專利名稱：作為hPPARα和/或hPPARγ激活劑的α－哌嗪取代的苯丙酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及α-哌嗪取代的苯丙酸衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，它們的制備方法，含有它們的藥物組合物以及它們作為過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體(簡(jiǎn)稱PPAR)的激動(dòng)劑、尤其是對(duì)PPARγ和PPARα顯示出激動(dòng)作用的雙重激動(dòng)劑用于治療和/或預(yù)防糖尿病和高脂血癥等代謝疾病的用途。
背景技術(shù)：
過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體(簡(jiǎn)稱為PPAR)是與糖皮質(zhì)激素受體、維甲酸受體和甲狀腺素受體等同屬于核內(nèi)受體超家族的配體依賴型轉(zhuǎn)錄因子。迄今為止，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)三種PPAR亞型α、γ和δ(也稱β和NUC1)。它們是被不同的基因編碼的。而且，PPARγ還存在2種同工型PPARγ1和γ2。這2種蛋白質(zhì)的區(qū)別在于它們的NH2-末端的30個(gè)氨基酸，它們是啟動(dòng)子的交替使用和nRNA的差異剪接的結(jié)果(Vidal-Puig，J.Clin.Invest.，972553-2561，1996)。
PPARα主要在對(duì)脂類有極高分解代謝活性的組織如棕色脂肪組織和肝臟中表達(dá)，其次是在腎、心臟、骨骼肌中。(Endocnnology，1995，137，354)。它能正控制或負(fù)控制與脂肪酸代謝和胞內(nèi)輸送有關(guān)的基因(例如?；鵆oA合成酶、脂肪酸結(jié)合蛋白質(zhì)和脂蛋白脂肪酶)以及與膽固醇和中性脂質(zhì)的代謝有關(guān)的載脂蛋白(AI，AII，CIII)基因的表達(dá)。PPARγ主要存在于脂肪組織中，也少量存在于骨骼肌、肝臟、結(jié)腸、視網(wǎng)膜、免疫系統(tǒng)中。最近研究結(jié)果也提示其高度表達(dá)于巨噬細(xì)胞，包括動(dòng)脈粥樣硬化的泡沫細(xì)胞中。其中，PPARγ2主要是在脂肪組織中專一性表達(dá)的，而PPARγ1則在各種組織中均有發(fā)現(xiàn)，其中在腎、腸和心臟表達(dá)最高。PPARγ主要調(diào)節(jié)涉及脂肪細(xì)胞分化以及胰島素敏感性基因的表達(dá)(J.Lipid.Res.，1996，37，907)。
PPARδ以神經(jīng)細(xì)胞為中心在生物體內(nèi)各組織中普遍表達(dá)。目前，關(guān)于PPARδ的生理學(xué)意義還不清楚。
噻唑烷二酮類藥物如曲格列酮、羅格列酮在臨床上顯示可增強(qiáng)II型糖尿病患者的胰島素作用，降低血清葡萄糖。已報(bào)道噻唑烷二酮為PPARγ的有效和選擇性的激活劑，并直接結(jié)合到PPARγ受體(J.M.Lehmann等，J.Biol.Chem.12953-12956，270(1995))。
貝特類(fibrates)藥物一向被廣泛用作高脂血癥的治療藥，可降低血清甘油三酯(20-50％)、LDLc(10-15％)，并增加HDLc(10-15％)。實(shí)驗(yàn)表明，fibrates對(duì)血清脂質(zhì)的作用是通過(guò)PPARα的激活作用介導(dǎo)的，例如可參見(jiàn)，B.Staels等，Curr.Pharm.Des.，1-14，3(1)，(1997)。PPARα的激活引起增加脂肪酸分解代謝和降低肝臟中脂肪酸再次合成(引起甘油三酯合成和VLDL產(chǎn)生/分泌減少)的酶的轉(zhuǎn)錄。此外，PPARα激活降低apoC-III的產(chǎn)生。apoC-III(LPL活性的抑制劑)產(chǎn)生的減少增加了VLDL的清除(J.Auwerx等，Atherosclerosis，J59-S37，124(Suppl)，(1996))。
現(xiàn)有技術(shù)的研究結(jié)果表明，具有對(duì)PPARγ和PPARα兩者的雙重激動(dòng)作用的藥物在降低糖尿病伴有的其他異常、尤其是升高甘油三酯中可具有附加的益處，例如可參見(jiàn)US5478852，WO98/05331。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是尋找并開(kāi)發(fā)具有PPARγ和PPARα激動(dòng)活性的小分子化合物，所述化合物可用來(lái)治療hPPARγ和/或hPPARα介導(dǎo)的疾病、危險(xiǎn)因子或病癥。本發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，下列通式I的化合物具有對(duì)PPARγ和PPARα激動(dòng)活性，從而可用于預(yù)防和/或治療與PPARγ和PPARα有關(guān)的疾病或癥狀，如糖尿病或高血糖癥。本發(fā)明進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，通式I化合物還具有良好的降血脂作用。
因此，本發(fā)明的一方面涉及式I的化合物，其消旋體、旋光異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，
其中R1和R2各自獨(dú)立地選自H，C1-C4的直鏈或支鏈烷基；R3選自Ar1，-SO2Ar1；Ar和Ar1各自獨(dú)立地選自芳香碳環(huán)或雜環(huán)，其中的環(huán)為單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)；每個(gè)環(huán)為5-6元環(huán)，雜環(huán)包含1-4個(gè)選自下面的雜原子O，S，N；環(huán)上無(wú)取代或被1-4個(gè)選自下面的取代基取代鹵素，硝基，羥基，羥甲基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C6直鏈或支鏈烷基，C2-C6直鏈或支鏈烯基，C1-C4烷氧基，C2-C4鏈烯氧基，苯氧基，芐氧基，羧基或氨基；Y為H，鹵素；n為1-4的整數(shù)。
本發(fā)明的另一方面涉及包含本發(fā)明化合物的藥物組合物，其含有至少一種通式I化合物的消旋體或旋光異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物以及一或多種藥用載體或賦形劑。
本發(fā)明的另一方面涉及制備通式I化合物或者其藥學(xué)上可接受鹽或溶劑化物的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及制備通式I化合物或者其藥學(xué)上可接受鹽或溶劑化物的中間體。
本發(fā)明的再一方面涉及本發(fā)明通式I化合物用于制備治療或預(yù)防hPPARγ和/或hPPARα介導(dǎo)的疾病、危險(xiǎn)因子或病癥的藥物的用途。
所述的hPPARγ和/或hPPARα介導(dǎo)的疾病、危險(xiǎn)因子或病癥包括高血糖癥、脂代謝障礙脂血癥、II型糖尿病包括相關(guān)的糖尿病性脂代謝障礙脂血癥、I型糖尿病、高甘油三酯血癥、X綜合征、胰島素抗性、心力衰竭、高脂血癥、高膽固醇血癥、高血壓、心血管疾病包括動(dòng)脈粥樣硬化以及患有如肥胖癥、厭食癥、貪食癥和神經(jīng)性厭食癥患者的食欲和食物吸收的調(diào)節(jié)。
具體來(lái)說(shuō)，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通式I化合物，其消旋體、旋光異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物， 其中R1和R2各自獨(dú)立地選自H，C1-C4的直鏈或支鏈烷基；R3選自Ar1或-SO2Ar1；Ar和Ar1各自獨(dú)立地選自芳香碳環(huán)或雜環(huán)，其中的環(huán)為單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)；每個(gè)環(huán)為5-6元環(huán)，雜環(huán)包含1-4個(gè)選自下面的雜原子O，S，N；環(huán)上無(wú)取代或被1-4個(gè)選自下面的取代基取代鹵素，硝基，羥基，羥甲基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C6直鏈或支鏈烷基，C2-C6直鏈或支鏈烯基，C1-C4烷氧基，C2-C4鏈烯氧基，苯氧基，芐氧基，羧基或氨基；Y為H，鹵素；n為1-4的整數(shù)。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，通式I化合物為通式II所表示的S構(gòu)型異構(gòu)體，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物， 其中
連接于COOR1的碳原子為S構(gòu)型；R1為氫，甲基；R3為Ar1或-SO2Ar1；Ar1為苯環(huán)，環(huán)上無(wú)取代或被1-5個(gè)選自下面的取代基取代鹵素，硝基，羥基，羥甲基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C6直鏈或支鏈烷基，C2-C6直鏈或支鏈烯基，C1-C4烷氧基，C2-C4鏈烯氧基，苯氧基，芐氧基，羧基或氨基；Y為H，Br。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物選自(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-間-甲苯基-哌嗪-1-基)-丙酸；(2S)-2-[4-(4-硝基-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-2-[4-(2-氟-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-2-[4-(4-氟-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-2-[4-苯磺?；?哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-2-[4-(2-硝基-苯磺酰基)-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-間-氯-苯基-哌嗪-1-基)-丙酸；(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-苯基-哌嗪-1-基)-丙酸；(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-3-溴-苯基}-2-[4-(4-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-丙酸；(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-3-溴-苯基}-2-[4-苯基-哌嗪-1-基]-丙酸；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
通式I化合物或者其藥用鹽或其溶劑化物可按以下方法制備方法一由下列式V化合物 其中Ar1的定義同通式I，與式III化合物反應(yīng)， 其中Ar，R1，R2，Y和n的定義同通式I，得到R3＝Ar1的通式I化合物， 其中Ar1、Ar、R1、R2、Y、n的定義同通式I。
所述的式V化合物有市售，或可按文獻(xiàn)報(bào)道的方法(Palmer，B.D.等，Synth Commun 1987，17，601；GRAVATT，G.L.等，J.Med.Chem.1991，34(5)，1552-1560；GRAVATT，G.L.等，J.Med.Chem.1991，34(5)，1552-1560)由式IV化合物與對(duì)甲苯磺酰氯(TSC1)反應(yīng)制得， 其中Ar1的定義同通式I。
方法二1)由上述式III化合物與二溴二乙胺氫溴酸鹽反應(yīng)，得到式VI化合物， 其中Ar，R1，R2，Y和n的定義同通式I；2)使式VI化合物再與Ar1SO2Cl反應(yīng)，得到R3＝芳磺?；?-SO2Ar1)的通式I化合物。
其中Ar1、Ar、R1、R2、Y、n的定義同通式I。
如果需要，通式I的化合物可轉(zhuǎn)化成另一種形式的通式I的化合物，如R1＝C1-C4直鏈或支鏈烷基的通式I化合物和堿金屬氫氧化物進(jìn)行反應(yīng)，得到R1＝H的通式I化合物。
本發(fā)明還涉及上述式III化合物的制備方法，其包括1)使市售或采用常規(guī)方法制備的芳基甲酰胺與式VII(R4為C1-C4烷基，R2定義同通式I)化合物反應(yīng)，環(huán)合得到式VIII化合物，其中Ar和R2的定義同通式I，R4為C1-C4烷基。式VIII化合物再經(jīng)四氫鋰鋁還原，得到式IX化合物，其中Ar和R2的定義同通式I。式VII化合物的制備可參見(jiàn)Chem.Pharm.Bull.(1986)，34(7)，2840-51；J.Med.Chem.(1992)，35(14)，2617-26。
2)使其中Y和n的定義同通式I的式X化合物，特別優(yōu)選Y＝H或者n＝1、Y＝Br并且Br位于羥基鄰位的式X化合物先與R1OH(其中R1的定義同通式I，優(yōu)選R1＝CH3)和二氯亞砜反應(yīng)，接著與BOC2O反應(yīng)，得到XI化合物，其中R，Y和n的定義同通式I。n＝1、Y＝Br并且Br位于羥基鄰位的式X化合物可由酪氨酸與溴素反應(yīng)制得。
3)使步驟1)得到的IX化合物與步驟2)得到的XI化合物反應(yīng)，得到式XII化合物， 其中R，R2，Ar，Y和n的定義同通式I，
式XII化合物再用三氟乙酸脫去保護(hù)基，得到式III化合物。
更具體地，通式I化合物的合成反應(yīng)方案詳見(jiàn)下列反應(yīng)路線和描述反應(yīng)路線一式III化合物的合成 反應(yīng)步驟一 式VII化合物與芳基甲酰胺在甲苯中回流反應(yīng)6-30小時(shí)。濃縮，柱分離(洗脫劑正己烷/乙酸乙酯系統(tǒng))，得到棕色油狀的式VIII化合物。式VIII化合物和四氫鋰鋁(LiAlH4，購(gòu)自天津市環(huán)威精細(xì)化工有限公司)室溫下于乙醚中，混合攪拌1-24小時(shí)。依次小心滴加水、氫氧化鈉水溶液及硫酸鎂攪拌0.1-1小時(shí)。過(guò)濾、濃縮、柱分離(洗脫劑正己烷/乙酸乙酯系統(tǒng))，得到白色固體狀式Ix化合物，其中R4為C1-C4烷基，Ar、R2同通式I的定義。
反應(yīng)步驟二
使其中Y和n的定義同通式I的式X化合物、特別優(yōu)選Y＝H或n＝1、Y＝Br并且Br位于羥基鄰位先與R1OH(優(yōu)選R1＝CH3)和二氯亞砜混合回流1-10小時(shí)，濃縮。得到的殘留物與BOC2O在無(wú)水乙腈中三乙胺中催化下，室溫?cái)嚢?-8小時(shí)，濃縮。加二氯甲烷溶解，依次用硫酸氫鈉水溶液、飽和碳酸鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液洗，無(wú)水硫酸鎂干燥。濃縮，乙醚重結(jié)晶，得到白色固體狀式XI化合物，其中Y，R1和n的定義同通式I。n＝1、Y＝Br并且Br位于羥基鄰位的式X化合物可由酪氨酸與溴素在冰醋酸中室溫反應(yīng)0.5-48小時(shí)制得。
反應(yīng)步驟三 使式IX的化合物與式XI的化合物在PPh3和DIAD的催化下，于無(wú)水四氫呋喃中，室溫反應(yīng)1-30小時(shí)。濃縮，柱分離(洗脫劑正己烷/乙酸乙酯系統(tǒng))，得到棕色的油狀式XII化合物，其中，Ar，R1，R2，Y和n定義同通式I。式XII化合物再用三氟乙酸于二氯甲烷中室溫反應(yīng)1-10小時(shí)。反應(yīng)液用0.5％NaOH水溶液調(diào)PH值為中性，分出有機(jī)層，干燥。濃縮，柱分離(洗脫劑氯仿/甲醇系統(tǒng))，得到棕色油狀的式III化合物，其中，Ar，R1，R2，Y和n定義同通式I。
反應(yīng)路線二其中R3＝Ar1的式I化合物的合成 將由市售獲得或按文獻(xiàn)報(bào)道的方法(Palmer，B.D.等，SynthCommun 1987，17，601；GRAVATT，G.L.等，J.Med.Chem.1991，34(5)，1552-1560；GRAVATT，G.L.等，J.Med.Chem.1991，34(5)，1552-1560)制得的其中Ar1的定義同通式I的式IV化合物、對(duì)甲苯磺酰氯(TSC1)和三乙胺溶于無(wú)水二氯甲烷中，0℃反應(yīng)1-20小時(shí)。反應(yīng)液依次水、飽和氯化鈉洗，干燥。濃縮，乙醇重結(jié)晶，得到其中Ar1的定義同通式I的式V化合物。將式V化合物與按照上述反應(yīng)路線一制得的式III化合物溶于HMPA(六甲基磷酰胺)，加入無(wú)水碳酸鈉，130-140℃反應(yīng)1-10小時(shí)。柱分離(洗脫劑正己烷/乙酸乙酯系統(tǒng))，得到棕色油狀式I化合物，其中Ar1、Ar、R1、R2、Y、n的定義同通式I。
反應(yīng)路線三其中R3＝SO2Ar1的式I化合物的合成 將二乙醇胺與48％HBr水溶液混合100-130℃反應(yīng)6-12小時(shí)。反應(yīng)過(guò)程中不斷水泵減壓蒸除水。濃縮，得到棕色油狀的二溴二乙胺氫溴酸鹽。二溴二乙胺氫溴酸鹽接著與按照上述反應(yīng)路線一制得的式III化合物在無(wú)水碳酸鈉催化下于無(wú)水乙醇中，回流反應(yīng)8-60小時(shí)。濃縮，二氯甲烷溶解，水洗，干燥、濃縮、柱分離(洗脫劑氯仿/甲醇系統(tǒng))，得到棕色粘稠狀式I化合物，Ar1、Ar、R1、R2、Y、n的定義同通式I。
如果需要，通式I的化合物可轉(zhuǎn)化成另一種形式的通式I的化合物，如R1＝C1-C4直鏈或支鏈烷基的通式I化合物和堿金屬氫氧化物水溶液在有機(jī)溶劑如THF或乙醇中，室溫或回流反應(yīng)0.1-20小時(shí)，經(jīng)處理得到R1＝H的通式I化合物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到本發(fā)明式I化合物存在立體中心。當(dāng)需要式I化合物為單一的對(duì)映體時(shí)，可以使用在所有可能的步驟中均處于單一對(duì)映異構(gòu)體形式的反應(yīng)物來(lái)制備，或者在單一對(duì)映異構(gòu)體形式的試劑或催化劑的存在下進(jìn)行反應(yīng)來(lái)制備，或者通過(guò)常規(guī)方法拆分立體異構(gòu)體混合物來(lái)制備。一些優(yōu)選的方法包括使用微生物進(jìn)行拆分，拆分與手性酸如扁桃酸、樟腦磺酸、酒石酸、乳酸等任何可使用的酸形成的非對(duì)映異構(gòu)體的鹽，或者拆分與手性堿如番木鱉堿(bracine)、金雞納樹(shù)生物堿及其衍生物等形成的非對(duì)映異構(gòu)體的鹽。常用的方法見(jiàn)Jaques等人編輯的“Enantiomers，Racemates and Resolution”(WileyInterscience，1981)。更具體地，式I的化合物可以通過(guò)用手性胺、氨基酸、由氨基酸衍生的氨基醇進(jìn)行處理而轉(zhuǎn)化成非對(duì)映異構(gòu)酰胺的1∶1的混合物；可以使用常規(guī)的反應(yīng)條件將酸轉(zhuǎn)化成酰胺；非對(duì)映異構(gòu)體可以通過(guò)分級(jí)結(jié)晶或色譜法進(jìn)行分離，式I化合物的立體異構(gòu)體可以通過(guò)水解純的非對(duì)映異構(gòu)酰胺來(lái)制備。
根據(jù)本發(fā)明，通式I化合物可用于治療或預(yù)防hPPARγ和/或hPPARα介導(dǎo)的疾病、危險(xiǎn)因子或病癥。所述的hPPARγ和/或hPPARα介導(dǎo)的疾病、危險(xiǎn)因子或病癥包括有高血糖癥、脂代謝障礙脂血癥、II型糖尿病包括相關(guān)的糖尿病性脂代謝障礙脂血癥、I型糖尿病、高甘油三酯血癥、X綜合征、胰島素抗性、心力衰竭、高脂血癥、高膽固醇血癥、高血壓、心血管疾病包括動(dòng)脈粥樣硬化、患有如肥胖癥、厭食癥、貪食癥和神經(jīng)性厭食癥患者的食欲和食物吸收的調(diào)節(jié)。本發(fā)明化合物特別適用于治療或預(yù)防高血糖癥、脂代謝障礙脂血癥、II型糖尿病包括相關(guān)的糖尿病性脂代謝障礙脂血癥。
本發(fā)明化合物既可以其本身也可以其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物的形式使用。式I化合物的藥學(xué)上可接收的鹽包括與藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸或者無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿形成的常規(guī)鹽以及季銨的酸加成鹽。合適的酸加成鹽的例子包括與鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富馬酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羥基乙酸、甲酸、乳酸、馬來(lái)酸、酒石酸、檸檬酸、撲酸、丙二酸、羥基馬來(lái)酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羥基萘甲酸、氫碘酸、蘋(píng)果酸、鞣酸等形成的鹽。其它的酸，如草酸，雖然其本身并非藥學(xué)上可接受的，但可以用于制備用作中間體的鹽，以獲得本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。合適的堿加成鹽的例子包括與鈉、鋰、鉀、鎂、鋁、鈣、鋅、N，N’-二芐基乙二胺、氯代普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普魯卡因形成的鹽。本文中涉及到本發(fā)明化合物時(shí)，包括式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的前藥，該前藥一經(jīng)給藥，即在體內(nèi)通過(guò)代謝過(guò)程進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)化，變成具有活性的藥物。通常，這類前藥是本發(fā)明化合物的功能性衍生物，其在體內(nèi)容易轉(zhuǎn)化成所需的式(1)的化合物。例如，在“Design Of Prodrugs”，H.Bund Saard，Elsevier編輯(1985)中描述了選擇和制備適宜前藥衍生物的常規(guī)方法。
本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的活性代謝產(chǎn)物。
本發(fā)明化合物既可單獨(dú)也可以藥物組合物的形式使用。本發(fā)明的藥物組合物包含有效劑量的本發(fā)明式I化合物、其消旋體、旋光異構(gòu)體、或其可藥用鹽或溶劑化物以及一種或多種適宜的可藥用載體。本發(fā)明所述的藥用載體包括但不限于離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘油，山梨酸，山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚(yú)精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蜂蠟，羊毛脂。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可以以下面的任意方式施用口服，噴霧吸入，直腸用藥，鼻腔用藥，頰部用藥，局部用藥，非腸道用藥，如皮下、靜脈、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、胸骨內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸入，或借助一種外植儲(chǔ)器用藥。其中優(yōu)選口服、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥方式。
當(dāng)口服用藥時(shí)，本發(fā)明化合物可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不限于片劑、膠囊、水溶液或水懸浮液。其中，片劑使用的載體一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂。膠囊制劑使用的稀釋劑一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸浮液制劑則通常是將活性成分與適宜的乳化劑和懸浮劑混合使用。如果需要，以上口服制劑形式中還可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。
當(dāng)局部用藥時(shí)，特別是治療局部外敷容易達(dá)到的患面或器官，如眼睛、皮膚或下腸道神經(jīng)性疾病時(shí)，可根據(jù)不同的患面或器官將本發(fā)明化合物制成不同的局部用藥制劑形式，具體說(shuō)明如下當(dāng)眼部局部施用時(shí)，本發(fā)明化合物可配制成一種微粉化懸浮液或溶液的制劑形式，所使用載體為等滲的一定pH的無(wú)菌鹽水，其中可加入或不加防腐劑如氯化芐基烷醇鹽。對(duì)于眼用，也可將化合物制成膏劑形式如凡士林膏。
當(dāng)皮膚局部施用時(shí)，本發(fā)明化合物可制成適當(dāng)?shù)能浉?、洗劑或霜?jiǎng)┲苿┬问?，其中將活性成分懸浮或溶解于一種或多種載體中。軟膏制劑可使用的載體包括但不限于礦物油，液體凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蠟和水；洗劑或霜?jiǎng)┛墒褂玫妮d體包括但不限于礦物油，脫水山梨糖醇單硬脂酸酯，吐溫60，十六烷酯蠟，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，芐醇和水。
本發(fā)明化合物還可以無(wú)菌注射制劑形式用藥，包括無(wú)菌注射水或油懸浮液或無(wú)菌注射溶液。其中，可使用的載體和溶劑包括水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的非揮發(fā)油也可用作溶劑或懸浮介質(zhì)，如單甘油酯或二甘油酯。
另外需要指出，本發(fā)明化合物的使用劑量和使用方法取決于諸多因素，包括患者的年齡、體重、性別、自然健康狀況、營(yíng)養(yǎng)狀況、化合物的活性強(qiáng)度、服用時(shí)間、代謝速率、病癥的嚴(yán)重程度以及診治醫(yī)師的主觀判斷。優(yōu)選的使用劑量介于0.01～100mg/kg體重/天，其中最優(yōu)劑量在5mg/kg-10mg/kg體重/天。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例是本發(fā)明優(yōu)選的說(shuō)明性優(yōu)選方案，對(duì)本發(fā)明不構(gòu)成任何限制。
化合物熔點(diǎn)由RY-1型熔點(diǎn)儀測(cè)定，溫度未經(jīng)校正。1H NMR光譜由Bruker ARX 400型或US Varian Ulity Inova 600型核磁儀測(cè)定。FAB質(zhì)譜由Zabspect高分辨磁質(zhì)譜儀測(cè)定。
制備實(shí)施例12-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙醇(中間體1)將4-溴-3-氧-戊酸甲酯(23.2g，0.11mol)和苯甲酰胺(20.1g，0.17mol)溶于160mL甲苯中，加熱回流，用分水器除去反應(yīng)生成的水，反應(yīng)9小時(shí)。濃縮，將得到的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(正己烷∶乙酸乙酯＝6∶1)，得到5.6g淺棕色油狀2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙酸甲酯，收率22％。
將2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙酸甲酯(2.3g，10mmol)溶于16mL乙醚，0℃下滴加至LiAlH4(0.38g，10mmol)在乙醚中的混懸液4mL中。室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)液依次小心加入0.4mL水、0.4mL的15％NaOH水溶液、1.2mL水及一勺無(wú)水硫酸鎂。過(guò)濾，濾液濃縮，得到1.6g淡黃色固體的2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙醇，收率80％。
MS[M]+＝231.2m/e；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.99-7.78(m，2H)，7.43-7.42(m，3H)，3.94(t，2H)，2.74(t，2H)，2.34(s，3H)。
制備實(shí)施例2A(2S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-羥基-苯基)-丙酸甲酯(中間體2)0℃下，將二氯亞砜(8mL，0.11mmol)滴加至含L-酪氨酸(17.9g，0.1mmol)的甲醇(100mL)溶液中?；亓?小時(shí)。濃縮。加入三乙胺(15mL)、乙腈(150mL)，再滴加BOC2O(23.3mL，0.11mmol)。室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。濃縮，加二氯甲烷(200mL)溶解，依次用1M硫酸氫鈉水溶液(200mL)、少量飽和碳酸鈉水溶液及水洗，有機(jī)相無(wú)水硫酸鎂干燥。濃縮，得白色固體狀(2S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(4-羥基-苯基)-丙酸甲酯(26.0g，90％)。
MS[M]+＝295.4m/e；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ6.98-6.90(m，2H)，6.78-6.73(m，2H)，4.60-4.50(m，1H)，3.70(s，3H)，3.08-2.93(m，2H)，1.45(s，9H)。
制備實(shí)施例2B(2S)-3-(3-溴-4-羥基-苯基)-2-叔丁氧羰基氨基-丙酸甲酯(中間體2B)0℃下，將含溴素(0.9g，5.5mmol)的冰醋酸溶液(8mL)滴加至L-酪氨酸(1.0g，5.5mmol)與冰醋酸的混濁液(10mL)中。室溫過(guò)夜。過(guò)濾，烘干濾餅，得到1.7g黃色固體，直接用于下一步反應(yīng)。
按照上述制備實(shí)施例2A所述方法進(jìn)行反應(yīng)，得到的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)，得0.8g白色固體狀(2S)-3-(3-溴-4-羥基-苯基)-2-叔丁氧羰基氨基-丙酸甲酯，收率38.6％。
MS[M]+＝374.4m/e；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.37(d，1H)，7.10-7.05(dd，2H)，3.56(s，3H)，3.52-2.50(m，1H)，2.80-2.65(m，2H)，1.45(s，9H)。
制備實(shí)施例3A(2S)-2-氨基-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸甲酯(中間體3A)將中間體1(10.1g，0.05mol)、中間體2A(14.7g，0.05mol)、三苯基磷(14.41g，0.055mol)溶于干燥的四氫呋喃(180mL)，滴加含40％DIAD的甲苯溶液(74mL，0.14mmo l)。室溫?cái)嚢?0小時(shí)。濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)，得16.8g淺黃色油狀(2S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸甲酯，收率67％。
將(2S)-2-叔丁氧羰基氨基-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸甲酯(16.8g，0.035mol)、三氟乙酸(34mL)、二氯甲烷(340mL)混合室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。用0.5％氫氧化鈉水溶液調(diào)PH值至中性，有機(jī)層無(wú)水硫酸鈉干燥。濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化(氯仿/甲醇＝80/1)，得10.6g淺棕色油狀(2S)-2-氨基-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸甲酯，收率80％。
MS[M]+＝380.4m/e；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.92-7.89(m，2H)，7.52-7.45(m，3H)，7.07(d，2H)，6.83(d，2H)，4.17(t，2H)，3.56(s，3H)，3.51-3.42(m，1H)，2.93(t，2H)，2.80-2.67(m，2H)，2.36(s，3H)，1.75(s，2H)。
制備實(shí)施例3B(2S)-2-氨基-3-{3-溴-4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸甲酯(中間體3B)按照與制備中間體3A相似的方法，將中間體2A替換為中間體2B，得到(2S)-2-氨基-3-{3-溴-4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸甲酯。
MS[M]+＝459.4m/e；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.92-7.89(m，2H)，7.52-7.48(m，3H)，7.37(d，1H)，7.10-7.05(dd，2H)，4.25(t，2H)，3.56(s，3H)，3.52-2.50(m，1H)，2.94(t，2H)，2.80-2.65(m，2H)，2.38(s，3H)，1.76(s，2H)。
制備實(shí)施例4(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-哌嗪-1-基-丙酸甲酯(中間體4)將二乙醇胺100g、40％氫溴酸水溶液1000mL混合，劇烈回流，同時(shí)水泵減壓不斷蒸出水，共反應(yīng)10小時(shí)。濃縮，得297g淺棕色液體。
將上述淺棕色液體47.4g、中間體3A(4.5g，11.8mmol)、無(wú)水乙醇150mL混合回流過(guò)夜。冷卻至室溫，加碳酸鈉1.3g(11.8mmol)，再回流10小時(shí)。冷卻至室溫，過(guò)濾，蒸除乙醇。殘留物加氯仿溶解，依次用水、飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥。濃縮，柱分離(氯仿/甲醇＝60/1)，得1.0g棕色固體，收率19％。
MS[M]+＝449.4m/e；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.98-7.96(m，2H)，7.46-7.38(m，3H)，7.06(d，2H)，6.81(d，2H)，2.70-2.61(m，2H)，2.60-2.51(m，2H)，2.36(s，3H).
實(shí)施例1(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-間-甲苯基-哌嗪-1-基)-丙酸0℃、氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將2-[(2-羥基-乙基)-間-甲苯基-氨基]-乙醇(1.0g，5.13mmol)、對(duì)甲苯磺酰氯(2.0g，10.53mmol)、三乙胺(1.1g，10.89mmol)混合溶于無(wú)水二氯甲烷中，攪拌30分鐘。再置于冰箱中過(guò)夜。反應(yīng)液用水、飽和氯化鈉水溶液洗，無(wú)水硫酸鈉干燥。濃縮，加適量乙醇，自然靜置，析出白色固體0.9g。
將上述的白色固體、中間體3A(0.6g，1.58mmol)、碳酸氫鈉(0.27g，3.21mmol)混合于4mL六甲基磷酰胺(HMPA)中，加熱至134℃反應(yīng)4小時(shí)。柱分離(正己烷/乙酸乙酯＝5/1)，濃縮得到無(wú)色粘稠狀物質(zhì)。將稠狀物溶于四氫呋喃，滴加過(guò)量的1N氫氧化鋰水溶液，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。加2N稀鹽酸調(diào)PH值至2-3，氯仿提取三次。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥。濃縮，無(wú)水乙醇重結(jié)晶，得0.54g白色固體(20％)，mp205-207℃。
MS[M]+＝525.4m/e；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.95-7.90(m，2H)，7.55-7.45(m，3H)，7.20-7.04(m，3H)，6.90-6.58(m，5H)，4.18(t，2H，J＝6.6Hz)，3.45-3.44(m，1H)，3.20-3.00(m，4H)，2.90(t，2H)，2.90-2.64(m，6H)，2.35(s，3H)，2.22(s，3H)。
實(shí)施例2(2S)-2-[4-(4-硝基-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸將中間體4(0.31g，0.69mmol)、4-硝基-苯磺酰氯(0.19g，0.86mmol)，三乙胺(0.21g，2.1mmol)，溶于無(wú)水二氯甲烷6mL中，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。柱分離(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，濃縮得到0.15g棕色稠狀物。將棕色稠狀物溶于四氫呋喃，滴加過(guò)量的1N氫氧化鋰水溶液，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)液用2N鹽酸調(diào)PH值至2-3，氯仿提取三次。有機(jī)相用飽和氯化鈉洗，無(wú)水硫酸鈉干燥。濃縮，四氫呋喃重結(jié)晶，得0.13g黃色固體(30％)。mp205-207℃。
MS[M]+＝620.4m/e；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.43-8.41(m，2H)，8.02-8.00(m，2H)，7.88-7.86(m，2H)，7.48-7.46(m，3H)，7.08-7.06(d，2H)，6.81-6.79(d，2H)，4.17(t，2H)，3.56(m，1H)，3.10-2.86(m，12H)，2.32(s，3H)。
實(shí)施例3(2S)-2-[4-(2-氟-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸按照與實(shí)施例2相似的方法，將其中的4-硝基-苯磺酰氯替換為2-氟-苯磺酰氯，得白色固狀的(2S)-2-[4-(2-氟-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸，總收率28％。mp170-172℃。
MS[M+H]+＝593.2m/e；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.79(brs，1H)，7.92-7.89(m，2H)，7.78-7.74(m，2H)，7.51-7.41(m，5H)，7.07-7.05(d，2H，J＝8.5Hz)，6.80-6.78(d，2H，J＝8.5Hz)，4.17(t，2H，J＝6.6Hz)，3.35(m，1H)，3.10-2.49(m，12H)，2.33(s，3H)。
實(shí)施例4(2S)-2-[4-(4-氟-苯磺酰基)-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸按照與實(shí)施例2相似的方法，將其中的4-硝基-苯磺酰氯替換為4-氟-苯磺酰氯，得白色固體的(2S)-2-[4-(4-氟-苯磺酰基)-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸，總收率32％。mp198-200℃。
MS[M+H]+＝594.2m/e；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.80-7.95(m，4H)，7.55-7.45(m，5H)，7.10(d，2H)，6.80(d，2H)，4.80-4.70(m，1H)，4.15(t，2H，J＝6.6Hz)，3.10-2.82(m，12H)，2.30(s，3H)實(shí)施例5(2S)-2-[4-苯磺酰基-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸按照與實(shí)施例2相似的方法，將其中的4-硝基-苯磺酰氯替換為苯磺酰氯，得白色固體的(2S)-2-[4-苯磺?；?哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸，總收率23％。mp180-182℃。
MS[M+H]+＝575.4m/e；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.93-7.90(m，2H)，7.60-7.59(m，2H)，7.51-7.44(m，5H)，7.06-7.04(d，2H，J＝8.7Hz)，6.80-6.77(d，2H，J＝8.7Hz)，4.14(t，2H，J＝6.6Hz)，3.50-3.40(m，1H)，3.10-2.78(m，12H)，2.40(s，3H)，2.35(s，3H)。
實(shí)施例6(2S)-2-[4-(2-硝基-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸按照與實(shí)施例2相似的方法，由2-硝基-苯磺酰氯制得白色固體的(2S)-2-[4-(2-硝基-苯磺酰基)-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸，總收率24％。mp171-173℃。
MS[M+H]+＝620.4m/e；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.42(brs，1H)，7.97-7.91(m，6H)，7.50-7.48(m，3H)，7.07(m，2H)，6.81-6.79(m，2H)，4.15(t，2H，J＝6.6Hz)，3.31(m，1H)，3.12(m，4H)，2.89-2.80(m，3H)，2.72(m，3H)，2.58(m，2H)，2.33(s，3H)。
實(shí)施例7(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-間-氯-苯基-哌嗪-1-基)-丙酸按照與實(shí)施例1相似的方法，將其中的2-[(2-羥基-乙基)-間-甲苯基-氨基]-乙醇替換為2-[(2-羥基-乙基)-3-氯苯基-氨基]-乙醇，得白色固體的(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-間-氯-苯基-哌嗪-1-基)-丙酸，總收率20％。mp138-139℃。
MS[M+H]+＝546.2m/e；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.91(m，2H)，7.53-7.48(m，3H)，7.26-7.15(m，3H)，6.97(s，1H)，6.93-6.83(m，5H)，4.20(t，2H，J＝6.6Hz)，3.80(m，1H)，3.34(m，4H)，3.12(m，5H)，2.98-2.90(m，3H)，2.35(s，3H)。
實(shí)施例8(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-苯基-哌嗪-1-基)-丙酸按照與實(shí)施例1相似的方法，將其中的2-[(2-羥基-乙基)-間-甲苯基-氨基]-乙醇替換為2-[(2-羥基-乙基)-苯基-氨基]-乙醇，得白色固體的(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-苯基-哌嗪-1-基)-丙酸，總收率27％。mp218-220℃。
MS[M+H]+＝512.3m/e；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.92-7.89(m，2H)，7.53-7.45(m，3H)，7.25-7.15(m，4H)，6.95-6.81(m，5H)，4.20(t，2H，J＝6.6Hz)，3.83-3.72(brs，1H)，3.30-2.90(m，12H)，2.36(s，3H)。
實(shí)施例9(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-3-溴-苯基}-2-[4-(4-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-丙酸按照與實(shí)施例1相似的方法，將其中的中間體3A替換為中間體3B、2-[(2-羥基-乙基)-間-甲苯基-氨基]-乙醇替換為2-[(2-羥基-乙基)-(4-甲基-苯基)-氨基]-乙醇，得白色固體的(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-3-溴-苯基}-2-[4-(4-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-丙酸，總收率24％。mp203-205℃。
MS[M+H]+＝525.2m/e；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.92-7.90(m，2H)，7.49-7.48(m，3H)，7.14-7.12(m，2H)，7.01-6.99(m，2H)，6.84-6.80(m，4H)，4.18(t，2H，J＝5.8Hz)，3.36-3.34(m，1H)，3.04-2.66(m，12H)，2.35(s，3H)，2.19(s，3H)。
實(shí)施例10(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-3-溴-苯基}-2-[4-苯基-哌嗪-1-基]-丙酸按照與實(shí)施例1相似的方法，將其中的中間體3A替換為中間體3B、2-[(2-羥基-乙基)-間-甲苯基-氨基]-乙醇替換為2-[(2-羥基-乙基)-苯基-氨基]-乙醇，得白色固體的(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-3-溴-苯基}-2-[4-苯基-哌嗪-1-基]-丙酸，總收率30％。mp220-222℃。
MS[M+H]+＝590.2m/e；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.94-7.90(m，2H)，7.51-7.47(m，4H)，7.26-7.22(m，3H)，7.10-6.82(m，4H)，4.26(t，2H，J＝6.4Hz)，3.85(brs，1H)，3.29-2.92(m，12H)，2.35(s，3H)。
實(shí)施例11激活人PPARα和PPARγ的活性測(cè)定對(duì)化合物在293-T細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的功能效應(yīng)進(jìn)行篩選，以測(cè)定它們激活PPAR亞型的能力。采用預(yù)先建立嵌合受體系統(tǒng)比較受體亞型對(duì)相同的靶基因轉(zhuǎn)錄活性的影響。將人PPARα和PPARγ配體結(jié)合域各自與酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4 DNA結(jié)合域融合。再連接到哺乳動(dòng)物的表達(dá)載體pM上，構(gòu)建pM-hPPARα/GAL4和pM-PPARγ/GAL4兩種質(zhì)粒。把GAL4DNA結(jié)合區(qū)與pB4-tk-luc連接，構(gòu)成pB4-RES-tk-luc(一個(gè)含有GAL4DNA結(jié)合位點(diǎn)的螢火蟲(chóng)熒光素酶的報(bào)告基因)。以pRL-CMV-Rluc作為內(nèi)標(biāo)校正轉(zhuǎn)染效率以及內(nèi)源性影響。
將293-T細(xì)胞接種入48孔板，細(xì)胞密度為2-4×104個(gè)/孔，培養(yǎng)液為10％脫脂胎牛血清(FCS)的無(wú)酚紅無(wú)抗生素的1640培養(yǎng)基。48小時(shí)后，將培養(yǎng)液更換為5％脫脂F(xiàn)CS的無(wú)酚紅無(wú)抗生素的1640培養(yǎng)基，然后分別把兩種亞型的pM-hPPAR/GAL4、pB4-RES-tk-luc和pRL-CMV-Rluc三種質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到293-T細(xì)胞中，給藥后24小時(shí)檢測(cè)熒光素酶的強(qiáng)度。以0.2‰DMSO作為空白對(duì)照。
化合物對(duì)PPARα的激動(dòng)作用(10μM)及其EC50

化合物對(duì)PPARγ的激動(dòng)作用(10μM)及其EC50

權(quán)利要求
1.通式(I)化合物，其消旋體、旋光異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物， 其中R1和R2各自獨(dú)立地選自H，C1-C4的直鏈或支鏈烷基；R3選自Ar1或-SO2Ar1；Ar和Ar1各自獨(dú)立地選自芳香碳環(huán)或雜環(huán)，其中的環(huán)為單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)；每個(gè)為5-6元環(huán)，雜環(huán)包含1-4個(gè)選自下面的雜原子O，S，N；環(huán)上無(wú)取代或被1-4個(gè)選自下面的取代基取代鹵素，硝基，羥基，羥甲基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C6直鏈或支鏈烷基，C2-C6直鏈或支鏈烯基，C1-C4烷氧基，C2-C4鏈烯氧基，苯氧基，芐氧基，羧基或氨基；Y為H，鹵素；n為1-4的整數(shù)。
2.權(quán)利要求1的化合物，其為通式II所代表的S構(gòu)型異構(gòu)體， II其中連接于COOR1的碳原子為S構(gòu)型；R1為氫，甲基；R3為Ar1或-SO2Ar1；Ar1為苯環(huán)，環(huán)上無(wú)取代或被1-5個(gè)選自下面的取代基取代鹵素，硝基，羥基，羥甲基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C6直鏈或支鏈烷基，C2-C6直鏈或支鏈烯基，C1-C4烷氧基，C2-C4鏈烯氧基，苯氧基，芐氧基，羧基或氨基；Y為H，Br，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其選自(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-間-甲苯基-哌嗪-1-基)-丙酸；(2S)-2-[4-(4-硝基-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-2-[4-(2-氟-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-2-[4-(4-氟-苯磺酰基)-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-2-[4-苯磺?；?哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-2-[4-(2-硝基-苯磺?；?-哌嗪-1-基]-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸；(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-間-氯-苯基-哌嗪-1-基)-丙酸；(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-2-(4-苯基-哌嗪-1-基)-丙酸；(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-3-溴-苯基}-2-[4-(4-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-丙酸；(2S)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-1，3-噁唑-4-基)-乙氧基]-3-溴-苯基}-2-[4-苯基-哌嗪-1-基]-丙酸；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
4.藥物組合物，其含有權(quán)利要求1的化合物，其消旋體、旋光異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。
5.制備權(quán)利要求1所述化合物的方法，其包括1)使式IV化合物和對(duì)甲苯磺酰氯反應(yīng)，得到式V化合物， 其中Ar1的定義同權(quán)利要求1；2)使步驟1)得到的式V化合物 其中Ar1的定義同權(quán)利要求1，與式III化合物反應(yīng)， 其中R1，R2，Ar，Y和n的定義同權(quán)利要求1，得到R3＝Ar1的通式I化合物， 其中Ar1、Ar、R1、R2、Y、n的定義同權(quán)利要求1；或者1)使上述式III化合物與二溴二乙胺氫溴酸鹽反應(yīng)，得到式VI化合物， 其中Ar，R1，R2，Y，n的定義同權(quán)利要求1，2)使步驟1)得到的式VI化合物與Ar1SO2Cl反應(yīng)，得到R3＝-SO2Ar1的通式I化合物， 其中Ar1、Ar、R1、R2、Y、n的定義同權(quán)利要求1。
6.權(quán)利要求5所述化合物的方法，其進(jìn)一步包括使其中R1＝C1-C4直鏈或支鏈烷基的通式I化合物和堿金屬氫氧化物進(jìn)行反應(yīng)，得到R1＝H的通式I化合物。
7.權(quán)利要求5的方法，其中的式III化合物可按以下方法制備，包括1)使芳基甲酰胺與其中R4為C1-C4烷基，R2定義同權(quán)利要求1的式VII化合物反應(yīng)，環(huán)合得到式VIII化合物，其中，Ar和R2的定義同權(quán)利要求1，R4為C1-C4烷基，使式VIII化合物經(jīng)四氫鋰鋁還原得到式IX化合物，其中R2、Ar的定義同權(quán)利要求1； 2)使其中Y和n的定義同權(quán)利要求1的式X化合物與其中R1定義同權(quán)利要求1的R1OH反應(yīng)，得到XI化合物，其中R1，Y和n的定義同權(quán)利要求1； 3)使步驟1)得到的IX化合物與步驟2)得到的XI化合物反應(yīng)，得到式XII化合物， 其中Ar，Y，R1，R2和n的定義同權(quán)利要求1，式XII化合物經(jīng)三氟乙酸脫去保護(hù)基，得到式III化合物， 其中Ar、R1、R2、Y、n的定義同權(quán)利要求1。
8.權(quán)利要求1所述的化合物用于制備治療hPPARα和hPPARγ介導(dǎo)的疾病、危險(xiǎn)因子或病癥的藥物的用途。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述疾病、危險(xiǎn)因子或病癥為高血糖癥、脂代謝障礙脂血癥或II型糖尿病包括相關(guān)的糖尿病性脂代謝障礙脂血癥。
10.式III化合物， 其中Ar、R1、R2、Y、n的定義同權(quán)利要求1。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式I化合物，其消旋體、旋光異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物以及含有所述化合物的藥物組合物，通式I中各取代基的定義如權(quán)利要求書(shū)中所述，本發(fā)明還涉及通式I化合物的制備方法以及這些化合物用于制備治療高血糖癥、脂代謝障礙脂血癥、II型糖尿病包括相關(guān)的糖尿病性脂代謝障礙脂血癥的藥物的用途。
文檔編號(hào)A61K31/496GK1702069SQ20041004257
公開(kāi)日2005年11月30日 申請(qǐng)日期2004年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月24日
發(fā)明者李松, 周辛波, 王莉莉, 徐成, 阮承邁, 林翠芳, 肖軍海, 鄭志兵, 劉洪英, 謝云德, 鐘武, 崔浩 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所