專利名稱:具有增強(qiáng)的細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)的阿黑皮素原荷爾蒙的兩個生物活性片斷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及從阿黑皮素原荷爾蒙中提取的兩個具有生物活性的肽鏈的結(jié)合物,其具有增加的細(xì)胞保護(hù)效應(yīng),以及炎癥反應(yīng)與組織/傷口愈合之間的調(diào)節(jié)作用。這兩種阿黑皮素原的肽鏈的結(jié)合物具有更佳的藥理作用和組織損傷愈合的效果。
背景技術(shù):
蛋白質(zhì)與基因序列中具有生物活性的部分,其長度通常是5至15個氨基酸和重復(fù)的肽,其間被更長的未知功能肽鏈片斷(1-5)分割開來。將計算分析應(yīng)用于該基序的提取以及隨后對它們的蛋白質(zhì)區(qū)域的生物活性的控制(1-5)。本發(fā)明提出了該具有增強(qiáng)的細(xì)胞保護(hù)和藥理功能的阿黑皮素原荷爾蒙中兩個重復(fù)且具有生物活性的片斷的結(jié)合物。
發(fā)明內(nèi)容
在一個單一蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)族中重復(fù)的肽鏈片段,以及與其相匹配的互補(bǔ)的序列顯示與更大分子結(jié)構(gòu)的生物活性相關(guān)聯(lián)的區(qū)域(1-5)。
現(xiàn)代的編程技術(shù)、軟件以及蛋白質(zhì)和基因結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫的發(fā)展使人們利用計算機(jī)對不同蛋白質(zhì)中更大數(shù)量的重復(fù)的、具有生物活性的和互補(bǔ)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬成為可能(1-5)。因此,人們可以在個人計算機(jī)上快速而非常方便地提取相對短小的、重復(fù)性的基序(1-5)。為了獲得具有增加的藥理作用和細(xì)胞保護(hù)效果的可能的要素的結(jié)合物,我們通過軟件SCAN(3-5)對阿黑皮素原分子中的重復(fù)性的并具有生物活性的肽進(jìn)行了分析。
圖1顯示了阿黑皮素原分子的兩個具有生物活性的肽片段SYSMEHFRWGKPV與YGGFM,及其結(jié)合物KOMET在乙醇誘導(dǎo)大鼠胃損傷標(biāo)準(zhǔn)模型中的細(xì)胞保護(hù)作用。
具體實施例方式
本發(fā)明的目的在于通過對阿黑皮素原荷爾蒙分子中的兩個重復(fù)性的和具有生物活性的肽進(jìn)行結(jié)合獲得增強(qiáng)的細(xì)胞保護(hù)藥理效果。
實際上,本發(fā)明是利用軟件SCAN來從阿黑皮素原蛋白質(zhì)的基序中提取兩個重復(fù)性的并具有生物活性的序列(SYSMEHFRWGKPV與YGGFM),而不是對該蛋白質(zhì)的基序進(jìn)行隨機(jī)性的篩選。上述兩個提取的序列可以在以下分子中找到阿黑皮素原前體、阿黑皮素原、促腎上腺皮質(zhì)激素、促黑素細(xì)胞激素、β-促脂解素、腦啡肽原、前腦啡肽原、β-內(nèi)啡肽以及adrenorphin(表1)。
通過利用96%乙醇誘導(dǎo)的雄性Wistar大鼠胃部損傷的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞保護(hù)模型(6、7),對SYSMEHFRWGKPV與YGGFM這兩個具有生物活性的肽段分別及以結(jié)合物進(jìn)行測試。用生理鹽水處理的對照組的8個大鼠,其胃部損傷區(qū)域為255.5±78.1mm2(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差,如圖1)(7)。用SYSMEHFRWGKPV(1mg/kg)與YGGFM(10mg/kg)兩種肽的結(jié)合物處理的8個大鼠組成的試驗組,其胃部損傷區(qū)域為0.3±0.7mm2(與對照組相比,P<0.05,如圖1)(7)。用SYSMEHFRWGKPV(1mg/kg)處理的8個大鼠組成的試驗組,其胃部的損傷區(qū)域為5.9±8mm2(與對照組相比,P<0.05,如圖1)(7)。而用YGGFM(10mg/kg)處理的8個大鼠的試驗組,其胃部損傷區(qū)域為139.4±36.1mm2(與控制組相比,P<0.05,如圖1)(7)。能夠提供最佳細(xì)胞保護(hù)作用的SYSMEHFRWGKPV與YGGFM這兩種肽的結(jié)合物將以KOMET的名字進(jìn)行專利申請。上述肽及其組合物對正常的胃黏膜沒有刺激作用(7)。
對本發(fā)明可能應(yīng)用的描述在表1中定義的具有生物活性的序列KOMET,及其結(jié)構(gòu)分子式的組合KOMET-1、KOMET-2以及KOMET-3可以在炎癥反應(yīng)和創(chuàng)傷愈合的調(diào)節(jié)過程方面用作生物活性肽。對從阿黑皮素原荷爾蒙的活性片段中(6-9)獲得的KOMET-1、KOMET-2以及KOMET-3進(jìn)行定義的目的在于以一種快捷而有效的方式獲得可能的藥物的分子式(序列)。
本發(fā)明的KOMET、KOMET-1、KOMET-2以及KOMET-3的目的是為了能夠獲得一種藥物,該藥物可預(yù)防和消除組織和肌體在炎癥和自我免疫疾病中,以及在下列部位的外傷、感染和燒傷所帶來的損傷1、結(jié)締組織、關(guān)節(jié)以及骨骼;2、中樞神經(jīng)以及周圍神經(jīng)系統(tǒng)、視神經(jīng)、眼睛和耳朵;3、皮膚、毛發(fā)和指甲;4、消化系統(tǒng)、肝臟、胰腺、口腔、牙齒以及鼻竇;5、免疫系統(tǒng)、骨髓、淋巴結(jié)以及脾臟;6、心血管系統(tǒng);7、呼吸系統(tǒng)、respiratornog sustava;8、生殖系統(tǒng)。
本發(fā)明的工業(yè)應(yīng)用阿黑皮素原中具有生物活性的序列KOMET、KOMET-1、KOMET-2以及KOMET-3可以施用于皮下、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)以及靜脈內(nèi)。局部施用包括軟膏、乳膏、凝膠劑、栓劑、陰道栓、滴眼劑、滴耳劑。
參考文獻(xiàn)1.L.Baranyi,W.Campbell,K.Ohishima et al.,Nature Medicine 1(1995)894-901.
2.J.E.Blalock,Nature Medicine 1(1995)876-878.
3.N. On the Optimization of Complementary Protein Coding,inS.Ohno,K.Aoki,M.Usui,E.Uchio(Eds.),Uveitis Today,Elsevier,Amsterdam,1998,pp 315-318.
4.N. and P.Konjevoda,Period.Boil.101(1999)363-368.
5.N. N.Gotovac,M.Martinis et al.Simple Three-step Method for theAnalysis and Design of Repetitive and Bioactive protein Motifs,inV.B. (Ed.),Advances in Systems Signals Control and Computers vol.II,IAAMSAD,and ANS,Durban,1998,pp310-311.
6.P.Konjevoda,N. D. et al.Croat.Chem.Acta 73(2000)1111-1121.
7.P.Konjevoda,N. G.Aralica and B. J.Physiol.-Paris 95(1-6)(2001)277-281.
8.J.M.Lipton and A.Catania,Immunol.Today 18(1997)140-145.
9.N. N.Kopjar,K. et al.Croat.Chem.Acta 71(1998)591-605.
表1定義了以KOMET命名的阿黑皮素原的兩種具有生物活性的序列的結(jié)合物,以及化學(xué)結(jié)構(gòu)分子式分別為KOMET-1、KOMET-2以及KOMET-3(通過組合單一的分子結(jié)構(gòu)式獲得)的三種結(jié)合物。
兩種具有生物活性的且重復(fù)的蛋白質(zhì)基序(肽YGGFM與肽SYSMEHFRWGKPV)的結(jié)合物,是利用SCAN軟件(3-5)從阿黑皮素原前體以及阿黑皮素原分子中通過計算得出的。重復(fù)性肽YGGFM同樣存在于腦啡肽原、前腦啡肽原、β-促脂解素、β-內(nèi)啡肽以及adrenorphin分子中(a)。而肽SYSMEHFRWGKPV則存在于促黑素細(xì)胞激素及促腎上腺皮質(zhì)激素分子中(b)。
阿黑皮素原中兩種具有生物活性的肽YGGFM與肽SYSMEHERWGKPV的結(jié)合物是以KOMET的名字申請專利的。
這兩種肽的其他結(jié)合物是以如下的名字和結(jié)構(gòu)分子式申請專利的KOMET-1特征為其結(jié)構(gòu)分子式是YGGFMSYSMEHERWGKPVYGGFM,KOMET-2特征為其結(jié)構(gòu)分子式是YGGFMSYSMEHERWGKPV以及KOMET-3特征為其結(jié)構(gòu)分子式是SYSMEHERWGKPVYGGFM。
表1(a)
表1(b)圖1阿黑皮素原分子中該具有生物活性的肽段SYSMEHFRWGKPV與YGGFM在乙醇誘導(dǎo)胃損傷的大鼠模型中的細(xì)胞保護(hù)效果。與單獨的肽序列相比較,序列KOMET(SYSMEHFRWGKPV+YGGFM)的結(jié)合物顯示出更強(qiáng)的細(xì)胞保護(hù)效果。
權(quán)利要求
1.兩個具有生物活性的且重復(fù)的阿黑皮素原序列的結(jié)合物KOMET,其特征在于其結(jié)構(gòu)分子式是SYSMEHFRWGKPV與YGGFM(表1),用于制備作為全身性的和局部的藥物的合成中。
2.兩個具有生物活性的且重復(fù)的阿黑皮素原序列的結(jié)合物KOMET-1,其特征在于其結(jié)構(gòu)分子式是YGGFMSYSMEHFRWGKPVYGGFM,用于制備作為全身性的和局部的藥物的合成中。
3.兩個具有生物活性的且重復(fù)的阿黑皮素原序列的結(jié)合物KOMET-2,其特征在于由結(jié)構(gòu)分子式是YGGFMSYSMEHFRWGKPV組成,用于制備作為全身性的和局部的藥物的合成中。
4.兩個具有生物活性的且重復(fù)的阿黑皮素原序列的結(jié)合物KOMET-3,其特征在于由結(jié)構(gòu)分子式是SYSMEHFRWGKPVYGGFM組成,用于制備作為全身性的和局部的藥物的合成中。
全文摘要
應(yīng)用計算分析定義了阿黑皮素原的重復(fù)的且具有生物活性的片斷SYSMEHFRWGKPV與YGGFM。采用乙醇誘導(dǎo)的胃損傷細(xì)胞保護(hù)模型證實與這兩個序列分別應(yīng)用相比較,SYSMEHFRWGKPV與YGGFM序列的結(jié)合物具有增強(qiáng)的細(xì)胞保護(hù)效果。SYSMEHFRWGKPV與YGGFM這兩個序列的結(jié)合物用KOMET表示并申請專利。引入KOMET的目的是為了在全身性和局部炎癥和傷口愈合的協(xié)調(diào)上獲得更好和更強(qiáng)的藥物學(xué)效果。顯示這兩個序列的不同結(jié)合物的補(bǔ)充的結(jié)構(gòu)分子式也進(jìn)行了如下的定義KOMET-1的序列為YGGFMSYSMEHFRWGKPVYGGFM,KOMET-2的序列為YGGFMSYSMEHFRWGKPV,KOMET-3的序列為SYSMEHFRWGKPVYGGFM。
文檔編號A61K38/34GK1558772SQ01823710
公開日2004年12月29日 申請日期2001年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月18日
發(fā)明者茲拉托·艾德蒙維科, 尼古拉·斯坦巴克, 帕斯科·康捷文達(dá), 達(dá)科·米庫斯, 康捷文達(dá), 斯坦巴克, 茲拉托 艾德蒙維科, 米庫斯 申請人:茲拉托·艾德蒙維科, 尼古拉·斯坦巴克, 帕斯科·康捷文達(dá), 達(dá)科·米庫斯, 茲拉托 艾德蒙維科