亞甲基膦酸可包括一個或多個膦酸基團和一個或多個氨基。這些氨基亞甲基膦酸的實例包括，但不限于，附圖2中所示的化合物F-N。
可以預(yù)計，這些骨靶向藥物和其它骨靶向藥物可通過雜原子之一連接或化學改性產(chǎn)生附加的連接點。例如EDTMP可通過磷氧之一連接于連接基團以產(chǎn)生膦酸根連接基團，如附圖3所示(參見例如Vieira deAlmedia等，Tetrahedron，55，12997-13010(1999))。磷氧還可被烷基化，如附圖4所示，其中R基團可帶有，例如側(cè)基氨基以提供用于結(jié)扎于例如活化PEG的第二連接點?？捎糜诒景l(fā)明的其它類型的烷基化包括，但不限于，類似于包含DOTMP的實例，如在Chavez等，Biomedical ImagingReporters，Dyes，& Instumentation，Contag &Sevick-Muracia，Eds.，Proc.SPE，Vol.3600，99-106(July，1999)中詳細描述的那樣或如在例如US5,177,064、US5,955,453、de Lombaert等，J Med.Chem.，37，498-511(1994)和Iyer等，Tetrahedron Letters，30(51)，7141-7144(1989)中詳細描述的其它膦酸。非此即彼，對于化學改性，EDTMP可被例如通過接入苯胺基團改性以產(chǎn)生ABDTMP(在例如國際專利申請WO 94/00145的附圖1中詳細描述)。苯胺胺隨后可用于形成，例如酰胺鍵，DOMTP可如附圖5中所示類似地改性。
術(shù)語“膦酸酯、磷酸酯和氨基亞甲基膦酸酯是指分別包含膦酸、磷酸和氨基亞甲基膦酸以及任何鹽、可水解酯和磷基酸的前藥。在血液的生物學pH7.4或在骨骼周圍的更酸性pH下，骨靶向藥物的磷酸酯或膦酸酯的某些部分可脫質(zhì)子，用抗衡離子置換。此外，在發(fā)明中，質(zhì)子與鈣的交換對于骨靶向藥物與羥基磷灰石的結(jié)合是固有的結(jié)果，然而，制備和給藥含有骨靶向藥物的組合物可能需要或不需要其中含磷酸的完全質(zhì)子化。因此，膦酸、磷酸和氨基亞甲基膦酸被引伸，與磷酸酯、膦酸酯和氨基亞甲基膦酸酯交替使用。雖然不是特別優(yōu)選，但磷基酸的生物學可水解酯也可用于骨靶向前藥的體內(nèi)應(yīng)用。同樣，磷基酸的前藥還可在體內(nèi)使用以在例如配制和給藥過程中掩飾組合物的酸性。
靶向藥物還可以是基于特定組織的性質(zhì)靶向的試劑。該靶向藥物的典型實例包括，但不限于，聚合物，其由于EPR效果(提高的滲透性和保持力)選擇性地定位于腫瘤組織，如H.Maeda等“Tumor vascularpermeability and the EPR effect in macromoleculartherapeuticsA Review”；Journal of Controlled Release，2000vol 63，pp 271-284中所述，其內(nèi)容列為本文參考文獻。其它典型聚合物是N-(2-羥基丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)和(聚)L-谷氨酸。
靶向藥物還可含有RGD部分，如Curnis等，Cancer Research，64(2)565-571(2004)中所討論，RGD部分通過與細胞粘連受體，包括αvβ3整合素相互作用靶向RGD融合蛋白質(zhì)至脈管系統(tǒng)。
3.合成a.主環(huán)系本發(fā)明的化合物可使用LY294002(化合物1)作為起始產(chǎn)物合成，LY294002(化合物1)可以是商業(yè)上獲得的或如實施例1所述或如US5,703,075所述合成，其內(nèi)容列為本文參考文獻。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員也可使用化合物2作為起始產(chǎn)物合成本發(fā)明的化合物。
b.主環(huán)系衍生物的制備化合物2和3的主環(huán)系可以是LY294002(化合物1)的主環(huán)系衍生物，化合物3的主環(huán)系衍生物可如US5,703,075所述用于制備LY294002(化合物1)主環(huán)系的方法制備，其內(nèi)容列為本文參考文獻?；衔?的主環(huán)系的衍生物還可使用商業(yè)可獲得的化合物，包括，但不限于取代的2-羥基苯乙酮制備。
c.嗎啉環(huán)衍生物的制備化合物的胺衍生物可在實施例1通過在從室溫至強制條件(過量親核試劑和加熱到110℃)的條件下中置換硫代烷基制備。任何伯或仲含氮親核試劑可反應(yīng)得到選擇性的胺取代以得到嗎啉環(huán)結(jié)構(gòu)(包括不同的嗎啉類似物)。該化合物3的胺衍生物的典型實例的合成在本文實施例中描述。
d.酯的制備如上所述，酯可用于形成本發(fā)明的季銨化化合物。本發(fā)明的季銨化化合物優(yōu)選用鹵代酯形成，在一優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的季銨化化合物使用氯甲基酯形成。用于制備本發(fā)明的化合物的許多氯甲基酯是由商業(yè)來源得到的。此外，氯甲基酯可如WO 02/42265、WO 94/23724和US4,444,686、4,264,765和4,342,768中所述合成，其內(nèi)容列為本文參考文獻。
e.季銨化本發(fā)明的前藥可通過用鹵代甲基酯季銨化化合物1或化合物2的叔胺制備，如實施例4和實施例6中所述。季銨化的胺化合物在溫和條件下通常是不可逆的，然而，如上所述，本發(fā)明的季銨化合物是易于水解的。可用于季銨化化合物1或化合物2的叔胺的鹵代甲基酯是商業(yè)上獲得的或可如以下實施例所述制備。
f.連接基團本發(fā)明的前藥還可通過用含有至少兩個官能團的連接基團季銨化化合物1或化合物2的叔胺制備。連接基團可以是任何天然或合成的連接基團，它們能夠季銨化叔胺，還能夠共價連接于靶向分子或可以已經(jīng)連接于靶向分子。
連接基團優(yōu)選由原子，例如氮或硫、單元，例如-NH-、-CH2-、-C(O)-、-C(O)NH-或原子鏈組成。連接基團的分子量通常為約14-200，優(yōu)選14-96，長度為至多6個原子。連接基團的典型實例包括，但不限于，飽和或不飽和脂族基團，其任選被取代，其中鏈的一個或兩個飽和碳任選被-C(O)-、-C(O)C(O)-、-CONH-、-CONHNH-、-C(O)O-、-OC(O)-、-NHCO2-、-O-、-NHCONH-、-OC(O)NH-、-NHNH-、-NHCO-、-S-、-SO-、-SO2-、-NH-、-SO2NH-或-NHSO2-取代。
連接基團的第一官能團用于如上所述季銨化叔胺，優(yōu)選的第一官能團是鹵代甲基酯，包括，但不限于，氯甲基酯和碘甲基酯。連接基團的第二官能團可用于共價連接于靶向藥物。
第二官能團可以是親電子基團或親核基團，優(yōu)選的用于共價連接靶向第二官能團是硫代異氰酸酯、鹵代乙酰胺、馬來酰亞胺、亞酰氨基酯、硫代苯鄰二甲酰亞胺、N-羥基琥珀酰亞氨基酯、吡啶基二硫化物、苯基疊氮化物、羧基(和其酰氯)、氨基、酰基hydrozide、氨基脲、硫代氨基脲、重鹽、肼、疊氮化物、氨基烷基脲、氨基烷基硫脲、鹵代三嗪和間(二羥基硼烷基)苯基硫脲。其它可適用于共價連接本發(fā)明的前藥和靶向藥物的合適的反應(yīng)基團包括二硫化物、氮烯、磺酰胺、碳化二亞胺、磺酰氯、benzimidates、-COCH3和-SO3H。
合適的第二官能團將取決于將與其形成共價鍵合的靶向藥物的官能團和由于形成一定類型的連接的結(jié)果損失生物活性的敏感性。如果靶向藥物是蛋白質(zhì)，第二官能團可以與構(gòu)成多肽骨架的氨基酸側(cè)鏈基團反應(yīng)。該側(cè)鏈基團包括天冬氨酸和谷氨酸殘基的羧基、賴氨酸殘基的氨基、酪氨酸和組氨酸的芳香基團和半胱氨酸殘基的巰基。
靶向藥物，例如多肽骨架存在的羧基側(cè)鏈可與胺第二官能團通過溶解的碳化二亞胺反應(yīng)反應(yīng)。靶向藥物存在的氨基側(cè)鏈可與硫代異氰酸酯、異氰酸酯或鹵代三嗪第二官能團反應(yīng)以實現(xiàn)與本發(fā)明的前藥的連接。或者，靶向藥物上的氨基側(cè)鏈基團可通過雙官能團試劑，例如二醛和亞氨基酯連接于帶有胺活性基團的本發(fā)明的前藥。靶向藥物中存在的芳香基團可經(jīng)重鹽衍生物偶合于本發(fā)明的前藥。靶向藥物分子上的巰基可與馬來酰亞胺或鹵代烷基靶向藥物反應(yīng)基團，例如碘乙酰胺反應(yīng)。適合于該反應(yīng)的游離巰基可由蛋白質(zhì)免疫球蛋白的二硫化物鍵產(chǎn)生或通過化學衍生引入。連接于在免疫球蛋白內(nèi)重鏈區(qū)域中產(chǎn)生的游離巰基不干擾免疫球蛋白的抗原結(jié)合位，但會使得抗體不能夠活化補體。
當靶向藥物是糖基化蛋白質(zhì)時，經(jīng)多肽骨架形成與本發(fā)明的化合物連接的其它方法是根據(jù)例如McKearn等EPO 88,695的方法與糖蛋白的碳水化合物側(cè)鏈形成共價連接。因此，抗體的碳水化合物側(cè)鏈可選擇性地氧化以產(chǎn)生醛，它隨后與胺活性基團反應(yīng)形成Schiff堿或與肼、氨基脲或硫代氨基脲活性基團反應(yīng)得到相應(yīng)的腙、縮氨基脲或硫代縮氨基脲連接基團。這些相同的方法還可用于將本發(fā)明的前藥連接于非蛋白質(zhì)靶向藥物，例如碳水化合物或多糖。
用于連接碳水化合物和多糖，不需要在先的氧化過程的另一種靶向藥物活性基團是二羥基硼烷基，例如存在于間(二羥基硼烷基)苯基硫脲衍生物中。該基團與含有1，2-順-二醇的靶向藥物反應(yīng)，形成5元環(huán)硼酸酯，從而以含有該基團的碳水化合物、多糖和球蛋白使用。二羥基硼烷基衍生物還可用于連接本發(fā)明的前藥與核糖核苷、核苷酸和核糖核酸，因為核糖在2’，3’位置含有1，2-順-二醇基團，如Rosenberg等，Biochemistry，11，3623-28(1972)中所述。脫氧核糖核苷酸和DNA靶向藥物由于不存在3’羥基，不能以此方式連接于本發(fā)明的前藥。然而，后者靶向藥物可通過如Engelhardt等，EPO 97,373中所述首先形成脫氧核糖核苷酸的烯丙基胺衍生物共軛于前藥的硫代異氰酸酯衍生物。
當與本發(fā)明的前藥連接的靶向藥物是完整細胞時，可使用多肽活性或碳水化合物活性基團。Hwang and Wase，Biochim.Biophys.Acta，512，54-71(1978)公開了使用Sundberg等，J.Med.Chem.，17，1304(1974)的雙官能團EDTA螯合劑的重鹽衍生物，用銦-111標記紅血球和血小板。二羥基硼烷基與各種細菌、病毒和微生物反應(yīng)，參見Zittle，Advan.Enzym.，12493(1951)和Burnett等，Biochem.Biophys.Res.Comm.，96，157-62(1980)。
可用于共價季銨化化合物1或化合物2的優(yōu)選連接基團是下式化合物
(化合物4)其中X表示鹵代基團；Y表示-CH2-、CH(CH3)-、-CH(Ph)-、-C(CH3)(COOH)-或CH(CH(CH3)2)-；Z1和Z2分別是S或O；和n是0-4。
在一實施方案中，本發(fā)明的化合物4是那些化合物，其中X表示Cl或I；Y表示-CH2-、CH(CH3)-、-CH(Ph)-、-C(CH3)(COOH)-或CH(CH(CH3)2)-；Z1和Z2分別是S或O；和n是0。
在另一實施方案中，本發(fā)明的化合物4是那些化合物，其中X表示Cl或I；Y表示-CH2-、CH(CH3)-、-CH(Ph)-、-C(CH3)(COOH)-或CH(CH(CH3)2)-；Z1和Z2分別是S或O；和n是1。
化合物4提供同時帶有烷基和芳基羧基骨架的連接基團，這提供了在最終季銨氮的裂解速率方面的適應(yīng)性?；衔?的連接基團可使用可獲得的起始產(chǎn)物如實施例5中所述制備。
g.純化本發(fā)明的化合物可用標準純化方法分離。本發(fā)明的化合物可溶解鍵會側(cè)重于在化合物純化過程中水解。
本發(fā)明還涉及純化本發(fā)明化合物的方法，其包括將化合物加入含有至少0.1％酸(v/v)的溶液中以溶解化合物?；衔镫S后通過進行色譜法，優(yōu)選HPLC純化。
h.測試可測試本發(fā)明的前藥以確定以時間為函數(shù)可水解鍵的水解速率和通過進行暴露于斷裂條件的前藥的HPLC分析的水解產(chǎn)物。本發(fā)明的化合物的生物活性可通過包括，但不限于，如實施例17中所述阻斷在巨噬細胞系J774細胞的噬菌作用的方法測量。本發(fā)明的化合物的生物活性還可通過如US5,480,906、K.Fuchikami等，J.Biomol Screen，2002 Oct.pp441-450、VI Silveria等，J.Biomol.Screen，2002，Dec.7(6)，507-514、BE Drees Combinatorial Chemistry andHighthroughput Screening 2003，vol 6，321-330中所述的PI-3激酶試驗測量，上述文獻內(nèi)容列為本文參考文獻。
i.鹽本發(fā)明的化合物以各種可藥用的鹽形式是有用的。術(shù)語“可藥用的鹽”是指那些鹽形式，它們對藥物化學家是顯然的，即它們基本上是無毒的，提供所需的藥物動力學性質(zhì)、口感、吸收、分布、代謝或排泄。在選擇時同樣重要的本質(zhì)上更實際的其它因子是原料成本、易于結(jié)晶、收率、穩(wěn)定性、吸濕性和散裝藥物的流動性。藥物組合物可方便地由活性組分或其可藥用的鹽與可藥用的載體混合制備。
適用于本發(fā)明的方法和組合物的本發(fā)明化合物的可藥用鹽包括，但不限于，與各種有機和無機酸，例如鹽酸、羥基甲基磺酸、氫溴酸、甲磺酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸、馬來酸、苯磺酸、甲苯磺酸、氨基磺酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、pamoic acid、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、isethonic acid形成的鹽，包括各種其它類型的可藥用的鹽，例如磷酸鹽、磷酸鹽、硼酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、水楊酸鹽等。陽離子，例如季銨離子可預(yù)計用作陰離子部分的可藥用的抗衡離子。
本發(fā)明的化合物的優(yōu)選鹽包括鹽酸鹽、甲磺酸鹽和三氟乙酸鹽，更優(yōu)選甲磺酸鹽。此外，本發(fā)明的化合物的可藥用的鹽可用非金屬，例如鈉、鉀和鋰、堿土金屬，例如鈣和鎂、有機堿，例如二環(huán)己基胺、三丁基胺和吡啶和氨基酸，例如精氨酸、賴氨酸等形成。
本發(fā)明的可藥用的鹽可通過常規(guī)化學方法合成。通常，鹽通過使游離堿或酸與化學計量或過量的所需鹽形成無機或有機酸或堿在合適的溶劑或溶劑混合物中反應(yīng)制備。
通常，本發(fā)明的化合物的鹽的抗衡離子由用于合成化合物的反應(yīng)物確定，根據(jù)反應(yīng)物，它們可以是鹽的抗衡離子的混合物。例如，當加入NaI以有助于反應(yīng)時，抗衡離子可以是Cl和I抗衡陰離子的混合物。此外，在存在乙酸作為洗脫液時，制備性HPLC會導(dǎo)致原始抗衡離子與乙酸根陰離子交換。鹽的抗衡離子可交換成不同抗衡離子，抗衡離子優(yōu)先與可藥用的抗衡離子交換以形成如上所述的鹽。交換抗衡離子的方法在WO 2002/042265、WO 2002/042276和S.D.Clas，“Quaternized Colestipol，an improved bile salt adsorbentInVitro studies.”Journal of Pharmaceutical Sciences，80(2)128-131(1991)中描述，其內(nèi)容列為本文參考文獻。為清楚起見，抗衡離子未明確顯示于本文化學結(jié)構(gòu)中，化合物的表征基于確定的季銨陽離子。
4.組合物本發(fā)明還包含含有一種或多種本發(fā)明化合物的組合物。本發(fā)明的組合物還含有一種或多種可藥用的附加成分，例如明礬、穩(wěn)定劑、抗菌劑、緩沖劑、著色劑、矯味劑、輔料等。
a.制劑本發(fā)明的組合物可以是以常規(guī)方式配制的片劑和錠劑。例如，用于口服的片劑和膠囊可含有常規(guī)賦形劑，包括，但不限于，粘合劑、填料、潤滑劑、崩解劑和增濕劑。粘合劑包括，但不限于，果汁、阿拉伯膠、白明膠、山梨糖醇、黃芪膠、淀粉膠水和聚乙烯基吡咯烷酮。填料包括，但不限于，乳糖、糖、微晶纖維素、玉米淀粉、硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、聚乙二醇和氧化硅。崩解劑包括，但不限于，馬鈴薯淀粉和淀粉乙醇酸鈉。增濕劑包括，但不限于，月桂基硫酸鈉。片劑可用本領(lǐng)域已知方法涂覆。
本發(fā)明的組合物還可以是液體制劑，包括，但不限于，含水或含油懸浮液、溶液、乳液、糖漿和酏劑。組合物還可配制成干產(chǎn)品，在使用前用水或其它合適賦形劑配制。該液體制劑可含有添加劑，包括，但不限于，懸浮劑、乳化劑、非水賦形劑和防腐劑。懸浮劑包括，但不限于，山梨糖醇糖漿、甲基纖維素、葡萄糖/糖漿、白明膠、羥基乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠和氫化食用脂肪。乳化劑包括，但不限于，卵磷脂、脫水山梨糖醇單油酸酯和阿拉伯樹膠。非水賦形劑包括，但不限于，食用油、杏仁油、精制椰子油、油酯、丙二醇和乙醇。防腐劑包括，但不限于，甲基或丙基對羧基苯甲酸酯和山梨酸。
本發(fā)明的組合物還可配制成栓劑，其含有栓劑基礎(chǔ)物，包括，但不限于，可可脂或甘油。本發(fā)明的組合物還可配制用于吸入，它可以是包括，但不限于，溶液、懸浮液或乳液形式，它可作為干粉或氣溶膠形式，使用推進劑，例如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷給藥。本發(fā)明的組合物還可配制成含有含水或非水賦形劑的外用制劑，其包括，但不限于，乳液、油膏、洗液、軟膏、藥膏、斑點或膜。
本發(fā)明的組合物還可配制成用于腸胃外給藥，其包括，但不限于，通過注射或連續(xù)輸液。用于注射的制劑可以是在油質(zhì)或含水賦形劑中的懸浮液、溶液或乳液，可含有配制助劑，包括，但不限于，懸浮、穩(wěn)定和分散劑。組合物還可以粉末形式提供，用合適賦形劑，包括，但不限于，無菌、無熱源水重新構(gòu)成溶液。
本發(fā)明的組合物還可配制成常效制劑，它可通過植入或肌內(nèi)注射給藥。組合物可用合適的聚合物或疏水材料(作為例如在可藥用的油中的乳液)、離子交換樹脂配制或作為微溶衍生物(例如作為微溶鹽)。
本發(fā)明的組合物還可配制成脂質(zhì)體制劑。脂質(zhì)體制劑可含有脂質(zhì)體，它滲透感興趣的細胞或角質(zhì)層，與細胞膜融合，引起脂質(zhì)體中的物質(zhì)輸送入細胞中。例如可使用在Yarosh的US5,077,211、Redziniak等的US4,621,023或Redziniak等的US4,508,703中描述的脂質(zhì)體。用于靶向皮膚癥狀的本發(fā)明的組合物可在哺乳動物的皮膚暴露于引起氧化損傷的UV或藥物之前、期間或之后給藥。其它合適的配制可以采用niosome。Niosome是類似于脂質(zhì)體的脂質(zhì)囊，其膜主要由非離子脂質(zhì)組成，其某些形式對透過角質(zhì)層傳送化合物是有效的。
5.治療本發(fā)明還包含治療患有與PI-3激酶活性有關(guān)的癥狀的患者的方法。PI-3激酶活性可以是反常的、過量的或本質(zhì)活躍的。本發(fā)明還包括治療炎性疾病的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。由于不合適的PI-3激酶信息活性導(dǎo)致的該疾病和不利健康結(jié)果在現(xiàn)有技術(shù)公開，例如US2002/0150954A1、US5,504,103、US6,518,277B1、US6,403,588、US6,482,623、US6,518277、US6,667,300、US20030216389、US20030195211、US20020037276和US5,703,075，其內(nèi)容列為本文參考文獻。
本發(fā)明還包括提高p53傳遞的編程細胞死亡的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還包括提高腫瘤細胞化學敏感性的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還包括提高腫瘤細胞放射敏感性的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還包括抑制腫瘤誘導(dǎo)的血管生成的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還包括抑制與非癌癥疾病有關(guān)的血管生成過程的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還包括治療癌癥的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。
化合物可同時或有節(jié)奏地(metronomically)與其它抗癌治療，例如化學治療和放射治療一起給藥。用于本文的術(shù)語“同時”或“同時地”是指彼此在48小時，優(yōu)選24小時，更優(yōu)選12小時，還優(yōu)選6小時，最優(yōu)選3小時或以內(nèi)的其它抗癌治療和給藥本發(fā)明的化合物。用于本文的術(shù)語“有節(jié)奏地”是指在不同于化學治療的時間，以相對于重復(fù)給藥和/或化學治療制度的確定頻率給藥化合物。
化學治療可包括給藥細胞毒素藥物或抑制細胞生長藥物或其組合。細胞毒素藥物通過(1)妨礙細胞復(fù)制DNA的能力和(2)在癌細胞中誘導(dǎo)細胞死亡和/或凋亡防止癌細胞繁殖。抑制細胞生長藥物經(jīng)調(diào)節(jié)、妨礙或抑制控制細胞繁殖和有時在低連續(xù)水平的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程起作用。
可用作細胞毒素藥物的化合物的種類包括如下烷基化試劑(包括，但不限于，氮芥、哌嗪衍生物、烷基磺酸酯、亞硝基脲和triazene)尿嘧啶芥、氮芥、環(huán)磷酰胺(Cytoxan)、異環(huán)磷酰胺、美法侖、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙撐蜜胺、三亞乙基硫代磷胺、白消安、亞硝脲氮芥、洛莫司汀、鏈脲霉素、達卡巴嗪和替莫唑胺；抗代謝物(包括，但不限于，葉酸拮抗劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物和腺苷脫氨酶抑制劑)甲氮喋呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、氟達拉濱磷酸鹽、噴司他丁和吉西他濱；天然產(chǎn)物和其衍生物(例如長春花生物堿、抗癌抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼毒素)長春堿、長春新堿、長春地辛、博來霉素、更生霉素、道諾霉素、阿霉素、表柔比星、伊達比星、阿糖胞苷、紫衫醇(紫衫醇商業(yè)上作為Taxol獲得)、光神霉素、deoxyco-formyrin、1-天冬酰胺酶、干擾素(優(yōu)選IFN-α)、依托泊苷和替尼泊苷。
其它增殖細胞毒素藥物是navelbene、CPT-11、阿那曲唑、來曲唑、卡培他濱、reloxafine、環(huán)磷酰胺、ifosamide和droloxafine。
微管影響藥物干涉細胞有絲分裂，其細胞毒素活性是現(xiàn)有技術(shù)中已知的。用于本發(fā)明的微管影響藥物包括，但不限于，allocolchicine(NSC 406042)、halichondrin B(NSC 609395)、秋水仙堿(NSC 757)、秋水仙堿衍生物(例如NSC 33410)、dolastatin10(NSC 376128)、美登素(NSC 153858)、rhizoxin(NSC 332598)、紫衫醇(Taxol，NSC 125973)、Taxol衍生物(例如NSC 608832)、硫代秋水仙堿NSC 361792)、三苯甲游基半胱氨酸(NSC 83265)、長春堿硫酸鹽(NSC 49842)、長春新堿硫酸鹽(NSC 67574)、天然和合成epothilone，包括，但不限于epothilone A、epothilone B和discodermolide(參見Service，(1996)Science，2742009)、雌莫司汀、諾考達唑、MAP4等。該藥物的實例還在Bulinski(1997)J.Cell Sci.1103055 3064；Panda(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA9410560-10564；Muhlradt(1997)Cancer Res.573344-3346；Nicolaou(1997)Nature 387268-272；Vasquez(1997)Mol.Biol.Cell.8973-985和Panda(1996)J.Biol.Chem 27129807-29812。
同樣合適的是細胞毒素藥物，例如表鬼臼毒素、抗腫瘤酶、拓撲異構(gòu)酶抑制劑、甲基芐肼、米托蒽醌、鉑配位配合物，例如順鉑和卡鉑、生物響應(yīng)改性劑、生長抑制劑、抗激素治療藥物、亞葉酸、替加氟和造血生長因子。
可使用的抑制細胞藥物包括，但不限于，激素和類固醇(包括合成類似物)17.α-乙炔基雌二醇、二乙基己烯雌酚、睪丸激素、強的松、氟羚甲基睪丸素、屈他雄酮丙酸酯、睪內(nèi)酪、甲地孕酮乙酸酯、甲基強的松龍、甲基-睪丸激素、潑尼松龍、去炎松、hlorotrianisene、羥基孕酮、氨魯米特、雌莫司汀、乙酸甲羥孕酮、leuprolide、氟他胺、托瑞米芬、zoladex。
其它細胞抑制藥物是抗血管生成藥，例如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，還包括其它VEGF抑制劑，例如抗VEGF抗體和小分子，例如ZD6474和SU6668。還可以使用來自Genetech的抗Her2抗體。合適的EGFR抑制劑是EKB-569(不可逆抑制劑)。還包括對EGFR免疫特異的Imclone抗體C225和src抑制劑。
同樣適合用作細胞抑制藥物的是Casodex(比卡魯胺，AstraZeneca)，它使得男性激素依賴的癌不增殖。細胞抑制藥物的另一實例是抗雌激素它莫西芬，它抑制雌激素依賴乳腺癌繁殖或生長。細胞增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑是細胞抑制藥物，典型實例包括表皮生長因子抑制劑、Her-2抑制劑、MEK-1激酶抑制劑、MAPK激酶抑制劑、PI3抑制劑、Src激酶抑制劑和PDGF抑制劑。
可根據(jù)本發(fā)明治療的各種癌癥包括，但不限于，如下癌，其包括膀胱(包括加速和轉(zhuǎn)移膀胱癌)、乳腺、結(jié)腸(包括結(jié)腸直腸癌)、腎、肝、肺(包括小和非小細胞肺癌和肺腺癌)、卵巢、前列腺、睪丸、泌尿道、淋巴腺系統(tǒng)、直腸、喉、胰腺(包括外分泌胰腺癌)、食道、胃、膽囊、子宮頸、甲狀腺和皮膚(包括鱗片細胞癌)的癌；淋巴系的造血瘤，包括白血病、急性淋巴細胞白血病、急性成淋巴細胞白血病、B-細胞淋巴瘤、T-細胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛細胞淋巴瘤、組織細胞淋巴瘤和Burketts淋巴瘤；骨髓系造血瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生異常綜合癥、骨髓白血病、前髓細胞白血病；中樞和末梢神經(jīng)系統(tǒng)瘤，包括星細胞瘤、成神經(jīng)細胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；間葉細胞來源的瘤，包括纖維肉瘤、橫紋骨肉瘤和骨肉瘤；和其它瘤，包括黑素瘤、xenoderma、pigmentosum、角化棘皮瘤、精原細胞瘤、甲狀腺小囊癌和畸胎癌。
本發(fā)明最優(yōu)選用于治療加速或轉(zhuǎn)移膀胱癌、胰腺癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、結(jié)腸直腸癌和乳腺癌。
本發(fā)明還包括治療胰腺炎的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明化合物。如Gukovsky等在Gastroenterology，126(2)554-66(2004)中討論，PI-3激酶的抑制可預(yù)防胰腺炎。
本發(fā)明還包括治療潰瘍的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明化合物。本發(fā)明還包括治療胃癌，例如胃癌的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明化合物。如Bacon等在Digestive Disease Week Abstracts and Itinerary Planner，Vol.2003，Abstract No.M921(2003)和Rokutan等在DigestiveDisease Week Abstracts and Itinerary Planner，Vol.2003，Abstract No.354(2003)中所討論，PI-3激酶包括在幽門螺桿菌與胃細胞的粘著中。此外，Osaki等，Journal of Cancer Research andClinical Oncology，130(1)8-14(2004)指出PI-3激酶抑制劑，例如LY294002可用作胃癌的抗腫瘤藥。
本發(fā)明還包括改善斯滕特固定膜性能的方法，其包括向帶有斯滕特固定膜，例如心臟血管斯滕特固定膜的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。如Zhou等在Arteriosclerosis Thrombosis andVascular Biology，23(11)2015-2020(2003)所討論，PI-3激酶的抑制可防止伴隨著斯滕特固定膜在脈管中的部位的“緊張”損傷。本發(fā)明的化合物在斯滕特固定膜或其聚合物基質(zhì)中可改善在斯滕特固定膜涂層基質(zhì)中的溶解性、改善含水/血清溶解性或改善輸送入直接相鄰于斯滕特固定膜部位的細胞。
本發(fā)明還包括治療與年齡有關(guān)的黃斑變性(AMD)的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。如在Retina February189 2004中所討論，VEGF的抑制抑制了與AMD有關(guān)的血管生長過度，本發(fā)明的化合物可通過抑制血管生長治療AMD。
本發(fā)明還包括治療高血壓的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。如在Northcott and Watts，Hypertension，43(1)125-130(2004)中所討論，PI-3激酶的抑制可防止與高血壓有關(guān)的低細胞外Mg2+濃度。
本發(fā)明還包括抑制遠祖細胞，例如骨髓遠祖細胞的分化，其包括向遠祖細胞加入有效量的本發(fā)明的化合物。如在Lewis等，Experimental Hematology，32(1)36-44(2004)中所討論，PI-3激酶途徑的抑制抑制了骨髓遠祖細胞。
本發(fā)明還包括治療肝癌的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。如在Leng等，Hepatology 38(4)Suppl 1401A(2003)中所討論，LY294002抑制是人體肝組織指示劑的Akt(絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶B)的磷酸化。
本發(fā)明還包括治療與突變異種PTEN有關(guān)的癥狀的方法，其包括向需要的患者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。PTEN是位于染色體10q23上的腫瘤抑制基因，它已在患者中用Cowden疾病確定。如在Vega等，Journal of Investigative Dermatology，121(6)1356-1359(2003)中所討論，對抑制原癌基因Akt的活化，突變異種PTEN有低的能力，PI-3激酶抑制劑可抑制Akt的磷酸化，從而降低突變異種PTEN的效果。
a.給藥本發(fā)明的組合物可以任何方式給藥，包括，但不限于，口服、腸胃外、舌下、外用、直腸、經(jīng)粘膜、局部、經(jīng)吸入、經(jīng)頰給藥或其組合。腸胃外給藥包括，但不限于，靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、鞘內(nèi)和關(guān)節(jié)內(nèi)。本發(fā)明的組合物還可以輸液形式給藥，它使得組合物緩慢釋放以及i.V輸液的緩慢控制。
b.劑量用于治療所需的化合物的治療有效量根據(jù)所治療的癥狀、所需活性的時間長度和年齡和患者癥狀變化，最終由主治醫(yī)師確定。然而，一般而論，用于成人治療所用的劑量通常在每天0.001mg/kg-約200mg/kg的范圍內(nèi)，劑量可以是約每天1μg/kg-約100μg/kg。所需劑量可方便地以單一劑量給藥或作為多次劑量以合適的間隔給藥，例如每天二、三、四或更多亞劑量。多次劑量通常是期望或需要的。
許多因素會導(dǎo)致本發(fā)明的化合物在寬劑量范圍內(nèi)給藥，當與其它治療結(jié)合時，本發(fā)明化合物的劑量可以相對較低的劑量給藥。此外，使用靶向藥物可以使所需劑量相對低。由于包括，但不限于，低毒性、高清除、叔胺的低裂解速率的因素，本發(fā)明的某些化合物會以相對高的劑量給藥，結(jié)果，本發(fā)明化合物的劑量會是約1ng/kg-約100mg/kg。本發(fā)明化合物的劑量可以是任何劑量，包括，但不限于，約1μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、75μg/kg、100μg/kg、125μg/kg、150μg/kg、175μg/kg、200μg/kg、225μg/kg、250μg/kg、275μg/kg、300μg/kg、325μg/kg、350μg/kg、375μg/kg、400μg/kg、425μg/kg、450μg/kg、475μg/kg、500μg/kg、525μg/kg、550μg/kg、575μg/kg、600μg/kg、625μg/kg、650μg/kg、675μg/kg、700μg/kg、725μg/kg、750μg/kg、775μg/kg、800μg/kg、825μg/kg、850μg/kg、875μg/kg、900μg/kg、925μg/kg、950μμg/kg、975μg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg。
本發(fā)明具有多個方面，用如下非限制實施例說明。
實施例1LY294002的制備根據(jù)基于在Vlahos等，J.Biol.Chem.269(7)5241(1994)中描述方法的方案2制備10g LY294002樣品，所述文獻列為本文參考文獻。Thoichromone，例如12的硫代甲基被胺的置換在上文描述(Bantick等，J.Heterocyclic Chem，18679(1981)，其內(nèi)容列為本文參考文獻)，甲基苯基酮，例如11與二硫化碳的環(huán)化并伴隨著硫醇陰離子的烷基化(Vlahos等和Bantick等)。在羧酸(10)在一步反應(yīng)中制備甲基酮(例如11)用在Rubottom等，J.Org.Chem.，481550(1983)中描述的方法進行，其內(nèi)容列為本文參考文獻。
方案2 (化合物1)實施例2LY294002的季銨類似物的制備根據(jù)方案3，LY294002的叔胺用碘甲烷或芐基氯在強制條件下季銨化以得到化合物A052-10和13B。實施例56描述了甲基季銨前藥A052-10的合成，實施例57描述了鄰苯二酰亞氨基季銨前藥A052-08的合成。實施例58描述了對羧基芐基季銨化A044-78的合成。描述了對-scn-芐基季銨前藥A044-80。
方案3 實施例3氯甲基酯的制備氯甲基中間體根據(jù)在Tsujihara，Synth Commun，24，767，1994中描述的方法制備。簡言之，將合適的羧酸在50/50二氯甲烷/水的混合物中稀釋，將混合物在冰浴中冷卻，加入碳酸氫鈉(4當量)和四正丁基硫酸氫銨(0.05當量)。在攪拌5分鐘后，加入氯甲基氯硫酸酯(1.1當量)，溶液劇烈攪拌過夜。將混合物與更多二氯甲烷一起轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用飽和氯化鈉溶液洗滌。有機物用硫酸鈉干燥，除去溶劑得到產(chǎn)物。物質(zhì)用LC-MS表征，在某些情況下用1H NMR光譜表征。用此一般方法，由相應(yīng)的羧酸制備如下典型氯甲基酯。
表1
*使用UV檢測的保留時間**使用UV檢測原料羧酸的保留時間UD＝由于沒有UV吸收和未被MS離子化而未檢測到實施例4LY294002向季銨前藥的轉(zhuǎn)化將LY294002(化合物1)溶解在乙腈中，隨后與1-2當量碘化鈉一起加入實施例3的氯甲基酯(1-1.5當量)。在室溫下與氯甲基酯的反應(yīng)僅緩慢進行，得到少量季銨產(chǎn)物，同時沉淀氯化鈉。在65℃下，反應(yīng)通過在4小時內(nèi)進行完全。在完全時(由LC-MS分析判斷)過濾反應(yīng)，濃縮，用逆相HPLC上純化。收集餾分，凍干得到所需的產(chǎn)物蓬松粉末。以此方式制備和純化的實施例在如下表格中顯示(抗衡離子未顯示，但包括氯、碘、乙酸根或它們的混合物)。
表2

實施例5鹵代甲基酯連接基團根據(jù)實施例3和實施例4的結(jié)果，制備鹵代甲基酯連接基團(方案4和圖表)?；衔顱如實施例3中所述由化合物A(商業(yè)獲得)制備，該化合物通過如下方法轉(zhuǎn)化為更活性的碘甲基酯(化合物C)經(jīng)Finklestein反應(yīng)，溶解在丙酮或2-丁酮中，隨后溶解2-5當量碘化鈉，于是沉淀氯化鈉，在溶液中制備碘甲基酯(化合物C)?；衔顲通過汽提溶劑分離，溶解在水不溶混溶劑，例如二氯甲烷中，用水撮以除去殘余碘化鈉。
化合物E由化合物D(商業(yè)獲得)制備，化合物F和G分別以類似于化合物B和C的制備方法制備。
方案4 實施例6LY294402用鹵代甲基連接基團季銨化鹵代甲基酯，包括實施例5的那些，用類似于實施例4中的條件用于季銨化LY294002。含有連接基團與游離官能團的典型前藥包括如下

化合物1105通過在乙腈中混合化合物1101和化合物C，兩者在其中溶解，在3天時間內(nèi)沉淀化合物1105，用少量乙腈洗滌得到基本上純的化合物1105(由LCMS證實)。
實施例7使用化合物1111制備前藥化合物1111通過方案5中所示的方法制備，化合物1110用純?nèi)宜崽幚?-3小時，用氬氣吹出TFA，真空干燥得到由化合物1113組成的玻璃狀固體。隨后將化合物1113溶解在1-3ml磺酰氯中，在65℃加熱3-8小時。用氬氣吹出磺酰氯，真空干燥以良好收率得到化合物1111玻璃狀黃色固體?；衔?111可作為典型酰氯與各種含氮和含羥基親核試劑反應(yīng)，例如通過簡單地溶解在甲醇中得到相應(yīng)的甲基酯化合物1112。
方案5 將化合物1111的樣品溶解在乙腈中用至少5當量的不同的醇在分液漏斗中處理。1小時后，用HPLC-MS分析樣品，顯示良好轉(zhuǎn)化率，＞90％的化合物1111轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酯，如表格3所示和表征。
表3
UV214nm實施例8使用化合物1111制備蛋白質(zhì)共軛前藥蛋白質(zhì)在大量水溶液(pH7-9)(磷酸鹽緩沖液至碳酸鹽緩沖液)中使用相對于被改性的氨基或羥基2-10倍過量的化合物1111共軛。酰氯化合物1111可加入混合有機-含水溶液(例如50/50水/乙腈或50/50水/THF)或在二氯甲烷中在兩相反應(yīng)體系中在室溫下攪拌1-24小時。蛋白質(zhì)共軛物可通過透析或超濾純化和直接使用。
將5mg/ml鐵傳遞蛋白質(zhì)(Sigma)在50mM碳酸氫鈉緩沖液中的500μl等分液與100up的30mM A024-79(100摩爾當量)混合，該化合物根據(jù)實施例12在DMSO中制備。在室溫下反應(yīng)1小時20分鐘后，除去50up樣品，通過Sephadex G-10(切掉700分子量)柱以由小分子分離蛋白質(zhì)。純化共軛蛋白質(zhì)洗脫物的等分樣品隨后用乙腈提取，用LC-MS發(fā)現(xiàn)未檢測到化合物1。使純化的共軛蛋白質(zhì)洗脫物在室溫下靜置39小時，此時再次用乙腈提取蛋白質(zhì)混合物，此時檢測到化合物1的15％最大理論量。這些結(jié)果顯示每摩爾鐵傳遞蛋白連接15摩爾的前藥的摩爾比。這些結(jié)果說明帶有親電連接基團的前藥連接于典型蛋白質(zhì)，說明顯著數(shù)量的PI3激酶抑制劑(化合物1)在含水條件下由蛋白質(zhì)釋放。
實施例9用化合物1111制備樹脂結(jié)合的前藥在wang樹脂上采用標準FMOC/HOBT偶合肽化學使用所有天然氨基酸制備肽arg-gly-asp-ser(RGDS)。樹脂結(jié)合的肽與化合物1111在DMF中反應(yīng)1-24小時，過濾，樹脂用DMF洗滌，隨后用二氯甲烷洗滌，然后用三氟乙酸處理以由樹脂斷裂共軛化合物1126(方案6)。實施例55描述規(guī)模提高的化合物1111的制備方法。
方案6 實施例10用化合物1111制備帶有葉酸酯靶向藥物的前藥化合物1111帶有親電基團，它可以與親核氨基在溫和堿性有機或含水條件(即碳酸氫鈉緩沖液，20mM-500mM)下反應(yīng)形成不可逆硫脲連接基團。在靶向生物分子葉酸酯上存在合適的親核氨基，葉酸酯分子A和C通過在DMF中在堿三乙胺或二異丙基乙胺存在下以大致相等比例混合經(jīng)氨基共軛于化合物1111產(chǎn)生化合物B和D(方案7)。
方案7 實施例11使用化合物1111制備帶有抗體靶向藥物的前藥化合物1111在含水pH7-9中共軛于單克隆抗體，隨后通過超濾或其它由小分子分離蛋白質(zhì)共軛物的標準方法分離。共軛進行可根據(jù)實施例8制備。
實施例12
使用N-羥基琥珀酰亞胺酯制備前藥較化合物1111反應(yīng)性低的酯通過生產(chǎn)化合物1113的N-羥基琥珀酰亞胺活性酯制備(方案8)。將100mg化合物1113(A024-67)樣品與53mg N-羥基琥珀酰亞胺(2當量)溶解在1ml無水THF中。在攪拌下，一次加入1M二環(huán)己基碳化二亞胺在二氯甲烷中的45up等分樣品(2當量)。在3分鐘內(nèi)，形成重質(zhì)白色沉淀物，表示發(fā)生偶合反應(yīng)。在使反應(yīng)攪拌23小時后，過濾反應(yīng)混合物，由濾液除去溶劑得到172mg粗活性酯產(chǎn)物，粘稠黃色油，稱為化合物A024-79，顯示2.334分鐘的保留時間，對峰值發(fā)現(xiàn)M+＝535的預(yù)期質(zhì)量。
方案8 化合物1113Ref.NO.A024-79采用如上所述用于化合物1111的相同化學方法，如實施例8所述用A024-79共軛靶向蛋白質(zhì)，如實施例74所述共軛于聚合物。
實施例13用化合物1105制備前藥化合物1105帶有親電基團，它可與親核氨基在溫和堿性有機或含水條件(例如碳酸氫鈉緩沖液，20mM-500mM)下反應(yīng)形成不可逆硫脲連接基團。合適的親核氨基存在于靶向生物分子，例如肽、蛋白質(zhì)和帶有胺基團小分子，例如維生素衍生物上(方案7的A和C)。該產(chǎn)物的典型實例包括化合物B和D。
方案9 實施例14嗎啉環(huán)衍生物的制備方案1的硫代甲基化合物如實施例1中所述制備，該化合物在合適溶劑中在含有或不含催化量的乙酸下與過量親核胺化合物一起加熱直到消耗大部分硫代甲基化合物?；旌衔镫S后進行制備性逆相LC-MS以分離所需的嗎啉類似物。以該方法制備的化合物顯示于表格4中，并附上制備條件，表征和分離方法顯示于表5中?；衔锏腘MR數(shù)據(jù)顯示于表6中。
表4

表5
表6
實施例15HPLC分析HPLC在Shimadzu LCMS-2010上采用3ml/分鐘的流速和5％的起始B濃度進行。B溶劑在5.0分鐘時直線上升至95％濃度，在95％保持至6.0分鐘，隨后在6.5分鐘時直線下降至5％，在此保持直到試驗在7.5分鐘結(jié)束。除非另有說明，這是用于實施例的方法。方法B是用于極性化合物的緩慢梯度方法，它采用3ml/分鐘的流速和0％的起始B濃度，在第一分鐘內(nèi)保持，B溶劑在3.0分鐘時直線上升至10％濃度，在5.0分鐘時直線上升至95％，將其保持至6.0分鐘，隨后在6.5分鐘時直線下降至5％，在此保持直到試驗在7.5分鐘結(jié)束。除質(zhì)量檢測外，LC檢測由3個通道組成在254nm時的UV吸光率、在214nm時的UV吸光率和蒸發(fā)光散射(Alltech ELSD 2000)。蒸發(fā)光散射檢測器在50℃下以1.5升/分鐘的氮氣流量運轉(zhuǎn)。Shimadzu LCMS-2010的CDL(化學反溶劑線)和封閉溫度均為300℃，氮氣噴霧器氣流是4.5L/分鐘。由50-2000m/z檢測正和負質(zhì)譜，柱是YMC CombiScreen ODS-AQ，S-5μ粒徑，50mm長，4.6mm內(nèi)徑。移動相A使用HPLC級B&J水，加入0.1％(v/v)HOAc，移動相B是HPLC級B&J乙腈，加入0.1％(v/v)HOAc。系統(tǒng)給出1.50-1.60分鐘的保留時間(tR＝1.50-1.60)，使用標準商業(yè)物質(zhì)(4-羧基苯基乙酸；Aldrich Catalog H5000-4；m.p.149-151℃)作內(nèi)標。
實施例16制備性HPLC制備性HPLC在由兩個連接SIL-10A自動取樣器的LC-8A泵組成的Shimadzu系統(tǒng)中進行，用逆相柱(YMC，cat CCAQSOS0520WT；ODS-AQ CombiPrep，20mm×50mm)，然后通過可變體積分流器；較小的物流隨后用LC-10ADVP補充泵(MeOH)補充至3ml/分鐘，洗脫液通過可變雙通道波長UV檢測器，粗略地以6∶1分流至蒸發(fā)光散射檢測器(在50℃下運轉(zhuǎn)，氮氣流量1.5升/分鐘)和Shimadzu 2010 Mass檢測器；來自MRA分流器的較大物流隨后流過用作餾分收集器的由質(zhì)量、W吸光率或ELS峰值觸發(fā)的Gilson 215液體處理器。
不同梯度總是用更加含水的溶劑A開始，急劇上升到不同濃度的B，移動相A使用HPLC級B&J水，加入0.1％(v/v)HOAc，移動相B是HPLC級B&J乙腈，加入0.1％(v/v)HOAc。
實施例17水解前藥的生物活性LY294002(化合物1)的生物活性通過測試在J774巨噬細胞中的噬菌作用確定，這是I類PI-3激酶依賴的途徑。簡言之，J774細胞用LY294002在10、1和0.1μM的濃度下與合適的DMSO對照組在DMED中與10％FCS測試1小時，隨后以目標與效應(yīng)器比率等于100∶1加入激活的sRBCs(羊血紅細胞)，在37℃30分鐘。將細胞暴露于低滲堆以除去血紅細胞，通過測量在細胞溶解產(chǎn)物中的血色素濃度確定噬菌作用。如附圖1所示，LY294002以劑量依賴方式在所有濃度下明顯阻斷噬菌作用。這些結(jié)果表明J774細胞系可用于迅速和容易地測試本發(fā)明化合物抑制PI-3激酶活性的能力。使用該測試PI-3激酶活性的方法，靶向前藥化合物1126在5μM濃度下以可變預(yù)培養(yǎng)時間試驗以使前藥就地轉(zhuǎn)化為活性藥物(化合物1)。對照樣品(時間零，沒有化合物1126預(yù)培養(yǎng))顯示140的噬菌系數(shù)(PGI，由于沒有抑制PI-3激酶引起的噬菌程度的量度)，而用含水pH＝7，2、5和10小時的培養(yǎng)時間，化合物1126分別顯示88、78和37的PGI。此實施例說明最初前藥1126具有很少至沒有PI-3激酶活性，隨時間轉(zhuǎn)化為生物活性藥物，它顯示明顯的PI-3激酶抑制。另一實驗顯示在暴露限制情況下(20分鐘暴露于試驗溶液，隨后除去試驗溶液)20μM濃度的化合物1126具有50的PGI，而相對地，溶劑空白為163，化合物為190和RGDS(四肽，即化合物1126的靶向部分)為170。此實施例顯示靶向PI-3激酶抑制劑在暴露時間限制情況下的優(yōu)點。該效果進一步通過用降低劑量的化合物1126重復(fù)實驗而證實，該實驗顯示10μM、3μM、1μM和0μM，對于20分鐘的培養(yǎng)時間，隨后除去化合物，隨后培養(yǎng)2小時以發(fā)生噬菌作用分別得到33、143、206和213的PGI。此實施例說明在劑量暴露限制情況下化合物1126以劑量依賴方式抑制PI-3激酶。
實施例18骨靶向基團A030-84的制備
500mg 4-[(N-BOC)氨基甲基]苯胺(Aldrich)在10ml二噁烷中的溶液用多聚甲醛(400mol％，270mg)和三甲基亞磷酸酯(400mol％，1.12g)處理，混合物在95℃加熱過夜。隨后加入更多多聚甲醛(270mg)和三甲基亞磷酸酯(1.12g)，再次在95℃下加熱過夜。將溶液冷卻，溶解在氯仿(20mL)中，用飽和氯化鈉(20mL)和水(20mL)洗滌。有機物用硫酸鈉干燥，經(jīng)在80℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑和過量三甲基亞磷酸酯得到1.723g透明油。稱為商品編號A030-74的標題化合物的存在用電噴HPLC-MS證實，顯示保留時間tR＝2.9分鐘，對于所需物質(zhì)[M＝C18H32N2O8P2]，質(zhì)量467m/z[M+H]+和489m/z[M+Na]+。
70mg如上制備的A030-74在10mL二氯甲烷中的溶液用溴三甲基甲硅烷(690mol％，1.97g)處理，溶液攪拌過夜。加入甲醇(10mL)，溶液攪拌15分鐘，隨后濃縮得到1.12g橙色油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實。使用該梯度的保留時間為tR＝0.85分鐘，對于所需產(chǎn)物[M＝C9H16N2O6P2]的質(zhì)譜以負模式操作在預(yù)期的m/z 309[M-H]-，該產(chǎn)物指定的參考號碼A030-84。
實施例19化合物A014-52的合成 向1.0g4-羧基苯基硫代異氰酸酯中加入二氯甲烷(15mL)和蒸餾水(15mL)，燒瓶在冰水浴中冷卻，加入碳酸氫鈉(4.0當量)和四正丁基硫酸氫銨(0.05當量)。10分鐘后，加入氯甲基氯硫酸酯(1.2當量)，溶解劇烈攪拌過夜，用二氯甲烷(10mL)轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。分層，有機物用飽和氯化鈉(20mL)洗滌，有機物用硫酸鈉干燥，除去溶劑得到1.10g茶色固體。標題化合物的存在通過以保留時間表示的產(chǎn)物(4.2分鐘)相對起始羧酸(3.2分鐘)的位移表示?；衔镞€用質(zhì)子NMR光譜證實1H(CDCl3)δ8.08(d，2H，J8.8Hz)，7.30(d，2H，J8.8Hz)，5.95(s，2H)。
實施例20化合物A014-48的合成 250mg氯甲基酯(用A014-52中描述的方法制備)在2mL丙酮中的溶液用碘化鈉(1.2當量)處理，溶液攪拌過夜。過濾溶液，除去溶劑，殘余物溶解在二氯甲烷(10mL)中。溶液用10％(w/v)亞硫酸鈉(10mL)、5％(w/v)碳酸氫鈉(10mL)和水(10mL)洗滌。有機物用硫酸鈉干燥，除去溶劑得到137mg淺綠色固體。標題化合物的存在通過以保留時間表示的碘甲基酯產(chǎn)物(4.4分鐘)相對起始氯甲基酯(4.2分鐘)的位移表示。化合物還用質(zhì)子NMR光譜證實1H(CDCl3)δ8.04(d，2H，J8.8Hz)，7.29(d，2H，J8.1Hz)，6.15(s，2H)。
實施例21化合物A014-76的合成 387mg氯甲基酯(用A014-52中描述的方法制備)在6mL2-丁酮中的溶液用碘化鈉(1.2當量)處理，溶液加熱10小時。過濾溶液，除去溶劑，殘余物溶解在二氯甲烷(10mL)中。溶液用10％(w/v)亞硫酸鈉(10mL)、5％(w/v)碳酸氫鈉(10mL)和水(10mL)洗滌。有機物用硫酸鈉干燥，除去溶劑得到310mg茶色固體。標題化合物的存在通過以保留時間表示的碘甲基酯產(chǎn)物(4.4分鐘)相對起始氯甲基酯(4.2分鐘)的位移表示。
實施例22化合物A018-24的合成 將64mg 2-對硝基芐基-1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷(Macrocyclics)在500μL二噁烷中的溶液用多聚甲醛(50mg)和三甲基亞硫酸酯(207mg)處理?；旌衔锛訜嶂?5℃，在75℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。加入氯仿(10mL)，溶液用飽和氯化鈉(2×10mL)和水(2×10mL)洗滌。將有機物在硫酸鈉上干燥，除去溶劑得到棕色油。它經(jīng)LC純化得到所需物質(zhì)。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS A證實；tR＝1.8分鐘。MS[M＝C27H53N5O14P4]m/z 796(MH+)，818(MNa+)。
實施例23化合物A022-32的合成 將33mg膦酸化大環(huán)(在A018-24中制備)在700μL二氯甲烷中的溶液用溴三甲基甲硅烷(72mg)處理。混合物攪拌過夜，加入更多溴三甲基甲硅烷(36mg)，再攪拌3天。加入甲醇(500mL)，溶液攪拌1小時，隨后除去揮發(fā)物得到棕色油。加入甲醇沉淀出棕色固體，將其過濾并干燥。它經(jīng)LC純化得到2.7mg所需物質(zhì)。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS A證實；tR＝1.5分鐘。MS[M＝C19H37N5O14P4]m/z 682(M-H-)，340[(M-2H)/2]2-。
硝基用標準還原方法還原，例如用5％鈀/C催化劑在甲醇中在純氫氣氣氛下攪拌。隨后過濾混合物(仔細防止空氣暴露于催化劑)，蒸發(fā)溶劑得到胺。
實施例24化合物A022-56的合成 將磷酸(1.26g)、6M鹽酸(19.5mL)和對-二甲苯二胺(1.0g)的混合物加熱到100℃。向其中加入37％(wt/wt)含水甲醛(1.15mL)，混合物在100℃攪拌過夜。過濾混合物，通過在80℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去水得到2.11g白色固體。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS，采用方法B證實；tR＝1.8分鐘。MS[M＝C10H18N2O6P2]m/z 325(MH+)。
實施例25化合物A018-12的合成 將928mg N-BOC-1，4-二氨基丁烷在10mL二噁烷中的溶液用多聚甲醛(592mg)和三甲基亞磷酸酯(2.44g)處理。混合物在108℃攪拌過夜，在75℃通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。加入氯仿(10mL)，溶液用飽和氯化鈉(2×10mL)和水(2×10mL)洗滌，有機物用硫酸鈉干燥，除去溶劑得到1.55g油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實；tR＝2.4分鐘。MS[M＝C15H34N2O8P2]m/z 455(MNa+)。
實施例26化合物A026-92的合成 783mg膦酸酯(在A018-12中制備)在18mL二氯甲烷中的溶液用溴三甲基甲硅烷處理。溶液攪拌過夜，加入甲醇，混合物攪拌2小時。除去揮發(fā)物得到黃色油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS，采用方法B證實；tR＝0.4分鐘。MS[M＝C6H8N2O6P2]m/z 275(M-H-)。
實施例27化合物A030-74合成 500mg 4-[(N-BOC)氨基甲基]苯胺在10ml二噁烷中的溶液用多聚甲醛(270mg)和三甲基亞磷酸酯(1.12g)處理，混合物在95℃加熱過夜。隨后加入更多多聚甲醛(270mg)和三甲基亞磷酸酯(1.12g)，再次在95℃下加熱過夜。將溶液冷卻，溶解在氯仿(20mL)中，用飽和氯化鈉(20mL)和水(20mL)洗滌。有機物用硫酸鈉干燥，經(jīng)在80℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑和過量三甲基亞磷酸酯得到1.72g透明油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，tR＝2.9分鐘，對于所需物質(zhì)[M＝C18H32N2O8P2]m/z467[MH]+；489m/z[MNa]+。
實施例28化合物A030-84的合成 870mg A030-74在10mL二氯甲烷中的溶液用溴三甲基甲硅烷(1.97g)處理，溶液攪拌過夜。加入甲醇(10mL)，溶液攪拌15分鐘，隨后濃縮得到1.12g橙色油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS，采用方法B證實；tR＝0.85分鐘，MS[M＝C9H16N2O6P2]m/z 309[M-H]-。
實施例29化合物A035-66的合成 將2.0g部分的4-氨基甲基苯甲酸(Aldrich)溶解在含有0.64g固體NaOH的20mL水中。加入3.18g部分的Boc酐(Aldrich)，混合物攪拌過夜。通過仔細加入15mL2N HCl調(diào)節(jié)混合物至pH＝2。過濾生成的白色固體，干燥得到2.9997g產(chǎn)物。產(chǎn)物用LCMS表征(保留時間2.901分鐘，在250m/z觀察至所需M-H質(zhì)量離子)。
實施例30化合物A035-6的合成 將A 1.5部分的A35-66與0.69g N-羥基琥珀酰亞胺(Aldrich)一起溶解在17mL無水THF中，在攪拌下用6mL在二氯甲烷中的1M二環(huán)己基碳化二亞胺(Aldrich)一次處理。2天后，過濾出白色沉淀(二環(huán)己基脲)，濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到2.8146g白色固體，用LCMS表征(保留時間3.299分鐘，所需M+H在349m/z)。
實施例31化合物A035-14合成 將500mg分部的A035-6溶解在5mL無水THF中，用1.002mL(10當量)乙二胺(EDA)處理，使其攪拌2小時。將溶液由形成的固體傾析，通過真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)由傾析的溶液中除去溶劑和過量EDA得到0.8728g白色固體，產(chǎn)物用LCMS表征(保留時間1.608分鐘，所需M+H在294m/z)。
實施例32化合物A032-24的合成 872mg胺(如A035-14制備)在10ml二噁烷中的溶液用多聚甲醛(535mg)和三甲基亞磷酸酯(2.21g)處理，混合物在100℃加熱過夜，隨后在80℃通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得到棕色固體。加入氯仿(25mL)，溶液用水(15mL)洗滌。有機物用硫酸鈉干燥，除去溶劑得到241mg黃色半固體。經(jīng)LC純化得到58.8mg所需物質(zhì)。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，tR＝2.6分鐘，MS[M＝C21H37N3O9P2]，m/z 538(MH+)，560(MNa+)。
實施例33化合物A032-40的合成 將54.6mg膦酸酯(在A032-24中制備)在1mL二氯甲烷中的溶液用溴三甲基甲硅烷(156mg)處理?；旌衔飻嚢柽^夜，加入乙醇(0.5mL)和水(3滴)，攪拌1小時，隨后除去揮發(fā)物，將物質(zhì)真空干燥。將其溶解在水(1mL)中，凍干得到59mg茶色固體。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法B，tR＝0.4分鐘，MS[M＝C12H21N3O7P2]，380(M-H-，382(MH+)，404(MNa+)。
實施例34化合物A026-60的合成 A026-60經(jīng)Kantoci，D.，Kenike，J.K.，Wechter，W.J.Syn.Commun.，1996，26(10)，2037.的方法制備將N-芐基-N-甲胺(20.0g)、二乙基亞磷酸酯(70.7g)和三乙基原甲酸酯(29.3g)的混合物在氮氣下攪拌回流(150℃)5小時。經(jīng)在70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，混合物再次回流加熱過夜。溶液用600mL氯仿稀釋，用1M氫氧化鈉(3×100mL)和飽和氯化鈉(3×150mL)洗滌。有機物用硫酸鈉干燥，除去溶劑得到74.0g淺黃色油。將10.0g該物質(zhì)進行硅膠柱色譜法，使用14∶4∶1乙酸乙酯∶己烷∶甲醇作洗脫液，得到6.08g透明油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，tR＝3.4分鐘，MS[M＝C17H31NO6P2]，m/z 408(MH+)，430(MNa+)，471(MNa-CH3CN+)。
實施例35化合物A030-54的合成 A030-54(化合物是已知的，CAS #80475-00-9)經(jīng)Kantoci，D.，Kenike，J.K.，Wechter，W.J.Syn.Commun.，1996，26(10)，2037.的方法制備4.52g膦酸化芐胺(經(jīng)A026-60制備)在甲醇(45mL)中的溶液用10％鈀/C(200mg)處理，在氫氣氣氛下過夜。過濾出鈀/C得到2.98g淺黃色油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法A，tR＝1.9分鐘，MS[M＝C10H25NO6P2]，m/z318(MH+)。
實施例36化合物A039-16的合成 A039-16將500mg 4-氯甲基苯甲酸(Aldrich)溶解在8mL THF中，一次用5當量乙二胺(Aldrich)(983μL)處理。24小時后，高真空汽提溶劑，白色固體(93％)用LCMS表征(保留時間0.4分鐘，所需M+H在195m/z)。
實施例37化合物A038-24的合成 將679mg氨基酸(經(jīng)A039-16制備)、37％(wt/wt)含水甲醛(1.04mL)、磷酸(1.15g)和濃(12.1M)鹽酸(2.3mL)在二噁烷(10mL)中的混合物在100℃攪拌過夜。經(jīng)在75℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，混合物離心分離，棄掉固體。向液體中加入更多甲醛溶液(1.04mL)、磷酸(1.15g)、濃鹽酸(2mL)和二噁烷(10mL)，再次在100℃下攪拌過夜。在75℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得到粘稠油，其經(jīng)LC純化得到276mg棕色固體。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法A，tR＝0.6分鐘，MS[M＝C13H23N2O11P3]，m/z 475(M-H-)，477(MH+)。
實施例38化合物A038-50的合成 6.0gFmoc-Lys-OH(Advanced ChemTech)在甲醇(25mL)和水(25mL)的混合物用37％(wt/wt)含水甲醛(6.06mL)和二甲基亞磷酸酯(8.96g)處理。混合物在80℃攪拌2小時，冷卻，用二氯甲烷(1×100mL，2×50mL)提取。有機物用飽和氯化鈉(50mL)洗滌，用硫酸鎂干燥30分鐘，除去溶劑得到10.17g淺綠色油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法A，tR＝3.3分鐘，MS[M＝C27H38N2O10P2]，m/z 613(MH+)，636(MNa+)。
實施例39化合物A038-66的合成 23.9mg膦酸化Fmoc-Lys-OH(經(jīng)A038-50制備)在二氯甲烷(1mL)中的溶液用溴三甲基甲硅烷(60mg)處理，混合物攪拌過夜。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法A，tR＝3.4分鐘，MS[M＝C23H30N2O10P2]，m/z555(M-H-)。
實施例40化合物A038-76的合成 將112.9mg膦酸化Fmoc-Lys-OH(經(jīng)A038-50制備)在6M鹽酸(3mL)中的溶液在80℃下攪拌2天。加入水(9mL)，2天后，離心分離混合物，傾析液體。固體經(jīng)真空干燥得到86.8mg灰白色固體。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法A，tR＝3.1分鐘，MS[M＝C23H30N2O10P2]，m/z555(M-H-)。
實施例41化合物A038-90的合成 500mg Fmoc-Lys-OH(Advanced ChemTech)在二噁烷(5mL)中的溶液用37％(wt/wt)含水甲醛(303μL)、磷酸(333mg)和濃(12.1M)鹽酸(674μL)處理?；旌衔镌?0℃攪拌過夜，經(jīng)在75℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法B，tR＝5.4分鐘，MS[M＝C23H30N2O10P2]，m/z 555(M-H-)。
實施例42化合物A042-18的合成 將1.29gBoc保護的氨基酸(如A035-66所述制備)在15mL四氫呋喃中的溶液用N-羥基琥珀酰亞胺(623mg)和在二氯甲烷(5.4mL)中的1.0M1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺處理?；旌衔飻嚢柽^夜，過濾白色沉淀，上清液濃縮得到1.89g白色固體。標題化合物的存在由在3.3分鐘存在UV信號說明。
實施例43化合物A042-26的合成 向2.1g順-(2-氨基乙基)胺在20mL四氫呋喃中的溶液中在40分鐘內(nèi)滴加1.0g活化酯(經(jīng)A042-18制備)在20mL四氫呋喃中的溶液?；旌衔飻嚢柽^夜，形成沉淀物，將其過濾，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到2.10g黃色油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法A，tR＝1.4分鐘，MS[M＝C19H33N5O3]，m/z 380(MH+)，402(MNa+)。
實施例44化合物A042-32的合成 2.08g胺(如A042-26制備)在二噁烷(20ml)中的溶液用多聚甲醛(1.50g)和二甲基亞磷酸酯(6.85g)處理，混合物在90℃加熱過夜，隨后在70℃通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。加入二氯甲烷(50mL)，用飽和氯化鈉(25mL)和水(25mL)洗滌。有機物用硫酸鈉干燥，除去溶劑。殘余物經(jīng)LC純化得到123.8mg黃色油。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法D，tR＝2.2分鐘，MS[M＝C31H61N5O15P4]，m/z868(MH+)。
實施例45化合物A042-70的合成 111.1mg膦酸化二胺(經(jīng)A042-32制備)在1mL二氯甲烷中的溶液用194mg溴三甲基甲硅烷處理。5小時后，加入甲醇(1mL)，溶液攪拌1小時，除去溶劑得到113.9mg茶色固體。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法B；tR＝1.0分鐘，MS[M＝C18H37N5O13P4]m/z328[(M+2H/2)2+]]，656(MH+)。化合物還用質(zhì)子NMR光譜分析1H(CDCl3)δ7.77(d，2H，J8.1Hz)，7.43(d，2H，J8.2Hz)，4.1-3.3(m，33H)。
實施例46化合物A026-94的合成 750mg膦酸酯(經(jīng)A030-54制備在24mL二氯甲烷中的溶液用溴三甲基甲硅烷(2.89g)處理，溶液攪拌過夜。加入甲醇(10mL)，溶液攪拌2小時，除去溶劑得到黃色油，其凍干得到364mg白色固體。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法B；tR＝0.6分鐘，MS[M＝C2H9NO6P2]m/z 204[M-H]-。
實施例47化合物A042-96的合成 A042-96(叔丁基亞磷酸酯)4.10g磷酸在100mL四氫呋喃中的溶液用2-甲基-2-丙醇(7.41g)處理，加入1，3-二異丙基碳化二亞胺在二氯甲烷(100.0mL)中的1.0M溶液，導(dǎo)致形成白色固體?；旌衔飻嚢柽^夜，過濾固體，除去溶劑得到6.82g黃色油。標題化合物的存在用GC-MS證實，發(fā)現(xiàn)如下片段57[(CH3)3C+]，83[HP(OH)3+]，123[(HO)2PC(CH3)2+]。
實施例48化合物A042-98的合成 將乙醇胺(858mg)、多聚甲醛(1.05g)、叔丁基亞磷酸酯(經(jīng)A042-96制備，6.82g)在苯(100mL)中的混合物在90℃加熱過夜，得到在粘稠油上的液體。將液體傾析，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到油，它經(jīng)硅膠柱色譜法純化，使用在二氯甲烷中的10％甲醇作洗脫液，得到透明油(436mg)。標題化合物的存在用電子噴霧LC-MS證實，采用方法A，tR＝3.6分鐘，MS[M＝C20H45NO7P2]，m/z 496(MNa+)。
實施例49化合物A029-34的合成 為制備4-硫代異氰酸基苯基乙酸酯，將1.3ml(13.5mmoles，2當量)硫光氣加入懸浮在20ml無水THF中的1.0g 4-氨基苯基乙酸(6.61mmoles)[Aldrich]和3.73g無水碳酸鉀(4當量)中。懸浮液在室溫下攪拌15分鐘，隨后在硅油浴中在85℃加熱4小時。冷卻溶液，通過在過濾器洗滌器中的1英寸C鹽床層。在圓底燒瓶中收集溶液，減壓除去溶劑。
將樣品貯存在真空干燥器中2小時，隨后溶解在丙酮-水混合物中，凍結(jié)和凍干得到1.65g帶黑色固體。化合物用在LCMS色譜中保留時間位移至3.32分鐘證實。
實施例50化合物A040-22的合成 為制備4-硫代異氰酸基苯基乙酸氯甲基酯，將0.530g 4-異氰酸基苯基乙酸(2.7mmoles)在玻璃小瓶中溶解在5.0ml二氯甲烷中，向其中加入溶解在5.0ml水中的0.044g四正丁基硫酸氫銨(相轉(zhuǎn)移催化劑-0.05當量)和0.866g碳酸氫鈉(4當量)。溶液在冰浴中攪拌10分鐘，向冷混合物中加入0.520g氯甲基氯硫酸酯(ACROS Chemical-1.2當量)，攪拌4小時，溫度逐漸達到室溫。在分液漏斗中分離有機層，用10ml飽和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥。真空除去溶劑得到0.703g粗油狀物。產(chǎn)物通過在LCMS中在4.268分鐘保留時間形成新峰和相應(yīng)于原料的峰消失證實。
實施例51化合物A040-26的合成
為制備化合物1101的4-硫代異氰酸基苯基乙酸季銨鹽衍生物，將化合物1101(.300g，1.0mmole)和.582g碘化鈉(4當量)在1打蘭小瓶中溶解在4.0ml無水乙腈中。在攪拌下加入在2.0無水乙腈中的4-硫代異氰酸基苯基乙酸氯甲基酯(化合物A040-22)。混合物在硅油浴中在65℃下加熱5小時，用LCMS監(jiān)測反應(yīng)過程。當大多數(shù)化合物1101原料消耗時，反應(yīng)混合物用制備性LCMS純化，保留時間3.019分鐘，m+＝513。得到194.1mg的94％純產(chǎn)物的收率，用LCMS證實。化合物A040-26隨后與帶有親核基團靶向藥物如采用化合物1105的實施例中公開的方法制備有用的靶向前藥。
實施例52化合物A044-52的合成 為制備N-芐基-N-甲基氨基甲?；燃谆?，將0.300mg(324μL，d＝0.942)芐基甲胺和640μL二異丙基乙胺(1.5當量)溶解在2.0ml無水二氯甲烷中，在冰浴中冷卻。當溶液冷卻時，加入在2.0ml無水二氯甲烷中的330μL氯甲基氯甲酸酯(1.5當量)，攪拌2小時，逐漸使溶液達到室溫。將黃色溶液放置在分液漏斗中，用2×10ml 1NHCl、1×10ml水和2×10ml 1N碳酸氫鈉洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮。得到氯甲基氨基甲酸酯黃色油，在LCMS中證實為uv活化組分，保留時間為3.520分鐘。為制備化合物1101的N-芐基，N-甲基氨基甲?；谆句@鹽，將0.5g化合物1101和0.5g碘化鈉(20當量)在玻璃小瓶中溶解在5.0ml無水乙腈中。向溶液中加入N-芐基，N-甲基氨基甲酰基氯甲基酯，隨后放置在65℃油浴中過夜。產(chǎn)物用LCMS證實，用制備性LCMS純化得到169.5mg(理論收率的21.5％)稱為A044-52的固體，保留時間2.731分鐘，M+＝485，90％純度。
實施例53化合物A044-62合成 為制備化合物1157的N-芐基，N-甲基氨基甲?；谆句@鹽，將22mg化合物1157、20mg碘化鈉(2.0當量)和30.7mgN-芐基，N-甲基氨基甲?；燃谆?2.0當量)在玻璃小瓶中在500μl無水乙腈中混合，在65℃油浴中過夜。產(chǎn)物用LCMS證實，用制備性LCMS純化，得到5.4mg(理論收率的15.5％)化合物，保留時間2.810分鐘，M+＝483，98％純度。
實施例54化合物A044-28的合成 為制備化合物1101的芐基甲?；?1-乙基季銨鹽，在冰浴中保持0℃的玻璃小瓶中將200μL1-氯己基氯甲酸酯加入在2.0ml無水二氯甲烷中的100μL芐醇。向冷卻的溶液中加入200μL吡啶，導(dǎo)致在幾分鐘內(nèi)白色沉淀形成。持續(xù)在室溫下攪拌過夜，向混合物中加入10ml二氯甲烷，隨后用1×10ml 0.5M HCI、1×10ml水和1×10ml 0.5N碳酸氫鈉溶液洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑。芐基-1-氯己基甲酸酯作為uv活性組分確認，保留時間3.933分鐘。
向溶解在1.0ml無水乙腈中的100mg化合物1101和100mg NaI(20當量)中加入107mg(1.5當量)芐基-1-氯乙基甲酸酯?；旌衔镌?5℃加熱過夜，LCMS顯示還存在起始物質(zhì)，因而加入附加的107mg(1.5當量)芐基-1-氯乙醚甲酸酯，再持續(xù)加熱24小時。LCMS確認產(chǎn)物，它可由原料用緩慢梯度色譜法分離。所需化合物用制備性LCMS分離得到13.7mg(理論值的8.7％)化合物，保留時間為4.690分鐘，M＝+488，98.6％純度。
實施例55化合物1126的合成為制備氯甲基-叔丁基琥珀酰亞胺，將溶解在8.0ml二氯甲烷中的叔丁基琥珀酸酯(Aldrich)，2.0g在攪拌下加入在冰浴中的含有在8.0ml水中的4.0g碳酸鉀和0.24g四正丁基硫酸氫銨的玻璃小瓶中。15分鐘后，向二氯甲烷層中加入1.3mL氯甲基氯硫酸酯(Acros)，攪拌反應(yīng)混合物，溫度緩慢達到室溫。分離有機層，用1×10ml水和1×10ml飽和鹽水溶液洗滌。溶液用無水硫酸鈉干燥，減壓除去溶液。得到3g淺黃色油，稱為A047-71。
將上述3g A047-71溶解在36mL乙腈中，用1.8g化合物1101和1.8g NaI處理，放置在加熱器攪拌16小時。反應(yīng)混合物(包括沉淀物)在水和二氯甲烷間分配，分離二氯甲烷層，用鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥，蒸發(fā)得到黑色油。將油溶解在5mL乙腈中，貯存在冰箱中2天，過濾出形成的黃色沉淀，用3mL乙腈洗滌，干燥得到2.8435g＞95％純度的產(chǎn)物，稱為A046-67A，保留時間2.719分鐘，，[M+]494m/z。將所有產(chǎn)物溶解在10ml磺酰氯中，加熱到65℃4小時。真空除去過量磺酰氯，黃色油在高真空下干燥得到酰氯(化合物1111)黃色易碎固體，該固體直接用于隨后的反應(yīng)。
為偶合化合物1101酰氯和de-FMOCed RGDS肽，將1.26g化合物1111酰氯和5.6g de-FMOC除去的RGDS肽(均在真空干燥器中用五氧化二磷干燥)在氬氣下在50ml圓底燒瓶中混合。向固體中加入在28ml二氯甲烷中的270μL吡啶，將混合物振蕩以溶解酰氯。將混合物放置在軌道振蕩器上1小時，溶液通過燒結(jié)玻璃注射器排出，用2×10ml二氯甲烷洗滌，排出溶劑。向樹脂中加入500μL苯甲醚，隨后加入20ml的50/50TFA/二氯甲烷溶液。使樹脂在TFA溶液中靜置3小時，偶然振蕩。由樹脂排出TFA溶液，樹脂用10ml二氯甲烷洗滌，其與TFA溶液混合。將TFA溶液放置在用氬氣吹干的4個小瓶中，每個小瓶多次用醚洗滌處理，再次用氬氣吹干燥。產(chǎn)物用LCMS確認，在17次實驗中用制備性逆相LCMS純化。合并溶液得到163.7mg96％的純產(chǎn)物(稱為A036-33)，保留時間1.768分鐘，M+＝853和[M+H]/2427m/z。該化合物的LC-MS色譜和質(zhì)譜示于附圖7和附圖8中。在附圖7中，X軸是時間(分鐘)，Y軸用于頂部色譜是UV檢測器在254nm的毫吸收單位，用于底部色譜是用蒸發(fā)光散檢測器檢測的毫伏。在附圖8中，X軸是質(zhì)量電荷比(m/z)，Y軸是質(zhì)量離子計數(shù)的強度。
方案10
實施例56化合物A052-10合成 為制備化合物1101的鄰苯二甲酰亞氨基甲基季銨鹽，將100mg化合物1101和100mg碘化鈉(2.0當量)的混合物溶解3.0ml無水乙腈中，向混合物中加入128mg氯甲基鄰苯二甲酰基亞胺(Aldrich)，小瓶在油浴中在55℃加熱4天。產(chǎn)物用LCMS在保留時間3.984分鐘的新峰證實，M+＝467。
實施例57化合物A052-08的合成 為制備化合物1101的鄰苯二甲酰亞氨基甲基季銨鹽，將100mg化合物1101和100mg碘化鈉(2.0當量)的混合物溶解3.0ml無水乙腈中，向混合物中加入128mg氯甲基鄰苯二甲?；鶃啺罚∑吭谟驮≈性?5℃加熱4天。產(chǎn)物用LCMS證實，新峰Rf＝3.984，M+＝467。
實施例58化合物A044-78的合成 為制備化合物1101的4-羧基芐基季銨鹽，將300mg化合物1101、400mg碘化鈉和500mg氯甲基苯甲酸在玻璃小瓶中混合，懸浮在4.0ml無水乙腈中。反應(yīng)在油浴中在65℃下加熱，用LCMS監(jiān)測2周。通過裝填附加2μm填料的燒結(jié)塑料注射器過濾溶液，用制備性LCMC分離所需化合物，保留時間3.717分鐘，M+＝442。得到收率27.7mg，96％純度?；衔顰044-78的羧基通過如下方法轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性基團a)如實施例31的方法所述與N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)以制備NHS活性酯或b)如實施例56的方法所述轉(zhuǎn)化為酰氯。這些反應(yīng)性基團隨后與靶向藥物的親核胺或醇基團采用上文實施例中所述的方法反應(yīng)得到靶向前藥共軛物。
實施例59化合物A044-80的合成 為制備化合物1101的4-異氰酸基芐基季銨鹽，將300mg化合物1101、450mg碘化鈉(3.0當量)和490mg 3.0當量4-氯甲基苯異氰酸酯的混合物溶解在4.0ml無水乙腈中，在油浴中在65℃下加熱2天，LCMS顯示反應(yīng)進行完全，因為不存在原料(化合物1101)。產(chǎn)物用保留時間4.577分鐘的新峰證實，M+＝439。用采用化合物1105和A040-26的實施例的方法，化合物A044-80各種靶向藥物的親核基團反應(yīng)得到靶向藥物。
實施例60化合物A044-4的合成。
為制備化合物1101的新戊?；谆句@鹽，將新戊酰基氯(2.0當量)滴加到100mg化合物1101和100mg碘化鈉(2.0當量)在2.0ml無水乙腈中的混合物中?；旌衔镌谟驮≈性?5℃下加熱2小時。通過裝填附加2μm填料的燒結(jié)塑料注射器過濾固體，用制備性LCMS證實和分離固體。得到黃色固體，保留時間2.735分鐘，M+＝422。得到收率102.3mg，純度93.7％。
實施例61化合物A040-70的合成
為制備化合物1101的乙酰氧基甲基季銨鹽，將1.0g化合物1101在玻璃小瓶中溶解在10ml無水乙腈中，加入1.0g溴甲基乙酸酯(2.0當量)，在室溫下攪拌過夜。LCMS顯示存在原料，因此反應(yīng)在65℃油浴中加熱8小時，由固體傾析母液，固體用少量冷乙腈洗滌。固體在真空干燥器中干燥過夜，產(chǎn)物為264mg白色固體，用2.204分鐘的保留時間證實，M+＝380，97％純。該化合物被發(fā)現(xiàn)具有非常高的水溶性；通過將27mg化合物溶解在pH約4的1.865mL磷酸鹽緩沖鹽水中制備化合物在磷酸鹽緩沖鹽水中的32.5毫摩爾溶液。將該溶液的50μL等分樣品(含有1.625μMoles化合物1101前藥)注射在無處理的小鼠的尾靜脈中，未觀察到不適結(jié)果，說明前藥形式?jīng)]有毒性。而注射1.04μMole化合物1101導(dǎo)致3只小鼠立即死亡。此外，用口服填喂法，向無處理小鼠給藥，250μL化合物A040-70的32.5mM溶液。在5、15和30分鐘后，得到40μL小鼠血液，用LC-MS(在用乙腈提取后)分析顯示前藥A040-70和化合物1的結(jié)合血液含量在各自的時間點為1.8、4.97和4.80毫摩爾。該結(jié)果說明了在體內(nèi)來自前藥的活性藥物的口服生物利用度。氯化物鹽如下得到通過將化合物A040-70溶解在少量水中，通過陰離子交換樹脂床，例如由Aldrich得到的Dowex22(氯化物形式)，隨后用水洗滌，凍干合并的洗脫液得到具有與溴離子交換的氯離子的固體。
實施例62制備用于非離子水溶性的帶有聚氧乙烯的前藥 將78mg部分的化合物1與76mg NaI一起溶解在2mL乙腈中，用144mg氯甲基酯A029-62處理，在65℃攪拌5小時。反應(yīng)用逆相LC-MS純化得到72mg(51％收率)黃色固體A027-85，保留時間2.30分鐘，由具有如預(yù)期的C30H38NO9顯示的M+＝556質(zhì)譜表征。將少量樣品加入pH＝7.4的磷酸鹽緩沖液中，用LC-MS隨時間跟蹤，基本部分的前藥轉(zhuǎn)化回化合物，估計的轉(zhuǎn)化半衰期為約3小時。
實施例63制備化合物1的骨靶向藥物將在水中的20μL部分的75mMolar A042-70(1.5μMoles)加入含有500mMolar磷酸鹽緩沖液的小瓶中(11個小瓶具有從3.0-8.0，以0.5單位增加的不同pH)。在混合后，每個小瓶用在乙腈中的50μL60μMolar化合物1111(相對于骨靶向藥物，3.0μMoles＝2當量)，振蕩混合。1小時后，將每個小瓶的3μL等分樣品注射入HPLC，測定原料和所需產(chǎn)物，水解產(chǎn)物，化合物1101的UV峰面積。僅pH在6、6.5、7、7.5和8的樣品被發(fā)現(xiàn)具有明顯數(shù)量的所需骨靶向藥物A046-89P(保留時間2.50分鐘；[M+]1075m/z，C42H59N6O19P4)，還發(fā)現(xiàn)[M+2]/2＝538m/z)。此實施例說明在這些條件下用于合成骨靶向前藥的最佳pH為pH＝7.0，其得到帶有4個膦酸基團的化合物1的所需骨靶向前藥的理論收率的42％。相同溶液在pH＝7.0靜置24小時后分析顯示，靶向前藥完全轉(zhuǎn)化回化合物1，表明在生物相應(yīng)條件下的可逆性。
實施例64化合物1126對非小細胞肺癌的體內(nèi)效力將4-6周齡體重給的雄性無處理小鼠在0天在右側(cè)腹皮下接種5million腫瘤細胞(人體非小分子肺癌細胞H1299)。在腫瘤生長14天后，將動物分成3組，每組5個動物。一組僅接受載體對照，另一組每天兩次尾靜脈注射(i.v)50μL體積的24.4mmolar化合物1126在磷酸鹽緩沖鹽水中的溶液，劑量水平相當于25mg/kg/天的前藥(即化合物1)的活性組分，最后一組每天兩次尾靜脈注射(i.v)50μL體積的4.9mmolar化合物1126在磷酸鹽緩沖鹽水中的溶液，劑量水平相當于5mg/kg/天的前藥(即化合物1)的活性組分。每3天用測徑器測量腫瘤以確定腫瘤體積，記錄動物在27天殺死時的動物體重。結(jié)果顯示于表7中，相對于對照組，在治療(17天)后僅3天的第一數(shù)據(jù)點對于兩個劑量水平顯示強腫瘤體積下降，并持續(xù)至研究結(jié)束。
表7
*與僅使用載體的對照動物相比每天兩次劑量在超過兩周的給藥周期內(nèi)是可忍受的，如上效力結(jié)果還說明在對照組和兩個治療組之間動物體重方面沒有統(tǒng)計學上的明顯差異，其作為總毒性的一般量度標準，表示靶向前藥具有合乎需要的沒有毒性。
實施例65化合物1126對腦癌的體內(nèi)效力按上述實施例所述進行動物研究，只是使用人體腦癌細胞系(U87MG)，治療在第7天開始，因而在第10天進行第一次腫瘤體積測量。化合物1126對該癌細胞系的結(jié)果顯示于表8中，顯示效力和合乎需要的沒有毒性。
表8
*與僅使用載體的對照動物相比實施例66αv靶向PI3激酶抑制劑取消EDC-CBF1內(nèi)皮細胞在Matrigel上的管形成管形成在一定程度上代表體內(nèi)血管生成的形成。在本實施例中，測定PI3激酶抑制劑(包括靶向PI3激酶抑制劑前藥)能夠抑制血管形成的程度。將Matrigel涂在12孔板上，在37℃固化2小時。在PBS、RADfW(環(huán)狀負控制肽)、RGDfV(環(huán)狀正控制肽)、RADS(直鏈負控制肽)、化合物或化合物1126存在下，1×105EDC-CBF1內(nèi)皮細胞以20°M濃度放置在Matrigel層的頂部過夜，用顯微鏡獲取圖象。在PBS對照孔(附圖的頂部左側(cè)面板)可看到充分形成的管。與PBS對照相比，含有RGDfV、RADfV或RGDS的孔沒有很大差異，在含有化合物1101和化合物1126的孔中管形成明顯較少。
實施例67在NBEC中靶向PI3激酶抑制劑誘導(dǎo)p53轉(zhuǎn)錄活性本實驗測試PI3激酶抑制劑(化合物1和化合物的靶向前藥形式；化合物1126)對誘導(dǎo)p53熒光素酶活性的效果。轉(zhuǎn)染方法類似于在監(jiān)測p53轉(zhuǎn)錄的文獻中描述的方法。與對照組相比，化合物1(6小時暴露)誘導(dǎo)超過兩倍的熒光素酶活性，化合物1的靶向形式(化合物1126)具有更好的誘導(dǎo)p53熒光素酶的能力(幾乎達到3倍)。p53功能的誘導(dǎo)說明了p53抑制劑，20μM濃度的pifithrinα的取消。通過這些化合物誘導(dǎo)的催化活化Akt的共同轉(zhuǎn)染也抑制了p53功能。此結(jié)果顯示PI3激酶抑制劑誘導(dǎo)的p53轉(zhuǎn)染在整個信號級別中是Akt的下游，靶向前藥化合物1126相對于非靶向藥物化合物給出提高的p53誘導(dǎo)。
實施例68化合物1126的純化從反應(yīng)混合物A044-84(2.33g)稱重出0.33g單獨的樣品，在制備性色譜法之前立即溶解在含有按體積計1份乙腈、按體積計1份水和按體積計1％乙酸的800μl溶液中，每次注射400μl溶液用于制備性色譜法。泵A洗脫液是加入0.1％乙酸的B&J水(365-4)，泵B洗脫液是加入0.1％乙酸的B&J乙腈(015-4)。最初洗脫液是10％B，隨后在4分鐘時間內(nèi)直線上升至34％B，隨后在4.25分鐘時直線上升至95％B，保持至5.25分鐘，隨后在5.50分鐘時直線下降回起始10％B?？偙昧髁渴欠昼姟Ｔ谧詣尤悠魅佑糜谙乱辉囼灂r系統(tǒng)保持重新平衡。使用該梯度，在3.37分鐘時洗脫出具有正質(zhì)譜峰853(m/z＝1)和427(m/z＝2)的產(chǎn)物。在信號檢測ELSD超過10mv時在制備性色譜法試驗期間收集餾分。含有產(chǎn)物的餾分用兩倍以上的水(按體積計)稀釋，在收集后立即用干冰-丙酮酮在凍干容器中冷凍。在凍干24-48小時后，得到總共180mg化合物1126，白色蓬松固體，純度95％。該實施例說明用仔細地pH控制，不穩(wěn)定的前藥化合物1126可用水基逆相分離方法以高純度分離。
實施例69SCN-反應(yīng)性前藥的制備 將如實施例20的方法制備的184mg部分A014-48溶解在12mL乙腈中的154mg化合物1中，在室溫下攪拌。16小時后，LC-MS顯示約65％轉(zhuǎn)化為所需的季銨化合物，因而加入45mg附加的碘化合物，再經(jīng)22小時后，反應(yīng)進行到80％完成，因而加入40mg附加的碘化合物，使其攪拌24小時。隨后離心固體，用乙腈洗滌得到282.6mg(45％收率)所需高純度產(chǎn)物，作為化合物COMPOUND 1105，對C28H23N2O5S，用2.89保留時間分鐘和顯示所需499的M+表征。
在甲醇中靜置時，化合物1105清潔地與甲醇反應(yīng)得到化合物A013-94，對于C29H27N2O6S，保留時間為2.78分鐘，預(yù)期的M+為531。這說明硫代異氰酸基前藥與醇反應(yīng)得到共軛于連接基團的氨基甲酸酯。
硫代異氰酸酯中間體前藥還與包括仲胺的各種胺在二氯甲烷中(優(yōu)選在三乙胺存在下)反應(yīng)得到脲產(chǎn)物，例如A017-55(C35H38N3O7S，保留時間為2.84分鐘，所需M+為644m/z)；A017-57(C33H34N307S，保護時間為2.46分鐘，顯示616m/z的所需M+)；和A027-15(C38H48N3O11P2S，保留時間為2.82分鐘，顯示816m/z的所需M+)。這些實施例說明硫代異氰酸酯前藥與親核試劑的不同基團以良好收率反應(yīng)得到所需連接產(chǎn)物。A017-55進一步與三氟乙酸反應(yīng)，其在叔丁基斷裂中意外地得到環(huán)狀化合物A017-59(C31H28N3O6S，保留時間為2.47分鐘，顯示570m/z的所需M+)。此實施例說明在前藥化合物的連接基團上可進行附加的化學。在pH＝7.4的磷酸中，用LC-MS跟蹤，明顯數(shù)量的該化合物在17小時時間內(nèi)轉(zhuǎn)化回化合物。
實施例70化合物對靶向前藥的急性毒性在三個無處理小鼠中以16mg/kg的劑量水平靜脈給藥化合物經(jīng)測定在給藥5分鐘內(nèi)具有100％的死亡率。用實施例56的方法制備的化合物1126，在三個小鼠中以37％較高劑量水平(22mg/kg)靜脈注射時，即使在觀察1小時后，顯示0％死亡率。此實施例說明了化合物1前藥改善的配制能力和前藥減少的毒性。
實施例71化合物1的類似物
在中間體A046-67SM的制備過程中，例如如實施例56中化合物1126所述，觀察到副反應(yīng)。該物質(zhì)用LC-MS純化得到單一化合物A037-94，用質(zhì)子NMR與建議的結(jié)構(gòu)一致，得到保留時間為3.00分鐘，質(zhì)譜顯示預(yù)期的338m/z的預(yù)期[M+H]+(非常低數(shù)量)和在379m/z更顯著的質(zhì)量[M+H+41(ACN)]。此實施例說明適用于附加前藥改性的化合物1新類似物的分離。
實施例72在小鼠中使用前藥輸送化合物1小鼠皮下注射百萬非小細胞肺癌細胞(H1299)，使其生長約7天直到腫瘤質(zhì)量約10-15mm乘以7-9mm直徑。動物注射靶向前藥，化合物1126，或者i.v.(50uL)或者i.p.(50uL)在磷酸鹽緩沖鹽水中的化合物1126的32.6mMolar溶液。60分鐘后，殺死小鼠，取出腫瘤。獲得三小片腫瘤，并切碎。在陳化24小時后使所有前藥轉(zhuǎn)化為化合物后，腫瘤樣品用乙腈提取。用LC-MS定量顯示在I.P注射的腫瘤片中可提取的化合物1濃度(作為游離化合物1和由化合物1126衍生的總和)為157±7nanomolar，在I.V.注射的腫瘤片中為271±7nanomolar。這實施例說明使用靶向前藥化合物1向腫瘤組織的輸送。
實施例73前藥形成化合物1的可逆性將前藥化合物溶解在水或DMSO(如果不能直接溶解于水)中，隨后在pH＝7.4或pH＝4.8的50mM磷酸緩沖液中稀釋至少10倍，在室溫下靜置?；衔镌诤h(huán)境中的最終濃度為50-500μMolar。隨時間取出等分樣品，用LC-MS分析以確定前藥的消失和證實藥物(化合物1)的出現(xiàn)?；衔?126被發(fā)現(xiàn)在pH＝7.5具有約1小時的半衰期，在pH＝4.8有約64小時的半衰期?；衔?110被發(fā)現(xiàn)在pH＝7.4具有約10小時的半衰期，在pH＝4.8有約120小時的半衰期?；衔顰040-70被發(fā)現(xiàn)在pH＝7.4具有約10小時的半衰期。這些實施例說明前藥化學轉(zhuǎn)化為藥物(化合物1)和前藥的消失與pH是非常有關(guān)的，在生理學pH下轉(zhuǎn)化發(fā)現(xiàn)得更快，在酸性pH下明顯較慢。
實施例74腫瘤定位共軛物的合成帶有親電基團的化合物(例如化合物A036-48B、1105、1107、1111、A024-79和1113)可與帶有親核基團，例如醇、氨基和硫醇基團的聚合物反應(yīng)。分子量2000-100000的N-(2-羥基丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)與過量化合物1111在非質(zhì)子有機溶劑，例如二氯甲烷或四氫呋喃在三乙胺或二異丙基乙胺存在下反應(yīng)，隨后通過尺寸排除色譜法、超濾或在另一溶劑，例如甲醇或醚中沉淀分離。由此沉淀或分離的聚合物基本上沒有1111，用作腫瘤定位共軛物，它在腫瘤的附近隨時間釋放活性化合物1，產(chǎn)生抗腫瘤和抗血管生成作用。同樣，聚谷氨酸可通過羧酸與過量二胺使用碳化二亞胺偶合反應(yīng)，隨后通過尺寸排除色譜法或逆相HPLC純化得到聚谷氨酸的聚親核形式轉(zhuǎn)化為聚帶有親核基團。這些聚合物隨后直接與過量部分的化合物1111或1105或A036-48B或A024-79在非質(zhì)子有機溶劑，例如二氯甲烷或四氫呋喃在三乙胺或二異丙基乙胺存在下反應(yīng)，隨后通過尺寸排除色譜法、超濾或在另一溶劑，例如甲醇或醚中沉淀分離。由此沉淀或分離的聚共軛聚合物基本上沒有低分子殘余前藥，用作腫瘤定位共軛物，它在腫瘤的附近隨時間釋放活性化合物1，產(chǎn)生抗腫瘤和抗血管生成作用。
權(quán)利要求
1.含有季銨氮的前化合物，其中季銨氮的一個鍵是可水解的，在所述鍵水解后得到下式化合物 其中，R1和R2分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、羥基、鹵素、烷氧基、雜環(huán)、氰基、氨基，或連接在一起形成任選取代的環(huán)脂族基團或任選取代的芳基；R3表示H、任選取代的脂族基團和任選取代的芳基；和R4和R5分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、雜環(huán)、芳氧基、羧基或連接在一起形成任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1-環(huán)A-R2選自如下基團 和
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R4-N-R5選自如下基團 和
4.下式的化合物 其中環(huán)A是苯并；Z1和Z2分別是S或O；R1和R2分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、羥基、鹵素、烷氧基、雜環(huán)、氰基、氨基，或連接在一起形成任選取代的環(huán)脂族基團或任選取代的芳基；R3表示H、任選取代的脂族基團和任選取代的芳基；R4和R5分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、雜環(huán)、芳氧基、羧基或連接在一起形成任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基；R6表示H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、烷氧基、羧基、氨基、雜環(huán)、芳氧基，并且被靶向藥物任選取代；和L表示連接基團。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R1-環(huán)A-R2選自如下基團 和
6.權(quán)利要求4的化合物，其中R4-N-R5選自如下基團 和
7.權(quán)利要求4的化合物，其中R6選自如下基團
8.下式的化合物 其中環(huán)A是苯并；Z1、Z2、Z3和Z4分別是S或O；R1和R2分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、羥基、鹵素、烷氧基、雜環(huán)、氰基、氨基，或連接在一起形成任選取代的環(huán)脂族基團或任選取代的芳基；R3表示H、任選取代的脂族基團和任選取代的芳基；R4和R5分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、雜環(huán)、芳氧基、羧基或連接在一起形成任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基；R6表示H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、烷氧基、羧基、氨基、雜環(huán)、芳氧基，并且被靶向藥物任選取代；和R7表示-CH2-、CH(CH3)-、-CH(Ph)-、-C(CH3)(COOH)-或CH(CH(CH3)2)-。
9.權(quán)利要求8的化合物，其中R1-環(huán)A-R2選自如下基團 和
10.權(quán)利要求8的化合物，其中R4-N-R5選自如下基團 和
11.權(quán)利要求8的化合物，其中R6選自如下基團
12.權(quán)利要求8的化合物，其中在R7和季胺之間的鍵是可水解的。
13.下式的化合物 其中環(huán)A是苯并；Z1和Z2分別是S或O；R1和R2分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、羥基、鹵素、烷氧基、雜環(huán)、氰基、氨基，或連接在一起形成任選取代的環(huán)脂族基團或任選取代的芳基；R3表示H、任選取代的脂族基團和任選取代的芳基；R4和R5分別是H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、雜環(huán)、芳氧基、羧基或連接在一起形成任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基；R6表示H、任選取代的脂族基團、任選取代的芳基、烷氧基、羧基、氨基、雜環(huán)、氧基，并且被靶向藥物任選取代；和R7表示-CH2-、CH(CH3)-、-CH(Ph)-、-C(CH3)(COOH)-或CH(CH(CH3)2)-；T表示靶向藥物。
14.權(quán)利要求13的化合物，其中R1-環(huán)A-R2選自如下基團 和
15.權(quán)利要求13的化合物，其中R4-N-R5選自如下基團 和
16.權(quán)利要求13的化合物，其中R6選自如下基團
17.權(quán)利要求13的化合物，其中靶向藥物選自維生素、肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)體、骨搜尋試劑和軟骨搜尋試劑。
18.權(quán)利要求17的化合物，其中維生素是葉酸鹽或維生素C。
19.權(quán)利要求17的化合物，其中肽是選自RGDs、c(RGDfK)、玻璃體結(jié)合蛋白、纖維結(jié)合素、生長激素抑制素受體激動劑和生長激素受體拮抗劑的含RGD肽。
20.權(quán)利要求17的化合物，其中蛋白質(zhì)是腫瘤特異單克隆抗體或其片斷。
21.權(quán)利要求17的化合物，其中骨搜尋試劑選自膦酸酯、膦酸、氨基甲基膦酸、磷酸酯、多磷酸酯和羥基磷灰石結(jié)合多肽。
22.權(quán)利要求17的化合物，其中骨搜尋試劑是EDTMP、DOTMP、ABDPMP、BAD、MTX-BP、CF-BP、(Asp)6、(Glu)6、阿侖磷酸鹽、帕米磷酸鹽、4-氨基丁基膦酸、1-羥基乙烷-1，1-二膦酸、氨基亞甲基二膦酸、肌醇六磷酸和N，N-二(甲基膦?；?-4-氨基苯甲酸。
23.下式的化合物 其中X表示鹵素基團；Y表示-CH2-、CH(CH3)-、-CH(Ph)-、-C(CH3)(COOH)-或CH(CH(CH3)2)-；Z1和Z2分別是S或O；和n是0-1。
24.權(quán)利要求23的化合物，其中X表示Cl或I；Y表示-CH2-、CH(CH3)-、-CH(Ph)-、-C(CH3)(COOH)-或CH(CH(CH3)2)-；Z1和Z2分別是S或O；和n是0。
25.權(quán)利要求23的化合物，其中X表示Cl或I；Z1和Z2分別是0；和n是1。
26.純化權(quán)利要求1-21任何之一的化合物的方法，其包括(a)將含有所述化合物的組合物加入溶液，其中所述溶液含有至少0.1％(v/v)的酸；(b)將含有所述化合物的(a)的溶液加入色譜法系統(tǒng)；和(c)分離所述化合物。
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述色譜法系統(tǒng)是HPLC。
28.治療患有與PI-3激酶活性有關(guān)的癥狀的患者的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
29.治療炎性疾病的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
30.權(quán)利要求28的方法，其中所述組合物還含有一種或多種附加治療藥物。
31.權(quán)利要求30的方法，其中一種或多種附加治療藥物選自烷基化試劑、抗代謝物、天冬酰胺酶、長春新堿、長春堿、蒽環(huán)類抗生素、微管分配藥物、紫衫醇、herceptin、gemcitabine、依托泊甙。
32.在患者中誘導(dǎo)細胞凋亡的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的合有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
33.提高腫瘤細胞化學敏感性的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
34.提高腫瘤細胞放射敏感性的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
35.抑制腫瘤誘導(dǎo)的血管生成的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
36.抑制與非癌癥疾病有關(guān)的血管生成過程的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
37.治療胰腺炎的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
38.治療潰瘍的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
39.治療胃癌的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
40.治療肝癌的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
41.改善斯滕特固定膜性能的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
42.治療與年齡有關(guān)的黃斑變性(AMD)的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
43.治療與突變異種PTEN的癥狀的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
44.治療高血壓的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物。
45.分裂白細胞功能的方法，其包括使白細胞與有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物接觸。
46.抑制遠祖細胞分化，其包括使遠祖細胞與有效量的含有權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物的組合物接觸。
47.抑制哺乳動物全細胞中磷脂酰肌醇3-激酶的方法，其包括向需要的患者給藥權(quán)利要求1-21的任何之一的化合物。
48.權(quán)利要求47的方法，其中所述給藥是通過緩慢靜脈輸液。
全文摘要
本發(fā)明提供了PI－3激酶抑制劑的新前藥，新化合物是含有可逆季胺的LY294002和其類似物。
文檔編號A61K31/535GK1826331SQ200480009226
公開日2006年8月30日 申請日期2004年4月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月3日
發(fā)明者約瑟夫·R·加里奇, 唐納德·L·德登, M·帕特森, 蘇敬東, R·G·敘爾 申請人:塞馬福爾藥業(yè)公司