專利名稱：：一種抗血小板活化因子化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種對于血小板活化因子(PAF)具有拮抗作用的藥物，特別涉及在銀杏內(nèi)酯B的10位上的氧原子上連接有含氮基團(tuán)的化合物。技術(shù)背景銀杏作為藥用植物由來已久，公元1000年左右，我國民間就使用銀杏葉治療哮喘與支氣管炎。隨著藥物提取工藝標(biāo)準(zhǔn)化和藥理作用活性硏究的深入，世界各國，特別是德國、法國等歐洲國家已將銀杏提取物(GB)廣泛用于治療呼吸系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)等疾病。銀杏內(nèi)酯是存在于銀杏葉及根莖中的一系列二萜類化合物，化學(xué)性質(zhì)相當(dāng)穩(wěn)定。銀杏內(nèi)酯是血小板活化因子(platelet-activatingfactor,PAF)的強(qiáng)拮抗物，血小板活化因子是一個(gè)很強(qiáng)的生理調(diào)節(jié)器，在很多生理現(xiàn)象上扮演著重要角色，如過敏、發(fā)炎及哮喘等等，因此尋找適當(dāng)?shù)腜AF對抗物來作為醫(yī)療上的使用便是醫(yī)學(xué)界一個(gè)很重要的課題。銀杏內(nèi)酯B(GinkgolideB,GB)是從銀杏葉中提取的一種六環(huán)籠狀結(jié)構(gòu)的二萜化合物，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的血小板活化因子(PAF)捨抗劑，它直接參與血栓形成，可刺激冠狀動(dòng)脈和腦動(dòng)脈，引起它們的收縮、痙攣，導(dǎo)致心肌和腦組織缺血。銀杏內(nèi)酯B是一種六環(huán)籠狀結(jié)構(gòu)的二萜化合物，口服LD505g/kg，顯示出具有高度的安全性，但銀杏內(nèi)酯B是剛性結(jié)構(gòu)，不溶于水，生物利用度差，致使藥效的充分發(fā)揮受到限制，影響臨床應(yīng)用效果。目前國內(nèi)外己有一些關(guān)于銀杏內(nèi)酯B衍生物的研究(W09518131),對于改變銀杏內(nèi)酯B的溶解性和藥效有一些研究，但均未涉及到其安全性等指標(biāo)的研究，尋找到一些安全、有效、生物利用度高的衍生物將為銀杏內(nèi)酯B的市場化開發(fā)帶來光明的前途。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問題本發(fā)明提供一種更安全、能夠提高水溶性并有利于充分發(fā)揮藥效的一種抗血小板活化因子化合物。技術(shù)方案本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種抗血小板活化因子化合物，在銀杏內(nèi)酯B的10位上的氧原子上連接有N-乙基嗎啉基團(tuán)，結(jié)構(gòu)如下。該化合物可以和各類有機(jī)酸或無機(jī)酸成鹽；該化合物的有機(jī)酸鹽可以為枸櫞酸鹽或乙酰水楊酸鹽；該化合物的無機(jī)酸鹽可以為甲磺酸鹽或鹽酸鹽；用該化合物可以制成臨床需要的口服制劑或注射劑。有益效果與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明是以銀杏內(nèi)酯B為母體，經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾，成為銀杏內(nèi)酯B的含氮衍生物，合成方法步驟少，處理簡單。產(chǎn)物在其成鹽后，其水溶性、生物利用度及療效均有提高和增強(qiáng)。其毒性的研究結(jié)果顯示比現(xiàn)有文獻(xiàn)提到的銀杏內(nèi)酯B衍生化合物毒性要低。本化合物具有血小板活化因子(PAF)拮抗作用，可應(yīng)用于治療和預(yù)防缺血性中風(fēng)、炎癥、哮喘等與PAF因子相關(guān)疾病的藥品制備中。具體實(shí)施例方式實(shí)施例IIO-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B及其甲磺酸鹽的制備工藝流程600mg(1.4mmol)銀杏內(nèi)酯B溶于40mL乙腈中，依次加入N-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽370mg(2.0mmol)，碳酸鉀2.5g，碘化鉀50mg，加熱回流1小時(shí)，反應(yīng)基本完全。冷卻，過濾，濾液減壓濃縮，所得固體中加入氯仿洗滌后得粗品。粗品柱層析，乙酸乙酯/石油醚(l:l)洗脫，得無色油狀物，該油狀物中加入適量無水乙醚，即有白色固體析出，過濾，干燥得白色固體300mg(收率40M)，即為10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B。所得固體溶于乙醇，將等摩爾量的甲磺酸的乙醇溶液滴加入，攪拌、旋干即得IO-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B甲磺酸鹽。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B及其甲磺酸鹽的合成路線:實(shí)施例210-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B乙酰水楊酸鹽及制備工藝流程將300mg的(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B溶于乙醇，將等摩爾量的乙酰水楊酸的乙醇溶液滴加入，攪拌、旋干即得10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B乙酰水楊酸鹽。10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B乙酰水楊酸鹽的合成路線實(shí)施例3修飾前后的化合物水溶性比較將結(jié)構(gòu)修飾前后化合物水溶性進(jìn)行簡單的對比，同樣取等摩爾量的銀杏內(nèi)酯B、10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B、10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B鹽酸鹽及IO-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B甲磺酸鹽，測定其溶解狀況，結(jié)果見表l。表1修飾前后的化合物水溶性比較結(jié)果化合物銀杏內(nèi)酯B10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B鹽酸鹽IO隱O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B甲磺酸鹽溶解性不溶不溶溶解溶解說明通過結(jié)構(gòu)修飾后，銀杏內(nèi)酯B衍生物相應(yīng)的鹽的水溶性能夠改變原銀杏內(nèi)酯B水溶性差的性狀。實(shí)施例4修飾前后抗血小板聚集活性比較血小板聚集反應(yīng)與體內(nèi)血栓形成、動(dòng)脈粥樣硬化等發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。這類疾病是當(dāng)前危害人類健康，導(dǎo)致死亡率最高的禍?zhǔn)字?。而防治血栓栓塞性疾病藥物，包括①抗凝劑②抗血小板藥③溶血栓劑等的藥理作用均與抑制血小板聚集反應(yīng)有關(guān)。家兔體外血小板聚集率測定方法新西蘭白兔，雌雄不拘，用利多卡因局部麻醉，頸動(dòng)脈插管放血，3.8%的枸櫞酸鈉1:9抗凝，以800r/min離心10min，取富血小板血漿(PRP)，剩余部分以3000r/min離心，取貧血小板血漿(PPP)，聚集誘導(dǎo)劑用PAF(終濃度0.37ug/ml)、。每管250^1PRP中加入不同濃度的藥物10ul，對照組PRP中加入生理鹽水10ul，溫育5min，然后加入10ug/ml的PAFlO(il，檢測定血小板lmin、5min、max聚集率，并按下述公式計(jì)算抑制率，結(jié)果見表2。計(jì)算公式對照組血小板聚集率-給藥組血小板聚集率血小板聚集抑制率(％)=^/n^,一^+X100對照組血小板聚集率表2.10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B對PAF誘導(dǎo)家兔體外血小板聚集率的影響(Z土SZ))<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從表2知10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B的IC50為16.26Ug/L，據(jù)文獻(xiàn)(Physuol.Rev.2000，80:16691699和Prog.Neurobiol.2002，67:235~257)報(bào)道銀杏內(nèi)酯B的IC50為106ng/L，大于10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B的IC50，說明銀杏內(nèi)酯B通過結(jié)構(gòu)修飾后的產(chǎn)物，藥物活性也隨之增加。實(shí)施例5藥物毒性實(shí)驗(yàn)藥物的毒性反應(yīng)，是由于用藥超過正常劑量或長期使用正常劑量而由于藥物積蓄體內(nèi)(如由于腎臟有病，藥物的排泄減少或肝臟有病，藥物在體內(nèi)的分解破壞減少)而發(fā)生的反應(yīng)。正常劑量無毒的藥物在過量使用或積蓄到一定濃度時(shí)，即可能產(chǎn)生毒性反應(yīng)。有些毒性大的藥物，稍過量即可中毒，有些藥物在治療劑量時(shí)即有毒性反應(yīng)。LD50是衡量藥物毒性大小的指標(biāo)，是評價(jià)藥物優(yōu)劣的重要參數(shù)。本試驗(yàn)采用改良的寇氏法測定LD50以大鼠作為受試動(dòng)物，選用文獻(xiàn)(W09518131)中化合物作對比。結(jié)果見表3。表3藥物毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從表3可以看出，10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B甲磺酸鹽口服時(shí)LD50大于5g/kg，基本上沒有顯示出藥物毒性，具有很高的安全性，10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B甲磺酸注射時(shí)LD50為lg/kg，其劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其體內(nèi)的藥物有效劑量，具有高度的安全性，同時(shí)也可以看出，本發(fā)明涉及的化合物的LD50在口服和注射時(shí)較其它化合物的LD50大，顯示出毒性更低，具有更加安全的藥理性質(zhì)。實(shí)施例610-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B甲磺酸鹽注射液的制備稱取10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B甲磺酸鹽20g，加注射用水2000ml溶解，灌裝成1000支，滅菌，包裝即得。肌肉、靜脈注射或靜脈滴注。實(shí)施例710-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B甲磺酸膠囊的制備稱取10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B甲磺酸鹽100g，加淀粉等輔料適量，混勻制成片劑1000粒即得，口服。權(quán)利要求1、一種抗血小板活化因子化合物，結(jié)構(gòu)如下其特征是在銀杏內(nèi)酯B的10位上的氧原子上連接有N-乙基嗎啉基團(tuán)。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗血小板活化因子化合物，其特征在于該化合物和各類有機(jī)酸或無機(jī)酸成鹽。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抗血小板活化因子化合物，其特征在于該化合物的有機(jī)酸鹽為枸櫞酸鹽或乙酰水楊酸鹽。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抗血小板活化因子化合物，其特征在于該化合物的無機(jī)酸鹽為甲磺酸鹽或鹽酸鹽。5、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗血小板活化因子化合物，其特征在于用該化合物制成臨床需要的口服制劑或注射劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗血小板活化因子化合物，該化合物在銀杏內(nèi)酯B的10位上的氧原子上連接有N-乙基嗎啉基團(tuán)。10-O-(N-乙基嗎啉基)銀杏內(nèi)酯B分子結(jié)構(gòu)式如圖該化合物還可以與相應(yīng)的有機(jī)酸或無機(jī)酸成鹽，將這種化合物制成適宜的劑型應(yīng)用于臨床，本發(fā)明具有能夠提高水溶性并有利于充分發(fā)揮藥效降低毒性、提高安全性等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號A61K31/5377GK101302221SQ20071002187公開日2008年11月12日申請日期2007年5月9日優(yōu)先權(quán)日2007年5月9日發(fā)明者秦引林申請人:秦引林