專利名稱：大黃素作為過(guò)氧化物酶體增長(zhǎng)因子活化受體γ激動(dòng)劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種作為過(guò)氧化物酶體增長(zhǎng)因子活化受體γ(PPARγ)激動(dòng)劑的藥物，更具體指大黃素(emodin)；以及含有大黃素的藥物用于作為由PPARγ介導(dǎo)的代謝性疾病的預(yù)防和治療，如高脂血癥、糖尿病、肥胖癥等。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，在我國(guó)隨著人們生活水平質(zhì)量的不斷提高，飲食結(jié)構(gòu)及生活方式的變化，患有血脂代謝異常的人數(shù)在逐年升高，由此而引發(fā)的高血壓病、高脂血癥、冠心病、糖尿病、肥胖癥等“富裕性疾病”的發(fā)病率亦明顯上升，同時(shí)，這類疾病還是威脅中老年人健康的第一大殺手，已經(jīng)引起了全社會(huì)的高度重視。有資料顯示，目前，高脂血癥、糖尿病、肥胖癥等密切相關(guān)的病癥，其相加總發(fā)病率已達(dá)10％。我國(guó)90年代初期與80年代相比，人群血脂水平明顯增加，尤其在北方大城市，約30～40％的人患有不同程度的超過(guò)邊緣性標(biāo)準(zhǔn)的血脂和血糖代謝異常。因此，在全社會(huì)范圍內(nèi)重視、控制這類疾病已勢(shì)在必行。
近十年來(lái)的研究表明，核受體PPAR(Peroxisome Proliferator-activated Receptors)又稱過(guò)氧化物酶體增長(zhǎng)因子活化受體，是一類由配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子，屬I(mǎi)I型核受體超家族成員，能被脂肪酸以及外源性過(guò)氧化物酶體增殖劑(Peroxisome Proliferator，PP)激活。在兩棲類、嚙齒類動(dòng)物及人類等PPAR s均有3種亞型，即PPARα、PPARβ(亦稱PPARδ或NUC1)和PPARγ。PPAR介導(dǎo)的效應(yīng)主要包括脂類代謝、免疫反應(yīng)等，因此，動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖、糖尿病、腫瘤以及炎癥性疾病等的發(fā)生發(fā)展與PPAR有密切關(guān)系。
PPAR的不同亞型具有不同的生物學(xué)作用，PPARα在肝臟脂類代謝中發(fā)揮重要作用，PPARβ在脂肪細(xì)胞分化中的作用還存在著爭(zhēng)議，而PPARγ參與脂肪形成和免疫反應(yīng)，與脂肪細(xì)胞分化、肥胖及胰島素抵抗關(guān)系密切，被認(rèn)為是治療糖尿病、肥胖癥、壞脂血癥、炎癥、高血壓和癌癥藥物設(shè)計(jì)的重要靶標(biāo)分子，成為近年來(lái)研究熱點(diǎn)。
對(duì)于PPARγ激動(dòng)劑的研究主要集中在其在治療II型糖尿病方面的應(yīng)用。胰島素增敏劑噻唑烷二酮類藥物(TZDs)作為PPARγ的一類激動(dòng)劑可以明顯降低白色脂肪組織(WAT)中甘油三酯的含量，同時(shí)還可降低血漿中的葡萄糖，脂質(zhì)和II型糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰島素水平。三類TZD類藥物羅格列酮rosiglitazone(Rezulin)，皮格列酮piogitazone(ACTOS)和曲格列酮Troglitazone(Avandia)已被FDA認(rèn)證通過(guò)，作為治療II型糖尿病的藥物已經(jīng)在市場(chǎng)上銷售。至于PPARγ拮抗劑，理論上可減少脂肪、防治肥胖，但臨床尚未應(yīng)用。
近年來(lái)，研究的熱點(diǎn)又集中在天然PPARγ激動(dòng)劑的發(fā)現(xiàn)上。從傳統(tǒng)的中藥中發(fā)現(xiàn)PPARγ激動(dòng)劑并作為治療相關(guān)性疾病的藥物是現(xiàn)在研究的另一個(gè)熱點(diǎn)。我們從中藥決明子的乙醇提取物中，采用硅膠層析，凝膠過(guò)濾等技術(shù)分離得到一個(gè)黃色粉末，通過(guò)波譜技術(shù)鑒定為大黃素；并采用酵母雙雜交技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了PPARγ激動(dòng)劑的活性測(cè)試。
有關(guān)大黃素的活性報(bào)道比較多，其藥理作用廣泛，如瀉下作用，保肝作用，參與胰腺組織的再生和修復(fù)，利尿作用，抗菌，抗病毒，抗腫瘤，抗炎以及雌激素樣作用，并且能與雌激素受體有高度的親和力，激動(dòng)受體產(chǎn)生生物效應(yīng)，此外，大黃素還能抑制亞油酸系統(tǒng)的脂質(zhì)過(guò)氧化作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供大黃素作為PPARγ激動(dòng)劑的藥物。
本發(fā)明從中藥決明子Cassia obtusifolia L.中，經(jīng)有機(jī)溶劑回流，分離、純化得到一種黃色針狀結(jié)晶，經(jīng)紫外光譜、紅外光譜及核磁共振氫譜和碳譜鑒定為大黃素(emodin)，化學(xué)名為1，3，8-三羥基-6-甲基蒽醌(1，3，8-trihydroxy-6-methyl lanthraquinone)，結(jié)構(gòu)式如下 1.理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)255～257℃；IRmax(KBr)cm-13429，1684，1632，1558，1541，1485；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ12.18(1H，s，OH-8)，12.11(1H，s，OH-1)，10.82(1H，s，OH-6)，7.75(1H，s，H-5)，7.56(1H，s，H-4)，7.07(1H，s，H-2)，6.62(1H，s，H-7)，2.57(3H，s，MeO-3)；13C-NMR(125MHz，CDCl3)δ161.7(C-1)，113.1(C-1a)，123.7(C-2)，147.5(C-3)，120.3(C-4)，132.6(C-4a)，108.6(C-5)，134.7(C-5a)，165.4(C-6)，107.8(C-7)，164.7(C-8)，189.8(C-9)，109.1(C-8a)，181.3(C-10).
經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)大黃素具有PPARγ激動(dòng)劑的作用。因此本發(fā)明的技術(shù)方案如下大黃素作為PPARγ激動(dòng)劑的應(yīng)用。
2.基于表面膜共振生物傳感器技術(shù)對(duì)大黃素與PPARγ結(jié)合活性分析采用Biacore 3000對(duì)大黃素特異結(jié)合PPARγ的分析結(jié)果得到的其KD值(dissociationconstant)為3.28μM(見(jiàn)圖1)。這一結(jié)果說(shuō)明大黃素能夠特異性與PPARγ結(jié)合。
3.采用酵母雙雜交技術(shù)分析大黃素對(duì)PPARγ激動(dòng)活性關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)操作方法酵母液體培養(yǎng)基(無(wú)亮氨酸和色氨酸)的制備參見(jiàn)酵母克隆手冊(cè)(www.clontech.com)；大黃素和陽(yáng)性化合物皮格列酮溶于二甲亞砜濃度為10mM。酵母菌株AH109(plc2)包含兩個(gè)質(zhì)粒，分別為pGADT7-CBP和PGBKT7-PPARγLBD。
接P1C2于T-L-液體培養(yǎng)基中，30℃、250rpm培養(yǎng)過(guò)夜，T-L-液體培養(yǎng)基稀釋后，按1∶100分別加入羅格列酮(10mM)、DMSO以及待篩藥物大黃素(10mM)，30℃孵育12h后，進(jìn)行α-半乳糖苷酶活性測(cè)定。
結(jié)果見(jiàn)圖2。由酵母篩選結(jié)果(圖2)可以看到大黃素對(duì)PPARγ有激動(dòng)活性，并且呈現(xiàn)很好的量效關(guān)系曲線，其活性比陽(yáng)性化合物皮格列酮略差些。
由以上的Biacore和酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明大黃素對(duì)PPARγ有結(jié)合活性并且能夠作為PPARγ的激動(dòng)劑。鑒于PPARγ參與脂肪形成和免疫反應(yīng)，與脂肪細(xì)胞分化、肥胖及胰島素抵抗關(guān)系密切，被認(rèn)為是治療糖尿病、肥胖癥、壞脂血癥、炎癥、高血壓和癌癥藥物設(shè)計(jì)的重要靶標(biāo)分子，所以大黃素可以作為預(yù)防和治療與PPARγ相關(guān)的代謝障礙疾病如糖尿病、肥胖癥、壞脂血癥、炎癥、高血壓等的藥物。


圖1 通過(guò)表面膜共振技術(shù)(Biacore 3000)對(duì)大黃素特異結(jié)合PPARγ分析。PPARγ耦聯(lián)于CM5芯片上，大黃素的濃度分別為0.625，1.25，2.5，5.0和10.0μM。配體注入時(shí)間為60秒，解離時(shí)間超過(guò)120秒。
圖2大黃素和陽(yáng)性化合物皮格列酮的量效關(guān)系曲線。大黃素(■)，皮格列酮(▲)。每個(gè)濃度為3個(gè)重復(fù)。
具體實(shí)施例方式
下面具體實(shí)施例的方法已經(jīng)申請(qǐng)專利(PPARγ拮抗劑和激動(dòng)劑的篩選方法，申請(qǐng)?zhí)?00310122706.7)。
1×10-62×10-66×10-68×10-61×10-51.5×10-52×10-52.5×10-53×10-5濃度 (M)下述實(shí)施例中，所用的試驗(yàn)材料及其來(lái)源包括酵母菌株AH109(基因型為MATa，trp1-901，leu2-3，112，ura3-52，his3-200，gal4，gal80 LYS2∷GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3，MEL1UAS-MEL1TATA-MEL1，GAL2UAS-GAL2TATA-ADE2，URA3∷MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ)、酵母表達(dá)質(zhì)粒pGBKT7和pGADT7為中科院上海生命科學(xué)學(xué)院龔毅教授惠贈(zèng)；模板CMV-mCBP由M.G.Rosenfeld提供；
模板pCDNA3.1-PPARγ由成都地奧公司提供；限制性內(nèi)切酶、DNA聚合酶、連接酶、dNTP等均購(gòu)自TaKaRa公司；10×buffer隨pyrobestTMDNA聚合酶一起購(gòu)自TaKaRa公司；膠回收試劑盒購(gòu)自華舜公司；氨芐西林、卡那霉素、LiAc、PEG 3500、PNP-α-Gal、各培養(yǎng)基的配制原料均購(gòu)自sigma公司；SS-carrier DNA購(gòu)自Strategene；DNA marker購(gòu)自鼎國(guó)生物公司；引物合成與DNA測(cè)序由上海博亞公司完成；96孔板購(gòu)自Nunclon公司。
下述實(shí)施例中常規(guī)的基因操作參照有關(guān)文獻(xiàn)，其中限制性酶切方法參照分子克隆第二版P259-P262；用T4DNA連接酶連接方法參照分子克隆第二版P282-P283；連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞DH5α方法參照分子克隆第二版P55-P56；用酶切鑒定方法參照分子克隆第二版P259-P262；此外瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物方法參照(PCR方法參照分子克隆第二版P680-P682)；膠回收按照華舜公司的試劑盒說(shuō)明書(shū)；質(zhì)粒提取方法參照C.Hoffmanand F.Winston，Gene 57267；1987；LB培養(yǎng)基的配制方法參照分子克隆第二版P908；酵母各培養(yǎng)基的配制方法參照Yeast Protocol Handbook(CLONTECH)。
實(shí)施例1 CBP和酵母GAL4AD融合蛋白(pGADT7-CBP)的質(zhì)粒構(gòu)建1)以CMV-mCBP為模板，用PCR技術(shù)復(fù)制擴(kuò)增獲得CBP(1-464aa)的DNA片段(基因序列依據(jù)S66385(GENEBANK))引物設(shè)計(jì)FW5’AACATATGATGGCCGAGAACTTGCTGGACG 3’RV5’AAGGATCCCTGTTGCCCTGCACCAACAG 3’PCR擴(kuò)增反應(yīng)(100μl)CMV-mCBP模板2μl；10×buffer10μl；dNTP(2.5mM)8μl；FW4μl；RV4μl；DNA聚合酶1μl；水71μl。
反應(yīng)條件為95℃變性8min，開(kāi)始循環(huán)95℃ 1min，65℃ 1min，72℃ 1min30s，重復(fù)30循環(huán)，72℃ 10min。
采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物，回收DNA。
2)將CBP(1-464aa)的PCR產(chǎn)物克隆到pGADT7載體上CBP(1-464aa)的PCR產(chǎn)物和pGADT7分別用Nde I和BamH I酶切；用試劑盒方法回收酶切產(chǎn)物，其中回收CBP(1-464aa)的PCR酶切產(chǎn)物近1400bp；pGADT7酶切產(chǎn)物近8.0kb；用T4DNA連接酶連接；連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞DH5α；涂布在含氨芐西林(100mg/l)的平板上；用酶切鑒定挑選正確的克隆(用酶切鑒定方法參照分子克隆第二版P259-P262)。
實(shí)施例2 PPARγLBD和酵母GAL4BD融合蛋白(pGBKT7-PPARγLBD)的構(gòu)建以pCDNA3.1-PPARγ為模板，用PCR技術(shù)復(fù)制擴(kuò)增獲得PPARγLBD(193aa-475aa)的DNA片段(基因序列依據(jù)NM005037(GENEBANK))引物設(shè)計(jì)FW5’AACATATGGCGGAGATCTCCAGT 3’RV5’AAGTCGACCTAGTACAAGTCCTT 3’PCR擴(kuò)增反應(yīng)(100μl)pCDNA3.1-PPARγ模板2μl；10×buffer10μl；dNTP(2.5mM)8μl；FW4μl；RV4μl；pyrobest聚合酶1μl；水71μl。
反應(yīng)條件為95℃變性8min，開(kāi)始循環(huán)95℃ 1min，65℃ 1min，72℃ 1min30s，重復(fù)30循環(huán)，72℃ 10min。
采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物，回收DNA。
2)將PPARγLBD的PCR產(chǎn)物克隆到pGBKT7載體上PPARγLBD的PCR產(chǎn)物和pGBKT7分別用Nde I和Sal I酶切；用試劑盒方法回收酶切產(chǎn)物(回收PPARγLBD的PCR酶切產(chǎn)物近850bp；pGBKT7酶切產(chǎn)物近7.3kb)；用T4DNA連接酶連接；連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞DH5α；涂布在含卡那霉素(50mg/l)的平板上用酶切鑒定，挑選正確的克隆用酶切鑒定挑選正確的克隆(用酶切鑒定方法參照分子克隆第二版P259-P262)。
實(shí)施例3 將pGADT7-CBP與pGBKT7-PPARγLBD分步轉(zhuǎn)入酵母細(xì)胞AH109中1)按LiAC法(參照分子克隆第二版)將質(zhì)粒pGBKT7-PPARγLBD轉(zhuǎn)入酵母細(xì)胞AH109接種酵母菌株AH109于約3ml YPDA中，30℃、250rpm培養(yǎng)16-18h(OD600約為1.4)；菌液按1∶5轉(zhuǎn)接于新鮮的YPDA中，30℃、200rpm培養(yǎng)5-7h(OD600至0.8～1.2)；取10ml菌液，4000rpm*5min離心收集酵母細(xì)胞；棄上清，1ml無(wú)菌水重懸，轉(zhuǎn)移入另一離心管中，再加入約10ml無(wú)菌水，混勻；4000rpm*5min再次離心收集酵母細(xì)胞；棄上清，1ml無(wú)菌水重懸，轉(zhuǎn)移入1.5ml eppendorf管中；4000rpm*5min再次離心收集酵母細(xì)胞，小心吸去上清；依次加入240ul PEG 3500(50％W/V)、36ul 1.0M LiAc(pH7.5)、5ul煮沸的SS-carrier DNA(10mg/ml)、60ul無(wú)菌水和10ul待轉(zhuǎn)化質(zhì)粒。
劇烈振蕩1min；30℃靜置30min；42℃水浴靜置30min，每隔5min顛倒混勻一次；4000rpm*5min離心收集轉(zhuǎn)化的酵母細(xì)胞；
吸去上清，1ml無(wú)菌水重懸，取200ul涂于涂布于色氨酸缺陷(以下簡(jiǎn)稱為T(mén)-)的選擇平板上，30℃培養(yǎng)3-4d；2)鑒定攜帶pGBKT7-PPARγLBD質(zhì)粒的陽(yáng)性克隆以上T-選擇平板上長(zhǎng)出的克隆中，挑取1-2號(hào)(pGADT7-CBP克隆1號(hào)；包含兩個(gè)質(zhì)粒的-PPARγLBD&pGADT7-CBP陽(yáng)性克隆2)至T-液體培養(yǎng)基中，30℃、250rpm培養(yǎng)16-18h；收集酵母，提取質(zhì)粒，PCR鑒定所提質(zhì)粒引物序列FW5’GTAATACGACTCACTATAGGGCGA 3’RV5’TCCGAGTCACTTTAAAATTTGTAT 3’PCR擴(kuò)增反應(yīng)(20μl)模板(所提質(zhì)粒)14μl；10×buffer2μl；dNTP(2.5mM)2μl；FW1μl；RV1μl；taq DNA polymerase0.5μl。
反應(yīng)條件為95℃變性5min，開(kāi)始循環(huán)95℃ 45s；50℃ 45s；72℃ 1min，重復(fù)35循環(huán)，72℃變性10min。
3)PCR鑒定得到擁有pGBKT7-PPARγLBD質(zhì)粒的陽(yáng)性克隆1。
4)將質(zhì)粒pGADT7-CBP轉(zhuǎn)入到上述1號(hào)克隆中接種1號(hào)克隆于約3ml T-液體培養(yǎng)基中，30℃、250rpm培養(yǎng)16-18h (OD600約為1.4)；菌液按1∶5轉(zhuǎn)接于新鮮的T-液體培養(yǎng)基中，30℃、200rpm培養(yǎng)5-7h(OD600至0.8～1.2)；按以上所述步驟轉(zhuǎn)化1號(hào)克隆，最終涂布于色氨酸、亮氨酸雙缺陷(以下簡(jiǎn)稱為T(mén)-L-)平板，30℃培養(yǎng)3-4d；5)PCR鑒定質(zhì)粒pGADT7-CBP是否轉(zhuǎn)入1號(hào)克隆挑取T-L-平板上的1-3號(hào)克隆至T-L-液體培養(yǎng)基中，30℃、250rpm，培養(yǎng)16-18h后提質(zhì)粒(方法同前)，PCR鑒定引物序列FW5’GTAATACGACTCACTATAGGGCGA 3’RV5’AGATGGTGCACGATGCACAGTT 3’PCR擴(kuò)增反應(yīng)(20μl)模板(所提質(zhì)粒)14μl；10×buffer2μl；dNTP(2.5mM)2μl；FW1μl；RV1μl；taq DNA聚合酶0.5μl。
反應(yīng)條件95℃變性5min，開(kāi)始循環(huán)95℃ 45s；50℃ 45s；72℃ 1min，重復(fù)35循環(huán)；72℃變性10min6)鑒定得到擁有pGBKT7電泳鑒定-PPARγLBD & pGADT7-CBP兩個(gè)質(zhì)粒的陽(yáng)性克隆2。
實(shí)施例4篩選化合物
1、羅格列酮(陽(yáng)性化合物)對(duì)CBP與PPARγ相互作用影響的鑒定1)將擁有pGBKT7-PPARγLBD質(zhì)粒的1號(hào)克隆(以下簡(jiǎn)稱為P1)和擁有雙質(zhì)粒pGBKT7-PPARγLBD & pGADT7-CBP的2號(hào)克隆(以下簡(jiǎn)稱P1C2)分別劃線于T-、T-L-平板，30℃培養(yǎng)3-4d后，取新鮮克隆(1-3周)，分別接種于2ml T-、T-L-液體培養(yǎng)基中，30℃、250rpm，過(guò)夜培養(yǎng)16-18h；2)分別用T-、T-L-液體培養(yǎng)基稀釋P1、P1C2過(guò)夜菌(至OD600約0.3)，按1∶100加入羅格列酮(自制合成，溶于二甲亞砜(DMSO)，10mM)或DMSO，實(shí)驗(yàn)分組情況如下表

*每組均設(shè)三份平行。
30℃培養(yǎng)6h后，測(cè)定α-半乳糖苷酶活性(按照Yeast Protocol Handbook(CLONTECH)進(jìn)行)混勻酵母培養(yǎng)液，取200ul測(cè)定OD 600(HITACHI，分光光度計(jì)U-2010)；另取200ul菌液于1.5ml eppendorf管中，10,000rpm*5min離心；取16ul上清于96孔板中(T-、T-L-液體培養(yǎng)基分別用作空白對(duì)照)，每孔加入48μl分析緩沖液(100mM PNP-a-Gal水溶液與0.5M醋酸鈉，pH4.5按體積比1∶2混合)；30℃避光孵育30min；加入136ul 10X終止緩沖液(1M Na2CO3)，終止反應(yīng)；測(cè)定410nm處的OD值(BIO-RAD酶標(biāo)儀MODEL 550)。
α-半乳糖苷酶活性的計(jì)算公式為α-半乳糖苷酶活性[mIU/(ml×cell)]＝OD410×Vf×1,000/[(xb)×t×Vi×OD600]其中，t＝反應(yīng)時(shí)間(分)Vf＝測(cè)值時(shí)的終體積(200ul)Vi＝加入酵母培養(yǎng)液上清的體積(16ul)OD600＝酵母培養(yǎng)液中酵母在600nm處的吸光度xb＝對(duì)-硝基苯酚在410nm處的摩爾吸光度×比色杯的底邊邊長(zhǎng)(cm)＝10.5(ml/umol)(對(duì)于200ul菌液而言)按照試驗(yàn)1所述的方法，測(cè)定各試驗(yàn)組α-半乳糖苷酶活性，并計(jì)算α-半乳糖苷酶相對(duì)活性，其公式為
4、藥物篩選接P1C2于T-L-液體培養(yǎng)基中，30℃、250rpm培養(yǎng)過(guò)夜，T-L-液體培養(yǎng)基稀釋后，按1∶100分別加入羅格列酮(10mM)、DMSO以及待篩藥物(10mM)，30℃孵育12h后，進(jìn)行α-半乳糖苷酶活性測(cè)定。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)構(gòu)如下的大黃素及含有該化合物的提取物、組合物的用途在于a、制備由PPARγ介導(dǎo)的代謝性疾病的預(yù)防和治療藥物中應(yīng)用；b、利用對(duì)α-半乳糖苷酶相對(duì)活性測(cè)定對(duì)PPARγ激動(dòng)劑活性，篩選有效藥物；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃素及含有該化合物的提取物、組合物的用途，其特征在于PPARγ介導(dǎo)引起的代謝疾病II型糖尿病、肥胖癥、高脂血癥中應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃素及含有該化合物的提取物、組合物的用途，其特征在于利用對(duì)α-半乳糖苷酶相對(duì)活性測(cè)定篩選作為PPARγ激動(dòng)劑的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及大黃素作為過(guò)氧化物酶體增長(zhǎng)因子活化受體γ激動(dòng)劑的應(yīng)用。大黃素，以及含有該化合物的中藥的提取物、它們的各種組合物，用于制備作為由PPARγ介導(dǎo)的代謝性疾病的預(yù)防和治療藥物中應(yīng)用以及利用對(duì)α－半乳糖苷酶相對(duì)活性測(cè)定對(duì)PPARγ激動(dòng)劑活性篩選有效藥物。
文檔編號(hào)A61K31/122GK1709227SQ20041002527
公開(kāi)日2005年12月21日 申請(qǐng)日期2004年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月18日
發(fā)明者沈建華, 沈旭, 蔣華良, 陳俊華, 陳晴, 杜毅, 李國(guó)偉, 陳凱先 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所