專(zhuān)利名稱(chēng)：一種淋巴細(xì)胞白血病分子標(biāo)志物的應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一個(gè)與淋巴細(xì)胞白血病發(fā)生、診斷和治療相關(guān)的分子的應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
STIP (septin and tuftelin interacting proteins),又名 TFIPll(Tufte I in-1nteracting Proteinll),位于人類(lèi)染色體 22ql2.1,是一種具有 G-patch 結(jié)構(gòu)域，卷曲螺旋和幾個(gè)短的色氨酸-色氨酸重復(fù)序列，該蛋白的基因序列在Genebank中的登錄號(hào)為NM—01121143 (Tvll) \NM—0011008697 (IV2)，在多細(xì)胞動(dòng)物中高度保守的核磷酸化蛋白，與剪接體相關(guān)。STIP位于小鼠牙齒成釉細(xì)胞(8111160131&^8)的頂尖分泌池，在HEK293細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)其定位于靠近SC35核斑點(diǎn)的亞核結(jié)構(gòu)。STIP為線(xiàn)蟲(chóng)的胚胎發(fā)育所必需分子。STIP在惡性血液腫瘤中的作用國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。我們首次研究發(fā)現(xiàn)，STIP的mRNA和蛋白質(zhì)水平在淋巴細(xì) 胞白血病細(xì)胞株和患者中高表達(dá)。在B淋巴細(xì)胞白血病ARH-77中STIP主要定位在細(xì)胞核中。在B淋巴細(xì)胞白血病ARH-77細(xì)胞中采用siRNA下調(diào)STIP表達(dá)后可抑制ARH-77細(xì)胞增殖，增加ARH-77細(xì)胞的死亡率，減少ARH-77細(xì)胞的惡性增殖潛能，阻滯細(xì)胞周期在S期。Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)下調(diào)STIP的表達(dá)后，pERKl/2活性顯著降低，P21的表達(dá)下調(diào)?；谝陨涎芯砍晒砻鱏TIP與淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)生和惡性增殖密切相關(guān)，STIP是一個(gè)可用于淋巴細(xì)胞白血病診斷和治療的新分子。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜，涉及多個(gè)癌基因的激活和抑癌基因的失活；且目前，已發(fā)現(xiàn)的與這些疾病發(fā)病相關(guān)的分子較少的現(xiàn)狀，提供一種作為淋巴細(xì)胞白血病診斷的分子標(biāo)志物STIP的應(yīng)用方法，該分子的發(fā)現(xiàn)將進(jìn)一步推動(dòng)惡性血液腫瘤的診斷和治療。一種淋巴細(xì)胞白血病分子標(biāo)志物的應(yīng)用方法，該分子標(biāo)志物用于制備診斷淋巴細(xì)胞白血病的制劑，所述的分子標(biāo)志物為STIP，氨基酸序列為SEQ ID N0.1 ;基因轉(zhuǎn)錄本序列為 SEQ ID N0.2 或 3。所述的診斷淋巴細(xì)胞白血病的制劑包括PCR、Real Time RT-PCR或者Westernblot檢測(cè)試劑。所述的PCR或Real Time RT-PCR試劑包括:STIP 正向引物 CGCATTGATGATGATGATGA ；STIP 負(fù)向引物 GGCTTCTTCCTTGGTCTG。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)和有益效果:STIP的表達(dá)在淋巴細(xì)胞白血病中明顯增高，表明STIP與淋巴細(xì)胞白血病發(fā)生密切相關(guān)，有望成為新的淋巴細(xì)胞白血病診斷分子標(biāo)志物，在淋巴細(xì)胞白血病ARH-77細(xì)胞中，干擾STIP表達(dá)可抑制腫瘤增殖，增加細(xì)胞死亡率，顯著降低腫瘤細(xì)胞的惡性增殖潛能，阻滯細(xì)胞周期于S期，表明STIP是一個(gè)淋巴細(xì)胞白血病治療的潛在新靶標(biāo)。該發(fā)明對(duì)研究白血病的發(fā)生、診斷和治療具有重大意義。


圖1為采用Real time RT-PCR方法檢測(cè)淋巴細(xì)胞白血病患者和單純性貧血患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中STIP的表達(dá)情況；圖2為采用Western blot方法檢測(cè)不同白血病細(xì)胞株及其正常人永生化的B淋巴細(xì)胞中STIP蛋白的表達(dá)情況；圖3為采用Western blot檢測(cè)淋巴細(xì)胞白血病患者和單純性貧血患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中STIP蛋白的表達(dá)情況；圖4為采用細(xì)胞免疫熒光染色(紅色為STIP，藍(lán)色顯示細(xì)胞核)和Western Blot分析STIP在A(yíng)RH77細(xì)胞中的定位和表達(dá)；圖5為在A(yíng)RH-77細(xì)胞中采用siRNA干擾STIP蛋白的表達(dá)；圖6為在A(yíng)RH-77細(xì)胞中采用siRNA干擾STIP表達(dá)后細(xì)胞死亡率(FL2-M1百分率)明顯增加的圖片(三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表性結(jié)果)；圖7為在A(yíng)RH-77細(xì)胞中采用siRNA干擾STIP的表達(dá)后細(xì)胞增殖速率明顯減慢(a)及細(xì)胞惡性增殖能力明顯減弱的圖片(b)；圖8為在A(yíng)RH-77細(xì)胞中采用siRNA干擾STIP表達(dá)后，S期細(xì)胞的百分比例明顯上升，表明STIP低表達(dá)后，影響細(xì)胞周期的運(yùn)行，使細(xì)胞周期阻滯在S期的圖片(三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表性結(jié)果);圖9為siRNA干擾ARH77細(xì)胞中STIP的表達(dá)后p-ERKl/2的活性降低，p21表達(dá)減少的圖片。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例旨在進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。實(shí)施例1收集臨床血液系統(tǒng)疾病患者骨髓標(biāo)本，用淋巴細(xì)胞分離液分離出單個(gè)核細(xì)胞，提取mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用PCR或Real Time RT-PCR方法檢測(cè)淋巴細(xì)胞樣品和單純性貧血骨髓樣品中STIP的mRNA表達(dá)，以GAPDH作為內(nèi)對(duì)照，數(shù)據(jù)經(jīng)2- Δ Ct進(jìn)行換算后做圖(ACt=Ct (STIP)-Ct (GAPDH))ο采用合成的STIP和GAPDH引物序列(見(jiàn)表I )，并按照相應(yīng)的反應(yīng)體系(見(jiàn)表2)和反應(yīng)條件(見(jiàn)表3)進(jìn)行PCR或Real-time PCR，檢測(cè)淋巴細(xì)胞白血病患者和對(duì)照樣本的STIP基因表達(dá)情況。表1、STIP和GAPDH弓丨物序列
權(quán)利要求
1.一種淋巴細(xì)胞白血病分子標(biāo)志物的應(yīng)用方法，其特征在于，該分子標(biāo)志物用于制備診斷淋巴細(xì)胞白血病的制劑，所述的分子標(biāo)志物為STIP，氨基酸序列為SEQ ID N0.1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淋巴細(xì)胞白血病分子標(biāo)志物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的分子標(biāo)志物為STIP，基因轉(zhuǎn)錄本序列為SEQ ID N0.2或3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淋巴細(xì)胞白血病分子標(biāo)志物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的診斷淋巴細(xì)胞白血病的制劑包括PCR、Real Time RT-PCR或者Western blot檢測(cè)試劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淋巴細(xì)胞白血病分子標(biāo)志物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的PCR或Real Time RT-PCR試劑包括: STIP 正向引物 CGCATTGATGATGATGATGA STIP 負(fù)向引物 G GCTTCTTCCTTGGTCTG。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種淋巴細(xì)胞白血病分子標(biāo)志物的應(yīng)用方法，該分子標(biāo)志物為STIP(又名TFIP11)，位于人類(lèi)染色體22q12.1，是一種具有G-patch結(jié)構(gòu)域，卷曲螺旋和幾個(gè)短的色氨酸-色氨酸重復(fù)序列，本發(fā)明是針對(duì)淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜，涉及多個(gè)癌基因的激活和抑癌基因的失活，而目前，已知的與上述疾病診斷和治療相關(guān)的分子較少的現(xiàn)狀，提供一種作為淋巴細(xì)胞白血病的診斷的分子標(biāo)志物STIP的應(yīng)用方法，該分子的發(fā)現(xiàn)將推動(dòng)淋巴細(xì)胞白血病的診斷和治療。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK103215363SQ20131014034
公開(kāi)日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月22日
發(fā)明者劉靜, 葉茂, 方琳, 陳慧勇, 王梓 申請(qǐng)人:中南大學(xué)