專利名稱：3’-脫氧腺苷在制備降血脂藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及3’-脫氧腺苷在制備降血脂藥物中的應(yīng)用，特別涉及3’-脫氧腺苷在制備降低血清甘油三酯藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
血脂是血液中所含脂類物質(zhì)的總稱。血液中的脂類主要包括甘油三酯、磷脂、膽固醇和游離脂肪酸。血液中脂類含量與全身脂類總量相比只占極少的一部分，但它轉(zhuǎn)運(yùn)于各組織之間，往往可以反映出體內(nèi)脂類代謝情況。正常成人血漿脂類含量相對穩(wěn)定，有一定的波動范圍。血脂水平也易受非疾病因素的影響，包括膳食或短期饑餓造成的影響。但這種影響只是暫時的，可以恢復(fù)到正常狀態(tài)。但是，如果因?yàn)橹敬x或運(yùn)轉(zhuǎn)發(fā)生異常，致使血漿一種或多種脂質(zhì)持續(xù)高于正常值，則稱為高脂血癥(Hyperlipemia，HP)。
高脂血癥可根據(jù)發(fā)生異常改變的血脂成分的不同，分為以下三種類型一、高膽固醇血癥正常人的血總膽固醇應(yīng)低于5.2毫摩爾/升(mmol/L)，如超過5.7毫摩爾/升可診斷為高膽固醇血癥，血總膽固醇含量介乎二者之間者為邊緣性或臨界性升高，也屬不正常情況。
二、高甘油三酯血癥血甘油三酯的理想值應(yīng)低于1.70毫摩爾/升；凡血甘油三酯超過1.7毫摩爾/升即為本癥。
三、復(fù)合性高脂血癥血中總膽固醇與甘油三酯同時升高者即可診斷為本病。
大量研究資料表明，高脂血癥，包括高膽固醇血癥(Hypercholesterolemia)、高甘油三酯血癥(Hypertriglyceridemia)及復(fù)合性高脂血癥是腦卒中、冠心病、心肌梗死、心臟猝死的重要危險因素。此外，高脂血癥也是促進(jìn)高血壓、糖耐量異常、糖尿病的一個重要危險因素。高脂血癥還可導(dǎo)致脂肪肝、肝硬化、膽石癥、胰腺炎、眼底出血、失明、周圍血管疾病、跛行、高尿酸血癥。人們早已知道攝入高脂肪和高膽固醇飲食會誘發(fā)動脈粥樣硬化，在一部分有遺傳性脂質(zhì)代謝缺陷的人中表現(xiàn)比較明顯，這些人由于難以清除血液循環(huán)中過多的中性脂肪和膽固醇，而引起血液中膽固醇和甘油三酯濃度升高。
高脂血癥是一種常見病，特別是對于老年人。高脂血癥是現(xiàn)代富貴文明病之一。在中國，高血脂人群隨經(jīng)濟(jì)的發(fā)展而增加，并越來越年輕化而令人擔(dān)心。尋找到能有效降低血脂的藥物或健康食品意義重大，將會帶來很大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。
目前，降血脂藥物種類較多，就其主要降血脂功能可分為降總膽固醇(TC)、主要降總膽固醇兼降甘油三酯、降甘油三酯(TG)、主要降甘油三酯兼降總膽固醇四大類。
膽酸整合劑如樹脂類考來烯胺(ChoIestyramine)(又名消膽胺)和考來替泊(CoIestipol)(又名降膽寧)等在國外的臨床研究及應(yīng)用較多，并曾作為降TC的第一線藥物。但該類藥物味道差，且易引起便秘。
HMG-CoA還原酶抑制劑是一類新穎的降血脂藥，它能抑制體內(nèi)膽固醇的生物合成，而大部分高膽固醇血癥患者，血中TC主要來自體內(nèi)合成。這類藥物的降TC作用比膽酸整合劑更強(qiáng)且副作用較小。洛伐他汀(Lovastatin原名Mevinolin)(又名樂瓦停、美降之)即屬于此類降血脂藥物。洛伐他汀類藥物不僅能明顯降低血清TC、LDL-C水平，亦能中等程度地降低血清TG水平。但其也有很多毒副作用，例如約有2％-3％的患者服藥后胃腸功能紊亂、惡心、失眠、肌肉觸痛及皮疹。約有2％用洛伐他汀治療者可見肝源性轉(zhuǎn)氨酶升高，停藥后即可回到正常。每天給狗大劑量(60-180mg/kg)洛伐他汀長期服用可見白內(nèi)障，人用治療劑量洛伐他汀，經(jīng)2～3年詳細(xì)的眼科檢查，未見晶體混濁發(fā)生。其毒副作用在理論上可分兩類一類由甲羥戊酸的代謝產(chǎn)物減少所致；另一類為本身的毒性作用所引起。
煙酸(Nicotinic Acid，又名Niacin)(屬B族維生素)及其衍生物如阿西莫司(Acipimox) (又名樂脂平(Olbetam))均具有抗脂肪分解的作用，其中，阿西莫司的作用持續(xù)時間更長、效能更強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中抗高血脂藥物的不足，本發(fā)明提供了如通式(I)所示的3’-脫氧腺苷的在制備降血脂藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的在于提供通式(I)所示的3’-脫氧腺苷為活性成分的藥物組合物。
具體講，本發(fā)明的3’-脫氧腺苷的降血脂作用優(yōu)選是降血脂中的血清甘油三酯。
本申請中高脂血癥，包括高膽固醇血癥(Hypercholesterolemia)、高甘油三酯血癥(Hypertriglyceridemia)及復(fù)合性高脂血癥。
高脂血癥同時會引起腦卒中、冠心病、心肌梗死、心臟猝死；也會促進(jìn)高血壓、糖耐量異常、糖尿病。高脂血癥還可導(dǎo)致脂肪肝、肝硬化、膽石癥、胰腺炎、眼底出血、失明、周圍血管疾病、跛行、高尿酸血癥。
另外，攝入高脂肪和高膽固醇飲食會誘發(fā)動脈粥樣硬化，在一部分有遺傳性脂質(zhì)代謝缺陷的人中表現(xiàn)比較明顯。
因此，本發(fā)明的3’-脫氧腺苷能制備預(yù)防和/或治療高脂血癥相關(guān)的心腦血管性疾病的藥物。所述的心腦血管性疾病優(yōu)選是腦卒中、冠心病、心肌梗死、心臟猝死、高血壓、動脈粥樣硬化、周圍血管疾病。
本發(fā)明的3’-脫氧腺苷也可以制備預(yù)防和/或治療高脂血癥相關(guān)的糖耐量異常、糖尿病、脂肪肝、肝硬化、膽石癥、胰腺炎、眼底出血、失明、跛行、高尿酸血癥的藥物。
本發(fā)明的3’-脫氧腺苷也可以治療遺傳性脂質(zhì)代謝缺陷病人的高脂血癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的藥物組合物含有有效劑量的如通式(I)所示的3’-脫氧腺苷，以及藥效學(xué)上可接受的載體。
根據(jù)本發(fā)明，所述的藥物組合物可以是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
在安全性實(shí)驗(yàn)中，3’-脫氧腺苷以5.0g/kg小鼠灌胃給藥。給藥后連續(xù)觀察兩周，記錄受試小鼠行為、活動、體重、攝食量、糞便及死亡等情況，兩周后處死進(jìn)行尸檢。小鼠給藥后毛色光滑、行為活動、體重增長、攝食、糞便正常，與溶劑對照組比較無明顯差異；且兩周內(nèi)無死亡及其它異常情況發(fā)生。處死后進(jìn)行尸檢，各主要臟器(心、肝、脾、肺、腎)經(jīng)肉眼觀察未見異常改變，與溶劑對照組比較無明顯差異。說明3’-脫氧腺苷無明顯的毒性反應(yīng)，小鼠最大耐受量為5.0g/kg，即3’-脫氧腺苷經(jīng)口給藥的LD50大于5.0g/kg。
服用3’-脫氧腺苷的高血脂模型小鼠的TG水平與模型組相比，3’-脫氧腺苷20mg/kg、10mg/kg劑量組均可以明顯降低血清TG水平。統(tǒng)計學(xué)表明，3’-脫氧腺苷10mg/kg劑量組和高血脂模型組有高度顯著性差異。3’-脫氧腺苷20mg/kg、10mg/kg劑量組與非諾貝特組TG水平相比無顯著性差異，說明3’-脫氧腺苷在10mg/kg，20mg/kg劑量下與非諾貝特在25mg/kg劑量下降低血清甘油三酯的效果相當(dāng)。
高脂模型小鼠的CHO顯著增高。各給藥組與模型組的CHO水平相比無顯著性差異，表明3’-脫氧腺苷無降低總膽固醇的作用。3’-脫氧腺苷對高血脂模型小鼠主要是降低血清甘油三酯，作用較強(qiáng)。
與模型組TG水平相比，3’-脫氧腺苷100mg/kg，50mg/kg，25mg/kg，三個劑量組均可明顯降低血清TG水平，且統(tǒng)計學(xué)表明，均有高度顯著性差異，表明3’-脫氧腺苷有較好的降低甘油三酯的作用，但3’-脫氧腺苷三個劑量組降低甘油三酯的作用強(qiáng)度無顯著性差異。說明3’-脫氧腺苷給藥對喂高脂飼料形成的高血脂模型大鼠有較好的降低血清甘油三酯的作用。
本發(fā)明藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將活性成分與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥使用的適當(dāng)施用形式或劑量形式。
本發(fā)明的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。
本發(fā)明的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射和穴位注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。
本發(fā)明的組合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進(jìn)劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。
為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。
為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。
例如，將本發(fā)明的組合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。這些輔料是本領(lǐng)域常用的此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
本發(fā)明藥用組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動物的性別、年齡、體重、性格及個體反應(yīng)，給藥途徑、給藥次數(shù)等，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明中藥學(xué)成分的使用劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明藥用組合物中最后的制劑中所含有的實(shí)際有效藥物數(shù)量，加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以達(dá)到其治療有效量的要求，完成本發(fā)明的治療目的。通常對體重約75公斤患者，所給本發(fā)明化合物的日劑量為0.5mg/kg體重～20mg/kg體重，優(yōu)選4mg/kg體重～16mg/kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥，這受限于給藥醫(yī)生的臨床經(jīng)驗(yàn)以及給藥方案。
術(shù)語TG甘油三酯CHO總膽固醇LDL-C低密度脂蛋白HDL-C高密度脂蛋白VLDL-C極低密度脂蛋白貝特類(Fibrates)藥物如氯貝特(Clofibrate)，它主要是通過抑制腺苷酸環(huán)化酶，使脂肪細(xì)胞內(nèi)cAMP含量減少，抑制脂肪組織水解，使血中非酯化脂肪酸含量減少，導(dǎo)致肝臟VLDL合成及分泌減少。同時它可使脂蛋白脂酶的活性增強(qiáng)，加速VLDL及TG的分解代謝。這些，終使血中VLDL、TG、LDL-C及TC的含量減少。另外，它還可通過抑制肝細(xì)胞對膽固醇的合成及增加膽固醇從腸道的排泄，使血中TC含量減少。
新一代降血脂藥，如非諾貝特、樂脂平、吉非羅齊等。它們對降低膽固醇和甘油三酯均有較強(qiáng)的作用，且毒副作用較少。但仍有一些禁忌癥需加以注意。如孕婦及哺乳期婦女禁用；肝炎活動期及腎功能損害者禁用；長期服藥患者，須定期檢查肝、腎功能及血脂水平。不良反應(yīng)有胃部不適、食欲減退、腹瀉、頭痛、頭暈、感覺異常、白細(xì)胞減少、谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高、皮疹等癥狀。
綜上所述，目前，雖然已有不少降血脂藥物應(yīng)用于臨床，在治療高脂血癥方面發(fā)揮了重要作用。但它們或多或少都具有一定毒副作用，降血脂藥物還需要不斷的進(jìn)行優(yōu)化，提高療效，降低毒副作用。
3’-脫氧腺苷(3-deoxyadenosine，又名蟲草素Cordycepin)，分子式C10H13N5O3，MW 251，是從蛹蟲草(Cordyceps militaris)中分離得到核苷類物質(zhì)，構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)亦可產(chǎn)生此物質(zhì)。其結(jié)構(gòu)式如下 現(xiàn)有技術(shù)中未見3’-脫氧腺苷的降血脂功能的報道。經(jīng)中國國家知識產(chǎn)權(quán)局專利檢索咨詢中心的檢索[委托編號(G)030358]，也未見3’-脫氧腺苷的降血脂的報道。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例用來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但這并不意味著對本發(fā)明有任何限制。
一、藥效試驗(yàn)實(shí)施例13’-脫氧腺苷預(yù)防給藥對高血脂模型小鼠血脂含量的影響材料與方法[實(shí)驗(yàn)動物]昆明種小鼠，雄性，體重18～20g，購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，許可證號SCXK(軍)2002-001。
3’-脫氧腺苷(從蛹蟲草子實(shí)體中分離得到，經(jīng)分析純度在99.9％以上)。
基礎(chǔ)飼料與高脂飼料，均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供，許可證號京動許字003，合格證號0015790?；A(chǔ)飼料配方20％面粉，10％米粉，20％玉米，20％豆粉，25％麩皮，2％骨粉，2％魚粉。高脂飼料配方79％基礎(chǔ)飼料，10％豬油，10％蛋黃粉，1％膽固醇。
非諾貝特(力平之)，法國力博福尼制藥公司。規(guī)格100mg/粒，批號64801，生產(chǎn)日期2000.11[試劑盒]甘油三酯(TG)試劑盒，總膽固醇(CHO)試劑盒，北京北化康泰臨床試劑有限公司，批號030320。
SeperateTMMax 190酶標(biāo)儀，Molecular Devices CorporationSunnyvale，CA.
方法[分組與給藥]小鼠按體重隨機(jī)分成六組正常對照組、高脂模型組、3’-脫氧腺苷高劑量組(20mg/kg)、3’-脫氧腺苷中劑量組(10mg/kg)、3’-脫氧腺苷低劑量組(5mg/kg)、非諾貝特組(25mg/kg)，每組10只。正常對照組給予普通飼料，其他各組給高脂飼料，連續(xù)14天，均無限量供給。同時，各給藥組每天灌胃一次，各組給藥體積均為0.1ml/10g，連續(xù)給藥14天。高脂模型組每天給予等體積生理鹽水。
14天后，小鼠摘眼球取血測定血清TG、CHO含量，測定方法按照TG、CHO試劑盒說明書進(jìn)行，以酶標(biāo)儀在500nm波長下測定吸光度。按下列公式計算甘油三酯含量TG(mg/dl)＝測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度*200(mg/dl)；計算總膽固醇含量CHO(mg/dl)＝測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度*193(mg/dl)。
數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)分析采取t檢驗(yàn)。
結(jié)果1、與正常對照組TG水平(64.1±8.1mg/dl)相比，模型組TG水平(134.20±31.30mg/dl)有極顯著性差異，表明本實(shí)驗(yàn)高脂小鼠模型造模是成功的。(見表1)2、與模型組TG水平相比，3’-脫氧腺苷高、中兩個劑量組均可明顯降低血清TG水平，且統(tǒng)計學(xué)表明，3’-脫氧腺苷中劑量組有高度顯著性差異；與非諾貝特組TG水平相比，3’-脫氧腺苷中、高劑量組TG水平無顯著性差異，表明3’-脫氧腺苷在10mg/kg，20mg/kg劑量下與非諾貝特在25mg/kg劑量下降低血清甘油三酯的效果相當(dāng)(見表1)。
3、與正常組CHO水平相比，模型組CHO水平有極顯著性差異，表明高脂模型小鼠CHO顯著增高。各給藥組與模型組CHO水平相比無顯著性差異，表明3’-脫氧腺苷無降低總膽固醇的作用(見表2)。
結(jié)論3’-脫氧腺苷對喂高脂飼料形成的高血脂模型小鼠有較好的降低血清甘油三酯的作用。
表1.3’-脫氧腺苷對高血脂模型小鼠血清TG含量的影響(mean±SD)。
組別 劑量(mg/kg)TG含量(mg/dl)正常對照組 -- 64.1±8.1模型組 -- 134.20±31.30##20 101.7±14.64*3’-脫氧腺苷 10 93.73±17.19**5 128.16±22.54ΔΔ非諾貝特組 25 97.77±12.19*##p＜0.01與正常對照組相比；*p＜0.05，**p＜0.01與模型組相比；ΔΔp＜0.01與非諾貝特組相比。
表2.3’-脫氧腺苷對高血脂模型小鼠血清CHO含量的影響(mean±SD)。
組別劑量(mg/kg) CHO含量(mg/dl)正常對照組 -- 136.5±3.5模型組 -- 274.5±7.1**20 279.9±7.23’-脫氧腺苷10 264.3±6.85 289.5±7.5**p＜0.01與正常對照組相比。
實(shí)施例23’-脫氧腺苷預(yù)防給藥對高血脂模型大鼠血中甘油三酯含量的影響材料及方法[實(shí)驗(yàn)動物]Wistar大鼠，雄性，體重220±20g左右，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所，許可證號SCXK-11-00-0006。
3’-脫氧腺苷(從蛹蟲草子實(shí)體中分離得到，經(jīng)分析純度在99.9％以上)。
基礎(chǔ)飼料與高脂飼料，均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供，許可證號京動許字003，合格證號0015790?；A(chǔ)飼料配方20％面粉，10％米粉，20％玉米，20％豆粉，25％麩皮，2％骨粉，2％魚粉。高脂飼料配方79％基礎(chǔ)飼料，10％豬油，10％蛋黃粉，1％膽固醇。
非諾貝特(力平之)，法國力博福尼制藥公司。規(guī)格100mg/粒，批號64801，生產(chǎn)日期2000.11[試劑盒]甘油三酯(TG)試劑盒，總膽固醇(CHO)試劑盒，低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)試劑盒，高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)試劑盒，均購自中生北控生物科技股份有限公司，批號030313。
SeperateTMMax 190酶標(biāo)儀，Molecular Devices CorporationSunnyvale，CA. 大鼠以普通飼料喂養(yǎng)適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境5天，然后毛細(xì)管眼底靜脈叢取血，離心300G 10分鐘取血清，分別測定造模前各項(xiàng)血脂指標(biāo)值。根據(jù)TG水平，進(jìn)行分層隨機(jī)分組。大鼠分成六組正常對照組、高脂模型組、3’-脫氧腺苷高劑量組(100mg/kg)、3’-脫氧腺苷中劑量組(50mg/kg)、3’-脫氧腺苷低劑量組(25mg/kg)、非諾貝特組(36mg/kg)，每組10只。正常對照組給予普通飼料，其他各組給高脂飼料，連續(xù)8天，均無限量供給。同時，各給藥組每天灌胃一次，各組給藥體積均為1.0ml/100g體重，連續(xù)給藥8天。高脂模型組每天給予等體積生理鹽水。
8天后，大鼠毛細(xì)管眼底靜脈叢取血測定血清總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)含量。測定方法按照試劑盒說明書進(jìn)行，以酶標(biāo)儀(波長500nm)測定吸光度。極低密度脂蛋白(VLDL-C)由CHO-LDL-C計算得出。
數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)分析采取t檢驗(yàn)。給藥前后血脂水平采用配對t檢驗(yàn)。
結(jié)果1、與正常對照組TG水平(125.5±30.8mg/dl)相比，模型組TG水平(216.0±83.2mg/dl)有極顯著性差異，表明本實(shí)驗(yàn)高脂大鼠模型造模是成功的。(見表3)2、與模型組TG水平相比，3’-脫氧腺苷高、中、低三個劑量組均可明顯降低血清TG水平，且統(tǒng)計學(xué)表明，均有高度顯著性差異，表明3’-脫氧腺苷有較好的降低甘油三酯的作用，但3’-脫氧腺苷三個劑量組降低甘油三酯的作用強(qiáng)度無顯著性差異。(見表3)結(jié)論3’-脫氧腺苷預(yù)防給藥對喂高脂飼料形成的高血脂模型大鼠有較好的降低血清甘油三酯的作用。
表3 3’-脫氧腺苷預(yù)防給藥對高血脂模型大鼠血清甘油三酯含量的影響(mean±SD)血脂(mg/dl)給藥前 給藥后劑量 極低密度 極低密度組別 低密度脂 低密度脂(mg/kg) 甘油三酯 總膽固醇脂蛋白高密度脂蛋 甘油三酯 總膽固醇 脂蛋白高密度脂蛋蛋白 蛋白(TG) (CHO) (VLDL-C 白(HDL-C) (TG) (CHO) (VLDL-C 白(HDL-C)(LDL-C) (LDL-C)))正常對125.5±30.
生理鹽水 102.9±24.1 126.3±5.8 27.3±12.4 66.9±11.6 40.3±10.7 125.6±7.0 19.7±9.0 76.6±10.6 35.1±21.3照組 8高脂模216.0±83.
生理鹽水 104.3±30.2 132.9±37.6 20.5±10.2 79.4±6.6 31.5±6.3 135.5±35.3 21.9±13.5 80.3±10.7 21.3±13.6Δ型組 2##ΔΔ132.9±37. 88.3±15.8Δ100 101.5±29.2 131.1±36.0 29.7±9.5 75.5±10.5 31.7±7.1 135.1±24.4 23.1±8.6 39.7±35.6+6**△△++++3’-脫氧 121.1±36. 69.3±8.4*Δ腺苷高 50 102.1±25.7 118.0±42.0 12.2±8.1 81.9±9.9 31.3±4.8 99.5±27.8*17.5±9.7 18.4±5.2ΔΔ0**++Δ++劑量組138.0±42. 68.7±7.6*Δ25 101.1±29.4 144.0±12.5 33.3±11.5 85.7±9.4 29.9±6.3 112.5±11.8 46.0±20.4 26.2±7.7++0**Δ++Δ++非諾貝82.0±12.5 102.9±14.7 42.9±12.6*36 102.6±26.0 138.1±21.3 35.9±15.7 79.9±13.1 34.2±6.1 49.8±22.5 14.0±5.0ΔΔ特組**Δ**ΔΔ**P＜0.01，*P＜0.05，與高脂模型組相比；##P＜0.01，#P＜0.05，與正常對照組相比；++P＜0.01，+P＜0.05，與非諾貝特組相比；ΔΔP＜0.01，ΔP＜0.05，配對t檢驗(yàn)，給藥后與給藥前血脂水平相比。
二、安全性實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3 3’-脫氧腺苷急性毒性試驗(yàn)材料及方法[實(shí)驗(yàn)動物]昆明種小鼠，體重18-22g，雌雄各半，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部試驗(yàn)動物科學(xué)部提供，合格證號01-3049[受試品]3’-脫氧腺苷(為本實(shí)驗(yàn)室從蛹蟲草子實(shí)體中分離得到，見實(shí)施例1)。
取昆明種小鼠40只，體重18-22g，雌雄各半。隨機(jī)分為2組，每組20只，即3’-脫氧腺苷組和溶劑對照組，禁食(不禁水)12小時后給藥。3’-脫氧腺苷組用12.5％的3-脫氧腺苷一次給小鼠灌胃給藥0.4ml/10g，則給藥劑量為5.0g/kg；溶劑對照組給等量的蒸餾水。給藥后連續(xù)觀察兩周，記錄受試小鼠行為、活動、體重、攝食量、糞便及死亡等情況，兩周后處死進(jìn)行尸檢。
結(jié)果3’-脫氧腺苷組小鼠給藥后毛色光滑、行為活動、體重增長、攝食、糞便正常，與溶劑對照組比較無明顯差異；且兩周內(nèi)無死亡及其它異常情況發(fā)生。兩組同時處死后進(jìn)行尸檢，各主要臟器(心、肝、脾、肺、腎)經(jīng)肉眼觀察未見異常改變，與溶劑對照組比較無明顯差異。結(jié)果見表4。
結(jié)論3’-脫氧腺苷一次經(jīng)口給藥的最大耐受量試驗(yàn)結(jié)果表明20只小鼠給藥后均無明顯的毒性反應(yīng)，兩周內(nèi)亦無死亡。因此，3’-脫氧腺苷一次經(jīng)口給藥的小鼠最大耐受量為5.0g/kg，即3’-脫氧腺苷經(jīng)口給藥的LD50大于5.0g/kg。
表4 3’-脫氧腺苷經(jīng)口給藥小鼠量大耐受量試驗(yàn)結(jié)果組別濃度 體積劑量 動物數(shù) 死亡動物數(shù) 最大耐受量(％) (ml/10g)(g/kg)(只) (只) (g/kg)3’-脫氧腺苷12.5 0.4 5.0 20 05.0組溶劑對照組 - 0.4 - 20 0-
權(quán)利要求
1.如通式(I)所示的3’-脫氧腺苷在制備降血脂藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的血脂是血清甘油三酯。
3.如通式(I)所示的3’-脫氧腺苷在制備預(yù)防和/或治療高脂血癥相關(guān)的心腦血管性疾病的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的心腦血管性疾病是腦卒中、冠心病、心肌梗死、心臟猝死、高血壓、動脈粥樣硬化、周圍血管疾病。
5.如通式(I)所示的3’-脫氧腺苷在制備預(yù)防和/或治療高脂血癥相關(guān)的糖耐量異常、糖尿病、脂肪肝、肝硬化、膽石癥、胰腺炎、眼底出血、失明、跛行、高尿酸血癥的藥物的應(yīng)用。
6.如通式(I)所示的3’-脫氧腺苷在制備預(yù)防和/或治療遺傳性脂質(zhì)代謝缺陷病人的高脂血癥的藥物中的應(yīng)用。
7.一種藥物組合物，其特征在于含有有效劑量的如通式(I)所示的3’-脫氧腺苷，以及藥效學(xué)上可接受的載體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物可以是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了如通式(I)所示的3’－脫氧腺苷降血脂的用途，特別是3’－脫氧腺苷降低血清甘油三酯的用途。
文檔編號A61K31/7042GK1539429SQ200310101650
公開日2004年10月27日 申請日期2003年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月27日
發(fā)明者朱平, 朱海波, 朱慧新, 張嶺, 何惠霞, 王全, 程克棣, 石建功, 楊永春, 朱 平 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所, 湖南省益康生物高科技有限公司