專利名稱：前膠束藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種前膠束藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
藥物活性成分的口服制劑在哺乳動物服用以后容易發(fā)生降解，并且不易充分吸收。已經(jīng)進(jìn)行過多種嘗試來提高口服活性成分的穩(wěn)定性和生物有效性。例如，脂質(zhì)體和膠束(micelle)已經(jīng)被用作藥物載體。參見Burke的美國專利5,552,156；Allen的美國專利4,837,028。Cho的美國專利4,849,227披露了一種口服組合物，它含有由乳化劑和表面活性劑組成的微粒，其中活性成分結(jié)合在微粒的表面，微粒外包有脂層。Cho等人的美國專利5,665,700披露了一種含有親水相的制劑，且親水相含有生物活性物質(zhì)，其中所述的親水相分散到親脂相中以形成乳化液。Cho的美國專利5,858,398披露了一種含有活性成分、磷脂和表面活性劑組成的微粒的制劑，其中所述的微粒懸浮在膠束中。
Nakagame等人的美國專利4,615,885披露了一種脂質(zhì)體制備物，它含有尿激酶和高脂肪酸，聚烯基乙二醇和鈣。Nakagame等人發(fā)現(xiàn)，高脂肪酸在磷脂形成薄層結(jié)構(gòu)的濃度時會整合到脂質(zhì)體的膜中。膜中脂肪酸的濃度優(yōu)選5-15wt.％。根據(jù)Nakagame等人的理論，當(dāng)濃度過高時會形成在中心含有脂肪酸的膠束，從而會降低或消除該組合物攜帶藥物的能力。
膠束是已知的輸藥系統(tǒng)，但是其穩(wěn)定性一般較差，導(dǎo)致活性成分從膠束中分離出來。嘗試通過使用表面活性劑、甘油三磷酸脂和脂-表面活性劑與膠束混合來提供胰島素和其他大分子在腸內(nèi)的吸收所得到的結(jié)果一般都較差。參見Muranishi et al.(1978)J.Pharm.Dyn.128；Inouye etal.(1979)J.Pharm.Dyn.2286；Danforth et al.(1980)J.Pharm.Dyn.4219；Crane et al.(1968)Diabetes 17625.
美國專利5,858,398披露了通過體外添加親水膽固醇和磷脂來穩(wěn)定膠束。
根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)用C12-C18脂肪酸層包封藥物活性成分后會形成前膠束，給予哺乳動物施用后，它會形成穩(wěn)定的膠束。這種前膠束能夠有效的輸送藥物活性成分，不需要使用膽固醇和磷脂進(jìn)行體外穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種組合物，它含有包封在C12-C18脂肪酸膜中的藥物活性成分，它還可選的進(jìn)一步包封在凝膠膠囊中。在哺乳動物腸內(nèi)，暴露的C12-C18脂肪酸會在體內(nèi)形成穩(wěn)定的膠束，它可以有效的輸送藥物活性成分到體循環(huán)系統(tǒng)中。本發(fā)明還提供了制備和使用該組合物的方法。


圖1的顯微照片顯示了包封在厚度為27um的C12-C18脂肪酸層中的含有胰島素的膠束(約0.0141ml)，其外面還包被一薄層凝膠膜。
圖2的顯微照片顯示了包封在厚度為27um的C12-C18脂肪酸層中的含有胰島素的微乳(約0.0141ml)，其外面還包被一薄層凝膠膜。
圖3的顯微照片顯示了包封在厚度為27um的C12-C18脂肪酸層中的含有胰島素的脂質(zhì)體(約0.0141ml)，其外面還包被一薄層凝膠膜。
圖4描述了糖尿病人服用實施例1制備的制劑后的血糖水平。
圖5描述了糖尿病人服用實施例1制備的制劑后其胰島素在血清中的濃度。
圖6描述了在十二指腸灌輸本發(fā)明的前膠束制劑后肝臟入口血中胰島素的濃度。
圖7描述了在十二指腸灌輸本發(fā)明的前膠束制劑后淋巴液中胰島素的濃度。
圖8描述了在十二指腸灌輸本發(fā)明的前膠束制劑后外周靜脈血中胰島素的濃度。
圖9描述了兔子在靜脈(i.v.)施用葡萄糖后血糖的升高。
圖10對比了腹膜(i.p.)施用標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)胰島素和本發(fā)明的制劑后的血糖反應(yīng)。
圖11對比了靜脈(i.v.)施用標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)胰島素和本發(fā)明的制劑后的血糖反應(yīng)。
具體實施例方式
本發(fā)明提供了一種組合物，它含有包封在C12-C18脂肪酸酯膜中的藥物活性成分，它還可選的進(jìn)一步包封在凝膠膠囊中。組合物中脂肪酸的總濃度優(yōu)選低于15wt.％，以使組合物處于“前膠束”的形式。這里的術(shù)語“前膠束”是指其中含有的C12-C18脂肪酸的濃度不足以形成膠束的組合物，但是它在哺乳動物消化系統(tǒng)中暴露于C12-C18脂肪酸時會形成膠束。尤其是，給哺乳動物施用后，前膠束在腸中暴露于脂肪酸時，脂肪酸的總體積百分比會超過15％，前膠束在體內(nèi)形成穩(wěn)定的膠束。
本發(fā)明在體內(nèi)從前膠束形成的膠束提供了輸送藥物活性成分到體循環(huán)系統(tǒng)中的工具。處于膠束中的活性成分會通過甘油一酸酯途徑被腸內(nèi)吸收系統(tǒng)吸收，而處于脂質(zhì)體形式的前膠束中的活性成分則通過磷酸鹽系統(tǒng)吸收。根據(jù)本發(fā)明，前膠束形式的口服制劑輸送的胰島素在十二指腸出口的淋巴液中有所發(fā)現(xiàn)(與美國專利No.5,656,289的脂質(zhì)體和美國專利No.5,665,700的微乳相似)，在肝臟入血中也有所發(fā)現(xiàn)(與美國專利No.5,858,398的穩(wěn)定微束相似)。這樣，輸送與觀察到的注射胰島素相似。尤其是，胰島素被本發(fā)明的制劑輸送到肝臟，就像從胰腺β細(xì)胞內(nèi)分泌出來的前胰島素的輸送一樣。
藥物活性成分包括但是不限于多肽、糖蛋白、有機(jī)和無機(jī)化合物、中藥以及其他本領(lǐng)域公知的可以用作藥物活性成分的物質(zhì)。尤其是，可以用于本發(fā)明的藥物活性成分包括(1)多肽，比如胰島素、生長激素、干擾素、降血鈣素、尿激酶、凝結(jié)因子-VIII，凝結(jié)因子-IX，EPO；(2)具有低生物有效性的化合物和/或靶向輸送到特定器官或系統(tǒng)的化合物，比如萘夫西林(nafcillin)、長春新堿、塞弗唑啉(cephazoline)、阿霉素、奎寧、氯喹、伯氨喹、d-α-生育酚(它也是抗氧化劑)和慶大霉素；(3)吸收后能夠占優(yōu)勢的結(jié)合到血漿蛋白和/或在肝臟中快速生物轉(zhuǎn)化、從而顯示較差生物活性的化合物，比如格列本脲。茚甲新、羥基保泰松、氯乙酰唑(chlorothiazole)、心得安、環(huán)磷酰胺；(4)模仿藥物的持續(xù)靜脈灌注的神經(jīng)藥理學(xué)，優(yōu)選能夠穿過血腦載體膜的那些，比如毒扁豆堿、氟西汀和費奧汀(feldene)。
如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知，活性成分的選擇是取決于要治療的疾病及其病況，或者要采用的治療方法。在一個優(yōu)選的實施例中，多肽是胰島素，所述的組合物用于治療糖尿病。在另外一個優(yōu)選的實施例中，藥物活性成分是長春新堿，所述的組合物用于治療癌癥。藥物活性成分的量取決于該物質(zhì)的性質(zhì)和目的用途，可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定。
藥物活性成分提供為本發(fā)明的前膠束脂肪酸膜內(nèi)的中心溶液。所述中心溶液可以是微乳或脂質(zhì)體。優(yōu)選的微乳是美國專利No.5,665,700所披露的，其中披露的信息在這樣引作參考。所述微乳優(yōu)選在表面活性劑存在的情況下含有藥物活性物質(zhì)和磷脂。所述微乳還可以進(jìn)一步含有親水液體、溶劑、蛋白抑制劑、穩(wěn)定劑、乳化酸、防腐劑。所述微乳可以通過混合來制備，或者在混合以后，使用微化劑來制備親水相和親脂相。
優(yōu)選的脂質(zhì)體在美國專利No.5,656,289披露，其中披露的信息在這樣引作參考。所述脂質(zhì)體優(yōu)選包括含有藥物活性成分的親水相和含有膽固醇、磷脂、親脂表面活性劑和未酯化的脂肪酸。所述脂質(zhì)體可以通過混合上述物質(zhì)來制備。
微乳或脂質(zhì)體中的磷脂優(yōu)選是水溶性的或易混合的磷脂，比如甘油磷酸、甘油磷酸膽堿、磷酸膽堿、甘油磷酸乙醇胺、磷酸乙醇胺、乙醇胺、甘油磷酸絲氨酸、甘油磷酸甘油。
磷脂可以是溶血磷脂，比如sn-1-?；?3-甘油磷酸，sn-1，2-甘油二酯，sn-1-?；?甘油磷酸膽堿，sn-1-二?；?甘油磷酸鹽，sn-1-二酰基-3-甘油磷酸乙醇胺，sn-1，2-酰基-3-甘油磷酸絲氨酸，sn-1，2-?；?3-甘油磷酸鹽，sn-1-酰基-3-甘油磷酸甘油，sn-1，2-二?；视土姿猁}，1-十四酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿；1-十四酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；1-十四酰-sn-甘油-3-磷酸-(N，N-二甲基)-乙醇胺；1-棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(或乙醇胺)，1-棕櫚酰-rac-甘油-3-磷酸膽堿，1-棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸-(N，N-二甲基)-乙醇胺；1-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿，以及它們的混合物。
所述的微乳或脂質(zhì)體優(yōu)選含有5體積％或少量油酸和其他的脂肪酸，比如蓖麻油酸和亞油酸。所述脂肪酸可以是飽和的或者未飽和的。在一個實施例中，所述脂肪酸是未飽和的。
所述的微乳或脂質(zhì)體包封在含有酯化的飽和C12-C18脂肪酸中間層中。所述脂肪酸可以與甘油或卵磷脂組合。所述C12-C18脂肪酸可以從可可果中提取。中間層優(yōu)選約0.02nm厚。
所述中間層還可以進(jìn)一步被包封在膜衣中，以形成微膠粒。所述膜衣優(yōu)選含有凝膠，還可以進(jìn)一步含有凝膠和羥甲基纖維素。所述微膠?？梢园b在凝膠膠囊中。
總組合物中的脂肪酸(包括所有的中心區(qū)脂肪酸)濃度低于15wt.％。
在一個優(yōu)選實施例中，所述的微膠粒的大小為約1.8-3mm。
本發(fā)明的組合物通過下述方法制備制備微乳或脂質(zhì)體的中心溶液，加入酯化的C12-C18脂肪酸，然后包以膜衣。微乳或脂質(zhì)體可以制成固體粉末的形狀，例如，使用流化床或者類似的設(shè)備(比如日本東京Freund有限公司生產(chǎn)的SPIR-A-FLOW)向載體(比如惰性羥丙基纖維素粉)噴射包衣。
所述的中心溶液可以包有酯化C12-C18脂肪酸的中間層，然后用多噴嘴設(shè)備(比如Freund有限公司生產(chǎn)的SPHEREX-LABO)包以膜衣。在一個優(yōu)選實施例中，含有藥物活性成分的中心溶液使用SPHEREX-LABO進(jìn)行震動和噴射，流速為5ml/min，震動速度為5.5，頻率為20Hz/秒；包以來自可可果(350g)和大豆卵磷脂(150g)的C12-C18脂肪酸中間膜衣，震動速度為7.4，頻率為20Hz/秒；膜再包衣含有下述成分的溶液凝膠(118.7g)、甘油(19.4g)、氫氧化鈉(5.5g)、羥甲基纖維素(56.4g)和水(100g)。得到的微膠粒大小為1.8-3.0mm(平均2mm)，然后滴入一個裝有冷卻循環(huán)植物油的1.5-2.0ml管子中進(jìn)行硬化。
硬化的微膠粒用收集網(wǎng)收集，沖洗去除植物油，于25℃過夜干燥。干燥的微膠粒包封在1號或2號軟凝膠膠囊中，分別含有16U或18U的胰島素，總重量為16.44mg/膠囊。優(yōu)選的制備總結(jié)如下重量百分比 比重 體積百分比 20Hz/秒 微膠粒％ ％中心30 0.92 32.635.5 3.8mg[23.1％]中間層 40 0.918 43.597.4 7.65mg[46.5％]膜 30 1.262 23.7816.94.99mg[30.4％]所述的含有前膠束(含有5％(重量/體積)的C12-C18脂肪酸)的微膠粒在施用給人類對象時，由于微膠粒有腸衣的保護(hù)，不會受到胃中酸環(huán)境的破壞，并且由于其大小為1.8-3.0mm，容易穿過幽門到達(dá)十二指腸。在腸內(nèi)，暴露于脂肪酸會使中間層膜脂肪酸的量增加到超過15wt.％，將前膠束轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的和易于生物吸收的膠束。
本發(fā)明的組合物有益于給哺乳動物(尤其是人類)輸送藥物活性成分。當(dāng)哺乳動物，優(yōu)選是人類，需要輸送所述的藥物活性成分時，它是以包有腸衣的膠囊形式口服施用。在一個優(yōu)選的實施例中，所述的藥物活性成分是胰島素。
在這里引用的所有參考文獻(xiàn)都是整體引用。
下面的非限定性的實施例進(jìn)一步解釋了本發(fā)明。
實施例1按照下述方法制備液態(tài)口服胰島素制劑。在本實施例以及其他實施例中使用的所有化學(xué)物質(zhì)都是分析純或化學(xué)純級。
亞混合物-A是在40℃水浴環(huán)境下將下述成分溶解到95％乙醇(約20ml)來制備的甘油單油酸酯(1.5-5.0g；優(yōu)選2.8-3.2g)，卵磷脂(0.5-6.0g；優(yōu)選3.0-3.5g)，膽固醇(2-8g；優(yōu)選2.8-4.6g)，磷脂酸(0.05-0.97g；優(yōu)選0.15-0.33g)，和磷脂酰膽堿(0-20g；優(yōu)選3.2-9.8g)。
抗氧化溶液是通過將下述成分溶解到95％乙醇(100ml)中來制備的酸丙酯(5-25g；優(yōu)選10-18g)，丁羥基苯甲醚(3-30g；優(yōu)選8-14g)，丁羥基甲苯(5-45g；優(yōu)選10-20g)，亞混合物-B是在40℃水浴環(huán)境下將下述成分溶解到95％乙醇(約150ml)來制備的聚氧乙烯-40-硬脂酸鹽(0.9-5.8g；優(yōu)選1.5-3.9g)；油酸(15.2-66.5g；優(yōu)選36.5-48.9g)；丙基帕拉板(Propylparaban)(0.89-2.58mg；優(yōu)選92-118mg)；抗壞血酸(58-290mg；優(yōu)選92-121mg)；抗氧化劑(52-380mg；優(yōu)選200-340mg)；α-維生素E(0.9-5.6g；優(yōu)選2.0-3.9g)；甲基帕拉板(Methylparaban)(482-988mg；優(yōu)選580-720mg)；亞混合物-A(12-48g；優(yōu)選19-37g)；用95％乙醇補充到210g，混勻。
亞混合物-C是通過將下述成分溶解到35ml 95％乙醇中來制備的胰島素(胰島素的量足以使裝有含有約125mg胰島素微膠粒的4#大小的膠囊達(dá)到，且使裝有含有約250mg胰島素微膠粒的2#大小的膠囊達(dá)到16U)和抑肽酶(足以防止上述量的胰島素在體內(nèi)被胰島素酶、蛋白酶等降解的激肽釋放酶抑制單位(KIU)。例如，對每約343,200單位的豬胰島素，加入約1千2百萬KIU當(dāng)量的抑肽酶。這兩種成分混合后，通過加入濃縮的檸檬酸調(diào)節(jié)pH到約2.4。然后加入N-乙酰神經(jīng)氨酸(0.8-2.5g；優(yōu)選0.9-1.8g)并溶解，在有的情況下，可以根據(jù)美國專利4,837,028的描述，加入環(huán)己炔脲(Glipizide等的記錄，臨床無效劑量，例如0.05mg)來補充神經(jīng)氨酸的阻斷效果，所有成分在恒定攪拌下完全溶解，用95％乙醇補充到70ml。
亞混合物-D是在40℃水浴環(huán)境下將下述成分溶解到50ml水中來制備的聚氧烯-40-硬脂酸鹽(0.5-2.4g；優(yōu)選0.88-2.55g)，羥丙基纖維素(2.55-9.89g；優(yōu)選3.08-7.04g)，苯甲酸鈉(4.8-14.9g；優(yōu)選8.69-12.48g)，用水補充到70ml。
含有胰島素的微乳是通過下述方法制備的混合亞混合物-B(210ml)、亞混合物-C(70ml)、亞混合物-D(70ml)和油酸(亞混合物-B，C，D總重量的5％)，然后使用美國麻省Micro-fluidic Co.公司生產(chǎn)的微流態(tài)化設(shè)備在冷卻條件下微流態(tài)化一次，剪切力約為100,000-200,000psi。含有胰島素的微乳封入微膠粒(約1.8-3.2mm大小)，它含有中心胰島素微乳(體積百分比32.61％；比重0.92)，然后再用可可果的酯化的C12-C18飽和脂肪酸和卵磷脂(體積百分比43.5％；比重0.918)作為中間層膜進(jìn)行包封，然后進(jìn)一步包被以凝膠(118.7g)、甘油(17.4g)、NaOH(5.5g)，HP-55(56.4g)和水(600g)(外膜衣體積百分比23.77％；比重1.262)。每一個微膠粒含有約0.01414ml和約0.6單位的胰島素.微膠粒中的胰島素的劑量可以根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整或修改。
實施例2亞混合物-A是將下述成分溶解到約60ml 95％乙醇、然后用95％乙醇補充到100ml來制備的聚氧乙烯-40-硬脂酸鹽(1-7g；優(yōu)選3.5-4.6g)；苯甲酸鈉(0.4-5.4g；優(yōu)選1.8-3.2g)；抑肽酶(如實施例1所述)；
神經(jīng)氨酸(0.05-6.0g；優(yōu)選0.4-1.0g)；苯甲酸鈉(0.5-5.8g；優(yōu)選1.8-4.2g)；羥丙基纖維素(3.8-14.2g；優(yōu)選5.4-8.8g)。
亞混合物-B的制備方法如下按照實施例1的方法將胰島素溶解，用濃縮的檸檬酸和抗壞血酸調(diào)節(jié)pH到2.4，用95％乙醇補充終體積到100ml。
亞混合物-C是通過混合亞混合物-A(100ml)和亞混合物-B(100ml)來制備的。
亞混合物-D的制備方法如下加熱125ml 95％乙醇到35-40℃，然后溶解下述成分膽固醇(2-21g；優(yōu)選12-21g)；甘油磷脂膽堿(3.72-14.65g；優(yōu)選7.68-11.05g)；α-維生素E(0.05-2.5g；優(yōu)選0.2-0.9g)；甘油單油酸酯(6.5-18.3g；優(yōu)選11.42-16.92g)；磷脂酰膽堿(0-20g；優(yōu)選3.2-9.8g)；然后冷卻至室溫。
亞混合物-E的制備方法如下加熱127.2ml of MCT(中等鏈?zhǔn)礁视腿ィ珽li Lilly and Co.，Indianapolis，Ind.公司生產(chǎn))到35-40℃，然后溶解下述成分土溫-80(0.3-37g；優(yōu)選0.8-2.1g)；丙基帕拉板(0.05-5.2g；優(yōu)選0.08-0.3g)；甲基帕拉板(0.05-3.8g；優(yōu)選0.8-1.7g)；抗氧化劑(0.08-1.8g；優(yōu)選0.8-1.9g)(如上述實施例1所述)；混合后冷卻到室溫。
亞混合物-F是通過混合亞混合物-D然后冷卻到室溫來制備的。
最終的制劑的制備方法是在恒定攪拌下，將亞混合物-C加入到亞混合物-F中，然后用體積百分比為5％的油酸(亞混合物-C & 亞混合物-F)均質(zhì)。
得到的胰島素溶液按照實施例1的方法制備成約3mm大小的微膠粒。
實施例3共計7位胰島素抗體陰性的糖尿病患者(5位II-型NIDDM糖尿病患者日?？诜┝康幕请?如格列本脲)無反應(yīng)，2位I-型IDDM糖尿病患者)，年齡從35歲到63歲(平均年齡47.3歲)，其中4位男性，3位女性，得到了他們的書面同意，并經(jīng)研究中心確認(rèn)。
在進(jìn)行研究的前一天下午6:00-6:30，給這些病人提供標(biāo)準(zhǔn)糖尿病患者的飲食，此后他們被整夜監(jiān)護(hù)起來，只是自由的提供水。在進(jìn)行研究的這一天上午6:00，每一位病人都被要求服用實施例1制備的含有胰島素的微膠粒(約0.5-0.8U胰島素/kg體重)，以300ml溫水送服。在4個小時之內(nèi)，每小時采集靜脈血樣測量血糖水平，在口服胰島素以后的第0、1.5、2.5小時時測量血清胰島素水平。結(jié)果如表1和圖4、圖5所示。
表1編號 年齡 性別血糖(mMol/L) 胰島素血清濃度uU/M0 1 2 3 40 1.5 2.5小時1 44 女 10.5 10.3 5.86.6 6.7 9.8 141 160.42 35 女 8.98.23.76 4.9 11.446.52013 40 男 11.1 9.58.25 5.8 13.787.6186.64 55 男 9.28.25.75.1 4.2 7.9 76.9179.15 56 女 8.68.16.25.4 3.8 14 88 1086 63 男 7.86.95.84.7 4.8 26 72 161.97 38 男 6.25.96.14.5 4.5 22.283.1179平均 47.29 4男3女 8.90 8.16 5.93 5.33 4.96 15.00 85.01 168.00SEM10.67 1.64 1.48 1.31 0.74 0.99 6.6628.50 29.93如圖4和圖5所示，血糖逐漸降低到臨床上可以接受的水平，而血清胰島素水平卻從胰島素很低的水平上升到約168μU/ml。沒有觀察到嚴(yán)重的血糖過低現(xiàn)象和胰島素過高現(xiàn)象。這一發(fā)現(xiàn)與給糖尿病人皮下注射胰島素后、口服治療劑量的美國專利No.5,665,700、美國專利No.4,849,227和美國專利No.5,656,289所披露的胰島素脂質(zhì)體或微乳制劑通常觀察到的血糖和血清胰島素水平的反應(yīng)顯著不同。這一發(fā)現(xiàn)大致與口服美國專利No.5,858,398所披露的胰島素膠束制劑后的臨床數(shù)據(jù)相類似，但是，這種新的前膠束制劑一般還會觀察到相對更快的降低血糖水平的藥物活性的起點。
實施例4把一頭麻痹的豬(公豬，70kg)從腹部中線切開，暴露出十二指腸，從連接十二指腸的最大的淋巴管插入導(dǎo)管。在研究過程中，每隔15分鐘收集淋巴液到大玻璃杯中。另一根導(dǎo)管插入到門靜脈，在研究過程中，每隔15分鐘對入口靜脈血取樣。實施例2所述的含有胰島素的微膠粒(2500mg含有約160單位的豬胰島素)在50ml pH約為2.8的冷緩沖液中過夜浸泡制成乳液，在5分鐘內(nèi)將其從導(dǎo)管灌入十二指腸。在操作過程中不要影響膽汁的流動。
使用本發(fā)明的發(fā)明人的開發(fā)的方法，分析稀釋到1/10-1/50的淋巴液和血清樣品中的胰島素濃度，并使用英國劍橋Novo-Nordisk Diagnostics，LTD公司的生物分析方法或放射免疫方法進(jìn)行驗證。圖6、7、8分別顯示了肝臟入口血、淋巴液和外周靜脈血的胰島素濃度。
早期的研究(美國專利No.5,858,398)表明，膠束結(jié)合的胰島素主要經(jīng)過書油一磷酸脂途徑從胃腸系統(tǒng)吸收，然后從入口靜脈系統(tǒng)進(jìn)入肝臟(Clark，B & Hubscher，G.，Nature 18535，1960；Imai，Y.& Sakagami，T，inLipid Biochemistry，pp.111-126，1966，Asakura Shoten，Tokyo，Japan)。本發(fā)明對豬的研究表明，從十二指腸灌入的本發(fā)明的口服胰島素制劑在入口血中有所發(fā)現(xiàn)，在給藥后15-30分鐘內(nèi)從十二指腸灌入的胰島素在插入導(dǎo)管的十二指腸淋巴液中的濃度顯著升高，它在外周靜脈血中也有所發(fā)現(xiàn)。
實施例5
按照實施例1使用微乳作為中心制備含有前膠束形式的胰島素的膠囊。每一個膠囊含有4.3單位的牛胰島素。在250mg/kg的靜脈葡萄糖挑戰(zhàn)之前15分鐘給5只白化兔子(3雄2雌，體重在2.1-2.5kg之間)中的每一只口服1個膠囊。水作為對照。如圖9所示，口服前膠束胰島素制劑可以有效的抑制靜脈施用葡萄糖引起的高血糖癥。血糖測定方法為Folin et al.，J.Bio.Chem.3881，1919中的方法。
圖10顯示了在250mg/kg的葡萄糖挑戰(zhàn)之前15分鐘給兔子腹腔(i.p.)施用標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)胰島素溶液(0.3ml，3.1IU/ml)或前膠束提取物(2.5ml，0.4IU/ml)后的血糖水平。腹腔注射標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)胰島素降低了血糖。腹腔注射本發(fā)明的含有少量硅鋁酸和環(huán)己脲的制劑有效的改正了胰島素引起的低血糖癥。這表明硅鋁酸和環(huán)己脲抑制了網(wǎng)狀內(nèi)皮組織系統(tǒng)(包括腹膜、肝臟、脾、腎和肺)的巨噬細(xì)胞活性，其中巨噬細(xì)胞包括單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。
圖11顯示了在250mg/kg的葡萄糖挑戰(zhàn)之前1分鐘給兔子靜脈(i.v.)施用標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)胰島素溶液(0.2ml，3.1IU/ml)或前膠束提取物(1.5ml，0.4IU/ml)后的血糖水平。在注射標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)胰島素后的90分鐘內(nèi)，在20-45分鐘時血糖水平迅速降低，然后逐漸升高，直到達(dá)到對照水平的10-30％。實驗過程中低血糖癥縮短。施用本發(fā)明的制劑，在35分鐘內(nèi)觀察到低血糖現(xiàn)象，一直持續(xù)到實驗后續(xù)的120分鐘或更長的過程中。相對于常規(guī)胰島素而言，其起點變慢而持續(xù)時間更長。
權(quán)利要求
1.一種具有含有藥物活性成分的中心的組合物，其中所述的中心包封在含有酯化的C12-C18脂肪酸的膜中，且所述的脂肪酸在組合物中的濃度低于15wt.％。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的中心時微乳或脂質(zhì)體。
3.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述的微乳含有磷脂和表面活性劑。
4.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述的脂質(zhì)體含有一個含有藥物活性成分的親水相和一個含有膽固醇、磷脂、親脂性表面活性劑和未酯化脂肪酸的連續(xù)親水相。
5.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的藥物活性成分是胰島素、生長激素、干擾素、降血鈣素、尿激酶、凝結(jié)因子-VIII、凝結(jié)因子-IX、EPO、萘夫西林、長春新堿、塞弗唑啉、阿霉素、奎寧、氯喹、伯氨喹、d-α-生育酚、慶大霉素、格列本脲、茚甲新、羥基保泰松、氯乙酰唑、心得安、環(huán)磷酰胺、毒扁豆堿、氟西汀或費奧汀。
6.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的藥物活性成分是胰島素。
7.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的C12-C18脂肪酸是可可提取物。
8.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的膜的厚度約為0.02mm。
9.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的膜進(jìn)一步包有膜衣。
10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述的膜衣含有凝膠。
11.如權(quán)利要求9所述的組合物，它是直徑為約1.8-3.0mm的微膠粒。
12.如權(quán)利要求11所述的組合物，它進(jìn)一步包有腸衣。
13.一種制備含有藥物活性成分的組合物的方法，它含有下述步驟(a)制備含有藥物活性成分的脂質(zhì)體或微乳；(b)在所述脂質(zhì)體或微乳的外面包以含有酯化的C12-C18飽和脂肪酸的中間層；(c)在所述中間層的外面包以膜層，制成微膠粒。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，它進(jìn)一步含有將所述的微膠粒包封到凝膠膠囊中的步驟。
15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述的脂質(zhì)體或微乳是干粉的形式。
16.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述的微乳的直徑是約1.8-3.0mm。
17.一種給哺乳動物輸送藥物活性成分的方法，它含有給所述的哺乳動物口服權(quán)利要求1的組合物的步驟。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述的哺乳動物是人。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種前膠束組合物，它含有包封在酯化的C
文檔編號A61K9/00GK1582143SQ02820117
公開日2005年2月16日 申請日期2002年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月11日
發(fā)明者曹泳元, 李凱旺 申請人:Imi生物醫(yī)藥公司