專利名稱：含有至少一個具有生物素或生物素衍生物共價鍵的具有抗血栓形成形成活性的多糖的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有至少一個連接生物素或生物素衍生物共價鍵，并具有肝素抗凝血和抗血栓形成藥理活性的新型合成低聚糖和多糖類。
肝素，特別通過抗凝血酶III(AT III)催化對兩種介入到凝血歷程中的酶，即Xa因子和IIa因子(即凝血酶)的抑制。低分子量肝素(HBPM)制劑含有由4～30個單糖形成的鏈，對Xa因子比對凝血酶具有更強的選擇性。
眾所周知，對Xa因子的抑制須要通過與抗凝血酶相連的區(qū)域(A-區(qū))把肝素固定在AT III上，還知道，對IIa因子(凝血酶)的抑制必須經(jīng)過A-區(qū)將其固定在AT III上，以及通過不那么確定連接的區(qū)域(T-區(qū))固定在凝血酶上。
合成的相當(dāng)于肝素A-區(qū)的低聚糖是已知的。在比如專利EP 84999和EP 529715中，在WO 99/36428號下公布的專利申請以及出版物Bioorg.Med.Chem.1998，6，1509～1516中都對此進(jìn)行了敘述。這些合成的低聚糖具有通過抗凝血酶III選擇性地抑制凝血因子Xa的性能，而對凝血酶卻沒有任何活性。在靜脈血栓形成當(dāng)中它們都顯示出抗凝血的活性。
在專利申請WO 98/03554和WO 99/36443中敘述了能夠經(jīng)過活化AT III來抑制凝血酶和Xa因子的合成低聚糖。
在這些專利申請中敘述了具有生物活性的硫酸化和烷基化的多糖衍生物。它們特別是抗凝血劑和抗血栓形成劑。特別顯示出，這些硫酸化和烷基化的多糖，根據(jù)在糖苷骨架上烷基和硫酸根排列的不同，可能是強的抗血栓形成劑和抗凝血劑。更一般地看，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過構(gòu)成多糖的序列，能夠精確地調(diào)整GAG型的活性，以得到具有肝素抗凝血和抗血栓形成藥物性能的活性很強的化合物。與肝素相比，它們具有的優(yōu)點是有確定的結(jié)構(gòu)，而且不與血小板的4因子發(fā)生反應(yīng)，不會產(chǎn)生肝素的血小板減少的作用。
但是，在人類的治療中使用在專利申請WO 98/03554和WO99/36443以及在專利EP 529715中敘述的某些產(chǎn)品可能遇到困難，特別是如果這些產(chǎn)品具有很長的半衰期的話。在用上述產(chǎn)品預(yù)防或者治療血栓形成的領(lǐng)域中，應(yīng)該在恢復(fù)或保持血液流動性的同時避免造成出血。
實際上還知道，對于某些意外的原因，正在治療當(dāng)中的病人可能會出現(xiàn)出血。也可能須要對正在進(jìn)行抗凝血治療的病人進(jìn)行外科的介入。另外，在某些外科手術(shù)中，可能使用大劑量的抗凝血劑，以阻止血液凝聚，而在手術(shù)結(jié)束時又必須中和這些抗凝血劑。因此，具有一種可以中和的抗凝血劑，以在任何時間終止抗凝血劑的活性是很有意義的。當(dāng)然，如上所述，合成的低聚糖已知不能很容易地被已知的含有精蛋白硫酸鹽的肝素解劑或HBPM所中和。
本發(fā)明涉及新型的合成多糖，其結(jié)構(gòu)與在專利申請WO 98/03554和WO 99/36443以及在專利EP 529715中敘述的化合物相近作為本發(fā)明目的的合成低聚糖的結(jié)構(gòu)在如下的方面是改性的，它具有與生物素(六氫-2-氧代-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑基-4-戊酸)或者與生物素衍生物的共價鍵。意外地顯示出生物素或生物素衍生物的引進(jìn)沒有改變該多糖的藥物活性。實際上，作為本發(fā)明目的的新型多糖具有與現(xiàn)有技術(shù)的低聚糖相當(dāng)?shù)目寡ㄐ纬苫钚?。但是它們還具有在緊急狀態(tài)下能夠迅速地被專門的解劑中和的優(yōu)點。這種專門的解劑是抗生物素蛋白(The Merck Index，第12版，1996，M.N.920，第151～152頁)或抗生蛋白鏈菌素，這是兩種分子量大約等于66000和60000Da的四聚蛋白質(zhì)，對生物素具有很強的親和力。
按照一般的方式，本發(fā)明涉及具有生物素或生物素衍生物的至少一個共價鍵的、具有抗凝血活性的合成多糖。
作為生物素衍生物，可以舉出在《Pierce目錄1999-2000》的第62～81頁所指出的衍生物，比如6-生物素酰胺己酸， 或者6-(6-生物素酰胺基己酰氨)己酸 或者2-生物素酰胺基乙硫醇 或者如下通式的各種化合物 本發(fā)明的目的特別是如通式(I)的多糖以及它們的可藥用鹽 其中—波浪線表示位于吡喃糖環(huán)平面下面或者上面的鍵，
Po表示含有相同或不同的n個單糖單元的多糖，由其異頭碳與Pe連接起來， 是具有吡喃糖結(jié)構(gòu)的單糖單元的示意性的表示，這些吡喃糖選自己糖、戊糖和相應(yīng)的脫氧蔗糖，這些單元由其異頭碳與另一個單糖單元連接，而且這些單元的羥基被相同或不同的基團R1取代，R1如在下面所定義，—Pe表示如下結(jié)構(gòu)的五糖 -h等于1或2；-n是整數(shù)，可以取0～25的各個值；—R1表示鏈-T-Biot、C1～C6烷氧基或基團-OSO3-；—R2表示鏈-T-Biot、C1～C6烷氧基或基團-OSO3-；—R3表示鏈-T-Biot、C1～C6烷氧基；—R4表示鏈-T-Biot、C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，或者R4構(gòu)成-O-CH2-橋，基團-CH2-連接在同一個環(huán)上帶有羧基官能團的碳原子上；條件是取代基R1、R2、R3或R4中至少一個表示基團-T-Biot；—W表示氧原子或亞甲基；—T表示選自下面的鏈中的一個NH， 或者 其中j和k相同或不同，是取自1～10的整數(shù)；-Biot表示如下的基團 如在前面所指出的，在本說明中一般要注意到，波浪線表示位于吡喃糖平面以下或者以上的鍵。
在Po中所含的單糖彼此可以相同或不同，糖苷間的鍵可以是α型或者β型的。
這些單糖有利地選自D-或L-己糖Alose、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、galose、艾杜糖、乳糖、塔羅糖(在此情況下h＝2)或者選自D-或L-戊糖核糖、阿拉伯糖、木糖、來蘇糖(在此情況下h＝2)。也可以使用其他單糖，比如脫氧蔗糖(h＝1和/或-CH2R1＝CH3)。
多糖部分Po可以由0～25個烷基化和二硫酸化或三硫酸化的單糖單元組成。
多糖部分Po也可以由0～25個烷基化和單硫酸化或二硫酸化的單糖單元組成。
多糖部分Po可以由0～25個不帶電荷的和/或部分帶電荷和/或帶全部電荷的烷基化單糖單元組成。
帶電荷的或不帶電荷的單元可以沿著鏈分布，或者相反集合在糖的帶電荷區(qū)域或不帶電荷區(qū)域中。
單元之間的鍵是1，2；1，3；1，4；1，5；1，6-鍵，是α型或β型的。
在本說明中，對于L-艾杜糖醛酸，選擇1C4構(gòu)象，對于D-葡萄糖醛酸，選擇4C1構(gòu)象，但是眾所周知的是，在溶液中的單糖單元的構(gòu)象是波動的。
比如，L-艾杜糖醛酸的構(gòu)象可以是1C42S0或4C1。
按照本發(fā)明的一個方面，它涉及如下通式(I.1)的多糖及其可藥用鹽 其中 表示特定的一類多糖Po，由其異頭碳與對于(I)所定義的Pe連接在一起， 如對(I)所定義，—基團R1如對(I)所定義，對于同一單糖，它們可以是相同或者不同的，—在[]m中所含的單糖被重復(fù)m次，在[]t中所含的單糖被重復(fù)t次，在[]p中所含的單糖被重復(fù)p次，—m是1～5的整數(shù)；t是0～24的整數(shù)；p是0～24的整數(shù)，條件是1≤m+t+p≤25，在這些通式(I.1)的多糖中，其中取代基R1、R2、R3或R4中只有一個表示鏈T-Biot，T和Biot如對(I)所定義，及其可藥用鹽構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。
按照本發(fā)明的一個特定的方面，它涉及通式(I.2)的十六環(huán)糖及其可藥用鹽 其中—T表示選自下面的鏈NH， 或者 其中，j和k相同或不同，是取自1～10的整數(shù)；-Biot表示如下的基團 —Pe表示如下結(jié)構(gòu)的五糖 其中—R1表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，—R2表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，—R3表示C1～C6烷氧基，—R4表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，或者R4構(gòu)成-O-CH2-橋，基團-CH2-與同一個環(huán)上帶有羧基官能團的碳原子相連，—W表示氧原子或亞甲基。
按照本發(fā)明的另一個方面，它涉及如下通式(I.3)的五糖及其可藥用鹽 其中R1、R2、R3、R4和W如對(I)所定義。
在通式(I.3)的這些五糖中，其中取代基R1、R2、R3或R4中只有一個表示鏈-T-Biot，T和Biot都如對(I)所定義，及其可藥用鹽構(gòu)成本發(fā)明的另外一個方面。
在通式(I.3)的這些多糖中，本發(fā)明的目的是如下通式(I.4)的五糖及其可藥用鹽 其中
—T表示選自下面的鏈NH， 或者 其中，j和k相同或不同，是取自1～10的整數(shù)；-Biot表示如下的基團 其中—R1表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，—R2表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，—R3表示C1～C6烷氧基，—R4表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，或者R4構(gòu)成-O-CH2-橋，基團-CH2-與同一個環(huán)上帶有羧基官能團的碳原子相連，—W表示氧原子或亞甲基。
按照本發(fā)明的另外的方面，它涉及如下的多糖—甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸根合(sulfonato)-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-生物素酰胺基-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺酸根合-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸(idopyranosyluronique))-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-吡喃葡糖苷，鈉鹽，—甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-[6-(生物素酰胺基己酰胺基)己酰胺基]-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺酸根合-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽；—甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-[6-(6-生物素酰胺基己酰胺基)己酰胺基]-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺酸根合-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽；—甲基(2-生物素酰胺基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽
—甲基-(2-[N-(6-生物素酰胺基己?；?]-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-9-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽；—甲基-(2-[6-(6-生物素酰胺基己酰胺基)己酰胺基]-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽。
本發(fā)明包括呈其酸的形式或者呈其任何一種可藥用鹽形式的多糖。在酸的形式中，官能團-COO-和-SO3-分別呈-COOH和-SO3H的形式。
本發(fā)明“多糖的可藥用鹽”意味著，一種多糖，其中一個或多個官能團-COO-和/或-SO3-以離子的形式連接在可藥用的陽離子上。按照本發(fā)明的優(yōu)選鹽，其陽離子選自堿金屬陽離子，其陽離子更優(yōu)選是Na+或K+。
上述的通式(I)化合物還包括其中一個或多個氫原子或碳原子被放射性同位素，比如氚或碳-14代替的化合物。這樣的標(biāo)記化合物，在生物化學(xué)試驗中，作為配位體被用于代謝或藥物代謝動力學(xué)的研究工作中。
原則上，制備本發(fā)明化合物的方法使用了如在以前文獻(xiàn)中所報道而制備的二環(huán)糖或低聚糖堿的合成子。特別將參考專利或?qū)＠暾圗P300,099、EP 529,715、EP 621,282和EP 649,854以及C.vanBoeckel，M.Petitou的文獻(xiàn)Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，1993，32，1671～1690。然后將這些合成子互相偶合，以提供按照本發(fā)明的多糖的完全被保護的相應(yīng)化合物，該被保護的相應(yīng)物隨后轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。
上面所提到的堿合成子之一含有特定的被保護官能團，這些官能團在以后能夠引入生物素或者生物素衍生物，比如呈疊氮基形式的潛伏型胺官能團或者呈N-鄰苯二酰亞胺基形式的被保護的胺官能團。
在上面提到的偶合反應(yīng)中，對其異頭碳具有活性的“供體”二環(huán)糖或低聚糖與具有游基羥基的“受體”二環(huán)糖或低聚糖反應(yīng)。
本發(fā)明涉及通式(I)化合物的制備方法，其特征在于，在第一步中，合成所需多糖(I)的完全被保護的相應(yīng)化合物，該化合物含有被保護的區(qū)域Pe的前體，在其非還原性的一端，延續(xù)出硫酸化我糖的被保護前體Po，這些前體中的一種特別含有胺官能團，此官能團適當(dāng)?shù)乇槐Ｗo，以便以后引入生物素或生物素衍生物；在第二步，引入和/或曝露出帶有負(fù)電荷的基團；在第三步，將胺官能團解保護，然后引入生物素或生物素衍生物。
按照上述的方法，特別是在專利申請WO 98/03554和WO 99/36443以及在上面所引用文獻(xiàn)中敘述的方法來合成Pe。
按照本領(lǐng)域已知的反應(yīng)，使用合成低聚糖的方法(G.J.Boon，Tetrahedron，1996，52，1095～1211、WO 98/03554和WO 99/36443)合成前體多糖部分Po，或者當(dāng)糖苷鍵的低聚糖供體與糖苷鍵的低聚糖受體偶合，以得到其尾部等于兩個活性片段的尾部之和的另一種低聚糖時，使用低聚糖。重復(fù)此步驟，直到得到所需的通式(I)化合物。按照本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的規(guī)律，最終所需化合物電荷的種類和分布決定在合成的不同步驟中所用的化合物的種類。可以參照比如C.vanBoeckel、M.Petitou的Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1993，32，1671～1690還有H.Paulsen的“低聚糖絡(luò)合物的選擇性化學(xué)合成進(jìn)展”Angew.Chem.Int.Ed.Engl.21。155～173(1982)。
使用如下反應(yīng)鏈，由其完全被保護的多糖前體得到本發(fā)明的化合物—先將醇官能團轉(zhuǎn)化為O-磺基，并通過消去在制造骨架時使用的保護基將羧酸解保護；然后—引入磺基；—將能夠引入生物素或生物素衍生物的胺官能團解保護；—通過傳統(tǒng)的氨基/酸偶合反應(yīng)引入生物素或生物素衍生物。
當(dāng)然能夠使用合成低聚糖的本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的不同策略來制備本發(fā)明的化合物。
上述方法是本發(fā)明優(yōu)選的方法。然而，通式(I)化合物可以由在比如P.M.Collins和R.J.Ferrier所著的《單糖、其化學(xué)及其在天然產(chǎn)品中的作用》(John.Wiley&Sons出版社，1995)和在G.J.Boons，Tetrahedron，1996，52，1095～1121中所述的糖化學(xué)所熟知的其他方法來制備。
因此，由按照C.van Boeckel和M.Petitou的Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1993，32，1671～1690中敘述的方法所制備的二糖合成子能夠得到五糖Pe。
在制備化合物(I)的方法中使用的保護基是在糖化學(xué)中通常使用的保護基，比如在T.W.Greene的《有機合成中的保護基團》(JohnWiley&Sonss，New-York，1981)中所述的保護基團。
保護基團有利地選自比如乙?；?、鹵代甲基、苯甲?；⒁阴１；⑵S基、取代芐基、任選取代的三苯甲基、四氫吡喃基、烯丙基、戊烯基、叔丁基二甲基甲硅基(tBDMS)或三甲代甲硅烷基乙基。
活化劑基團是在糖化學(xué)中傳統(tǒng)使用的基團，比如按照G.J.Boons，Tetrahedron，1996，52，1095～1121。這些活化劑基團選自亞胺鹽(imidates)、硫葡糖苷、戊烯基葡糖苷、黃原酸根、亞磷酸根或鹵化物。
涉及到生物素與低聚糖相連的方式以及生物素衍生物的種類，化學(xué)文獻(xiàn)給出了另外一種可能性，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的保護基團。將優(yōu)選使用胺官能團或者硫醇官能團，還可以使用羧酸官能團或醛官能團，它們都能夠與含有活化酯類、馬來酰亞胺、碘代乙酰基或伯胺基等活性基團的生物素衍生物發(fā)生反應(yīng)，此反應(yīng)按照在文獻(xiàn)(參見Savage等人的《抗生物素蛋白-生物素化學(xué)手冊》Pierce Chemical公司，1992)中敘述的條件進(jìn)行。
如上所述的方法能夠得到呈鹽形式的化合物。為了得到相應(yīng)的酸，要將呈鹽形式的本發(fā)明化合物與呈酸形式的陽離子型離子交換樹脂接觸。
然后可以用堿中和呈酸形式的本發(fā)明化合物，得到希望的鹽。為了制備通式(I)化合物的鹽，可以使用各種能夠與通式(I)化合物一起給出可藥用鹽的無機堿或有機堿。優(yōu)選使用如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣或氫氧化鎂的堿。通式(I)化合物的鈉鹽和鈣鹽是優(yōu)選的鹽。
按照本發(fā)明的化合物作為生物化學(xué)和藥物研究的對象。
這些化合物的總體抗血栓形成活性及其中和的性能在一個靜脈血栓的模型中進(jìn)行了研究，這個模型是如在J.-M.Herbert等人的Blood，1998，91，4197～4205中所述，給老鼠注射組織因子，然后在腔靜脈中形成淤血。在此模型中，在靜脈注射0.1～30mmol/kg的此化合物以后，獲得60％的血栓形成抑制。以1～1000的摩爾比注射抗生物素蛋白能夠明顯地降低這些化合物的抗血栓形成效果，獲得的降低可高于50％。同時，以上述的劑量注射抗生物素蛋白中和了這些化合物促出血的活性。同樣，注射抗生物素蛋白也中和了由抗-Xa活性和/或抗IIa活性測量的低聚糖的循環(huán)活性。
因此，本發(fā)明的另一個目的是使用抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素的方法，其特征在于，它可以中和本發(fā)明的多糖?？梢允褂每股锼氐鞍谆蚩股鞍祖溇貋碇苽溆糜谥泻捅景l(fā)明多糖的藥物。
由于本發(fā)明低聚糖的生物化學(xué)和藥物學(xué)上的活性，它們構(gòu)成了很有意義的藥物。其毒性與這樣的用途完全適合。它們也很穩(wěn)定，因此特別適合于構(gòu)成專門藥物的活性成分。
它們還可以用于各種由于凝血系統(tǒng)的體內(nèi)穩(wěn)定功能改變的疾病，特別是在心血管系統(tǒng)和腦血管系統(tǒng)疾病，比如與動脈硬化和糖尿病有關(guān)的血栓栓塞疾病，象不穩(wěn)定性心絞痛、中風(fēng)、血管成形術(shù)、動脈內(nèi)膜切除術(shù)、放置血管內(nèi)植入體后的再狹窄，或者與血栓溶解后的再栓塞、梗死、局部缺血源的癡呆、外周動脈疾病、血液透析、心房纖維性顫動有關(guān)的血栓栓塞疾病或者當(dāng)使用主動脈冠狀動脈架橋的血管植入體時的血栓栓塞疾病。這些化合物還可用于治療或預(yù)防靜脈源的血栓栓塞疾病，比如肺栓塞。它們可用于預(yù)防或治療比如在外科手術(shù)、腫瘤生長或由細(xì)菌、病毒或酶激活劑所誘發(fā)的凝血錯亂所觀察到的血栓形成并發(fā)癥。在其用于放置植入體(prothèses)時，本發(fā)明的化合物能夠覆蓋住植入體，如此使其與血液相容。它們特別可固定在靜脈內(nèi)植入體(Stents)上。在此情況下，如在EP 649,854中所述，可通過在未還原或已還原的末端引入適當(dāng)?shù)逆?bras)，任選對它們進(jìn)行化學(xué)改性。
當(dāng)用多孔型氣囊進(jìn)行動脈內(nèi)膜切除術(shù)時，本發(fā)明的化合物還可以用做佐劑。
本發(fā)明的化合物可用于制備治療上述各種疾病用的藥物。
因此，按照本發(fā)明的另一方面，其目的是一種藥物組合物，該組合物含有按照本發(fā)明合成的多糖或者其可藥用鹽作為活性成分，還任選含有一種或多種適當(dāng)?shù)亩栊再x形劑。
所述賦形劑按照藥物的形狀和希望給藥的形式來選擇口服、舌下、皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、透皮、透肌肉、局部或者直腸給藥。
活性成分還可以以與環(huán)糊精，比如α-、β-或γ-環(huán)糊精、2-羥丙基-β-環(huán)糊精或甲基-β-環(huán)糊精的絡(luò)合物的形式存在。
活性成分也可以由含有它的氣囊或者由送入血管的血管內(nèi)擴張器釋放出?；钚猿煞值乃幬锘钚圆⒉皇艿接绊?。
在每一個單劑中，活性成分的量都與為了得到所希望的預(yù)防或治療效果所設(shè)想的日劑量相適應(yīng)。每個單劑可含有0.1～100mg的活性成分，優(yōu)選含有0.5～50mg。這樣的劑量的抗凝血化合物將能夠用(靜脈)注射、快速灌注(bolus)或輸注液注射1～1000mg劑量的抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素所中和。
本發(fā)明的化合物還可以與一種或多種其他用于所希望治療的活性成分聯(lián)合使用，比如與抗血栓形成藥、抗凝藥、抗血小板凝結(jié)藥等，如潘生丁、阿司匹林、氯芐噻啶、氯吡格雷或糖蛋白IIa/IIIa絡(luò)合物拮抗劑。
下面的方法、制備例和示意式說明用于得到本發(fā)明多糖的不同中間體的合成方法。使用了如下的縮寫B(tài)n芐基；Bz苯甲?；?；CCM薄層色譜；Ts甲苯磺酰基；Lev乙酰丙酰基；Et乙基；Ph苯基；Me甲基；Ac乙酰基；SE三甲代甲硅烷基乙基；ESI是英文“電子噴射離子化”的縮寫；生物素六氫-2-氧代-1H-噻吩并[3，4-d]-咪唑-4-戊酸；Z苯甲酰氧羰基。
在后面，作為說明性的例子，詳細(xì)地敘述了本發(fā)明化合物的合成實例。
示意式1-三糖9的合成 制備例12-(三甲代甲硅烷基)-乙基-4，6-O-亞芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(2)在0℃下，在化合物1(15.8g，42.8mmol)(按照K.Jansson等人的J.Org.Chem.，1988，53，5629～5647制備)和甲基碘(20mL，319mmol)在四氫呋喃(350mL)中的溶液里每次少量加入氫化鈉(18g)。在環(huán)境溫度下攪拌反應(yīng)混合物4hr。用甲醇分解過量的氫化鈉，將反應(yīng)混合物倒入冰水(1.5L)中。在用乙酸乙酯萃取后，用飽和氯化鈉水溶液洗滌有機相，用硫酸鈉干燥，然后真空濃縮。用二氧化硅凝膠柱狀色譜(環(huán)己烷/乙酸乙酯15/1(v/v))提純殘渣，得到16.8g化合物2。D＝-41°(c＝0.6 9，二氯甲烷)。
制備例22-(三甲代甲硅烷基)乙基-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(3)在化合物2(16g，40.3mmol)在四氫呋喃(600mL)的溶液里相繼加入粉末狀的3分子篩(82g)、甲基橙(顯色指示劑)、硼氫氰化鈉(34g，526mmol)，然后滴加飽和的氯化氫乙醚溶液，直到得到玫瑰色。在過濾和用乙酸乙酯萃取后，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌有機相，用硫酸鈉干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。在二氧化硅凝膠上進(jìn)行柱狀色譜提純(甲苯/乙酸乙酯3/1(v/v))，得到12.5g化合物3。D＝-42°(c＝1.2，二氯甲烷)。
制備例32-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3-二-O-苯甲?；?4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖基)(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲?；?β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(5)在氬氣氣氛下將硫葡糖苷4(16.52g，16.60mmol)(按照專利申請WO 99/36443的制備例1得到)、化合物3(6.0g，15.05mmol)和粉末狀4分子篩(16.7g)的甲苯(300mL)中的混合物攪拌1hr。然后將此混合物冷卻到-20℃。在反應(yīng)混合物中滴加N-碘代琥珀酰亞胺(3.9g，17.4mmol)和三氟甲磺酸(0.17mL，1.97mmol)在二氯甲烷/二噁烷1/1(v/v)混合物中的溶液。10min以后，過濾反應(yīng)混合物，用二氯甲烷稀釋，相繼用1M的硫代硫酸鈉溶液、10％的碳酸氫鈉溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。在二氧化硅凝膠柱狀上進(jìn)行色譜提純(甲苯/乙酸乙酯6/1(v/v))，得到18.8g三糖5。D＝+34°(c＝1.26，二氯甲烷)。
制備例42-(三甲代甲硅烷基)乙基-(4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(6)在化合物5(18.7g，14mmol)在甲醇-二噁烷1/1(v/v)混合物的溶液里加入叔丁酸鉀(3.15g)。在環(huán)境溫度下攪拌2hr。用Dowex50WX4 H+樹脂中和反應(yīng)混合物，過濾并進(jìn)行真空濃縮。用二氧化硅凝膠對殘渣進(jìn)行柱狀色譜提純(二氯甲烷/甲醇20/1(v/v))，得到10.0g化合物6。D＝+29°(c＝1.11，二氯甲烷)。
制備例52-(三甲代甲硅烷基)乙基(4，6-O-亞芐基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(7)在氬氣氣氛下，于冷卻到0℃的化合物6(9.93g，12.24mmol)、甲基碘(9.0mL，138mmol)在無水四氫呋喃(100mL)中的混合物里以每次少量加入氫化鈉(5.2g，216mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌混合物20hr。用甲醇分解過量的氫化鈉，把反應(yīng)混合物倒入500mL冰水中。在用乙酸乙酯萃取后，用飽和氯化鈉溶液洗滌有機相，用硫酸鈉進(jìn)行干燥，然后進(jìn)行真空濃縮，得到11g化合物7，不經(jīng)提純用于下一步。
CCMRf＝0.38，二氧化硅凝膠，甲苯/乙酸乙酯3/2(v/v)。
制備例62-(三甲代甲硅烷基)乙基(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(8)把化合物7(11g)溶解于60％的醋酸(180mL)中，在80℃下攪拌1hr 30min。濃縮混合物并與甲苯一起共蒸發(fā)。在二氧化硅凝膠柱子上進(jìn)行色譜提純(甲苯/丙酮2/2(v/v))，得到8.46g化合物8。
CCMRf＝0.36，二氧化硅凝膠，甲苯/丙酮1/1(v/v)。
制備例72-(三甲代甲硅烷基)乙基(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(9)在化合物8(8.41g，10.6mmol)在二氯甲烷(110mL)中的溶液里加入1-苯甲酰氧基-1H-苯并三唑(5.36g，22.4mmol)和三乙胺(3.32mL)。在環(huán)境溫度下攪拌混合物20hr，然后用二氯甲烷稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。在二氧化硅凝膠柱子上進(jìn)行色譜提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇5/0.5/0.25(v/v/v))，得到8.40g化合物9。D＝+15°(c＝2，二氯甲烷)。
示意式2-合成五糖14
制備例82-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3-二-O-苯甲?；?4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(10)按照在制備例3中敘述的操作模式，把化合物9轉(zhuǎn)化為化合物10。D＝+42°(c＝2，二氯甲烷)。
制備例92-(三甲代甲硅烷基)乙基-(4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(11)按照在制備例4中敘述的操作模式，把化合物10轉(zhuǎn)化為化合物11。
CCMRf＝0.35，二氧化硅凝膠，二氯甲烷/甲醇10/1(v/v)。
制備例102-(三甲代甲硅烷基)乙基-(4，6-O-亞芐基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(12)按照在制備例5中敘述的操作模式，把化合物11轉(zhuǎn)化為化合物12。
CCMRf＝0.11，二氧化硅凝膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯1/2(v/v)。
制備例112-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(13)按照在制備例6中敘述的操作模式，把化合物12轉(zhuǎn)化為化合物13。
CCMRf＝0.33，二氧化硅凝膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇2/0.5/0.5(v/v)。
制備例122-(三甲代甲硅烷基)乙基-(6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(14)按照在制備例7中敘述的操作模式，把化合物13轉(zhuǎn)化為化合物14。
CCMRf＝0.16，二氧化硅凝膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇3/0.5/0.5(v/v)。
示意式3-合成七糖19
制備例132-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3-二-O-苯甲?；?4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(15)按照制備例3中所述的操作模式，進(jìn)行化合物14與二糖4的偶合反應(yīng)，得到化合物15。D＝+52°(c＝1.1，二氯甲烷)。
制備例142-(三甲代甲硅烷基)乙基-(4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(16)按照制備例4中所述的操作模式，把化合物15轉(zhuǎn)化為化合物16。
CCMRf＝0.31，二氧化硅凝膠，二氯甲烷/乙醇10/1(v/v)。
制備例152-(三甲代甲硅烷基)乙基-(4，6-O-亞芐基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(17)按照制備例5中所述的操作模式，把化合物16轉(zhuǎn)化為化合物17。
CCMRf＝0.46，二氧化硅凝膠，二氯甲烷/甲醇10/1(v/v)制備例162-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(18)按照制備例6中所述的操作模式，把化合物17轉(zhuǎn)化為化合物18。
CCMRf＝0.42，二氧化硅凝膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇1/0.5/0.5(v/v/v)。
制備例172-(三甲代甲硅烷基)乙基-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(19)按照制備例7中所述的操作模式，把化合物18轉(zhuǎn)化為化合物19。
CCMRf＝0.25，二氧化硅凝膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇3/0.5/0.5(v/v/v)。
示意式4-合成九糖23 制備例182-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3-二-O-苯甲?；?4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(20)在氬氣氣氛下，將硫葡糖苷4(5.2g，5.23mmol)、七糖19(4.72g，2.75mmol)和粉末狀4分子篩在甲苯中的混合物攪拌1hr。此時在0℃下滴加N-碘代琥珀酰亞胺(1.36g，5.85mmol)和三氟甲磺酸(0.140mL，1.56mmol)在二氯甲烷/二噁烷1/1(v/v)(32mL)中的溶液。15min以后，過濾反應(yīng)混合物，用二氯甲烷稀釋，相繼用1M的硫代硫酸鈉溶液、10％的碳酸氫鈉溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。在二氧化硅凝膠柱子上將殘渣進(jìn)行色譜提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇3/0.5/0.5(v/v/v))，得到7.13g化合物20。D＝+65°(c＝2，二氯甲烷)。
制備例192-(三甲代甲硅烷基)乙基-(4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(21)按照在制備例4中所述的操作模式把化合物20轉(zhuǎn)化為化合物21。
CCMRf＝0.27，二氧化硅凝膠，二氯甲烷/甲醇10/1(v/v)。
制備例202-(三甲代甲硅烷基)乙基-(4，6-O-亞芐基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(22)按照在制備例5中所述的操作模式把化合物21轉(zhuǎn)化為化合物22。
CCMRf＝0.31，二氧化硅凝膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇5/1/1(v/v/v)。
制備例212-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(23)按照在制備例6中所述的操作模式把化合物22轉(zhuǎn)化為化合物23。
CCMRf＝0.35，二氧化硅凝膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇2/1/1(v/v/v)。
示意式5-合成九糖29
制備例222-(三甲代甲硅烷基)乙基(2，3-二-O-甲基-6-O-甲苯磺?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(24)在氬氣氣氛下，將化合物23(1.09g)溶解于吡啶(10mL)中，然后加入甲苯磺酰氯(1.03g)。攪拌2hr后，用二氯甲烷(100mL)稀釋。相繼用10％的碳酸氫鉀水溶液和水洗滌有機相，干燥并蒸發(fā)至干。在二氧化硅凝膠柱子上進(jìn)行色譜提純(甲苯/丙酮2.3/2(v/v))以后，得到1.77g化合物24。
CCMRf＝0.5，二氧化硅凝膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇3/1/1(v/v/v)。
制備例232-(三甲代甲硅烷基)乙基(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(25)在含有粉末狀4分子篩的化合物24(500mg，0.23mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(11mL)的溶液里加入苯鄰二甲酰亞胺鉀(225mg，1.38mmol)，然后加入王冠醚18-冠-6(121.5mg，0.46mmol)。在80℃下攪拌混合物4hr。在冷卻以后，用二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物，在硅藻土上過濾，并濃縮。在凝膠SephadexLH 20(3×10cm)上將殘渣進(jìn)行色譜提純(二氯甲烷/乙醇1/1(v/v))，然后用二氧化硅凝膠柱子(甲苯/乙醇11/2(v/v))進(jìn)行色譜提純，得到417.4mg化合物25。
CCMRf＝0.38，二氧化硅凝膠，甲苯/乙醇11/2(v/v)。
制備例242-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-芐基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(27)在氬氣氣氛下，將硫葡糖苷26(1.515g，1.546mmol)(按照專利WO 99/36443的制備例36的化合物41制備)、受體25(840mg，0.391mmol)和粉末狀4分子篩(2.15g)的混合物攪拌1hr。將反應(yīng)混合物冷卻到0℃，加入N-碘代琥珀酰亞胺(387mg)和三氟甲磺酸(55.4μL)在二氯甲烷/二噁烷1/1(v/v)中的溶液(7mL)。10min以后，過濾混合物，用甲苯稀釋，相繼用1M的硫代硫酸鈉溶液、10％的碳酸氫鈉溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。在凝膠SephadexLH20上對殘渣進(jìn)行色譜提純(二氯甲烷/乙醇1/1(v/v))，接著在二氧化硅凝膠柱子上進(jìn)行色譜提純(甲苯/丙酮5/4(v/v))，得到887mg化合物27。D＝+70°(c＝0.35，二氯甲烷)。
制備例252-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(28)在10％的炭載鈀(750mg)存在下，在氫氣壓力下(5bar)，處理化合物27(750mg，0.245mmol)在醋酸(37mL)中的溶液2hr30min。過濾后，濃縮此溶液，在二氧化硅凝膠柱子上通過色譜提純此殘渣(甲苯/乙醇6/1(v/v))，得到728mg化合物28。
CCMRf＝0.32，二氧化硅凝膠，甲苯/乙醇6/1(v/v)。
制備例262-(三甲代甲硅烷基)乙基-(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-乙?；?2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖苷(29)在化合物28(728mg，0.245mmol)在二氯甲烷(10mL)的溶液里加入三乙胺(51.1μL，0.368mmol)、醋酸酐(32.5L，0.344mmol)和二甲基氨基吡啶(6.0mg，0.049mmol)。攪拌1hr以后，用二氯甲烷稀釋，相繼用10％的碳酸氫鉀溶液、水、飽和碳酸氫鈉溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。在二氧化硅凝膠柱子上將殘渣進(jìn)行色譜提純，得到0.618g化合物29。
CCMRf＝0.37，二氧化硅凝膠，甲苯/乙醇6/1(v/v)。
示意式6-合成低聚糖31 制備例27(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-乙?；?2，3-二-O-甲基-D-吡喃葡糖苷(30)把化合物29(579mg，0.192mmol)在三氟乙酸/二氯甲烷2/1(v/v)混合物(11.5mL)中的溶液攪拌1hr。用甲苯/乙酸正丙酯混合物2/1(v/v)(69mL)稀釋，濃縮并用甲苯進(jìn)行共蒸發(fā)。在二氧化硅凝膠柱子這對殘渣進(jìn)行色譜提純(甲苯/乙醇5/1(v/v))，得到523mg化合物30。
CCMRf＝0.31，二氧化硅凝膠，甲苯/乙醇5/1(v/v)。
制備例28(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-乙?；?2，3-二-O-甲基-D-吡喃葡糖三氯乙酰亞胺酸鹽(trichloroacetimidate)(31)在化合物30在二氯甲烷(3mL)的溶液里加入三氯乙腈(65.5μL，0.85mmol)和碳酸鈰(88.4mg，0.27mmol)。攪拌2 hr后，過濾混合物并濃縮。在二氧化硅凝膠柱子上對殘渣進(jìn)行色譜提純(甲苯/乙醇6/1(v/v)+0.1％三乙胺)，得到447mg化合物31。
CCMRf＝0.35，二氧化硅凝膠，甲苯/乙醇6/1(v/v)。
示意式7-合成十六糖35
制備例29甲基(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-乙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖糖醛酸芐酯)-(1→4)-(3，6-二-O-乙酰基-2-O-芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-碘代吡喃艾杜糖基糖醛酸芐酯)-(1→4)-2，3，6-三-O-芐基-α-D-吡喃葡糖苷(33)在二氯甲烷/乙醚混合物1/2(v/v)(5.5mL)中溶解氨基乙酸鹽31(370mg，0.121mmol)和化合物32(336mg，0.242mmol)(按照P.Westerduin等人在BioOrg.Med.Chem.，1994，2，1267得到)。在加入粉末狀4分子篩以后，把混合物冷卻到-20℃，添加0.1M的三氟甲磺酸三甲基甲硅酯在二氯甲烷中的溶液(181.5μL)。25min以后，加入固體碳酸氫鈉中和此混合物。在過濾和濃縮以后，在凝膠Sephadex上對殘渣進(jìn)行色譜提純，然后在二氧化硅凝膠柱子上進(jìn)行色譜提純(甲苯/丙酮6/5(v/v))，得到302mg化合物33。D＝+86°(c＝1，二氯甲烷)。
制備例30甲基(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-乙?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖糖醛酸)-(1→4)-(3，6-二-O-乙?；?2-O-芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-碘代吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-α-D-吡喃葡糖苷(34)在10％的碳載鈀(104mg)存在下，在氫氣壓力下(4bar)，處理化合物33(104mg，0.024mmol)在醋酸(5mL)中的溶液4hr。在過濾以后，將溶液進(jìn)行冷凍干燥，得到化合物34(87mg)，不經(jīng)提純用于下一步。
制備例31甲基(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-α-D-吡喃葡糖苷(35)在粉末狀3分子篩存在下，在化合物34(80mg，0.021mmol)在無水甲醇(6.9mL)中的溶液里加入1mol的甲醇鈉在甲醇(140μL)中的溶液。在環(huán)境溫度下經(jīng)過20hr后，過濾并用醋酸中和。將溶液濃縮到一半，放入細(xì)的SephadexG-25柱子(3×92cm)上。在用水洗脫和冷凍干燥后，得到化合物35(66mg)。
示意式8-合成低聚糖37
制備例32甲基-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-脫氧-2，3-二-O-甲基-6-苯二甲酰亞氨基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1-→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽(36)將多元醇35(66.4mg，0.021mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(1.8mL)中。加入三氧化硫-三乙胺絡(luò)合物(320mg，1.77mmol)，在55℃下攪拌混合物20hr。把溶液放在細(xì)SephadexG-25柱子(3×92cm)上，用0.2M的氯化鈉溶液洗脫。濃縮含有產(chǎn)物的級分，使用同樣的柱子，用水洗脫進(jìn)行脫鹽。在冷凍干燥后，得到83mg化合物36。
分子量ESI法，負(fù)模式化學(xué)分子量＝4968.92；實驗分子量＝4966.52±0.16u.m.a.
制備例33甲基-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-氨基-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽(37)把化合物36(83mg，0.017mmol)溶解于乙醇/水2/1(v/v)混合物中。加入水合肼(81.2μL，1.67mmol)，將混合物回流20hr。把溶液置于細(xì)SephadexG-25柱子(3×92cm)上用水洗脫。在濃縮含有產(chǎn)物的級分以后，把殘渣溶解于乙醇/水2/1(v/v)(5.00mL)混合物中，用水合肼(81.2μL)按上述條件重新處理，得到71mg化合物37。
分子量ESI法，負(fù)模式化學(xué)分子量＝4838.32；實驗分子量＝4814.6±0.70u.m.a.
示意式9-合成五糖39 制備例34甲基(6-O-乙?；?2-疊氮基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸芐酯)-(1→4)-(3，6-二-O-乙?；?2-O-芐基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸芐酯)-(1→4)-2，3，6-三-O-芐基-α-D-吡喃葡糖苷(39)把化合物6-O-乙酰基-2-疊氮基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-α，β-D吡喃葡糖三氯乙酰亞胺酸酯38(265mg，0.631mmol)(按照J(rèn).Basten等人在Bioorg.Med.Chem.Lett.(1992)，2(9)，901的方法得到)和化合物32(584mg，0.420mmol)(按照P.Westerduin等人在BioOrg.Med.Chem.，1994，2，1267的方法得到)溶解于二氯甲烷/乙醚1/2(v/v)(2 8.5mL)混合物中。在加入粉末狀4分子篩以后，把混合物冷卻到-20℃，加入0.1M的三氟甲磺酸三甲基甲硅酯在二氯甲烷(94.6μL)中的溶液。10min以后，重新加入亞胺酸酯(imidate)(53.8mg)，然后加入0.1M的三氟甲磺酸三甲基甲硅酯在二氯甲烷(19.2μL)中的溶液。10min以后，加入固體碳酸氫鈉中和混合物。在過濾和濃縮以后，在二氧化硅凝膠柱子上將殘渣進(jìn)行色譜提純(甲苯/乙酸乙酯3/1(v/v))，得到499mg化合物39。D＝+66°(c＝1.07，二氯甲烷)。
示意式10-合成五糖44(方法1) 制備例35甲基(6-O-乙酰基-2-氨基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(3，6-二-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-α-D-吡喃葡糖苷(40)在10％的碳載鈀(1.10g)和1M的鹽酸(0.336mL)存在下，在氫氣壓力(10bar)下，處理化合物39(552.6mg，0.335mmol)在叔丁醇/乙酸乙酯5/1(v/v)(16mL)混合物中的溶液4hr30min。在過濾以后，濃縮溶液，得到化合物40，不經(jīng)提純用于下一步。
制備例36甲基(2-氨基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-α-D-吡喃葡糖苷(41)把化合物40(324mg，0.300mmol)溶解于甲醇(8.8mL)。加入5M氫氧化鈉溶液(2.2mL)，在環(huán)境溫度下攪拌16hr。用Dowex50H+樹脂進(jìn)行中和并且過濾。把溶液通過細(xì)SephadexG-25柱子，用水洗脫。濃縮含有產(chǎn)物的級分，得到254.2mg化合物41。在此步驟，用核磁共振證實，保護基團(芐基和乙?；?已經(jīng)去掉。
CCMRf＝0.26，二氧化硅凝膠，乙酸乙酯/吡啶/醋酸/水5/5/1/3(v/v/v/v)。
制備例37甲基(2-(芐氧羰基)-氨基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-α-D-吡喃葡糖苷(42)把化合物41(241.1mg，0.253mmol)溶解于水(12.4mL)，加入碳酸氫鈉(63.7mg)，然后滴加氯甲酸芐酯(41μL)。在攪拌12hr以后，將反應(yīng)混合物通過細(xì)SephadexG-25柱子，用水洗脫。濃縮含有產(chǎn)物的級分。在二氧化硅凝膠柱子上進(jìn)行色譜提純(乙酸乙酯/吡啶/醋酸/水21/17/3.6/10v/v/v/v)，得到221mg化合物42。
CCMRf＝0.63，二氧化硅凝膠，乙酸乙酯/吡啶/醋酸/水5/5/1/3(v/v/v/v)。
制備例38
甲基(2-(芐氧羰基)-氨基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽(43)把多元醇42(19.6mg，0.018mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(1.62mL)。加入三氧化硫-三乙胺絡(luò)合物(114mg)，在55℃下避光攪拌混合物20hr。把此溶液置于細(xì)SephadexG-25柱子上，用0.2M的氯化鈉溶液洗脫。濃縮含有產(chǎn)物的級分，使用同樣的柱子，用水洗脫進(jìn)行脫鹽。在冷凍干燥后，得到28.5mg化合物43。D＝+48°(c＝2.75，水)。
制備例39甲基(2-氨基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽(44)在10％的碳載鈀(8.25mg)存在下，在氫氣壓力(5bar)下處理化合物43(27.5mg，0.015mmol)在叔丁醇(333μL)和水(500μL)的混合物中的溶液16hr。在過濾以后，濃縮此溶液，把殘渣置于細(xì)SephadexG-25柱子(3×92cm)上。在用水洗脫和冷凍干燥以后，得到23.7mg化合物44。D＝+58°(c＝1，水)。
示意式11-合成四糖48 制備例40甲基(4-O-乙酰丙酰(lévulinyl)-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(3，6-二-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-α-D-吡喃葡糖苷(46)在10％的炭載鈀(9.0g)存在下，在氫氣壓力(4bar)下處理化合物45(4.50g，3.02mmol)(按照P.Westerduin等人在BioOrg.Med.Chem.1994，2，1267的方法得到)在乙酸乙酯/叔丁醇(72mL，1/1，v/v)中的溶液6hr。在過濾和濃縮以后，把得到的化合物46不經(jīng)提純直接用于下一步。
CCMRf＝0.54，乙酸乙酯/吡啶/醋酸/水26/22/4.6/17v/v/v/v。
制備例41甲基(4-O-乙酰丙酰-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖苷(47)在0℃下，在化合物46(2.57g，2.71mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(35mL)溶液里加入碳酸氫鉀(2.71g)，然后加入甲基碘(3.4mL)。在環(huán)境溫度下攪拌16hr以后，把反應(yīng)介質(zhì)冷卻到0℃。此時相繼添加二甲基氨基吡啶(132mg)和醋酸酐(1.5mL)。將混合物攪拌16hr。在中和過量的醋酸酐以后，用乙酸乙酯進(jìn)行稀釋。相繼用10％的碳酸氫鉀溶液和水洗滌有機相，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾然后蒸發(fā)至干。在二氧化硅凝膠柱子上對殘渣進(jìn)行色譜提純[環(huán)己烷/(乙酸乙酯/乙醇1/1)9/5]，得到2.51g化合物47。
CCMRf＝0.41，甲苯/丙酮2/1v/v。
制備例42甲基(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖苷(48)把化合物47(2.5g，2.56mmol)溶解于甲苯/乙醇1/1 v/v混合物(500mL)中。加入醋酸肼(1.01g)。在環(huán)境溫度下攪拌2hr以后，將反應(yīng)介質(zhì)濃縮至干。把殘渣溶解于二氯甲烷中。相繼用2％的碳酸氫鈉溶液和水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥，過濾然后蒸發(fā)至干。在二氧化硅凝膠柱子上色譜提純(甲苯/乙酸乙酯1/4 v/v)，得到2.01g化合物48。
CCMRf＝0.37，甲苯/丙酮/2/1 v/v。
示意式12-合成五糖49 制備例43甲基(6-O-乙?；?2-疊氮基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡糖苷(49)把亞胺酸酯38(1.18g，2.81mmol)(按照J(rèn).Basten等人在BioOrg.Med.Chem.Lett.(1992)，2(9)，901的方法得到)和化合物48(1.83g，1.75mmol)溶解于二氯甲烷/乙醚1/2(v/v)(126mL)的混合物中。在加入粉末狀4分子篩以后，把混合物冷卻到-20℃，并添加1M的三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅酯在二氯甲烷(421μL)中的溶液。30min以后，加入新的量的亞胺酸酯(266mg)以及1M的三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅酯在二氯甲烷(168μL)中的溶液。10min以后，加入固體碳酸氫鈉中和混合物并過濾。用二氯甲烷溶解，相繼用2％的碳酸氫鈉溶液和水進(jìn)行洗滌，用硫酸鈉干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。在二氧化硅凝膠柱子上對得到的殘渣進(jìn)行色譜提純(二氯甲烷/乙酸乙酯4/3然后是1/1 v/v)，得到1.814g化合物49。
CCMRf＝0.57，甲苯/乙酸乙酯3/1 v/v。D＝+93°(c＝1.15，二氯甲烷)。
示意式13-合成五糖44(方法II) 制備例44甲基(2-疊氮基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-α-D-吡喃葡糖苷(50)在-5℃下，于化合物49(845.3mg)在四氫呋喃(104mL)的溶液里加入30％的雙氧水(42mL)。攪拌5min以后，滴加0.7M的氫氧化鋰水溶液(19.2mL)。在-5℃下攪拌反應(yīng)混合物1hr，然后在0℃下攪拌4hr，最后在環(huán)境溫度下攪拌16hr。用1M的鹽酸溶液進(jìn)行中和。
把溶液置于細(xì)SephadexG-25柱子上用水洗脫。把得到的含有產(chǎn)物的級分合并，濃縮并放置在Dowex AG 50WX4 H+柱子(50mL)上。在0℃下回收化合物并進(jìn)行濃縮，得到618mg化合物50。
CCMRf＝0.56，乙酸乙酯/吡啶/醋酸/水26/22/4.6/17v/v/v/v。
制備例45甲基(2-疊氮基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸酯)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸酯)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽(51)在即將使用之前，把化合物50與N，N-二甲基甲酰胺一起共蒸餾(3×29mL)。向化合物50(612mg，0.624mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(58mL)中的溶液里加入三氧化硫-三乙胺絡(luò)合物(3.84g)。
在55℃下把混合物避光攪拌16hr。把冷卻到0℃的混合物滴加到碳酸氫鈉(5.33g)在水(200mL)中的溶液里。在環(huán)境溫度下攪拌16hr，濃縮至干。
把殘渣溶解于水，把溶液置于細(xì)SephadexG-25柱子上，用0.2M的氯化鈉溶液洗脫。濃縮含有產(chǎn)物的級分，使用同樣的柱子用水洗脫進(jìn)行脫鹽。在冷凍干燥后，得到1.06g化合物51。
CCMRf＝0.5，乙酸乙酯/吡啶/醋酸/水3/5/1/3v/v/v/v。
制備例46甲基(2-氨基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽(44)此加氫進(jìn)行兩次，每次使用534.4mg化合物51。
在40℃下，在10％的炭載鈀(160mg)存在下，在氫氣壓力(5bar)下處理化合物51(534.4mg)在叔丁醇(6.7mL，12.6mL/g)-水(10mL，19mL/g)混合物中的溶液4hr。在過濾以后(MilliporeLSWP 5μm過濾器)，將溶液濃縮至干，得到530mg化合物44。
CCMRf＝0.49，乙酸乙酯/吡啶/醋酸/水3/5/1/3v/v/v/v。實施例1 實施例2 實施例3 實施例4 實施例5 實施例6
實施例1甲基-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-生物素酰胺基-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽在化合物37(18mg，3.72μmol)在0.5％的碳酸氫鈉中的溶液(1.5mL)里加入生物素的磺基琥珀酰亞胺(16.5mg)。在環(huán)境溫度下攪拌16hr后，把反應(yīng)混合物置于細(xì)SephadexG-25柱子上，用氯化鈉洗脫。濃縮含有產(chǎn)物的級分，在同樣的柱子上用水洗脫以脫鹽。
在冷凍干燥后，得到15.9mg實施例1的化合物。D＝+59°(c＝0.78，水)。
分子量ESI法，負(fù)模式化學(xué)分子量＝5065.12；實驗分子量＝5064.18±1.04u.m.a.
實施例2甲基-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-[6-(生物素酰胺基)己酰胺基]-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽在化合物37(18mg，3.72μmol)在0.5％(1.5mL)的碳酸氫鈉中的溶液里加入己酸6-生物素酰胺(酯)(16.5mg)。在環(huán)境溫度下攪拌16hr后，把反應(yīng)混合物置于細(xì)SephadexG-25柱子上，用氯化鈉洗脫。濃縮含有產(chǎn)物的級分，在同樣的柱子上用水洗脫以脫鹽。
在冷凍干燥后，得到17.9mg實施例2的化合物。D＝+60°(c＝0.78，水)。
分子量ESI法，負(fù)模式化學(xué)分子量＝5178.28；實驗分子量＝5176.3±0.77u.m.a.
實施例3甲基-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-[6-(6-生物素酰胺基己酰胺基)己酰胺基]-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽在化合物37(17mg，3.51μmol)在0.5％(1.4ml)的碳酸氫鈉中的溶液里加入6-(6-生物素酰胺基己酰胺基)己酸磺基琥珀酰亞胺(23.6mg)。
在環(huán)境溫度下攪拌16hr后，把反應(yīng)混合物置于細(xì)SephadexG-25柱子上，用氯化鈉洗脫。濃縮含有產(chǎn)物的級分，在同樣的柱子上用水洗脫以脫鹽。
在冷凍干燥后，得到17.4mg實施例3的化合物。D＝+64°(c＝1.0，水)。
分子量ESI法，負(fù)模式化學(xué)分子量＝5291.44；實驗分子量＝5292.1±0.83u.m.a.
實施例4甲基(2-生物素酰胺基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽在化合物44(21.2mg，0.012mmol)在0.5％的碳酸氫鈉中的溶液(750μL)里加入生物素N-羥基琥珀酰亞胺(42mg)在N，N-二甲基甲酰胺(750μL)中的溶液。在環(huán)境溫度下攪拌16hr后，把反應(yīng)混合物置于細(xì)SephadexG-25柱子上。
在用水洗脫和冷凍干燥后，得到22.3mg實施例4的化合物。D＝+38°(c＝0.15，水)。
分子量ESI法，負(fù)模式化學(xué)分子量＝1938.48；實驗分子量＝1937.48±0.11u.m.a.
實施例5甲基(2-[N-(6-生物素酰胺基己?；?]-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽此反應(yīng)進(jìn)行兩次，每次使用494.5mg化合物44。
把化合物44(494.5mg，0.289mmol)溶解于0.5％的碳酸氫鈉的水溶液(116mL)。
在其中滴加6-(生物素酰胺基)己酸磺基琥珀酰亞胺(1.46mg，2.63mmol)在0.5％碳酸氫鈉溶液(12mL)中的溶液。在環(huán)境溫度下攪拌16hr后，加入1M的氫氧化鈉水溶液并攪拌1hr。把反應(yīng)混合物置于細(xì)SephadexG-25柱子(5×1000cm)上，用氯化鈉洗脫。
合并來自兩次反應(yīng)的含有產(chǎn)物的級分。
在冷凍干燥后，得到999.2mg實施例5的化合物。
CCMRf＝0.42，乙酸乙酯/吡啶/醋酸/水3/5/1/3v/v/v/v。
分子量ESI法，負(fù)模式化學(xué)分子量＝2051.64；實驗分子量＝2051.60±0.43u.m.a.
實施例6甲基(2-[6-(6-生物素酰胺基己酰胺基)己酰胺基]-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽把化合物44(30.1mg，17.6μmol)溶解于0.5％的碳酸氫鈉的水溶液(7mL)。在其中滴加6-(6-生物素酰胺基己酰胺基)磺基琥珀酰亞胺(118mg，176μmol)在0.5％碳酸氫鈉溶液(1mL)中的溶液。在環(huán)境溫度下攪拌16hr后，加入1M的氫氧化鈉水溶液并攪拌1hr。把反應(yīng)混合物置于細(xì)SephadexG-25柱子(2×85cm)上，用氯化鈉洗脫。
合并含有產(chǎn)物的級分，濃縮并在細(xì)SephadexG-25柱子(2×85cm)上，用水洗脫進(jìn)行脫鹽。
在冷凍干燥后，得到26.5mg實施例6的化合物。
分子量ESI法，負(fù)模式化學(xué)分子量＝2164.48；實驗分子量＝2164.29±0.38u.m.a.
權(quán)利要求
1.具有抗血栓形成活性的合成多糖及其可藥用鹽，其特征在于，它們包括至少一個與生物素或生物素衍生物連接的共價鍵。
2.如下通式的權(quán)利要求1的多糖及其可藥用鹽 其中—波浪線表示位于吡喃糖環(huán)平面下面或者上面的鍵， Po表示含有相同或不同的n個單糖單元的多糖，由異頭碳與Pe連接起來， 是具有吡喃糖結(jié)構(gòu)的單糖單元的示意性的表示，這些吡喃糖選自己糖、戊糖和相應(yīng)的脫氧蔗糖，這些單元由其異頭碳與另一個單糖單元連接，而且這些單元的羥基被相同或不同的基團R1取代，R1如在下面所定義，—Pe表示如下結(jié)構(gòu)的五糖 —h等于1或2；—n是整數(shù)，可以取0～25的各個值；—R1表示鏈-T-Biot、C1～C6烷氧基或基團-OSO3-；—R2表示鏈-T-Biot、C1～C6烷氧基或基團-OSO3-；—R3表示鏈-T-Biot、C1～C6烷氧基；—R4表示鏈-T-Biot、C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，或者R4構(gòu)成-O-CH2-橋，基團-CH2-連接在在同一個環(huán)上帶有羧基官能團的碳原子上；條件是取代基R1、R2、R3或R4中至少一個表示基團-T-Biot；—W表示氧原子或亞甲基；—T表示選自下面的鏈中的一個NH， 或者 其中j和k相同或不同，是取自1～10的整數(shù)；-Biot表示如下的基團
3.如權(quán)利要求1或2的多糖及其可藥用鹽，如下通式(I.1) 其中 表示特定的一類多糖Po，由其異頭碳與(I)所定義的Pe連接， 如對(I)所定義，—基團R1如對(I)所定義，對于同一個單糖，它們可以是相同或者不同的，—在[]m中所含的單糖被重復(fù)m次，在[]t中所含的單糖被重復(fù)t次，在[]p中所含的單糖被重復(fù)p次，—m是1～5的整數(shù)；t是0～24的整數(shù)；p是0～24的整數(shù)，條件是1≤m+t+p≤25。
4.如權(quán)利要求3的多糖，其特征在于，取代基R1、R2、R3或R4中只有一個表示鏈-T-Biot，T和Biot如對(I)所定義。
5.如權(quán)利要求1～4中任何一項的十六環(huán)糖及其可藥用鹽，如通式(I.2) 其中—T表示選自下面的鏈NH， 或者 其中，j和k相同或不同，是取自1～10的整數(shù)；-Biot表示如下的基團 —Pe表示如下結(jié)構(gòu)的戊糖 其中—R1表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，—R2表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，—R3表示C1～C6烷氧基，—R4表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，或者R4構(gòu)成-O-CH2-橋，基團-CH2-與同一個環(huán)上帶有羧基官能團的碳原子相連，—W表示氧原子或亞甲基。
6.如權(quán)利要求1或2中任何一項的五糖及其可藥用鹽，如通式(I.3) 其中R1、R2、R3、R4和W如對(I)所定義。
7.如權(quán)利要求6的五糖，其特征在于，取代基R1、R2、R3或R4中只有一個表示鏈-T-Biot，T和Biot都如對(I)所定義。
8.如權(quán)利要求6或7中任何一項的五糖及其可藥用鹽，如通式(I.4)的通式(I.3) 其中—T表示選自下面的鏈NH， 或者 其中，j和k相同或不同，是取自1～10的整數(shù)；-Biot表示如下的基團 —R1表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，—R2表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，—R3表示C1～C6烷氧基，—R4表示C1～C6烷氧基或基團-OSO3-，或者R4構(gòu)成-O-CH2-橋，基團-CH2-與同一個環(huán)上帶有羧基官能團的碳原子相連，—W表示氧原子或亞甲基。
9.如權(quán)利要求1或2中之一的多糖，它們選自—甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-生物素酰胺基-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺酸根合-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽，—甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-[6-(生物素酰胺基)己酰胺基]-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺酸根合-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽，—甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(6-[6-(6-生物素酰胺基己酰胺基)己酰胺基]-6-脫氧-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-(6-O-磺酸根合-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽，—甲基(2-生物素酰胺基-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽，—甲基-(2-[6-(6-生物素酰胺基己酰胺基)己酰胺基]-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽，—甲基-(2-[6-(6-生物素酰胺基己酰胺基)己酰胺基]-2-脫氧-3，4-二-O-甲基-6-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸根合-α-D-吡喃葡糖苷，鈉鹽。
10.含有如權(quán)利要求1～9中任何一項的多糖作為活性成分，還任選含有一種或多種適當(dāng)?shù)亩栊再x形劑的藥物組合物。
11.如權(quán)利要求10的藥物組合物在如下方面的應(yīng)用，由于在心血管系統(tǒng)和腦血管系統(tǒng)疾病，比如患有動脈硬化和糖尿病時顯現(xiàn)的凝血系統(tǒng)的體內(nèi)穩(wěn)定功能改變有關(guān)的疾病，象不穩(wěn)定性心絞痛、中風(fēng)、血管成形術(shù)、動脈內(nèi)膜切除術(shù)、放置血管內(nèi)植入物后的再狹窄，或者與血栓溶解后的再栓塞、梗死、局部缺血源的癡呆、外周動脈疾病、血液透析、心房纖維性顫動有關(guān)的血栓栓塞疾病或者當(dāng)使用主動脈冠狀動脈架橋的血管植入物時的血栓栓塞疾病，還可用于治療或預(yù)防靜脈源的血栓栓塞疾病，比如肺栓塞，可用于預(yù)防或治療比如在外科手術(shù)、腫瘤生長或由細(xì)菌、病毒或酶激活劑所誘發(fā)的凝血錯亂所觀察到的血栓形成并發(fā)癥。
12.如權(quán)利要求1～9中任何一項的多糖在覆蓋植入體方面的應(yīng)用。
13.如權(quán)利要求1～9中任何一項的多糖作為在多孔型氣囊進(jìn)行動脈內(nèi)膜切除術(shù)時的佐劑。
14.抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素的使用方法，其特征在于，它們可中和如權(quán)利要求1～9中任何一項的多糖。
15.抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素用于制備中和權(quán)利要求1～9中任何一項多糖用的藥物方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有抗血栓形成活性的新型合成多糖，該多糖具有至少一個與生物素或生物素衍生物相連的共價鍵，本發(fā)明還涉及能夠中和這些多糖的抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素的使用方法。
文檔編號A61P31/04GK1466594SQ01816158
公開日2004年1月7日 申請日期2001年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月22日
發(fā)明者P·迪紹索伊, J·－M·赫爾伯特, M·佩蒂托, P·薩維, P 迪紹索伊, ず斬 , 僂 申請人:圣諾菲-合成實驗室公司