專利名稱：環(huán)加氧酶－2抑制性睡茄交酯組合物及其方法
背景技術(shù)：
(1)發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及睡茄交酯作為選擇性環(huán)加氧酶-2(COX-2酶)抑制劑的應(yīng)用。睡茄交酯對(duì)COX-1酶沒有影響。
(2)相關(guān)技術(shù)的描述茄科的沙丘催眠睡茄(L)是一種分布于整個(gè)印度干燥部分的直立常綠灌木。催眠睡茄，即Aswagandha，在印度草醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用是公知的。據(jù)報(bào)道，Aswagandha根部提取物作為人們用于治療腺病、關(guān)節(jié)炎、哮喘、高血壓、炎癥和風(fēng)濕病的藥物(Thakur，R.S.，等人，Majormedicinal plants of India；Ed.；Central Institute of Medicinaland Aromatic PlantsLucknow，India，531(1989))。催眠睡茄的葉子也可以作為治療包括腫瘤、炎癥、結(jié)膜炎和肺結(jié)核的多種疾病的藥物(Thakur，R.S.，等人，Major medicinal plants of India；Ed.；Central Institute of Medicinal and Aromatic PlantsLucknow，India，531(1989))。目前，這種植物的粉狀根部或根部提取物在美國被用作食物增補(bǔ)劑。
催眠睡茄中的主要化學(xué)成分為睡茄交酯。這些化合物在結(jié)構(gòu)上與麥角固醇骨架不同，區(qū)別在于其C-22和C-26被氧化形成δ-內(nèi)酯(Ray，A.B.，等人，Prog.Chem.Org.Nat.Prod.63，1-106(1994))。對(duì)催眠睡茄根部和葉子的化學(xué)分析導(dǎo)致了幾種睡茄交酯的分離和確定(Matsuda，M.，等人，Bioorg.Med.Chem.9，1499-1507(2001))。這種植物的果實(shí)為微橙色漿果并含有飽和與不飽和脂肪酸(StollerE.W.，等人，Lloydia，37，309-312(1974)；Monika，P.，等人，AsianJ.Chem.6，442-444(1994)；和Monika，P.，等人，Wsci.Phys.Sci.5，81-83(1993))。然而，并沒有完全研究葉子和果實(shí)的生物活性。睡茄交酯根據(jù)其結(jié)構(gòu)骨架分類(Ray，A.B.，等人，Prog.Chem.Org.Nat.Prod.63，1-106(1994))并且不同的結(jié)構(gòu)導(dǎo)致不同的藥理活性。已經(jīng)研究了睡茄交酯的消炎、抗癌、細(xì)胞毒素、免疫調(diào)節(jié)活性，以及其防止CCl4-引發(fā)的肝細(xì)胞毒性(Ray，A.B.，等人，Prog.Chem.Org.Nat.Prod.63，1-106(1994)；和Anjaneyulu，A.S.R.等人，Studies in Natural Products ChemistryStructure andChemistry(部分F)；Ed.Atta-ur-Rahman，卷20，135-261(1998))。據(jù)報(bào)道，它們還在動(dòng)物模型中誘導(dǎo)II期酶，這被認(rèn)為是癌化學(xué)防治的一個(gè)機(jī)理(Misico，R.I.，等人，J.Nat.Prod.65，677-680(2002)；和Su，B.N.，等人，Tetrahedron，58，3453-3466(2002))。
環(huán)加氧酶-1(COX-1酶)和環(huán)加氧酶-2(COX-2酶)酶引起花生四烯酸(一種存在于細(xì)胞中的脂類)轉(zhuǎn)化成前列腺素。前列腺素隨后在體內(nèi)引起炎癥性反應(yīng)。在許多人中COX-1酶受到抑制可能導(dǎo)致潰瘍的形成，因此通過化合物選擇性地抑制COX-2酶比當(dāng)前以非處方藥出售(OTC)的非選擇性非甾體抗炎藥(NSAIDs)更有優(yōu)點(diǎn)(Smith，W.L.，等人，Anu.Rev.Biochem.69145-182(2000))。重要的是記錄那些不僅僅在發(fā)炎細(xì)胞中而且通過各種腫瘤細(xì)胞觀察到了COX-2酶的過度表達(dá)(Patti，R.，等人，Cancer Lett.18013-21(2002)；Ohno，R.，等人，Cancer 911876-881(2001)和Khuder，S.A.，等人，BritishJournal of Cancer 841188-1192(2001))。因此對(duì)于癌癥的化學(xué)防治，人們更感興趣的是幾乎沒有COX-1酶活性的COX-2酶抑制劑。
發(fā)明目的因此本發(fā)明的一個(gè)目的是提供選擇性地抑制COX-2酶的組合物和方法。特別地，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種不抑制COX-1酶的方法和組合物。參考如下說明書和附圖這些和其它目的將變得更加明顯。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及一種相對(duì)于COX-1酶選擇性地抑制COX-2酶的方法，其包括提供有效量的睡茄交酯從而產(chǎn)生COX-2酶抑制。睡茄交酯優(yōu)選存在于催眠睡茄的植物材料中。特別地，本發(fā)明涉及一種相對(duì)于COX-1酶選擇性地抑制COX-2酶的方法，其包括提供有效量的存在于催眠睡茄中的分離或純化的睡茄交酯或其混合物，從而產(chǎn)生COX-2酶抑制。這種抑制可在體外作用，然而，優(yōu)選抑制在哺乳動(dòng)物的體內(nèi)進(jìn)行。
本發(fā)明方法優(yōu)選使用選自如下的化合物酸漿苦味素D(1→6)-β-D-比喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡糖苷；27-O-β-D-比喃葡萄糖基酸漿苦味素D；27-O-β-D-吡喃葡萄糖基粘內(nèi)酯B；4，16-二羥基-5β，6β-環(huán)氧酸漿苦味素D；4-(1-羥基-2，2-二甲基環(huán)-丙酮)-2，3-二氫生睡茄素A；2，3-二氫生睡茄素A；粘內(nèi)酯B；谷靛糖苷IX；酸漿苦味素D；睡茄糖苷IV，生睡茄素A，及其混合物。
并且，本發(fā)明涉及一種組合物，其包括比天然存在量增加的睡茄交酯或其混合物；和藥物學(xué)上可接受的載體，其中相對(duì)于COX-1酶該組合物選擇性地抑制COX-2酶。
優(yōu)選該組合物包括存在于催眠睡茄中的分離和純化的睡茄交酯或其混合物；和藥物學(xué)上可接受的載體，其中相對(duì)于COX-1酶該組合物選擇性地抑制COX-2酶。
在該組合物中，化合物為前面列出的化合物。
本發(fā)明還涉及下式的分離和純化的化合物 其中R為Glc-(1→6)-Glc-(1→4)-Glc，其中Glc為葡萄糖，并且其中R′為H。
本發(fā)明還涉及下式的分離和純化的化合物 其中R為Glc，并且R′為Glc，其中Glc為葡萄糖。
本發(fā)明還涉及下式的分離和純化的化合物
其中R＝O、R′＝H、R″＝H和R_＝Glc，其中Glc為葡萄糖。
本發(fā)明還涉及下式的分離和純化的化合物 其中R＝-OH、R′＝Glc、R′＝OH和R_＝H。
最后，本發(fā)明還涉及下式的純化的化合物 附圖簡述

圖1-1D是表示睡茄交酯1-12結(jié)構(gòu)的化學(xué)式。
圖2A-2E是表示在化合物1、2、3、4和5中觀察到的一些重要的HMBC(→)相關(guān)性的化學(xué)式。
圖3A為表示商用非甾體抗炎藥(NSAIDs)對(duì)COX-1酶和COX-2酶抑制活性的圖表。阿斯匹林、布洛芬和萘普生分別在180、2.1和2.5μg/ml下測(cè)試。西樂葆、萬絡(luò)和貝克斯他分別在1.67μg/ml測(cè)試。DMSO溶劑對(duì)照組不抑制COX酶。數(shù)據(jù)以標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝2)的平均值表示。
圖3B為表示睡茄交酯1-12在100μg/ml下對(duì)COX-1酶和COX-2酶抑制活性的圖表。DMSO溶劑對(duì)照組不抑制COX酶。垂直條形圖表示每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝2)。即便是在500μg/ml的濃度下，睡茄交酯1-12也沒有抑制COX-1酶。
圖4A和4B為表示化合物1-5在50、100和250μg/ml的濃度下抑制COX-2酶的劑量依賴關(guān)系。垂直條形圖表示每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝2)。
圖5表示化合物4、7、10和11在100ppm下和合成抗氧化劑BHA、BHT和TBHQ在10ppm的濃度下在20分鐘時(shí)對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制作用的圖表。用作溶劑對(duì)照組的DMSO沒有顯示出活性。同樣，睡茄交酯1-3、5、6、8、9和12在100ppm濃度時(shí)也沒有顯示出活性。數(shù)據(jù)以標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝2)的平均值表示。
優(yōu)選實(shí)施方案的說明現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，催眠睡茄的葉提取物具有良好的選擇性的COX-2酶抑制活性。已經(jīng)公開了得自催眠睡茄葉提取物的幾種新睡茄交酯和多種已知睡茄交酯的分離和鑒定。還公開了由葉子中分離的睡茄交酯對(duì)環(huán)加氧酶的抑制作用及其抗氧化活性。
已經(jīng)從催眠睡茄的葉子中分離出了四種新的睡茄交酯糖苷和一種睡茄交酯(此處全部稱為“睡茄交酯”)?；?D-、2G-核磁共振和質(zhì)譜數(shù)據(jù)，將這些新化合物的結(jié)構(gòu)澄清為酸漿苦味素D(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-比喃葡糖苷(1)、27-O-β-D-比喃葡萄糖基酸漿苦味素D(2)、27-O-β-D-吡喃葡萄糖基粘內(nèi)酯B(3)、4，16-二羥基-5β，6β-環(huán)氧酸漿苦味素D(4)和4-(1-羥基-2，2-二甲基環(huán)-丙酮)-2，3-二氫生睡茄素A(5)。并且分離出了幾種已知的睡茄交酯生睡茄素A(6)、2，3-二氫生睡茄素A(7)、粘內(nèi)酯B(8)、23，24-二氫生睡茄素A(9)、谷靛糖苷IX(10)、酸漿苦味素D(11)和睡茄交酯IV(12)。測(cè)試這些睡茄交酯以確定其抑制環(huán)加氧酶-1(COX-1酶)和環(huán)加氧酶-2(COX-2酶)酶和脂質(zhì)過氧化作用的能力。除化合物9外，在100μg/ml時(shí)測(cè)試的睡茄交酯顯示出9-40％的COX-2酶抑制作用?；衔?、10和11還分別以40、10和55％抑制了脂質(zhì)過氧化作用。
實(shí)施例1-12購買的催眠睡茄葉提取物與密執(zhí)安州大學(xué)生物活性天然產(chǎn)物和植物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的溫室中生長的催眠睡茄作物上采集的鮮葉甲醇提取物相同。通過制備性的TLC和HPLC純化提取物得到純的睡茄交酯1-12。
將化合物1以無定型粉末形式分離出來，并且通過HRFABMS由[M+H]+離子在m/z 945.4682(計(jì)算值為945.4695)確定其分子式為C46H73O20?；衔?的紅外光譜在3046和1698cm-1處顯示吸收光帶，分別對(duì)應(yīng)于-OH和α，β-不飽和內(nèi)酯部分。在其HMQC光譜中，在δ4.22、4.20和4.15處的三個(gè)異頭質(zhì)子雙峰分別與在δ103.0、103.9和104.8處的三個(gè)異頭碳相對(duì)應(yīng)，這表明化合物1含有一個(gè)三糖苷部分。除了糖苷信號(hào)外，化合物1還顯示出28個(gè)碳的信號(hào)。在80.1、32.8、160.4、123.6和168.6ppm處的信號(hào)歸屬于分子中6元環(huán)α，β-不飽和內(nèi)酯部分，并且δ139.0和125.5的烯碳?xì)w屬于C-5和C-6?；衔?的DEPT光譜在δ74.9、73.6、80.1處顯示出三個(gè)次甲基碳并且在δ57.6處顯示出一個(gè)亞甲基碳的存在，并表現(xiàn)出C-1、C-3、C-22和C-27氧化的碳原子。
1H NMR中δ0.60、0.90和1.90處的單峰以及在0.92ppm處的雙峰分別歸屬于C-18、19、28和21。正如其顯示了與其HMQC的125.5ppm處的該碳原子的相關(guān)性，在δ5.50處的烯屬質(zhì)子位于C-6上。
化合物1中糖單元的C-6′和C-4″分別出現(xiàn)在70和77.8ppm。在沒有共軛的葡萄糖中，這些碳原子通常分別出現(xiàn)在62和71ppm附近。通過在δ4.22處的H-1′和73.6ppm處的C-3之間觀察到的HMBC相關(guān)性(圖2A)，證實(shí)一個(gè)葡萄糖單元連接在糖苷配基的C-3上。對(duì)化合物1(圖2A)葡萄糖鍵重要的其它HMBC相關(guān)性分別是在δ4.20處的H-1″與δ70.0處的C-6′之間和在δ4.15處的H-1_與77.8ppm的C-4″之間?；衔?的酸解僅僅得到右旋葡萄糖和糖苷配基。糖苷配基的1H NMR光譜數(shù)據(jù)與公開的sominone的光譜數(shù)據(jù)相同(Atta-ur-Rahman；Jamal，S.A.，；Choudhary，M.I.Heterocycles34689-698(1992))。并且，在我們實(shí)驗(yàn)室中將化合物1的13C NMR數(shù)據(jù)與作為酸漿苦味素D(11)水解產(chǎn)物的sominone相比較。因此，化合物1中的葡萄糖鍵被確定為[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(→4)-β-D-吡喃葡糖苷]。在其FABMS中于m/z783、621和459處得到的化合物1的質(zhì)譜片斷表明三個(gè)葡萄糖單元的相繼損失，其進(jìn)一步證實(shí)建議的化合物1的結(jié)構(gòu)為Physagulin D(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1-4)-β-D-吡喃葡糖苷。
由于羥基和α，β-不飽和δ-內(nèi)酯的羰基官能團(tuán)的存在，以無定形粉末形式分離得到的化合物2的紅外吸收光譜在3407、1696cm-1處顯示吸收光帶。化合物2的質(zhì)譜在m/z 783.4168處(計(jì)算值783.4188)顯示[M+H]+離子，其符合分子式C40H63O5。在δ0.76、1.01和2.11處以單峰出現(xiàn)的1H NMR分別歸屬于化合物2上的三個(gè)甲基。在δ1.22處還顯示出一個(gè)甲基雙峰、作為雙峰的C-27亞甲基質(zhì)子(在δ4.60和4.46處針對(duì)每個(gè)質(zhì)子積分的)、在δ4.50和3.83處的氧化次甲基多重峰和在δ5.49處的烯屬質(zhì)子?；衔锏?3C NMR在δ168.6處顯示出α，β-不飽和δ-內(nèi)酯羰基、在δ74.9和73.6處顯示出兩個(gè)氧化次甲基，并且在δ139.1和125.4處顯示出烯屬碳原子的信號(hào)。化合物2的核磁共振譜與化合物1的相似，主要差別是由于缺少一個(gè)糖而引起的，正如由于分別在δ4.20和104.8處缺少異頭質(zhì)子和碳信號(hào)而指示的。對(duì)化合物2的酸解得到右旋葡萄糖和sominone(Atta-ur-Rahman等人，Heterocycles 34689-698(1992))，通過比較TLC發(fā)現(xiàn)與化合物1的水解產(chǎn)物相同。化合物2在m/z 783處產(chǎn)生的分子離子比化合物1的小162amu，表示其大致結(jié)構(gòu)為simonene二葡糖苷。基于在δ3.83的H-3和δ102.7的C-1′之間觀察到的HMBC的相關(guān)性(圖2B)，化合物2的一個(gè)葡萄糖單元被歸屬于在C-3上。當(dāng)與化合物1中的相似碳原子在δ57.6處的化學(xué)位移相比較，當(dāng)在δ63.5處的C-27碳原子移動(dòng)到低磁場5.9ppm時(shí)，化合物2的第二葡萄糖單體被歸屬于在C-27上。化合物2中的鍵得到了在δ63.5處的C-27和δ4.31的H-1″之間觀察到的其HMBC光譜相關(guān)性(圖2B)的進(jìn)一步支持。通過將化合物2中的A環(huán)和內(nèi)酯環(huán)碳原子與酸漿苦味素D(11)和谷靛糖苷IX(10)的13C NMR數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，在C-3和C-27上糖單體的位置得到了進(jìn)一步的證實(shí)。因此，化合物2的結(jié)構(gòu)被確定為27-O-β-D-吡喃葡萄糖基酸漿苦味素D。
以無定形粉末形式分離得到的化合物3的HRFABMS在m/z673.3200(計(jì)算值673.3224)處顯示[M+Na]+峰值，并相應(yīng)于分子式C34H50O12。如3425、1700和1652cm-1處的吸收光帶所示，化合物3的紅外吸收光譜分別表明羥基、α，β-不飽和δ-內(nèi)酯和六元環(huán)酮的存在。化合物3的1H NMR譜在δ3.66、3.33和4.44處顯示出三個(gè)氧化次甲基質(zhì)子、在δ0.67、0.98、1.18和2.1處顯示出四個(gè)甲基，并且在δ4.59和4.45處顯示出氧化亞甲基的信號(hào)。還在δ4.31處顯示異頭質(zhì)子的雙峰和在3.15ppm處的較寬的單峰，其分別與HMQC中的在δ102.7和δ56.6處的異頭碳和環(huán)氧碳相關(guān)。由于羰基碳的存在，13CNMR譜在δ210.2處顯示酮基的信號(hào)、在δ63.8和56.6處顯示環(huán)氧部分的信號(hào)，并且在δ78.9、29.6、159.1、122.5和167.4處顯示六元環(huán)α，β-不飽和內(nèi)酯部分的信號(hào)。光譜數(shù)據(jù)表明化合物3與粘內(nèi)酯B(8)密切相關(guān)。
經(jīng)光譜研究證實(shí)，水解化合物3得到粘內(nèi)酯B(8)和右旋葡萄糖。這表明化合物3為粘內(nèi)酯葡糖苷。其HMBC光譜分析表明，當(dāng)δ61.6處的C-27與4.31處的異頭質(zhì)子相關(guān)時(shí)，葡萄糖部分連接到C-27上。葡萄糖單體與C-27的連接還進(jìn)一步得到了與出現(xiàn)在δ57.1處的糖苷配基粘內(nèi)酯B(9)相比，C-27碳原子向低磁場位移5.3ppm證實(shí)。光譜數(shù)據(jù)表明，化合物3的結(jié)構(gòu)為27-O-β-D-吡喃葡萄糖基粘內(nèi)酯B(3)。
化合物4以與化合物12不可分離的混合物形式得到，并且其比例大約為2∶1。HRFABMS在m/z 669.3456(計(jì)算值669.3486)處顯示[M+H]+峰值，其相應(yīng)于分子式C34H53O13。由分子離子損失162amu而得到在m/z 507處的標(biāo)準(zhǔn)峰，表明化合物4含有一個(gè)糖苷。通過由DEPT、HMQC和HMBC光譜研究得到的支持證據(jù)，化合物4的1H和13C NMR的歸屬是毫不含糊的。
除糖碳之外，13C NMR和DEPT光譜在δ11.9、13.6、15.0和20.0處顯示四個(gè)甲基，在δ168.5處顯示α，β-不飽和δ-內(nèi)酯，并且在δ79.0、75.6、73.6和59.4處顯示氧化次甲基的信號(hào)。
在m/z 669處的分子離子比酸漿苦味素D的(M/z 621)高48amu，表示化合物4在其結(jié)構(gòu)中含有另外三個(gè)氧官能團(tuán)。這些氧官能團(tuán)中的一個(gè)歸屬于C-5和C-6處的環(huán)氧化物，C-5和C-6在其13C NMR中分別在δ65.5和59.4處共振。通過HMBC試驗(yàn)(圖2D)證實(shí)，第二和第三個(gè)氧官能團(tuán)確定為羥基并位于C-4和C-16處。將化合物4的1H和13C NMR數(shù)據(jù)與酸漿苦味素D相比較，表明其糖部分為葡萄糖并連接在分子的C-3上。通過在δ73.6的C-3和δ4.38的H-1′之間觀察到的HMBC光譜相關(guān)性(圖2D)，葡萄糖單體與C-3之間的連接被證實(shí)。因此，化合物4的結(jié)構(gòu)被確定為4，17-二羥基-5β，6β-環(huán)氧酸漿苦味素D。
以無定形粉末形式分離得到的化合物5的紅外吸收光譜分別在3434cm-1和1704cm-1處顯示羥基和δ-內(nèi)酯羰基的吸收光帶。HRFABMS在m/z 555.3335(計(jì)算值555.3323)處產(chǎn)生[M+H]+離子，其經(jīng)分析為C33H47O7。化合物5的13C NMR和DEPT光譜顯示6個(gè)甲基、9個(gè)亞甲基、9個(gè)次甲基和9個(gè)季碳原子的存在。化合物5的1H NMR在δ0.69、0.98、1.18和2.07處顯示四個(gè)甲基的信號(hào)。在δ4.35和4.28處的雙峰歸屬于C-27上甲基的兩個(gè)質(zhì)子。并且，出現(xiàn)于δ3.19處的質(zhì)子信號(hào)歸屬于H-4。除了化合物5在δ210.1、52.1、72.8和25.0處具有另外的碳信號(hào)之外，化合物5的13C NMR光譜與二氫生睡茄素A(7)的光譜相似。化合物5中相應(yīng)的質(zhì)子信號(hào)位于δ1.35(6H，s)和3.70(1H，s)處。附加的碳信號(hào)說明了化合物5中2，2-二甲基環(huán)丙酮部分，這得到了MS和DEPT的證明。HMBC光譜的分析表明，化合物中2，2-二甲基環(huán)丙酮部分通過二氫生睡茄素A(7)的C-4羥基連接(圖2E)。在FABMS中在m/a 472[M+H-C5H7O]+和m/z[M+H-C5H8O]+處的片斷還證明了建議的化合物5的結(jié)構(gòu)。
使用前列腺素內(nèi)過氧化物合酶同功酶-1(COX-1酶)和PGHS-2(COX-2酶)評(píng)價(jià)了由葉子中分離得到的睡茄交酯的環(huán)加氧酶(COX)抑制活性。阿斯匹林、布洛芬、萘普生、西東葆和貝克斯他用作陽性對(duì)照組，并且它們分別顯示61、53、79、23和25％的COX-1酶抑制活性；7、59、95、98和99％的COX-2酶抑制活性(圖3A)。萬絡(luò)抑制了80％的COX-2酶，而沒有抑制COX-1酶。新睡茄交酯1-5分別在50、100和250μg/ml下測(cè)試，并且所有由葉子中分離的其它睡茄交酯在100μg/ml濃度下測(cè)試。在100g/ml濃度下，化合物6、7、8、10、11和12分別得到了39、27、35、13、14和23％的COX-2酶抑制活性(圖3B)。對(duì)于化合物1-5，觀察了對(duì)于COX-2酶的劑量依賴性抑制(圖3)，并且在濃度測(cè)試中睡茄交酯的活性變化很大。在50μg/ml濃度下，化合物1-5表現(xiàn)出的COX-2酶抑制活性分別為15、9、7、5和15(圖4)。需要指出的是，即便是在500μg/ml濃度下，測(cè)試的睡茄交酯也沒有抑制COX-1酶。然而在COX-2酶測(cè)試中，對(duì)于所有的化合物，當(dāng)濃度從100μg/ml增加到250μg/ml時(shí)，活性仍然相同。在更高濃度下COX-2酶抑制活性沒有增加，這可能是由于在測(cè)試條件下睡茄交酯的溶解度原因。與化合物8和6相比，化合物3和10的COX-2酶抑制活性降低，這可能是由于在化合物3和10中發(fā)生了C-27糖基化。在C-23和C-24之間沒有雙鍵的化合物9對(duì)COX-1酶和COX-2酶都沒有顯示出抑制活性。這表明在α，β-不飽和δ-內(nèi)酯部分中的雙鍵對(duì)于COX-2酶抑制活性是相當(dāng)重要的。
睡茄交酯在模型體系中抑制脂質(zhì)過氧化作用的性能用來測(cè)定其是否可用作抗氧化劑。該測(cè)試可使用大的單層脂質(zhì)體進(jìn)行，并且過氧化作用可通過加入Fe2+引發(fā)。除化合物4、7、10和11外，測(cè)試的其它睡茄交酯沒有抑制脂質(zhì)過氧化作用(圖5)。在我們的測(cè)試體系中，單糖苷4、7、10和11分別抑制了40、5、44和55％的脂質(zhì)過氧化作用。
睡茄交酯對(duì)COX-2酶抑制活性的體外結(jié)果提供了使用催眠睡茄葉制劑作為民間用于治療炎癥的藥物的科學(xué)依據(jù)(Thakur，R.S.，Majormedicinal plants of India；Ed.；Central Institute of Medicinaland Aromatic PlantsLucknow，印度p.531(1989))。本發(fā)明還展示了這組化合物對(duì)COX-2酶抑制活性的第一份報(bào)告。在腫瘤細(xì)胞中觀察到了COX-2酶的過度表達(dá)表現(xiàn)，因此，選擇性的COX-2酶抑制劑可預(yù)防腫瘤的發(fā)展。報(bào)告表明睡茄交酯表現(xiàn)出抗癌活性(Thakur，R.S.，Major medicinal plants of India；Ed.；Central Instituteof Medicinal and Aromatic PlantsLucknow，印度p.531(1989))。因此，這些化合物可用作發(fā)展癌癥化學(xué)預(yù)防治療學(xué)的模板。由于催眠睡茄的葉和根都含有類似的睡茄交酯，以抑制COX-2酶的水平使用催眠睡茄根部粉末或葉提取物作為食物增補(bǔ)劑可降低炎癥疼痛、癌形成和腫瘤發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)。
試驗(yàn)步驟通常在500MHz VRX光譜儀上記錄1H NMR光譜。在125MHz處得到13C NMR光譜。在CDCl3或CD3OD中記錄化學(xué)位移。將HMBC設(shè)定在J＝8.0Hz。用于MPLC的硅膠為默克硅膠60(粒徑為35-70μm)。在JEOL HX-110雙聚焦質(zhì)譜儀上以陽性的模式操作得到HRFAB和FAB質(zhì)譜。制備性的HPLC在串連有C18柱(JAIGEL，10μm，20×250毫米)的再循環(huán)制備性HPLC(購自Japan Analytical Industry Co，型號(hào)為LC-20)上以3ml/min的速率進(jìn)行。使用的所有的有機(jī)溶劑和標(biāo)準(zhǔn)樣品為ACS試劑級(jí)。睡茄交酯的收率以葉子的百分干重表示。
植物材料萃取物(H-341)購自PhytoMyco ResearchCorporation，Greenville，NC，并且如下制備將陰干并碾碎的催眠睡茄葉連續(xù)用二氯甲烷和甲醇的混合物(1∶1，v/v)、甲醇和水萃取，得到三個(gè)級(jí)分。然后合并所有的級(jí)分，在減壓下過濾并干燥。將所得萃取物儲(chǔ)存在-20℃直到使用。
睡茄交酯的分離將由PhytoMyco Research Corporation得到的合并粗提物(4g)與正己烷(500ml)一起攪拌并過濾。在MPLC上使用CHCl3和甲醇(v/v)在梯度條件下對(duì)己烷不溶部分(3.2g)進(jìn)行色譜分析。收集的級(jí)分為I(600mg，CHCl3∶MeOH，9∶1)、II(500mg，CHCl3∶MeOH，8∶2)、III(1.2g，CHCl3∶MeOH，7∶3)和IV(200mg，CHCl3∶MeOH，1∶1)。使用CHCl3和甲醇(1∶1，v/v)對(duì)級(jí)分1進(jìn)行重復(fù)的MPLC，得到純化合物6(120mg，0.078％)、化合物7(50mg，0.032％)和級(jí)分1(4.0mg)。進(jìn)一步通過PTLC(己烷和乙酸乙酯，6∶4，v/v)純化該級(jí)分，得到純化合物9(2.1mg，0.0014％)。使用甲醇-水(1∶1，v/v)通過制備性的HPLC提純級(jí)分II，在19.5分鐘得到化合物10(20mg，0.013％)，在24.2-28.1分鐘得到級(jí)分2(50mg)。使用甲醇-水(4∶6，v/v)在HPLC上進(jìn)一步提純?cè)摷?jí)分，在32.96分鐘得到化合物11(40mg，0.026％)。同樣，通過制備性的HPLC(甲醇-水，6∶4，v/v)提純級(jí)分III，在112分鐘得到純化合物12(15mg，0.0097％)，在20-45分鐘得到級(jí)分3(950mg)，在140-160分鐘得到級(jí)分4(16mg)。通過HPLC(甲醇-水，6∶4，v/v)進(jìn)一步純化級(jí)分3，分別在66.8和78.6分鐘得到化合物8(200mg，0.13％)和化合物5(10mg，0.0065％)，并且在132分鐘得到700mg蔗糖。對(duì)級(jí)分4進(jìn)行HPLC(甲醇-水，7∶3，v/v)在81分鐘得到化合物2(12mg，0.0078％)。通過HPLC(甲醇-水，7∶3)純化級(jí)分IV，并且在20-30分鐘收集級(jí)分5(13mg)，在30.1-66分鐘收集級(jí)分6(30mg)。通過HPLC(甲醇-水，7∶3，v/v)純化級(jí)分6，在57.9分鐘得到化合物3(8.5mg，0.0055％)。使用甲醇-水(6∶4，v/v)通過HPLC進(jìn)一步純化級(jí)分5，在59.3分鐘得到純化合物1(10.5mg，0.0068％)，在96.4分鐘得到化合物4和化合物12的混合物(5.0mg，0.0032％)。
化合物1無色、無定形粉末；IR vmax(KBr)3406、1698、1650、1383、1076、1042cm-1；1H NMR(CD3OD)δ0.60(3H，s，Me-18)，0.90(3H，s，Me-19)，0.92(3H，d，J＝7.0Hz，Me-21)，1.90(3H，s，Me-28)，3.36(1H，m，H-3)，4.15(1H，d，J＝8.0Hz，H-1_)，4.20(1H，d，J＝8.0Hz，H-1′)，4.22(1H，d，J＝8.0Hz，H-1′)，4.30(1H，t，J＝2.3Hz，H-1)，4.35(2H，br，s，H-27)，4.48(1H，dt，J＝13.0，3.4Hz，H-22)，5.50(1H，br，D，J＝5.5Hz，H-6)；13C NMR數(shù)據(jù)(表1)；FABMS m/z 945(M+H+)、783(M+H+-葡萄糖)，621(M+H+-2×葡萄糖)、459(糖苷配基)；HRFABMS m/z 945.4682(M+H+；C46H73O20的計(jì)算值945.4695)。
表1睡茄交酯1-5的13C NMR化學(xué)位移
a數(shù)據(jù)是在CD3OD中在25℃125MHz記錄的。
通過DEPT試驗(yàn)確定多重峰并通過HMQC光譜分析確認(rèn)。
化合物2無色、無定形粉末；IR vmax(KBr)3407、1696、1652、1398、1040cm-1；1H NMR(CD3OD)δ0.76(3H，s，Me-18)，1.01(3H，s，Me-19)，1.22(3H，d，J＝7.0Hz，Me-21)，2.11(3H，s，Me-28)，3.83(1H，m，H-3)，4.31(1H，d，J＝8.0Hz，H-1″)，4.36(1H，d，J＝8.0Hz，H-1′)，4.46(1H，d，J＝11.5Hz，H-27b)，4.48(1H，dt，J＝13.0，3.4Hz，H-22)，4.50(1H，t，D，J＝2.3Hz，H-1)，4.60(1H，d，J＝11.5Hz，H-27a)，5.49(1H，br，d，J＝5.5Hz，H-6)；13C NMR數(shù)據(jù)(表1)；FABMS m/z 783(M+H+)；HRFABMS m/z 783.4168(M+H+；C40H63O15的計(jì)算值783.4188)。
化合物3無色、無定形粉末；IR vmax(KBr)3425、1700、1652、1400、1259、1058cm-1；1H NMR(CD3OD)δ0.67(3H，s，Me-18)，0.98(3H，d，J＝7.0Hz，Me-21)，1.18(3H，s，Me-19)，2.10(3H，s，Me-28)，3.15(1H，br s，H-6)，3.33(1H，d，J＝8.0Hz，H-4)，3.36(dd，1H，J＝11.0，3.0Hz，H-3)，4.31(1H，d，J＝7.5Hz，H-1′)，4.44(1H，dt，J＝13.5，3.5Hz，H-22)，4.45(1H，d，J＝11.5Hz，H-27b)，4.59(1H，d，J＝11.5Hz，H-27a)；13C NMR數(shù)據(jù)(表1)；FABMS m/z 673([M+Na]+)；HRFABMS m/z 673.3200([M+Na]+；C34H50O12的計(jì)算值673.3224)。
化合物4無色、無定形粉末；IR vmax(KBr)3424、1697、1652、1398、1384、1076、1042cm-1；1H NMR(CD3OD)δ0.69(3H，s，Me-18)，1.0(3H，d，J＝7.0Hz，Me-21)，1.22(3H，s，Me-19)，2.08(3H，s，Me-28)，3.14(1H，brs，H-6)，3.41(brt，J＝7.5Hz，H-16)，3.43(1H，d，J＝8.0Hz，H-4)，3.60(1H，m，H-3)，4.19(1H，br s，H-27)，4.38(1H，d，J＝7.5Hz，H-1′)，4.30(1H，dt，J＝13.5，3.4Hz，H-22)，4.46(1H，t，J＝2.3Hz，H-1)；13C NMR數(shù)據(jù)(表1)；FABMS m/z 669(M+H+)，507(糖苷配基)；HRFABMSm/z 669.3456(M+H)+；C34H53O13的計(jì)算值669.3486)。
化合物5無色、無定形粉末；IR vmax(KBr)3434、1704、1634、1397、1382、1256、1236、1058、999cm-1；1H NMR(CD3OD)δ0.69(3H，s，Me-18)，0.98(3H，d，J＝6.5Hz，Me-21)，1.18(3H，s，Me-19)，1.35(6H，s，Me-4′或5′)，2.07(3H，brs，Me-28)，3.15(1H，brs，H-6)，3.19(1H，t，J＝2.3Hz，H-4)，3.70(1H，s，Hz，H-1′)，4.28(1H，d，J＝12.0Hz，H-27)，4.35(1H，d，J＝12.0Hz，H-27)，4.42(1H，dt，J＝13.0，3.0Hz，H-22)；13C NMR數(shù)據(jù)(表1)；FABMS m/z 555(M+H+)，472[M+H-C5H7O]+、471[M+H-C5H8O]+；HRFABMS m/z 555.3335(M+H)+；C34H50O12的計(jì)算值555.3323)。
酸解將化合物1-5每種1mg和化合物11(5mg)分別溶于6％的HCl中，并在回流下加熱3小時(shí)。用1N NaOH中和所得溶液并用乙酸乙酯萃取。濃縮所得的乙酸乙酯萃取物，通過光譜試驗(yàn)表征糖苷配基。濃縮水溶液并分析糖分。經(jīng)測(cè)定，水溶液中僅僅存在右旋葡萄糖。
化合物6-12通過詳細(xì)1H和13C NMR光譜試驗(yàn)，將化合物6-12的結(jié)構(gòu)導(dǎo)出為生睡茄素A(6)(Anjaneyulu，A.S.R.等人Indian J.Chem.Sect.B.36161-165(1997))、2，3-二氫生睡茄素A(7)(Anjaneyulu，A.S.R.等人Indian J.Chem.Sect.B.36161-165(1997))、viscalactone B(8)(Pelletier，S.W.等人Heterocycles15317-320(1981))、23，24-二氫生睡茄素A(9)(Kirson，I.等人Tetrahedron 262209-2219(1970))、谷靛糖苷IX(10)(Ghosal，B.等人Ind.J.Nat.Prod.412-13(1988))、酸漿苦味素D(11)(Shingu，K.等人，Chem.Pharm.Bull.402088-2091(1992))、睡茄交酯IV(12)(Matsuda，M.等人，Bioorg.Med.Chem.91499-1507及其引用的參考文獻(xiàn)(2001))。這些化合物的光譜數(shù)據(jù)與其各自公開的數(shù)據(jù)相同。
CD分析化合物1-5的CD光譜在JASCO J-710型CD-ORD光譜儀上在NaOH中在以下條件下記錄掃描方式(波長)頻帶寬度(0.5nm)，靈敏度(50m deg)，響應(yīng)值(1秒)，波長范圍(200-400nm)，階梯分辨率(1nm)，掃描速率(100nm min-1)和累積(1)。對(duì)于化合物1-5觀察到的最大和最小(Δε)CD為1(c 0.001，MeOH)，Δε+73.7(257)；2(c 0.0005，MeOH)，Δε+15.4(262.5)；3(c 0.001，MeOH)，Δε+4.7(261)；4(c 0.0005，MeOH)，Δε+61.6(260)和5(c 0.001，MeOH)，Δε+9.8(260)。
實(shí)施例13環(huán)加氧酶抑制測(cè)試COX-1酶由公羊的精囊制備，將COX-2酶用人PGHS-2酶從昆蟲的無性細(xì)胞中分離。如下測(cè)定測(cè)試化合物對(duì)COX-1酶和COX-2酶的抑制作用在37℃下，使用連接到生物氧需要量監(jiān)測(cè)器(Yellow Spring Instrument，Inc.，Yellow Spring OH)的氧電極(Instech Laboratories，Plymouth Meeting，PA)監(jiān)測(cè)O2的吸收速率。將所述酶用三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH為7，10-15μl)稀釋(1∶1)，將溶于DMSO中的測(cè)試化合物(100μg/ml，10μl)加入到由3ml pH為7的0.1M三鹽酸、1mmol苯酚和85μg血紅蛋白組成的測(cè)試混合物中。將混合物培養(yǎng)2-3分鐘，并且通過加入花生四烯酸(10μl 1.64μM的溶液)引發(fā)反應(yīng)。通過使用Quick LogData采集和控制計(jì)算機(jī)軟件(Strawberry Tree Inc.，Sunnyvale，CA，USA)測(cè)定瞬時(shí)抑制。陽性對(duì)照阿斯匹林、布洛芬、萘普生分別在180、2.1和2.5μg/ml下測(cè)試，并且西樂葆、萬絡(luò)和貝克斯他在1.67μg/ml下測(cè)試。DMSO用作溶劑對(duì)照組(Wang，H.等人，J.Nat.Prod.62294-296(1999))。結(jié)果如圖3A和3B所示。圖4表示使用睡茄交酯1-5的結(jié)果。
實(shí)施例14抗氧化活性根據(jù)公開的方法(Ramsewak，R.S.等人，Phytomedicine 7303-308(2000))制備大的單層脂質(zhì)體(脂質(zhì)體懸浮液)。最終測(cè)試體積為2ml，包括100μl HEPES緩沖劑(50mMHEPES和50mM TRIS)、200μl 1M NaCl、1.64ml N2-沖洗過的水、20μl試樣或DMSO和20μl脂質(zhì)體懸浮液。通過加入20μlFeCl2·4H2O引發(fā)過氧化作用。使用Turner Model 450數(shù)字熒光計(jì)在0、1、3時(shí)以及每隔3分鐘直到21分鐘監(jiān)測(cè)熒光。相對(duì)熒光強(qiáng)度隨時(shí)間降低表示過氧化作用的速率。根據(jù)DMSO對(duì)照組計(jì)算抑制百分?jǐn)?shù)。所有化合物在100μg/ml下進(jìn)行測(cè)試，并且陽性對(duì)照BHA、BHT和TBHQ在10μM下進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果如圖5所示。
藥物組合物在藥物組合物中，睡茄交酯在1-1000毫克每毫升或克的劑量下具有抑制作用。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，將一種或多種處理患者的睡茄交酯以抑制量在藥物可接受的載體中施加到患者。因此，睡茄交酯與藥物載體物質(zhì)通過現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法處理，例如通過常規(guī)的混和、造粒、包衣、懸浮和封裝方法制成口服或直腸給藥的常用制劑。因此，用于口服的睡茄交酯制劑可通過將一種或多種蒽醌與固體藥物載體混和得到；任選地將所得的混合物造粒；如果需要和/或任選地在加入合適的助劑后，處理該混合物或?qū)⑵湓炝３善瑒┗蛱且峦璧男问健?br> 用于固體制劑的合適的藥物載體特別是，填充劑例如糖，如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇，纖維素制劑和/或磷酸鈣，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣；還有粘合劑，例如淀粉糊，例如玉米、小麥、大米或馬鈴薯淀粉、膠質(zhì)、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉鹽和/或聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯或聚甲基丙烯酸酯與部分游離的官能團(tuán)化的酯；如果需要，和/或起泡劑，例如上述淀粉，以及羧甲基淀粉、交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂，或海藻酸或其鹽，例如海藻酸鈉。助劑主要是流動(dòng)調(diào)節(jié)劑和潤滑劑，例如硅酸、滑石粉、硬脂酸或其鹽，例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣。糖衣丸提供有合適的涂層，任選耐胃液的涂層，其中尤其使用任選地含有阿拉伯樹膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮和/或二氧化鈦的濃縮糖液，含水溶劑或具有部分地游離官能團(tuán)的聚丙烯酸酯或聚甲基丙烯酸酯的酯溶液的漆溶液，或合適的纖維素制劑，例如乙?；w維素鄰苯二甲酸酯或羥丙基-甲基纖維素鄰苯二甲酸酯，其中含有或不含有適當(dāng)?shù)能浕瘎?，例如苯二甲酸酯或甘油三乙酸酯，以形成耐胃液的涂層。染料和色素可加到片劑或糖衣丸涂層中，用于識(shí)別或標(biāo)記各種劑量的活性成分。
包括一種或多種蒽醌的、可以口服給藥的睡茄交酯制劑進(jìn)一步包括硬膠質(zhì)膠囊，以及由膠質(zhì)和，如果需要，例如甘油和山梨糖醇的軟化劑制成的硬或軟封閉膠囊。硬膠質(zhì)膠囊可以含有一種或多種顆粒形式的睡茄交酯，例如與填充劑例如玉米淀粉、任選地顆?；男←湹矸?，粘合劑或潤滑劑例如滑石粉、硬脂酸鎂或膠態(tài)硅酸，和任選的穩(wěn)定劑的混合物的形式。在封閉膠囊中，一種或多種睡茄交酯以粉末或顆粒的形式存在；或其優(yōu)選以在適當(dāng)溶劑中的懸浮液的形式存在，其中為了穩(wěn)定懸浮液，可在其中加入例如單硬脂酸甘油酯。
其它可口服給藥的睡茄交酯制劑是，例如以常規(guī)方法制備的水懸浮液，其中在懸浮液中含有一種或多種懸浮形式的足夠單次劑量濃度的蒽醌。水懸浮液中含有至少少量的穩(wěn)定劑和/或調(diào)味劑，例如甜味劑例如糖精-鈉，或含有確定量的糖和/或山梨糖醇或類似物質(zhì)的糖漿。此外合適的是，例如用于振動(dòng)制劑的濃縮液或濃縮懸浮液。這種濃縮液還可以以單次劑量的量封裝。
用于直腸給藥的合適的睡茄交酯制劑是，例如包括一種或多種睡茄交酯和栓劑基質(zhì)的栓劑。這種基質(zhì)尤其是天然或合成的三酸甘油酯混合物。此外合適的是包括在基質(zhì)中的一種或多種睡茄交酯懸浮液的直腸膠囊。合適的基質(zhì)是，例如高度或尤其是中度不飽和脂肪酸的液態(tài)三酸甘油酯。
同樣尤其有益的是含有精細(xì)研磨的一種或多種睡茄交酯的制劑，優(yōu)選具有5μm或更小平均粒徑的那些，其中睡茄交酯與淀粉形成混合物，尤其是與玉米淀粉或小麥淀粉、馬鈴薯淀粉和大米淀粉形成混合物。其優(yōu)選通過在具有攪拌葉片類、刃形攪拌裝置的高速混合機(jī)簡單地混合制備，混和時(shí)間為例如3-10分鐘，并且在較大量組分的情況下必要時(shí)采用冷卻。在該混合過程中，在連續(xù)減小某些顆粒尺寸的同時(shí)，使一種或多種睡茄交酯的顆粒均勻地沉積在淀粉顆粒上?？墒褂贸Ｒ?guī)的，例如上述助劑將上述混和物加工成固體劑量單位形式，即例如壓成片劑或糖衣丸，或填充在膠囊中。然而，其還可以直接使用，或加入助劑之后使用，助劑例如是藥學(xué)上可接受的潤濕劑和分散劑，例如聚氧乙烯山梨聚糖與高級(jí)脂肪酸的酯，或月桂基硫酸鈉，和/或調(diào)味劑，如用于制備水懸浮液的濃縮液，例如與約5-20倍量的水制備水懸浮液。除了將睡茄交酯/淀粉混合物與表面活性物質(zhì)或其它助劑混和之外，還可以將這種物質(zhì)加入水中用于制備懸浮液。用于形成懸浮液的濃縮液，其包括一種或多種睡茄交酯/淀粉混合物和任選的助劑，可以以單次劑量的量包裝，如果需要，以密封或防水方式包裝。
并且，一種或多種睡茄交酯可經(jīng)腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、皮下或經(jīng)脈內(nèi)給藥到患者。通常，對(duì)于腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、皮下或經(jīng)脈內(nèi)給藥，可通過將一種或多種睡茄交酯溶解、懸浮或乳化在水或非水溶劑中來提供它或它們，非水溶劑例如為植物或其它類似的油類、合成脂肪酸甘油酯、高級(jí)脂肪酸或丙二醇的酯；并且如果需要，使用常規(guī)的添加劑，例如增溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。優(yōu)選地，一種或多種睡茄交酯以適于恒溫動(dòng)物或人腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、皮下或經(jīng)脈注射應(yīng)用的組合物形式提供。例如，這些組合物可包括生理上可接受的溶液，例如作為一種或多種蒽醌的載體的緩沖的磷酸鹽溶液。優(yōu)選地，該溶液處于生理pH下。在特定的實(shí)施方案中，該組合物是通過靜脈注射給藥直接注射到遍布腫瘤的患者的。
根據(jù)本發(fā)明的制劑包括一種或多種適于給藥到恒溫動(dòng)物或人的一定濃度的睡茄交酯，根據(jù)給藥模式該濃度為約0.3-95％，優(yōu)選為2.5-90％。為了保證需要?jiǎng)┝康囊环N或多種睡茄交酯的易于吸收，在懸浮液的情形下，該濃度通常不高于30％，優(yōu)選為2.5％；相反在具有一種或多種蒽醌的片劑、糖衣丸和膠囊的情形下，該濃度優(yōu)選不低于約0.3％。使用包括一種或多種睡茄交酯的制劑對(duì)患者的處理，優(yōu)選通過一次或多次以足以基本抑制COX-2酶的量給藥一種或多種睡茄交酯進(jìn)行處理。如果需要，該劑量可每天給藥，或分成幾個(gè)分劑量每隔幾個(gè)小時(shí)給藥。在特定的情況下，該制劑可與一種或多種其它治療聯(lián)合或在其之后使用，例如在輻射或化療之后使用。一種或多種睡茄交酯的給藥量取決于待治療的患者(恒溫動(dòng)物或人)、待治療患者的通常條件和需要治療疾病的種類。
上述描述僅僅用于說明本發(fā)明，本發(fā)明僅僅通過以下所附的權(quán)利要求書限定。
權(quán)利要求
1.一種相對(duì)于COX-1酶選擇性地抑制COX-2酶的方法，其包括提供有效量的睡茄交酯以產(chǎn)生COX-2酶抑制。
2.權(quán)利要求1中所述的方法，其中睡茄交酯存在于催眠睡茄的植物材料中。
3.一種相對(duì)于COX-1酶選擇性地抑制COX-2酶的方法，其包括提供有效量的存在于催眠睡茄中的分離或純化的睡茄交酯或其混合物，從而產(chǎn)生COX-2酶抑制。
4.權(quán)利要求1、2或3中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的抑制在體外進(jìn)行。
5.權(quán)利要求1、2或3中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的抑制在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行。
6.權(quán)利要求1、2或3中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物選自酸漿苦味素D(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡糖苷；27-O-β-D-吡喃葡萄糖基 酸漿苦味素D；27-O-β-D-吡喃葡萄糖基粘內(nèi)酯B；4，16-二羥基-5β，6β-環(huán)氧酸漿苦味素D；4-(1-羥基-2，2-二甲基環(huán)-丙酮)-2，3-二氫生睡茄素A；2，3-二氫生睡茄素A；粘內(nèi)酯B；谷靛糖苷IX；酸漿苦味素D；睡茄糖苷IV，生睡茄素A，及其混合物。
7.一種組合物，其包括(a)比天然存在量增加的睡茄交酯或其混合物；(b)藥物學(xué)上可接受的載體，其中相對(duì)于COX-1酶該組合物選擇性地抑制COX-2酶。
8.一種組合物，其包括(a)存在于催眠睡茄中的分離和純化的睡茄交酯或其混合物；(b)藥物學(xué)上可接受的載體，其中相對(duì)COX-1酶該組合物選擇性地抑制COX-2酶。
9.權(quán)利要求7或8中所述的組合物，其中所述的化合物選自酸漿苦味素D(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡糖苷；27-o-β-D-吡喃葡萄糖基 酸漿苦味素D；27-o-β-D-吡喃葡萄糖基粘內(nèi)酯B；4，16-二羥基-5β，6β-環(huán)氧酸漿苦味素D；4-(1-羥基-2，2-二甲基環(huán)-丙酮)-2，3-二氫生睡茄素A；2，3-二氫生睡茄素A；粘內(nèi)酯B；谷靛糖苷IX；酸漿苦味素D；生睡茄素A，睡茄糖苷IV。
10.一種下式的分離或純化的化合物， 其中R為Glc-(1→6)-Glc-(1→4)-Glc，其中Glc為葡萄糖，并且其中R′為H。
11.一種下式的分離或純化的化合物， 其中R為Glc，并且R′為Glc，其中Glc為葡萄糖。
12.一種下式的分離或純化的化合物， 其中R＝O、R′＝H、R″＝H和R_＝Glc，其中Glc為葡萄糖。
13.一種下式的分離或純化的化合物， 其中R＝-OH、R′＝Glc、R′＝OH和R_＝H。
14.一種下式的分離或純化的化合物，
全文摘要
本發(fā)明涉及環(huán)加氧酶－2酶抑制睡茄交酯。特別是，得自催眠睡茄的化合物為睡茄交酯的優(yōu)選來源，盡管其可以得自其它植物源。相對(duì)于COX－1酶，選擇性地抑制COX－2酶。
文檔編號(hào)A61K31/366GK1711100SQ200380103277
公開日2005年12月21日 申請(qǐng)日期2003年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月14日
發(fā)明者M·G·奈爾, B·嘉亞普拉卡薩姆 申請(qǐng)人:密執(zhí)安州大學(xué)