專利名稱：用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的氮芥類似物和甲磺酸依馬替尼的組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包含(a)選自苯丁酸氮芥、萘氮芥、雌莫司汀、氮芥、鹽酸氧氮芥、navembichin、phenestrine、潑尼莫司汀、曲磷胺或尿嘧啶氮芥的氮芥類似物和(b)4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基]苯基]-苯甲酰胺(在下文中“化合物I”)的組合；用于同時、獨立或相繼應(yīng)用，特別是用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)的包含該類組合并任選地包含至少一種可藥用載體的藥物組合物；該類組合用于制備治療CLL的藥物的應(yīng)用；包含該類組合的商品化包裝或產(chǎn)品；和一種對溫血動物，尤其是人進(jìn)行治療的方法。
慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)是成人白血病最常見的形式，其占所有白血病的25％(在美國(US)，每年新增約10,000例CLL)。在US，95％的CLL病例是B-細(xì)胞表型白血病。約50％的CLL患者在診斷時無癥狀。疾病的階段與預(yù)后相關(guān)；O階段的的平均存活率＞10年，而I-II階段的平均存活率為7年。一般在患者出現(xiàn)癥狀時開始治療。
在CLL的治療中主要使用兩組藥物(1)烷化劑如苯丁酸氮芥(CLB)或環(huán)磷酰胺和(2)嘌呤類似物如氟達(dá)拉濱。這些物質(zhì)在60-75％的患者中產(chǎn)生了響應(yīng)。
最近的隨機(jī)試驗證明與CLB相比，對氟達(dá)拉濱的響應(yīng)率更高，但是在存活率方面沒有差異。這兩類物質(zhì)中的任何一種都可用于CLL的一線治療。也可以用其它物質(zhì)來進(jìn)行治療。最后，所有的患者都會對這些藥物有耐藥性。沒有治療能治愈這種疾病(Kalil，N.和Cheson，B.D.The Oncologist4352-369，1999)。
組合伴侶(b)化合物I是具有下式的4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)苯基]-苯甲酰胺
其可以如WO 99/03854(其在這里被引入作為參考)所述那樣來進(jìn)行制備和給藥。
在于1999年1月28日公開的WO 99/03854中對化合物I的單甲磺酸加成鹽(在下文中被稱為“鹽I”)以及其優(yōu)選的晶型進(jìn)行了描述。
所列舉的活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)可以得自標(biāo)準(zhǔn)綱要“默克索引”的現(xiàn)行版本或得自數(shù)據(jù)庫，例如國際專利，例如IMS World Publications。其相應(yīng)內(nèi)容在這里被引入作為參考。根據(jù)這些參考資料，本領(lǐng)域任何技術(shù)人員都完全能對其進(jìn)行制造并對其藥學(xué)適應(yīng)征和其在標(biāo)準(zhǔn)試驗?zāi)Ｐ椭械男再|(zhì)進(jìn)行體外和體內(nèi)試驗。
應(yīng)當(dāng)清楚的是，在提到組合伴侶(a)和(b)時還包括其各自可藥用的鹽。如果該組合伴侶具有至少一種堿性基團(tuán)，則其可以形成酸加成鹽。那些具有酸性基團(tuán)，例如COOH的組合伴侶也可以與堿形成鹽。組合伴侶(a)或(b)或其可藥用的鹽也可以以水合物或包含用于結(jié)晶的其它溶劑的形式使用。4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基]苯基]-苯甲酰胺，即組合伴侶(b)優(yōu)選以其單甲磺酸鹽的形式用于本發(fā)明，例如該單甲磺酸鹽的β晶型形式。
化合物I被用于慢性骨髓性白血病(CML)和費城染色體-陽性的急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)的一線治療。事實上，由于t(9，22)(q34，11)易位，所有CML病例都表達(dá)組成活性的c-able激酶。相反，在CLL患者中，一直沒有報道BCR/ABL易位。
已經(jīng)出乎意料地發(fā)現(xiàn)，包含氮芥類似物，尤其是苯丁酸氮芥和化合物I的組合對得自患有慢性淋巴細(xì)胞白血病患者的細(xì)胞的抗增殖作用高于單獨使用任何一種類型的成分時所能獲得的最大作用。
本發(fā)明報道了包含選自苯丁酸氮芥、萘氮芥、雌莫司汀、氮芥、鹽酸氧氮芥、navembichin、phenestrine、潑尼莫司汀、曲磷胺或尿嘧啶氮芥的氮芥類似物，特別是苯丁酸氮芥(CLB)和化合物I的組合可產(chǎn)生高于僅使用治療有效量的氮芥類似物，特別是苯丁酸氮芥或僅使用治療有效量的化合物I時所獲得治療效果的效果。
本發(fā)明涉及一種用于同時、獨立或相繼應(yīng)用的組合，如聯(lián)合制劑或藥物的固定組合，其包含(a)氮芥類似物和(b)化合物I以及任選的至少一種可藥用載體，其中活性成分(a)和(b)在各種情況中以游離形式或可藥用鹽的形式存在。
這里所用的術(shù)語“聯(lián)合制劑”尤其定義的是一種如下意義上的“多個部分的試劑盒(kit of parts)”，即，上面所定義的組合伴侶(a)和(b)可以彼此獨立地給藥或者可以通過使用具有不同含量組合伴侶(a)和(b)的不同的固定組合來進(jìn)行給藥，即其可以同時給藥或可以在不同的時間點給藥。例如，多個部分的試劑盒的各部分可以同時給藥或按時間順序交錯給藥，即在不同的時間點并以相等或不同的時間間隔將該多個部分的試劑盒的任何部分進(jìn)行給藥。所選擇的時間間隔十分優(yōu)選地為使得這些部分聯(lián)合應(yīng)用時對所治療疾病的作用高于僅使用組合伴侶(a)和(b)中的任何一種時所獲得的作用的該類間隔。在該聯(lián)合制劑中被給藥的組合伴侶(a)與組合伴侶(b)的總量比可以不同，例如，為了與被治療患者亞群的需要相一致或與可能由于患者的年齡、性別、體重等等而具有不同需要的單個患者的需要相一致而變化。優(yōu)選具有至少一種有益作用，例如組合伴侶(a)和(b)的作用相互增強(qiáng)，特別是具有協(xié)同作用，例如比其加和作用更強(qiáng)、另外的有利作用、副作用降低、組合伴侶(a)和(b)中的一種或兩種在非有效劑量下產(chǎn)生聯(lián)合治療作用，并且十分優(yōu)選組合伴侶(a)和(b)的強(qiáng)協(xié)同作用。
術(shù)語“治療”包括給需要該類治療的溫血動物施用該組合伴侶以治愈疾病或產(chǎn)生使疾病消退或延遲疾病進(jìn)程的作用。
這里所用的術(shù)語“延遲進(jìn)程”指的是該治療至少減慢或阻礙了該疾病的進(jìn)程并且患者表現(xiàn)出比沒有進(jìn)行治療或用單一療法進(jìn)行治療的患者更高的存活率。
“氮芥類似物”指的是苯丁酸氮芥、萘氮芥、雌莫司汀、氮芥、鹽酸氧氮芥、navembichin、phenestrine、潑尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥。
這里所用的術(shù)語“苯丁酸氮芥耐藥性慢性淋巴細(xì)胞白血病”定義的尤其是其中苯丁酸氮芥不再有效或表現(xiàn)出其治療作用降低的慢性淋巴細(xì)胞白血病。
苯丁酸氮芥可以根據(jù)US專利3,046,301的描述來進(jìn)行制備，該專利在這里被引入作為參考。
包含(a)氮芥類似物，優(yōu)選苯丁酸氮芥和(b)化合物I并任選地包含至少一種可藥用載體(其中活性成分在各種情況中可以以游離形式或其可藥用鹽形式存在)的組合在下文中被稱為本發(fā)明的組合。
本發(fā)明的組合抑制了慢性淋巴細(xì)胞白血病。此外，本發(fā)明的組合在慢性淋巴細(xì)胞白血病的治療中表現(xiàn)出有益作用。在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方案中，用本發(fā)明的組合治療的增殖性疾病是慢性淋巴細(xì)胞白血病并且優(yōu)選地是苯丁酸氮芥耐藥性慢性淋巴細(xì)胞白血病。
更令人吃驚地是，人的體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)，與僅使用本發(fā)明的組合所用藥學(xué)活性成分中的一種的單一療法相比，使用本發(fā)明的組合不僅更有效，尤其是具有協(xié)同的例如抗增殖作用，例如對于延遲白血病的進(jìn)程而言更有效，而且還具有更令人吃驚的作用，例如副作用更低并且降低了死亡率和發(fā)病率。本發(fā)明的組合特別適于治療難以用被稱為抗癌劑的化療劑來治療的慢性淋巴細(xì)胞白血病，例如難以用氮芥類似物進(jìn)行治療、尤其是難以用苯丁酸氮芥治療的慢性淋巴細(xì)胞白血病。
另外的益處是可以使用本發(fā)明組合的活性成分的更低劑量，例如，所需的劑量不僅常常更低，而且還可以以更低的頻率進(jìn)行應(yīng)用，或者可使用更低的劑量以減少單獨使用所說伴侶中的一種時所觀察到的副作用例如腹瀉或惡心的發(fā)生率。這與所治療患者的愿望和要求是一致的。
用以確立的試驗?zāi)Ｐ涂梢宰C實本發(fā)明的組合產(chǎn)生了上文所描述的有益作用。本領(lǐng)域技術(shù)人員完全能選擇一種相關(guān)的試驗?zāi)Ｐ蛠碜C明該類有益作用。例如，可以在臨床研究中或用基本如下文所述的試驗方法來證明本發(fā)明組合的藥理學(xué)活性。
適宜的臨床研究特別是用患有晚期疾病的癌癥患者進(jìn)行的隨機(jī)雙盲平行研究。該類研究特別適于對使用活性成分的單一療法和使用本發(fā)明組合的療法的作用進(jìn)行比較，并特別適于證明本發(fā)明組合的活性成分的協(xié)同作用。該類研究的主要終點可以是對疼痛得分、止痛劑應(yīng)用、行為狀態(tài)、生活質(zhì)量分或疾病進(jìn)展的時間的作用。通過以固定的時間周期例如每隔4、6或8周對腫瘤進(jìn)行評估是一種確定本發(fā)明組合的作用的適宜方法。在適宜的研究方案中，患者接受例如每次治療2周的治療周期，化合物I的日劑量范圍為50至1000mg活性物質(zhì)并且苯丁酸氮芥的劑量為0.2至1mg/kg/天。該類研究的最低持續(xù)時間應(yīng)當(dāng)為約例如4周。
本發(fā)明的一個目的是提供一種包含一定量本發(fā)明的組合的藥物組合物，所說的一定量為可以對抗慢性淋巴細(xì)胞白血病的聯(lián)合治療有效量。在這種組合物中，組合伴侶(a)和(b)可以一起給藥、以一種聯(lián)合單位劑型或以兩種獨立的單位劑型形式相繼或單獨給藥。該單位劑型還可以是一種固定的組合。
本發(fā)明的藥物組合物可以以本身已知的方法來進(jìn)行制備，并且是適于腸道給藥例如口服或直腸道給藥和胃腸外給藥于包括人在內(nèi)的哺乳動物(溫血動物)的組合物，其僅包含治療有效量的至少一種藥理學(xué)活性組合伴侶或者還同時包含一種或多種可藥用的載體，尤其是適用于腸道和胃腸外應(yīng)用的載體。在本發(fā)明的一個實施方案中，將一種或多種活性成分口服給藥。
該新型的藥物組合物例如包含約10％至約100％，優(yōu)選約20％至約60％的活性成分。用于腸道或胃腸外應(yīng)用的聯(lián)合治療的藥物制劑有例如單位劑型形式的制劑，如糖衣片、片劑、膠囊或栓劑，并且還有安瓿劑。如果沒有特別說明，則這些制劑是用本身已知的方式制備的，例如是通過常規(guī)的混合、制粒、包糖衣、溶解或冷凍干燥方法來制備的。應(yīng)當(dāng)意識到，因為可以通過給予許多單位劑量來獲得必需的有效量，所以包含于各劑型單個劑量中的組合伴侶的單位含量本身不需要組成有效量。
本發(fā)明的組合中的各組合伴侶的治療有效量是可以同時給藥或者以任何次序相繼給藥，并且這些組分可以單獨給藥或者以固定組合的形式給藥。例如，本發(fā)明延遲增殖性疾病的進(jìn)程或?qū)υ摷膊∵M(jìn)行治療的方法可以包括以聯(lián)合治療有效量，優(yōu)選協(xié)同有效量，例如以相當(dāng)于這里所述的量的日劑量同時或以任何次序相繼(i)以游離或可藥用鹽形式施用第一組合伴侶和(ii)以游離或可藥用鹽形式施用第二組合伴侶。在治療過程中，本發(fā)明的組合中的各組合伴侶可以在不同的時間獨立給藥或者可以以分割或單一組合形式同時給藥。此外，術(shù)語給藥還包括施用可以在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成該類組合伴侶的組合伴侶的前體藥物。因此，本發(fā)明應(yīng)理解為包括所有該類同時或交替治療方案并且對術(shù)語“給藥”也進(jìn)行相應(yīng)解釋。
本發(fā)明的組合中所用各組合伴侶的有效劑量可以根據(jù)所用的特定化合物或藥物組合物、給藥方式、被治療的病癥、被治療病癥的嚴(yán)重程度而變化。因此，根據(jù)包括給藥途徑和患者的腎和肝功能在內(nèi)的各種因素對本發(fā)明組合的劑量方案進(jìn)行選擇。醫(yī)生、臨床醫(yī)師或獸醫(yī)的普通技術(shù)人員可容易地確定并指定用于預(yù)防、對抗或阻止該疾病進(jìn)展所需的單個活性成分的有效量。獲得位于可以產(chǎn)生功效而不產(chǎn)生毒性范圍內(nèi)的活性成分濃度的最佳精度需要一種以活性成分靶部位利用度的動力學(xué)為基礎(chǔ)的方案。其包括要考慮活性成分的分布、平衡和消除。
苯丁酸氮芥(在下文也被稱為CLB)的給藥劑量范圍可以為0.1至1mg/kg/天，優(yōu)選0.2至0.8mg/kg/天，CLB最優(yōu)選地可以以0.3至0.6mg/kg/天，例如0.3mg/kg/天的優(yōu)選劑量進(jìn)行給藥。苯丁酸氮芥可以口服給藥。例如，可以每四周將苯丁酸氮芥連續(xù)給藥5天，例如以0.3mg/kg體重的劑量進(jìn)行給藥。
在本發(fā)明的組合中，可以將化合物I例如鹽I在CLB給藥前給藥一天并在CLB給藥結(jié)束后將其給藥5天。在本發(fā)明的一個實施方案中，CLB可以連續(xù)給藥并且化合物I例如鹽I可以每天給藥。在本發(fā)明的另一個實施方案中，化合物I和CLB可以每天口服給藥。在本發(fā)明的一個實施方案中，CLB和化合物I是以每天400至800mg的日劑量進(jìn)行給藥的并且CLB是以每天0.1mg/kg體重的日劑量進(jìn)行給藥的。
在本發(fā)明的另一方面，化合物I例如鹽I和CLB是以固定組合的形式被給藥的。
本發(fā)明的另一個實施方案涉及一種CLB和化合物I例如鹽I的固定組合。
119.5mg鹽I相當(dāng)于100mg作為活性物質(zhì)的化合物I(游離堿)。根據(jù)種屬、年齡、個體情況、給藥途徑和所討論的臨床現(xiàn)象，將鹽I的有效劑量例如相當(dāng)于約50至1000mg化合物I，優(yōu)選50至600mg化合物I的日劑量給藥于體重約70kg的人。對于患有慢性淋巴細(xì)胞白血病的成人患者而言，推薦400mg的起始日劑量。對于在使用400mg的日劑量進(jìn)行響應(yīng)評估時被評估為響應(yīng)不足的患者而言，可以安全地考慮調(diào)整劑量并且只要患者可以從該治療獲益并且不出現(xiàn)限制性毒性，就可以對患者進(jìn)行治療。
本發(fā)明還涉及一種將化合物I或其可藥用的鹽給藥于患有慢性淋巴細(xì)胞白血病患者的方法，其包括在超過3個月的時期內(nèi)每天將治療有效量的化合物I或其可藥用的鹽給藥于所說的人類個體。本發(fā)明尤其是涉及其中化合物I的給藥日劑量為50至800mg，優(yōu)選50至400mg的該類方案。
當(dāng)本發(fā)明的組合中所用的組合伴侶是以市售的單一藥物形式被應(yīng)用時，如果在這里沒有具體提及，則其給藥劑量和方式可以根據(jù)各市售藥物包裝說明上提供的信息來進(jìn)行以產(chǎn)生這里所述的有益作用。
本發(fā)明的組合可以是一種聯(lián)合制劑或藥物組合物。
此外，本發(fā)明還涉及一種對患有慢性淋巴細(xì)胞白血病的溫血動物進(jìn)行治療的方法，其包括給所說的動物以可以聯(lián)合對抗所說白血病的治療有效量施用本發(fā)明的組合并且其中所說的組合伴侶可以以其可藥用鹽的形式存在。在本發(fā)明的一個實施方案中，在該類方法中，本發(fā)明的組合是與抗腹瀉藥一起給藥的。此外，該治療還可以包含放射療法、冷凍療法和免疫療法。
此外，本發(fā)明還涉及本發(fā)明的組合用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病和用于制備治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的藥物的應(yīng)用。
此外，本發(fā)明還涉及苯丁酸氮芥與化合物I或其可藥用鹽，例如鹽I聯(lián)合用于制備治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及化合物I或其可藥用的鹽例如鹽I與苯丁酸氮芥聯(lián)合用于制備治療對苯丁酸氮芥有耐藥性的慢性淋巴細(xì)胞白血病的藥物的應(yīng)用。
此外，本發(fā)明還提供了一種包含作為活性成分的本發(fā)明的組合以及說明其同時、單獨或相繼使用以治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的說明的商品化包裝。
實施例I化合物I使CLL淋巴細(xì)胞對CLB變敏感的作用A-材料和方法A-1)CLL淋巴細(xì)胞的分離和細(xì)胞培養(yǎng)。通過如文獻(xiàn)所述的那樣，例如Christodoulopolis G.等人在Cancer Research，1999，52178-84中所述的那樣在Ficoll Hypaque(Pharmacia，Uppsala，Sweden)上沉積離心將淋巴細(xì)胞從CLL患者的外周血中分離出來。對包含1x106個細(xì)胞/ml的等分試樣進(jìn)行T-淋巴細(xì)胞分析。用使用CD3抗體進(jìn)行的熒光-活性細(xì)胞分類分析來測定污染T淋巴細(xì)胞的百分比。用FACS分析測得的并表達(dá)為均值％±SE形式的分離的B-淋巴細(xì)胞中T-淋巴細(xì)胞污染的百分比為6.4±1.8。WSU細(xì)胞系是得自CLL患者的B-淋巴細(xì)胞系(Mohammad R.M.等人，Leukemia，1996，10130-7)。I83細(xì)胞系是B-型慢性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系(Carlsson M.等人，Eur.J.Immunol.，1989，19913-21)。
A-2)鋪板效率和劑量。將淋巴細(xì)胞以及WSU和I83 CLL淋巴細(xì)胞以200μl在補(bǔ)加了10％FBS的RPMI中分別包含1.5×106個淋巴細(xì)胞/ml和1.25x105個細(xì)胞/ml的混懸液形式接種到96-孔平板中。僅對具有線性平板效率的劑量響應(yīng)進(jìn)行分析。然后，將該淋巴細(xì)胞在37℃下在僅存在各種濃度的化合物I(0-100μM)、僅存在CLB(0-100μM)、或存在各種濃度的兩種藥物的情況下進(jìn)行培養(yǎng)。
A-3)細(xì)胞毒性試驗。MTT試驗是按照文獻(xiàn)中的描述(Christodoulopolis G等人，Cancer Research，1998，581789-92)在鋪板后72小時通過向各孔中加入20μl 5mg/ml MTT(溴化3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]2，5-二苯基-四唑鎓)在RPMI培養(yǎng)基中的溶液來進(jìn)行的。單獨使用的CLB、單獨使用的化合物I、或在存在化合物I的情況下CLB的LD50被定義為將吸收讀數(shù)降至對照值的50％所需的藥物濃度。相對于賦形劑處理的細(xì)胞(對照)而言處理后存活細(xì)胞百分比的計算為(OD進(jìn)行了處理的細(xì)胞/OD未進(jìn)行處理的細(xì)胞)x100。用下式來確定協(xié)同作用a/A+b/B＝1，其中a是與濃度為b的化合物I聯(lián)用時產(chǎn)生對照值的50％所需的CLB濃度；A是在不存在化合物I時產(chǎn)生LD50的CLB濃度；并且B是在不存在CLB時產(chǎn)生LD50的化合物I的濃度。根據(jù)該公式，當(dāng)I＜1時，其相互作用是協(xié)同作用，當(dāng)I＝1時，該相互作用是加和作用，并且當(dāng)I＞1是，其相互之間為拮抗作用。
A-4)統(tǒng)計分析 用雙尾t-檢驗來對均值之間的差異進(jìn)行評估。用EXCEL統(tǒng)計工具包來進(jìn)行相關(guān)性和線性回歸。
B-結(jié)果B-1)化合物I使CLL-WSU細(xì)胞對苯丁酸氮芥的敏感性增加。LD50是用指數(shù)內(nèi)插法獲得的。CLB單獨使用或與化合物I(5.0μM或10μM)聯(lián)用時的LD50和單獨使用化合物I時的LD50是如上所述那樣來確定的。將結(jié)果表示為三次獨立實驗的均值±SE(均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差)。*表示單獨使用CLB時的LD50值與存在化合物I時CLB的LD50值之間具有顯著差異(p＜0.005)。用如上所述的計算方法獲得的I值(I＜)表明CLB和化合物I協(xié)同起效。
用WSU細(xì)胞系進(jìn)行的實驗表明化合物I使這些細(xì)胞對CLB細(xì)胞毒性的敏感性敏化了10倍。僅用CLB進(jìn)行的培養(yǎng)需要34μM的劑量來產(chǎn)生LD50，僅用化合物I進(jìn)行培養(yǎng)時產(chǎn)生LD50需要13.72μM化合物I。但是，同時使用兩種藥物進(jìn)行培養(yǎng)時，在存在5.0μM化合物I時CLB的LD50為5.95μM(I＝0.53)并且在存在10μM化合物I時CLB的LD50為3.15μM(I＝0.82)。
B-2)化合物I在體外增加了CLL-淋巴細(xì)胞對苯丁酸氮芥的敏感性為了對化合物I對CLB細(xì)胞毒性的作用進(jìn)行進(jìn)一步評估，用得自CLL患者的淋巴細(xì)胞進(jìn)行相似的體外研究。如下面表1所示將患者分類；7名患者未進(jìn)行過治療(U1-U7)，5名患者之前已經(jīng)用CLB進(jìn)行過治療(T1-T5)。
結(jié)果表明兩種藥物在12名患者中的10名中協(xié)同起效；在未進(jìn)行治療的7名患者中，5名表現(xiàn)出與化合物I具有協(xié)同作用(U1-U4，U7)；I＞1的患者U5和U6表現(xiàn)出拮抗效果(其I分別為I＝5.93和I＝1.5)。之前已經(jīng)用CLB進(jìn)行過治療的5名患者(T1-T5)都表現(xiàn)出協(xié)同作用。單獨使用的CLB的LD50為5.56μM至79.7μM。單獨使用的化合物I的LD50為16.5μM至101.8μM。范圍為2.5-10μM的化物I將產(chǎn)生LD50所必需的CLB濃度降低至1.1μM-35.5μM。
未進(jìn)行過治療的患者和進(jìn)行過治療的患者(U7-U4和U7對T1-T5)之間化合物ILD50沒有顯著差異，表明不管臨床狀態(tài)如何，化合物I都增加了CLL-淋巴細(xì)胞對CLB的敏感性。
這些結(jié)果表明，因為在對患者具有最小毒性的濃度下(＜10μM)發(fā)現(xiàn)了協(xié)同作用(Mauro M.J.和Drucker B.J.The Oncologist 2001，6233-238)，所以證明化合物I在臨床環(huán)境中是有益的。使用5和10μM化合物I獲得的致敏作用相似的事實表明兩種藥物之間的協(xié)同作用似乎不是劑量依賴性的。這可能是由于在患者樣品中在＜5μM下c-abl激酶的抑制最大。化合物I的藥動學(xué)證明在口服給藥于患者后，Cmax(最大濃度)出現(xiàn)在給藥后1-3小時。以400mg的劑量給藥后Cmax為2.35±1.0μM/ml(≈4.0μM)并且在以600mg的劑量給藥后其為7.83±3.8μg/ml(≈13.0μM)。半衰期為約12小時。在上述實驗中所用化合物I的濃度，例如10μM是在臨床上可獲得的濃度。
實施例2含有4-[(4-甲基-1-哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]苯甲酰胺甲磺酸鹽，β晶型的膠囊以下面的組成制備包含119.5mg作為活性部分的鹽I(相當(dāng)于100mg化合物I(游離堿))的膠囊組成 鹽I 119.5mg纖維素MK GR 92mg交聯(lián)聚維酮XL15mgAerosil 200 2mg硬脂酸鎂1.5mg-------------------230mg該膠囊是通過將這些組分混合并將混合物填充到1號硬明膠膠囊中來進(jìn)行制備的。
實施例3含有4-[(4-甲基-1-哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]苯甲酰胺甲磺酸鹽，β晶型的膠囊以下面的組成制備包含119.5mg作為活性部分的鹽I(相當(dāng)于100mg化合物I(游離堿))的膠囊組成鹽I119.5mgAvicel 200mgPVPPXL 15mgAerosil2mg硬脂酸鎂 1.5mg------------------338.0mg該膠囊是通過將這些組分混合并將該混合物填充到1號硬明膠膠囊中來進(jìn)行制備的。
實施例5實施例5的材料和方法是實施例1中所提供的。
B-結(jié)果B-1)化合物I增加了I-83細(xì)胞系對苯丁酸氮芥的敏感性如上所述那樣來測定單獨使用的CLB或與化合物I(1.5μM或3μM)聯(lián)用的CLB的IC50和單獨使用的化合物I的IC50。
*表明在單獨使用的CLB的IC50和存在化合物I的情況下CLB的IC50之間有顯著差異。
用MTT試驗使用I83細(xì)胞系進(jìn)行的實驗表明化合物I例如鹽I協(xié)同地將這些細(xì)胞對CLB細(xì)胞毒性的敏感性敏化了2倍。單獨將CLB與I83細(xì)胞一起進(jìn)行培養(yǎng)時需要40.66μM的濃度來產(chǎn)生IC50，單獨使用化合物I時需要33.73μM化合物I來產(chǎn)生IC50。但是，用兩種藥物同時進(jìn)行培養(yǎng)時，存在1.5μM化合物I時CLB的IC50為17.3μM(I＝0.45)并且在存在3.0μM化合物I時CLB的IC50為24.5μM(I＝0.74)。
B-2)化合物I在體外增加了CLL-淋巴細(xì)胞對苯丁酸氮芥的敏感性
化合物I將產(chǎn)生IC50所必需的CLB濃度降低至1.1μM-59μM。
權(quán)利要求
1.一種用于同時、單獨或相繼應(yīng)用的組合，其包含(a)選自苯丁酸氮芥、萘氮芥、雌莫司汀、氮芥、鹽酸氧氮芥、navembichin、phenestrine、潑尼莫司汀、曲磷胺和尿嘧啶氮芥的氮芥類似物和(b)具有下式的4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)苯基]-苯甲酰胺 其中活性成分(a)和(b)在各種情況中是以游離形式或可藥用鹽形式存在的。
2.如權(quán)利要求1所述的組合，其是一種固定的聯(lián)合藥物組合物。
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合，其中(a)和(b)是以協(xié)同有效量存在的。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的組合，其中所說的氮芥類似物是苯丁酸氮芥。
5.如前面任意一項權(quán)利要求所述的組合用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的應(yīng)用。
6.如前面任意一項權(quán)利要求所述的組合用于制備治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的藥物的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中所說的白血病是苯丁酸氮芥耐藥性慢性淋巴細(xì)胞白血病。
8.一種對患有慢性淋巴細(xì)胞白血病的溫血動物進(jìn)行治療的方法，其包括以可以對抗所說疾病的聯(lián)合治療有效量給所說的動物施用權(quán)利要求1或2中任意一項所述的組合并且其中所說的化合物也可以以其可藥用鹽的形式存在。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中(a)苯丁酸氮芥是以0.2至0.8mg/kg體重/天的量給藥的并且(b)4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基]苯基]-苯甲酰胺是以每天50mg至800mg的劑量給藥的。
10.一種藥物組合物，其包含可對抗慢性淋巴細(xì)胞白血病的聯(lián)合治療有效量的如權(quán)利要求1或2所述的組合和至少一種可藥用的載體。
11.一種包含如權(quán)利要求10所述的藥物組合物以及說明其在慢性林靶細(xì)胞白血病的治療中同時、獨立或相繼應(yīng)用的說明的商品化包裝。
12.游離堿或可藥用鹽形式的4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)苯基]-苯甲酰胺用于制備與選自苯丁酸氮芥、萘氮芥、雌莫司汀、氮芥、鹽酸氧氮芥、navembichin、phenestrine、潑尼莫司汀、曲磷胺和尿嘧啶氮芥的氮芥類似物聯(lián)合用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的藥物的應(yīng)用。
13.如權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其中所說的氮芥類似物是苯丁酸氮芥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種組合，其包含(a)選自苯丁酸氮芥、萘氮芥、雌莫司汀、氮芥、鹽酸氧氮芥、navembichin、phenestrine、潑尼莫司汀、曲磷胺或尿嘧啶氮芥的氮芥類似物和(b)式(I)的4－(4－甲基哌嗪－1－基甲基)－N－[4－甲基－3－(4－吡啶－3－基)嘧啶－2－基氨基]苯基]－苯甲酰胺或其可藥用的鹽，本發(fā)明還涉及所說的組合用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的應(yīng)用。
文檔編號A61K31/505GK1711090SQ200380103155
公開日2005年12月21日 申請日期2003年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月12日
發(fā)明者勞倫斯·卡爾·帕納西, 拉克爾·希爾維阿·阿洛奇 申請人:猶太總醫(yī)院, 勞倫斯·卡爾·帕納西, 拉克爾·希爾維阿·阿洛奇