專利名稱：紫金標(biāo)提取物在制備抗病毒及抗菌藥物方面的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種純中藥植物提取物的用途，尤其是涉及紫金標(biāo)植物提取物在制備抗病毒及抗菌藥物方面的用途。
背景技術(shù)：
紫金標(biāo)(ceratostigma minus)為藍(lán)雪科紫金標(biāo)屬小灌木，分布于我國西南地區(qū)，其中又以西藏自治區(qū)資源最為豐富。
據(jù)《架棚中酚類化合物的研究》——《植物學(xué)報(bào)》1998，40(11)1035-1039及《架棚化學(xué)成分的研究》——《云南植物研究》1994，16(181-84)等相關(guān)文獻(xiàn)的記載，紫金標(biāo)化學(xué)成份的分離、結(jié)構(gòu)鑒定主要采用的方法如下將紫金標(biāo)干燥粉未用95％乙醇浸提得到浸膏后，分別用石油醚、乙醇乙酯、正丁醇、己烷萃取，通過一定的層析溶劑配比、一系列新型分離材料(如RP-18、MCI-gel CHP20P等)及現(xiàn)代波譜技術(shù)(如1HNMR、13CNMR等)和化學(xué)方法，共得到23個(gè)化合物，它們是plumbasidesA-C、plumbocatechinsA和B、麥芽酚甙plumbolactoneA、maltol-0-glucoside、藍(lán)雪醌plumbagin、槲皮素quercetin、楊梅黃素myricetin、異槲皮甙quercetin3-0-glucoside、楊梅甙myricetin-3-0-rhamnoside、藍(lán)雪酸plumbagic acid、isoshinanolone、epiisoshinanolon、N-trans-caf feoytyramine、N-trans-furuloyltyramine、香莢蘭乙酮apocynin、香莢蘭酸vanillic acid、丁香酸syringic acid、沒食子兒茶精gallocatechin、(+)-兒茶精(+)-atechin和1，2，6-三-O-沒食子酰葡萄糖1，2，6-tri-o-galloylglucoside，其中藍(lán)雪醌plumbagin與藍(lán)雪酸plumbagic acid是主要成份。
雖然紫金標(biāo)入藥在民間就有悠久的歷史，除在公元17世紀(jì)的藏醫(yī)名著《晶珠本草》中有記載外，在《中醫(yī)藥大辭典》(1988)、《中藥大辭典》(1979)、《云南中草藥選》(1970)、《藏藥志》(1996)、《西藏常用中草藥》(1971)、《全國中草藥名鑒》(1996)等書中亦有對其用途的描述，即紫金標(biāo)具有通經(jīng)活絡(luò)、祛風(fēng)濕、消炎止痛、續(xù)筋接骨之功效，主要用于治療風(fēng)濕病、跌打損傷、骨折、脈管炎、腮腺炎、慢性腰腿痛、月經(jīng)不調(diào)、頭痛頭暈等。同時(shí)，通過西藏自治區(qū)重點(diǎn)科研項(xiàng)目(1998-71)對紫金標(biāo)浸膏的抗炎、鎮(zhèn)痛、止血作用模型的研究發(fā)現(xiàn)紫金標(biāo)浸膏具有抑制小鼠耳水腫、抑制小鼠熱板反應(yīng)的效應(yīng)及縮短小鼠斷尾出血時(shí)間與凝血時(shí)間的作用，從而進(jìn)一步證明了紫金標(biāo)在祛風(fēng)濕、消炎止痛、止血等方面的作用。但是，紫金標(biāo)具有抑制病毒基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)譯等多環(huán)節(jié)的作用卻未曾見國內(nèi)外報(bào)道。
目前臨床應(yīng)用的抗病毒藥物雖然較多，但大多為核苷類衍生物，如ACV等，其作用靶點(diǎn)為病毒DNA聚合酶，它們以酶反應(yīng)底物類似物的形式與正常底物競爭，直接降低或阻斷病毒DNA聚合酶活性，其共同的缺點(diǎn)是易產(chǎn)生耐藥毒株，抗病毒譜窄，毒副作用大，價(jià)格高昂或藥理特性不理想。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供紫金標(biāo)植物提取物在制備抗病毒及抗菌藥物方面的用途。本發(fā)明對中藥紫金標(biāo)發(fā)揮了新的醫(yī)療用途，開辟了一個(gè)新應(yīng)用領(lǐng)域，與現(xiàn)有合成藥相比不但具有低毒高效的優(yōu)點(diǎn)，而且還兼有抗病毒和抗菌的雙重作用，其安全可靠，藥效作用強(qiáng)，有很好的藥用前景，且紫金標(biāo)原料豐富、價(jià)廉、萃取工藝簡單、制成中成藥成本低，并可做成各種劑型。
為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下本發(fā)明的特征在于紫金標(biāo)植物提取物在制備抗病毒及抗菌藥物方面的用途。
所述紫金標(biāo)植物提取物在制備抗病毒及抗菌藥物中以單味或者復(fù)方方式應(yīng)用。
所述紫金標(biāo)植物提取物以其抑制病毒基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)譯等多環(huán)節(jié)的方式作為在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
所述紫金標(biāo)植物提取物在制備抗病毒和抗菌雙重功效藥物中的應(yīng)用。
所述的紫金標(biāo)提取物以軟膠囊、或硬膠囊、或滴丸、或片劑、或分散片、或顆粒劑、或注射液、或口服液、或栓劑經(jīng)口服或皮膚或粘膜或直腸方式給藥。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、紫金標(biāo)為純中藥，其入藥的安全性很高；2、具有明顯抗HSV-1(單純皰疹病毒I型)的作用；3、抑菌、抗菌作用強(qiáng)，尤其對金黃色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌耐藥株、流感嗜血桿菌等有良好的抑制和殺滅作用；
4、具有抗病毒和抗菌的雙重作用，有很好的藥用前景；5、原料豐富、價(jià)廉、萃取工藝簡單、制成中成藥成本低，并可做成各種劑型。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1無機(jī)及有益成份含量分析將粉碎處理后的紫金標(biāo)樣品，用日立L-8800型氨基酸自動(dòng)分析儀測試其氨基酸種類及含量值(W％)；同時(shí)參照國家衛(wèi)生部的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對紫金標(biāo)樣品的脂肪、總糖、礦物質(zhì)(鐵、鉛、鎂、鈣、鋅、汞、銅、砷)含量進(jìn)行測定。
結(jié)果表明，受檢紫金標(biāo)樣品中共含有18種常見氨基酸，其中以甘氨酸含量最高，達(dá)1.25E+00(單位W％)，含總糖28.3％、脂肪1.52％、鈣221.4mg/kg、鎂62.0mg/kg、鋅0.70mg/kg、銅0.50mg/kg、鐵5.42mg/kg，而有害成份的含量卻十分低，其中鉛＜0.10mg/kg、砷＜0.53mg/kg、汞＜0.01mg/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于國家保健(功能)食品通用標(biāo)準(zhǔn)GB16740-1997中規(guī)定的鉛、砷、汞在固體產(chǎn)品中的含量分別不超過2.0mg/kg、1.0mg/kg、0.3mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)。表明紫金標(biāo)入藥的安全性很高。
實(shí)施例2小白鼠急性毒性試驗(yàn)取20只小鼠，每日一次用紫金標(biāo)浸膏灌胃150g/kg(相當(dāng)于原生藥含量)，觀察給藥7日內(nèi)動(dòng)物的中毒情況。結(jié)果表明動(dòng)物在給藥15分鐘后出現(xiàn)行動(dòng)減慢、嗜睡現(xiàn)象，約4小時(shí)恢復(fù)正常。試驗(yàn)期間動(dòng)物未出現(xiàn)死亡。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)解剖動(dòng)物肉眼觀察亦無明顯異常，測得小鼠一次灌胃紫金標(biāo)醇提物最大耐受量相當(dāng)于原生藥150g/kg，此劑量相當(dāng)于臨床用藥量(按每個(gè)人所用原生藥克數(shù)，每人50kg計(jì))的600倍以上，表明其毒性較小。
實(shí)施例3抗菌藥效學(xué)研究試驗(yàn)采用MH肉湯培養(yǎng)基，將紫金標(biāo)浸膏作連續(xù)稀釋成1∶2～1∶128的濃度后，再分別加入到相應(yīng)的各菌株的培養(yǎng)基中，觀測培養(yǎng)基中有無細(xì)菌生長，可以測定出最小抑菌濃度(MIC)。然后，把無細(xì)菌生長的培養(yǎng)基液，轉(zhuǎn)種到平板培養(yǎng)基，觀測平板培養(yǎng)基中有無細(xì)菌生長，可以測定出最小殺菌濃度(MBC)。
結(jié)果表明紫金標(biāo)浸膏在抗菌方面表現(xiàn)出了較強(qiáng)的作用，對金黃色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌耐藥株、流感嗜血桿菌等有良好的抑制和殺滅作用，其抑菌MIC、MBC分別達(dá)1∶32及1∶16。
實(shí)施例4抗病毒藥效學(xué)研究試驗(yàn)1、體外藥效學(xué)試驗(yàn)以HSV-1攻擊Vero細(xì)胞為細(xì)胞模型，采用CPE抑制法和MTT法研究了紫金標(biāo)流浸膏的體外抗HSV-1的藥物效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)證明紫金標(biāo)與ACV對HSV-1的治療指數(shù)無顯著性差異，同時(shí)用透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)用625mg·L-1的紫金標(biāo)給藥后病毒被明顯抑制。體外試驗(yàn)表明紫金標(biāo)控制在無毒劑量范圍時(shí)有抗HSV-1效果，劑量越大作用越明顯，并且有直接殺滅病毒顆粒、阻斷病毒侵入細(xì)胞和抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的作用。
2、體內(nèi)藥效學(xué)試驗(yàn)通過對小鼠進(jìn)行HSV-1的角膜局部接種、尾靜脈全身接種制成兩種HSV-1致病模型。
A、單純皰疹性角膜炎模型用4號針頭在小鼠右眼角膜上皮劃“#”字，滴HSV-1病毒懸液(TCID50＝105)1滴，閉眼按摩30s，左眼對照，每日滴藥3次。接種36h后，滴加2％熒光素，用放大鏡觀察角膜病變情況。每日記錄角膜病變面積。
B、小鼠尾靜脈接種HSV-1感染模型70只小鼠分為七組，每組10只。試驗(yàn)組從尾靜脈注射HSV-1后，第二天開始皮下注射紫金標(biāo)藥液，共治療10天；分別于接種后的第2、4、8、12、16、20、30天每組處死1只，于無菌條件下取肝臟、腎臟、脾臟、心臟和腦組織。臟器組織一部分放入10％福爾馬林溶液中，用來做常規(guī)病理組織切片(HE染色)。無毒劑量的紫金標(biāo)可不同程度減輕臟器的病理變化，高劑量組(0.3g/kg/d)明顯減少或消除臟器內(nèi)的病毒抗原。實(shí)驗(yàn)表明紫金標(biāo)可減輕臟器的病理變化，明顯減少或消除臟器內(nèi)的病毒抗原。
通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，紫金標(biāo)稀釋液滴眼的劑量為0.2mg/只/天時(shí)病變面積減少緩慢；劑量為0.4mg/只/天病變面積減少較快；用最大無毒劑量0.8mg/只/天來治療，病變面積減少最快，其療效僅比ACV滴眼藥略微遜色。說明紫金標(biāo)對HSV-1局部感染同樣有效，對皰疹性角膜炎有治療作用。由此說明紫金標(biāo)對病毒HSV-1有明顯的對抗作用，其效果與傳統(tǒng)抗病毒藥物無環(huán)鳥苷1mg.ml-1相似。雖然紫金標(biāo)為有毒中藥，但當(dāng)其小鼠皮下注射的劑量低至0.3g/kg/d時(shí)，臨床和病理方面均未出現(xiàn)異常，由此提示紫金標(biāo)在抗病毒領(lǐng)域具有一定的開發(fā)應(yīng)用前景。
實(shí)施例5藥理學(xué)試驗(yàn)1996年Montgomery[10]等人證實(shí)了易感細(xì)胞表面特異性受體HVEM直接與HSV-1糖蛋白gD特異結(jié)合介導(dǎo)HSV進(jìn)入宿主細(xì)胞。本試驗(yàn)通過自制的對應(yīng)于HSV-1糖蛋白gD基因序列的DNA探針，進(jìn)行了斑點(diǎn)雜交和Northern雜交，發(fā)現(xiàn)了不同濃度的紫金標(biāo)對HSV-1糖蛋白gD基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的影響，同時(shí)經(jīng)RT-PCR和細(xì)胞靶片的原位雜交對其作了進(jìn)一步的驗(yàn)證。
A、蝕斑法證實(shí)用625mg·L-1紫金標(biāo)預(yù)處理細(xì)胞，可顯著抑制HSV-1對Vero細(xì)胞的吸附；掃描電鏡進(jìn)一步證實(shí)用625mg·L-1紫金標(biāo)預(yù)處理細(xì)胞，可顯著抑制HSV-1對Vero細(xì)胞的吸附。
B、自制地高辛gD基因DNA探針進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，結(jié)果顯示紫金標(biāo)對HSV-1gD基因復(fù)制有抑制作用；根據(jù)細(xì)胞DNA與HSV-1DNA浮力密度不同，進(jìn)一步用氯化銫密度梯度法與3H-TdR摻入法直觀證實(shí)隨著紫金標(biāo)濃度的增加，HSV-1DNA峰逐步降低，40mg·L-1的紫金標(biāo)可64.88％抑制HSV-1DNA的合成，625mg·L-1的紫金標(biāo)可96.54％抑制HSV-1DNA的合成，由此說明紫金標(biāo)對HSV-1DNA的合成有明顯的選擇性抑制作用。
RT-PCR和Northern雜交的結(jié)果均顯示紫金標(biāo)能夠抑制HSV-1糖蛋白gD mRNA的表達(dá)。細(xì)胞靶片的原位雜交結(jié)果顯示不同劑量紫金標(biāo)作用的HSV-1感染組，其糖蛋白gD mRNA的表達(dá)低于陽性對照組，且隨藥物濃度的增加其抑制率明顯增高。HSV-1通過蔗糖密度梯度的離心純化，對純化后的HSV-1經(jīng)對流免疫電泳后，用3H-UTP摻入法證實(shí)紫金標(biāo)能明顯抑制HSV-1體外RNA的合成。
權(quán)利要求
1.紫金標(biāo)植物提取物在制備抗病毒及抗菌藥物方面的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述紫金標(biāo)植物提取物在制備抗病毒和抗菌雙重功效藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述紫金標(biāo)植物提取物在制備抗病毒及抗菌藥物中以單味或者復(fù)方方式應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述紫金標(biāo)植物提取物以其抑制病毒基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)譯等多環(huán)節(jié)的方式作為在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的紫金標(biāo)提取物以軟膠囊、或硬膠囊、或滴丸、或片劑、或分散片、或顆粒劑、或注射液、或口服液、或栓劑經(jīng)口服或皮膚或粘膜或直腸方式給藥。
全文摘要
本發(fā)明公開了紫金標(biāo)植物提取物在制備抗病毒及抗菌藥物方面的用途，它以抑制病毒基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)譯等多環(huán)節(jié)的方式作為在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用，其抑菌、抗菌作用強(qiáng)，尤其對金黃色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌耐藥株、流感嗜血桿菌等有良好的抑制和殺滅作用，具有抗病毒和抗菌的雙重作用，有很好的藥用前景；同時(shí)，其原料豐富、價(jià)廉、萃取工藝簡單，制成中成藥成本低，并可做成各種劑型。
文檔編號A61P31/04GK1631422SQ20041008140
公開日2005年6月29日 申請日期2004年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月7日
發(fā)明者李暉, 賈文祥, 陳恬, 蔣思萍, 陳金瑞, 張?jiān)偃?申請人:西藏自治區(qū)高原生物研究所