專利名稱：肽核酸衍生物,用于制備它們的中間體,及含它們的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及肽核酸衍生物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽，用于制備它們的中間體，制備它們的方法，含它們的藥物組合物及它們在抗病毒及抗腫瘤方面的用途。
九十年代初興起了一大類寡核苷酸類似物——肽核酸(PNA)的研究，PNA單體為2-氨乙基甘氨酸，其結(jié)構(gòu)介于核酸與肽之間，研究表明它具有以下優(yōu)點(1)結(jié)合能力強，具有與DNA和RNA雜交的能力，與DNA的雜交鏈的穩(wěn)定性比DNA雙螺旋還要穩(wěn)定，與全嘧啶序列的DNA片段以一種全新的機制形成三螺旋，與含嘧啶和嘌呤堿基的DNA形成雙螺旋；(2)專一性高，對錯配堿基的分辨率要比硫代寡核苷酸高；(3)生物穩(wěn)定性好，具有對各種蛋白酶和核酸酶的穩(wěn)定性；(4)合成方便。由于這些優(yōu)點，使之成為發(fā)展反義和反基因藥物以及分子生物學工具分子的非常有吸引力的一類化合物。
但目前對PNA的研究還沒有可循的理論指導，同時也沒有任何一個具體PNA化合物進入實際應用階段，因此，尋找新的具有生物活性的PNA仍是十分必要的。
本發(fā)明的目的在于尋找具有生物活性的新的PNA。
本發(fā)明人經(jīng)廣泛深入研究，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)具有下面通式I的肽核酸衍生物，其立體異構(gòu)體或藥用鹽在抗病毒和抗腫瘤方面顯示出良好的生物活性。
因此，本發(fā)明第一方面涉及通式I的肽核酸衍生物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽。
其中n為2～200，B為保護的和未保護的堿基，且所述堿基可相同或不同；包括天然堿基腺嘌呤，鳥嘌呤，胸腺嘧啶，胞嘧啶和尿嘧啶，和它們的類似物，如黃嘌呤和次黃嘌呤等，及具有能與天然堿基形成Watson-Crick或Hoogsteen，反Hoogsteen配對能力的雜環(huán)化合物，如7-去氮腺嘌呤，5-氮代-7-去氮腺嘌呤，異胞嘧啶。
R1為不存在或式(a)代表的基團 R2為式(b)或(c)代表的基團 其中Z為O，NR(其中R為H，CH3，或C2-C8直鏈、支鏈、環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷基，或氨基的保護基)，S，SO，SO2，PO2，CR7R8。
R3，R4，R5，R6，R7，R8分別為H或C1-C15，尤其是C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基等，C6-C12的取代和未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，C1-8烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代或未取代烷氨基，C1-C15烷基，尤其是C1-C8直鏈，支鏈和環(huán)狀結(jié)構(gòu)烷基，Y為H，或NH2的保護基，以及C1-C15烷基，尤其是C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，C6-C12的取代或未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，C1-8烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代或未取代烷氨基，C1-C15的各種烷基，尤其是C1-C8的直鏈，支鏈和環(huán)狀烷基。
本發(fā)明第二方面涉及用于制備式I肽核酸衍生物的式(5)或式(6)中間體， R3，R4，R5，R6分別為H或C1-C15，尤其C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基等，C6-C12的取代和未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，C1-C8烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代或未取代烷氨基，C1-C15烷基，尤其是C1-C8直鏈，支鏈和環(huán)狀結(jié)構(gòu)烷基。
Y為H，或NH2的保護基，以及C1-C15烷基，尤其是C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，C6-C12的取代或未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，C1-C8烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代或未取代烷氨基，C1-C15的各種烷基，尤其是C1-C8的直鏈，支鏈和環(huán)狀烷基，或與其相連的氨基成鹽的無機酸或有機酸。
X為H，羧基保護基，羧基的活化基團，堿金屬或堿土金屬離子，含1-20個碳原子烷基的季銨離子。
本發(fā)明再一方面涉及藥物組合物，其包括式I肽核酸衍生物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽及藥用載體或賦形劑。
本發(fā)明還涉及式I肽核酸衍生物，其立體異構(gòu)體或藥用鹽在制備用于抗病毒或抗癌藥物中的用途。
本發(fā)明還涉及制備式I肽核酸衍生物的方法，其包括(a)將N端保護的通式(5)或(6)化合物連于固相載體上(樹脂或帶有氨基酸的樹脂)；(b)脫去N端的保護基，使氨基游離；(c)將N端保護的通式(5)或(6)化合物以肽鍵與樹脂上的游離氨基連接；(d)根據(jù)所需鏈的序列組成，重復(b)和(c)；(e)脫去序列上的保護基，并將序列從樹脂上切割下來；(f)將(e)步所得粗產(chǎn)物以凝膠過濾和高效液相色譜純化。
本發(fā)明還涉及制備式5或式6化合物的方法，其詳細描述見后面反應路線1和2。
本發(fā)明中所用術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴、碘。
本發(fā)明中所用術(shù)語“雜環(huán)化合物”，舉例有7-去氮嘌呤，5-氮代-7-去氮鳥嘌呤，異胞嘧啶等；本發(fā)明所用術(shù)語“堿基”舉例有天然堿基如腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶，胞嘧啶或尿嘧啶，它們的類似物如黃嘌呤和次黃嘌呤。
本發(fā)明中所用術(shù)語“C1-C15烷基”或“C1-C8烷基”是指含1-15個或1-8個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，舉例有甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，新戊基，己基，辛基，庚基，壬基，癸基，十一烷基，十二烷基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，環(huán)辛基等。
本發(fā)明中所用術(shù)語“C1-C15烷氧基”或“C1-C8烷氧基”或“C1-C15烷氨基”或“C1-C8烷氨基”是指O-C1-C15烷基或O-C1-C8烷基，或C1-C15烷基氨基或C1-C8烷基氨基，其中C1-C15烷基或C1-C8烷基如上定義。
本發(fā)明中所用術(shù)語“C6-C12取代或未取代的芳香基”意指取代或未取代的苯基或萘基。
本發(fā)明中所用術(shù)語“雜芳香基”意指雜原子選自O，S或N的單環(huán)或雙環(huán)雜芳香基，舉例有噻吩，呋喃，吡啶，吲哚，苯并呋喃，苯并噻吩等。
本發(fā)明敘述中出現(xiàn)的符號“A”意指腺嘌呤結(jié)構(gòu)單元，“G”意指鳥嘌呤結(jié)構(gòu)單元，“T”意指胸腺嘧啶結(jié)構(gòu)單元，“C”意指胞嘧啶結(jié)構(gòu)單元，“U”意指尿嘧啶結(jié)構(gòu)單元。
本發(fā)明中所用的羧基保護基舉例講有甲基，乙基，芐基，取代基選自硝基，甲基，甲氧基的取代芐基等；羧基的活化基團舉例有琥珀酰亞胺，各種混合酸酐等。
本發(fā)明所述的“堿金屬或堿土金屬離子，含1-20個碳原子的烷基的季銨離子”舉例有鈉離子，鉀離子，鈣離子，三乙胺鹽或三甲胺鹽等。
本發(fā)明所述“氨基保護基”舉例有芐基，取代芐基，叔丁氧羰基、芐氧羰基，乙?；?-芴甲氧羰基等。
本發(fā)明所述的“與其相連的氨基成鹽的無機酸或有機酸”舉例有鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，次氯酸，高氯酸，硫酸，磷酸，草果酸，富馬酸，甲酸，乙酸，丙酸，檸檬酸，三氟乙酸，三氯乙酸，苯甲酸或取代的苯甲酸等。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明涉及通式I肽核酸衍生物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽， 其中n為2～200，B為保護的和未保護的堿基；包括天然堿基腺嘌呤，鳥嘌呤，胸腺嘧啶，胞嘧啶和尿嘧啶，和它們的類似物，如黃嘌呤和次黃嘌呤等，及具有能與天然堿基形成Watson-Crick或Hoogsteen，反Hoogsteen配對能力的雜環(huán)化合物，如7-去氮腺嘌呤，5-氮代-7-去氮腺嘌呤，異胞嘧啶。
R1為不存在或式(a)代表的基團
R2為式(b)或(c)代表的基團 其中Z為O，NR(其中R為H，CH3，或C2-C8直鏈、支鏈、環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷基，或氨基的保護基)，S，SO，SO2，PO2，CR7R8。
R3，R4，R5，R6分別為H或C1-C15，尤其C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基等，C6-C12的取代或未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，C1-C8烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代烷氨基，C1-C15烷基，尤其是C1-C8直鏈，支鏈和環(huán)狀結(jié)構(gòu)烷基。
Y為H，或氨基保護基，以及C1-C15烷基，尤其是C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，C6-C12的取代或未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，C1-8烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代烷氨基，C1-C15烷基，尤其是C1-C8的直鏈，支鏈和環(huán)狀烷基。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選n＝5-60的式I化合物。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選B為保護或未保護的選自腺嘌呤，鳥嘌呤，胸腺嘧啶，胞嘧啶和尿嘧啶的天然堿基的式I化合物。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選Y為H或氨基保護基為叔丁氧羰基，芐氧羰基，9-芴甲氧羰基的式I化合物。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選Z為O，NH，NCH3，SO，S，SO2或PO2的式I化合物。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選R3，R4，R5和R6皆為H，R7和R8分別N或CH3的式I化合物。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選B和4位取代基呈順式或反式構(gòu)型的式I化合物。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選骨架構(gòu)型為D-或L-型式I化合物。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選式Ia代表的式I化合物， 其中B，R3、R4、R5、R6、Z和n如上定義。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選式Ib代表的式I化合物， 其中B，R3、R4、R5、R6、Y和n如上定義。
本領域技術(shù)人員應明白式Ia和Ib化合物是本發(fā)明式I化合物的亞類或亞組并均在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本領域普通技術(shù)人員很容易理解本發(fā)明的通式I化合物存在著手性中心，因此通式I化合物中存在立體異構(gòu)體，如外消旋、順式或反式等立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體混合物，應明白這些立體異構(gòu)或它們的混合物也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明立體異構(gòu)體的制備可用本領域已知方法進行，如使用起始物光學異構(gòu)體，光學活性酸或堿拆分，分級結(jié)晶或色譜等。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明涉及式(5)或(6)化合物，
其中Z為O，NR(其中R為H，CH3，或C2-C8直鏈、支鏈、環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷基，或氨基的保護基)，S，SO，SO2，PO2，CR7R8。
R3，R4，R5，R6，R7，R8分別為H或C1-C15，尤其C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基等，C6-C12的取代或未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，含1-8個碳原子的烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代烷氨基，C1-C15烷基，尤其是C1-C8直鏈，支鏈和環(huán)狀結(jié)構(gòu)烷基。
Y為H，或NH2的保護基，以及C1-C15烷基，尤其是C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，C6-C12的取代或未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，C1-C8烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代或未取代烷氨基，C1-C15的各種烷基，尤其是C1-C8的直鏈，支鏈和環(huán)狀烷基，或與其相連的氨基成鹽的無機酸或有機酸。
X為H，羧基保護基，羧基的活化基團，堿金屬或堿土金屬離子，含1-20個碳原子烷基的季胺離子。
根據(jù)本發(fā)明，式(5)化合物可按反應路線1所示制備。
路線1 (i)B，K2CO3，18-crown-6 in DMF；or B，NaH(ii)LiAlH4in THF，R3Br，R4Br(iii)NaH，BrCR5R6COX′in DMF(iv)H2，Pd/C
在路線1(i)中，羧基和氨基被保護的反式-4-羥基-L-脯氨酸酯的4位羥基與取代的磺酰氯成酯(16)(其中R12為取代的磺酰基，Y為氨基保護基)，式(16)化合物與保護的或未保護的堿基(用B表示)，18-冠醚-6在二甲基甲酰胺(DMF)中于50-60℃反應24小時，或與B，NaH反應，得到化合物(17)，在(ii)中化合物(17)與氫化鋁鋰或硼氫化鋰于四氫呋喃(THF)中反應，然后與R3Br，R4Br(R3，R4如上定義)反應得到化合物(18)(其中R3，R4，Y和B如上定義)，(iii)化合物(18)與式BrCR5R6COX’(X’為OX，X如上定義，但不為氫)取代的溴烷基酸酯在NaH的作用下，于DMF中發(fā)生取代反應，得到化合物(19)，在(iv)中化合物(19)經(jīng)氫氧化鈉水溶液水解或催化氫化得到化合物(5)。
根據(jù)本發(fā)明，反式-4-羥基-L-脯氨酸酯的酯基優(yōu)選甲基，乙基，其氨基保護基優(yōu)選叔丁氧羰基(Boc)；取代的磺酰氯優(yōu)選對甲苯磺酰氯和甲磺酰氯，取代的溴烷基酸酯優(yōu)選溴乙酸乙酯和溴乙酸芐酯。
根據(jù)本發(fā)明，式(6)化合物可按反應路線2所示制備。
路線2 (i)YBr，Et3N；NH3/CH3OH(ii)LiAlH4in THF；Y；H2，Pd/C；R5Br，R6Br(iii)BrCR3R4COX′；R12Cl(iv)18-crown-6，B，K2CO3；or ph3P，DEAD，B(v)LiOH(aq)or H2，Pd/C
在路線2(i)中，羧基被保護的反式-4-羥基-L-脯氨酸酯的氨基與YBr(Y如路線1定義)在室溫下反應，得到的產(chǎn)物與氨/甲醇反應，得到化合物(23)，(ii)中化合物(23)與氫化鋁鋰在加熱條件下反應，繼而用Y保護還原得到的氨基，然后將環(huán)上的氨基通過H2，Pd/C去保護，再與R5Br，R6Br(R5，R6如上定義)反應得到化合物(24)，(iii)化合物(24)與BrCR3R4COX’(R3，R4如上定義，X’為OX，X如上定義，但不為氫)取代的溴烷基酸酯在室溫和堿性條件下，發(fā)生取代反應，再將得到的中間體的4位羥基與取代的磺酰氯R12Cl(R12為取代的磺?；?成酯，得到化合物(25)，在(iv)中化合物(25)與保護的堿基B，K2CO3，18-冠醚-6在DMF中于50-60℃反應24小時或與保護的堿基B，DEAD，三苯基膦反應，得到化合物(26)(式中各基團定義如上所述)，化合物(26)經(jīng)氫氧化鈉水溶液水解或催化氫化得到化合物(6)(式中各基團定義如上，但X’為OH)。
根據(jù)本發(fā)明，反式-4-羥基-L-脯氨酸酯的酯基優(yōu)選甲基，乙基，其氨基保護基優(yōu)選芐基，2位上的環(huán)外氨基保護基優(yōu)選Boc，取代的磺酰氯優(yōu)選對甲苯磺酰氯和甲磺酰氯，取代的溴烷基酸酯優(yōu)選溴乙酸乙酯和溴乙酸芐酯。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括通式I肽核酸衍生物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽，及藥用載體或賦形劑。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明還涉及用于抗病毒或治療癌癥的組合物，其包括通式I肽核酸衍生物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽，及藥用載體或賦形劑。
通式(I)化合物的抗病毒或治療癌癥的有效量或劑量取決于許多因素，包括但不限于哺乳動物種類，年齡，體重，健康狀況，具體的疾病及嚴重程度，個體反應，給予的具體化合物或給藥途徑等。
式I化合物可以藥物組合物形式給藥并通過腸道或非腸道途徑給予，如口服，皮下，肌內(nèi)，靜脈，透皮，鼻內(nèi)、直腸等途徑給予。用于腸道給藥劑型舉例有片劑、膠囊、溶液、懸浮液、粉劑、粒劑和糖漿等。用于非腸道給藥的劑型舉例有注射劑，凍干粉劑。用于局部給藥的劑型舉例有栓劑、貼劑、軟膏、噴霧劑等。
在本發(fā)明藥物組合物的藥用載體或賦形劑舉例有粘合劑，如微晶纖維素，黃蓍膠或明膠；賦形劑，如淀粉或乳糖崩解劑，如海藻酸，淀粉羥乙酸鈉，玉米淀粉等，潤滑劑，如硬脂酸鎂；滑動劑，如膠狀二氧化硅；及甜味劑，如乳糖或可以加入糖精或矯味劑，如薄荷，除了上述物質(zhì)外，還可以含有液體如聚乙二醇或脂肪油。其它劑量單位形式可以含有其它多種改變劑量單位的物理形式的物質(zhì)，例如，包衣。因此，可以用糖，蟲膠，或其它腸包衣劑包衣片劑或丸劑。除了活性成分外，糖漿可以含有乳糖作為甜味劑并且含有某些防腐劑，干燥劑和著色劑及矯味劑。用于藥物組合物中的載體或賦形劑應當是藥物純的并且在其用量內(nèi)無毒。
藥用載體或賦形劑還包括無菌稀釋劑如注射用水，鹽水，混合油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如芐基醇或羥苯甲酸甲酯；抗氧劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽，檸檬酸鹽或磷酸鹽及用于調(diào)節(jié)滲透壓的試劑如氯化鈉或葡萄糖。
本發(fā)明通過下面的實施例進行進一步描述，但這并不意味著本發(fā)明僅限于此。實施例二甲基甲酰胺和吡啶在使用前進行了干燥，三氟醋酸，N-甲基嗎啡啉，叔丁氧甲酸酐，L-反式-4-羥基脯氨酸，胸腺嘧啶，甲磺酰氯為Acros公司產(chǎn)品，DCC，N1-Boc-N5-(2-Cl-Cbz)-Lys，MBHA樹脂從ACT公司購買，腺嘌呤為Aldrich公司產(chǎn)品，胞嘧啶為Lancaster公司產(chǎn)品，乙腈為Fisher公司產(chǎn)品，芐氧羰酰氯為自制產(chǎn)品，SephadexG25為Pharmacia公司產(chǎn)品，DNA樣品為PAGE級，其它試劑和溶劑為本國產(chǎn)品，所用儀器有RY-1型顯微熔點儀，Carlo Erba 1106型元素分析儀，JNM-GX400型超導核磁共振儀，Zabspec，Tofspec，MALDI-TOF質(zhì)譜儀，HD-88-5A型核酸蛋白檢測儀(浙江永嘉縣華陽生物工程試劑儀器廠)，Labcon冰凍干燥機高壓液相所用儀器為Kromasil C-18柱，(4.6×250mm)，泵為Waters 600E，檢測器為Spectra Physics UV1000，記錄儀為Spectra Physics Data Jet INTEGRATOR，檢測波長為λ＝260nm，UV-260紫外可見分光光度計(Shimazu)，HX-10555恒溫循環(huán)器(軍事醫(yī)學科學院實驗儀器廠)。實施例1肽核酸單體(5)的合成(1)N-叔丁氧羰基-反式-4-對甲苯磺酰氧基-L-脯氨酸乙酯(16)將114g(0.44mol)N-叔丁氧羰基-反式-4-羥基-L-脯氨酸乙酯溶于500ml吡啶中，然后加入120g對甲苯磺酰氯，室溫下攪拌3天，減壓蒸去吡啶，將剩余物用乙酸乙酯溶解，并用鹽水洗滌后，乙酸乙酯溶液用無水硫酸鎂干燥，濃縮，得到無色的油狀物180g，產(chǎn)率99％。1H NMR1.25(3H，s，OCH2CH3)，1.36，1.40(9H，s，C(CH3)3，rotamers)，2.10～2.55(2H，m，C3’H2)，2.46(3H，s，Tos CH3)，3.55～3.65(2H，m，C5’H2)，4.14～4.20(2H，m，OCH2CH3)，4.32～4.39(1H，m，C2’H)，5.02～5.05(1H，m，C4H)，7.29～7.79(4H，dd，Tos phenyl)；13C NMR14.0，14.1(CH2CH3)，28.1，28.2(Boc CH3)，36.0，37.1(C3H2)，51.7，52.1(C5’H2)，57.1，57.4(C2’H)，61.2(OCH2CH3)，78.3，78.9(C4’H)，80.5，80.6(Boc C)，127.7，130.0(CH)，133.3(C4’)，145.2(C1’)，153.2(Boc CO)，172.2(CO)；元素分析計算值，C19H27NO7S(M413)，C55.21，H6.54，N3.39(％)，測定值，C55.09，H6.58，N3.17(2)N-叔丁氧羰基-順式-4-胸腺嘧啶-L-脯氨酸乙酯將11.34g胸腺嘧啶，8.28g無水碳酸鉀，7.93g18-冠-6投入400ml無水二甲基甲酰胺中，攪拌30min后，加入12.4g N-叔丁氧羰基-反式-4-對甲苯磺酰氧基-L-脯氨酸乙酯，在60-70℃加熱1天，TLC檢測反應物消失。將反應物冷卻，減壓蒸去二甲基甲酰胺，剩余物用乙酸乙酯溶解，用硅膠柱層析方法分離出產(chǎn)物3.72g，產(chǎn)率33.8％。1HNMR1.28(3H，t，OCH2CH3)，1.45(9H，s，C(CH3)3)，1.95(3H，s，C5H3)，2.76，3.58(2H，m，C3’H2)，3.94(2H，m，C5’H2)，4.12(2H，dd，OCH2CH3)，4.35(1H，m，C2’H)，5.25(1H，m，C4’H)，7.26(1H，m，C6H)，9.17(1H，m，C3NH)；13CNMR12.6(CH3)，14.1(CH2CH3)，28.2(Boc CH3)，34.1，35.6(C3’)，49.1，49.6(C5’)，51.7，52.1(C4’)，57.3，57.5(C2’))，60.4，61.5(CH2CH3)，81.1(Boc C)，111.6，111.8(C5)，135.9，136.2(C6)，151.1(C2)，153.3，(Boc CO)，163.6，165.4(C4)，172.3(CO)；m/z368(M＋1)，268(M－Boc＋2H)，元素分析計算值，C17H25N3O6(M367)，C55.59，H6.81，N11.44(％)，測定值，C55.19，H6.95，N10.94.(3)(2S，4S)-N-叔丁氧羰基-4-胸腺嘧啶-2-羥甲基四氫吡咯將3.13g(8.53mmol)N-叔丁氧羰基-順式-4-胸腺嘧啶-L-脯氨酸乙酯溶于200ml四氫呋喃中，在冰浴冷卻下，加入1.94g氫化鋁鋰，將反應在室溫下繼續(xù)攪拌，6小時后，TLC檢測反應完成，在冰浴冷卻下，滴加水破壞多余的氫化鋁鋰，并用1N鹽酸中和，然后將此混合物加熱至四氫呋喃層與水層分層，分出水層，并用乙酸乙酯提取水層3次，合并有機溶液，用無水硫酸鎂干燥后，濃縮，用常壓柱層析得到白色固體1.2g，產(chǎn)率為70％。1H NMR1.47(9H，s，C(CH3)3)，1.94(3H，s，CH3)，2.40～3.29(2H，m，C3’H2)，3.89～5.10(5H，m，C5’H2，C2’H，CH2OH)，5.05～5.10(C4’H)，7.25，7.26(1H，C6H)，8.97(1H，br，NH)；13C NMR13.0(CH3)，28.4(Boc，CH3)，32.3(C3’H2)，49.9(C5’H2)，51.7(C4’H)，58.6(C2’H)，80.6(CH2OH)，81.3(Boc C)，111.8(C5)，135.8(C5)，150.9(C2)，152.2(Boc CO)，163.1(C4)，M/z325(M)，226(M－Boc＋2H)，元素分析計算值，C15H23N3O5(M325)，C55.38，H7.08，N12.92(％)，測定值，C54.98，H7.26，N12.30.(4)(2S，4S)N-叔丁氧羰基-4-胸腺嘧啶-四氫吡咯-2-(2-亞甲氧基乙酸芐酯)1.15g(3.54mmol)(2S，4S)-N-叔丁氧羰基-4-胸腺嘧啶-2-羥甲基四氫吡咯與0.225gNaH溶于干燥的二甲基甲酰胺中，冰浴冷卻下攪拌，1小時后，投入溴乙酸芐酯，室溫下反應24小時。反應完畢后，減壓蒸去二甲基甲酰胺，用水和乙酸乙酯溶解，用1N鹽酸調(diào)至中性。乙酸乙酯溶液經(jīng)干燥，濃縮，分離，得到1.16g產(chǎn)物，產(chǎn)率79.7％。直接用于下一步反應。(5)(2S，4S)2-[N-叔丁氧羰基-4-(1-胸腺嘧啶)-]四氫吡咯-2-(亞甲氧基乙酸)將0.7g(2S，4S)N-叔丁氧羰基-4-胸腺嘧啶-四氫吡咯-2-(2-亞甲氧基乙酸芐酯)溶于30mL無水甲醇中，加入0.4g 5％鈀/炭作催化劑，通入氫氣，于常溫常壓下反應6h，過慮除去催化劑，濃縮，經(jīng)常壓柱層析得到產(chǎn)物0.6g，總產(chǎn)率92％。1H NMR1.42(9H，s，(CH3)3)，1.87(3H，s，CH3)，2.17，2.39(2H，m，C3’H2)，3.61～3.64，3.80～3.83(2H，m，C5’H2)，3.89～3.94(3H，m，C2’H，-CH2OCH2COOH)，4.50(2H，s，-CH2OCH2COOH)，4.94～5.02(1H，m，C4’H).13C NMR13.0(CH3)，28.7(C(CH3)3)，32.8(C3’)，50.6(C5’)，52.9(C4’)，54.8(-CH2OCH2COOH)，59.0(C2’)，64.0(-CH2OCH2COOH)，81.7(C(CH3)3)，111.1(C5)，137.7(C6)，153.1(C(CH3)3CO)，157.0(C2)，165.0(C4)，174.0(COOH)，元素分析計算值，C15H21N3O6(M383)，C50.87，H6.63，N10.71(％)，測定值，C51.34，H6.52，N10.29.實施例2肽核酸單體(6)的合成(1)(2S，4R)-N-芐基-2-氨甲酰基-4-羥基四氫吡咯2.35克(10mmol)的N-芐基羥脯氨酸甲酯溶于100毫升無水甲醇中，冰浴冷卻下慢慢通入氨氣至飽和，室溫下攪拌三天。蒸去溶劑，殘留物柱層析分離得粘稠狀N-芐基-4-羥基四氫吡咯-2-甲酰胺(氯仿/甲醇10∶1，Rf＝0.40)1.98克，收率90％。1HNMR(CDCl3)1.60-1.88(d，2H)，2.08-2.26(m，2H，C3’H2)，2.46-2.49(m，1H，C5’H2)，3.29-3.32(m，1H，C5’H2)，3.61-3.64(d，1H，J＝3Hz，PhCH2)，3.97-4.00(d，1H，J＝3Hz，PhCH2)，4.42(m，1H，C2’H)，5.36(m，1H，C4’H)，7.26-7.36(m，5H).MS220.1(M)+，202.1(M-H2O)+。元素分析計算值，C12H16N2O2(M220)，C50.70，H5.67，N9.85(％)，測定值，C50.36，H5.48，N9.88.(2)(2S，4R)-N-芐基-2-氨甲基-4-羥基四氫吡咯2.20克(10mmol)的(2S，4R)-N-芐基-2-氨甲?；?4-羥基四氫吡咯溶于150毫升干燥的四氫呋喃中，加入1.9克(50mmol)的氫化鋁鋰，回流四十八小時。冷卻至室溫，加水至氫化鋰鋁完全分解。濾去固體，濾液減壓蒸干，再加入乙醇10毫升減壓蒸干，殘留物柱層析分離得油狀產(chǎn)物(氯仿/甲醇5∶1，Rf＝0.22)1.57克，收率76％。1HNMR(CDCl3)1.78-2.90(m，9H)，3.16-3.20(dd，1H，m，C2’H)，3 36-3.39(d，1H，J＝3Hz，PhCH2)，3.91-3.94(d，1H，J＝3Hz，PhCH2)，4.25-4.28(m，1H，C4’H)，7.21-7.28(m，5H，C6H5CH2)。FAB-MS207(M＋H)+。元素分析計算值，C12H18N2O(M206)，C69.87，H8.79，N13.58(％)，測定值，C69.60，H8.70，N13.45.(3)(2S，4R)-N-芐基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯8.40克(41mmol)的(2S，4R)-N-芐基-2-氨甲基-4-羥基四氫吡咯溶于150毫升的二氯甲烷中，滴入溶于50毫升二氯甲烷的8.90克(41mmol)的叔丁氧甲酸酐。室溫下反應1小時，減壓濃縮，柱層析分離得油狀(2S，4R)-N-芐基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯(氯仿/甲醇40∶1，Rf＝0.32)9.6克，收率77％。1HNMR(400MHz；CDCl3)1.45(s，9H，C(CH3)3)，1.80-3.12(m，8H)，3.38-3.41(d，1H，J＝3Hz，PhCH2)，3.96-3.99(d，1H，J＝3Hz，PhCH2)，4.26-4.35(m，1H，C4’H)，7.27-7.32(m，5H，C6H5CH2)。FAB-MS307(M＋H)+。元素分析計算值，C17H26N2O3(M306)，C66.64，H8.55，N9.14(％)，測定值，C66.38，H8.52，N8.96.(4)(2S，4R)-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯
2.06克(8mmol)的(2S，4R)-N-芐基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯放置于氫化瓶中，加入30毫升無水甲醇溶解，然后加入0.11克10％Pd/C，進行氫化脫芐基。將氫化畢的反應混合物過濾，濾去催化劑。濾液減壓蒸去溶劑，柱層析分離，以氯仿/甲醇10∶1洗脫，得到白色固體(2S，4R)-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯1.5克，收率69％，m.p.78℃。1HNMR(CDCl3)1.39(9H，s，C(CH3)3)，1.68-3.3(m，6H)，3.71-3.72(m，1H，C2’H)，4.37(m，1H，C4’H)，5.38(m，1H，BocNH)。FAB-MS217(M＋H)+。元素分析計算值，C10H20N2O3(M216)，C55.53，H9.93，N12.95(％)，測定值，C55.02，H10.12，N12.64.(5)(2S，4R)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯(2S，4R)-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯2.16克(10mmol)和溴乙酸甲酯1.53克(10mmol)溶于50毫升的二氯甲烷中，冰浴冷卻下滴加1.01克(10mmol)的三乙胺，反應混合物在室溫下攪拌三天。反應畢，減壓蒸去溶劑，加入100毫升的乙酸乙酯溶解，再加入水100毫升洗滌，棄去水層，有機層用10％檸檬酸酸化至pH2-3，分出水層用碳酸氫鈉中和至pH為7-10，油狀物用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鎂干燥，蒸去溶劑得油狀物1.87克，收率65％。1HNMR(CDCl3)1.44(s，9H，(CH3)C)，2.13-3.67(m，10H)，3.72(s，3H，OCH3)，4.47(m，1H，C4’H)，5.4(m，1H，BocNH)。FAB-MS289(M＋H)+，189(M-Boc)+。元素分析計算值，C13H24N2O5(M288)，C54.15，H8.39，N9.72(％)，測定值，C53.97，H8.65，N9.43.(6)(2S，4R)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-對甲苯磺酰氧基四氫吡咯(2S，4R)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯2.88克(10mmol)溶于40毫升干燥的二氯甲烷中，冰浴冷卻下滴入溶于10毫升干燥的二氯甲烷的對甲苯磺酰氯2.10克(11mmol)，三十分鐘后滴入1.11克的三乙胺，室溫下反應過夜。反應混合物依次用水(50毫升×1)，5％碳酸氫鈉(50毫升×1)，飽和食鹽水(50毫升×1)洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液蒸去溶劑，得淡黃色油狀液體3.6克，收率86％。1HNMR(CDCl3)1.40(s，9H，(CH3)C)，2.46(s，3H，CH3)，2.17-3.59(m，8H)，3.69(s，3H，OCH3)，5.00(m，1H，C4’H)，7.36(d，2H)，7.77(d，2H)。FAB-MS443(M＋H)+。元素分析計算值，C20H30N2O7S(M442)，C54.28，H6.83，N6.33(％)，測定值，C54.60，H6.53，N6.45.(7)(2S，4S)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N3-苯甲酰基胸腺嘧啶-1)四氫吡咯(2S，4R)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯2.88克(10mmol)，N3-苯甲酰胸腺嘧啶2.30克(10mmol)和三苯基膦懸浮在100毫升干燥的四氫呋喃中，-15℃下滴加1.82毫升(11mmol)的偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)，反應混合物在室溫下攪拌過夜。減壓蒸去溶劑，殘留物用柱層析分離，以氯仿/甲醇50∶1洗脫，得到粘稠產(chǎn)物1.6克，收率32％。1HNMR(CDCl3)1.46(s，9H，(CH3)C)，2.02(s，3H，CH3)，1.89-3.40(m，7H)，3.80(s，3H，OCH3)，5.20-5.30(m，2H)，7.40-7.93(m，5H)，8.12(s，1H)。FAB-MS501.1(M＋H)+。(8)(2S，4S)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N6-苯甲?；汆堰?9)四氫吡咯(2S，4R)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-對甲苯磺酰氧基四氫吡咯1.16克(3.17mmol)，無水碳酸鉀0.61克(4.43mmol)，N6-苯甲酰腺嘌呤1.06克(4.43mmol)和0.35克18-冠醚-6懸浮在50毫升DMF中，反應混合物在70-80℃下攪拌過夜，減壓蒸去溶劑，殘留物用二氯甲烷提取，無水硫酸鎂干燥，蒸去有機溶劑，殘留物用柱層析分離，以氯仿/甲醇20∶1洗脫，得到粘稠產(chǎn)物0.42克，收率26％。1HNMR(CDCl3)1.46(s，9H，(CH3)C)，1.85-3.54(m，8H)，3.76(s，3H，OCH3)，5.16(m，1H，C4’H)，5.38(m，1H)，7.51-8.03(m，5H)，8.71(s，1H)，9.02(s，1H)。FAB-MS510.1(M＋H)+。元素分析計算值，C25H31N7O5(M5O9)，C58.93，H6.13，N19.24(％)，測定值，C59.10，H6.46，N18.87.(9)(2S，4S)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N4-苯甲酰基胞嘧啶-1)四氫吡咯(2S，4R)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-對甲苯磺酰氧基四氫吡咯1.78克(4.86mmol)，無水碳酸鉀2.00克(14.58mmol)，N4-苯甲酰胞嘧啶1.58克(7.29mmol)和1.00克18-冠醚-6懸浮在50毫升DMF中，反應混合物在70-80℃下攪拌過夜，減壓蒸去DMF，殘留物用乙酸乙酯提取，無水硫酸鎂干燥，蒸去有機溶劑，殘留物用柱層析分離，以氯仿/甲醇20∶1洗脫，得到粘稠產(chǎn)物0.97克，收率41％。1HNMR(CDCl3)1.49(s，9H，(CH3)C)，2.01-3.40(m，8H)，3.95(s，3H，OCH3)，5.16-5.40(m，2H)，7.50-7.63(m，5H)，7.92(d，1H)，8.56(d，1H)。FAB-MS486.1(M＋H)+。元素分析計算值，C24H31N5O6(M485)，C59.37，H6.44，N14.42(％)，測定值，C59.56，H6.30，N14.87.(10)(2S，4S)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N2-異丁?；B嘌呤-9)四氫吡咯0.37克(1.0mmol)N2-異丁酰基-O6-[2-(4-硝基苯基)乙基]鳥嘌呤懸浮于15毫升干燥的四氫呋喃中，加熱回流30分鐘后，冷卻至室溫，加入0.35克(1.3mmol)的三苯基膦和0.36克(1.2mmol)(2S，4R)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-羥基四氫吡咯，-15℃下滴加0.22毫升(1.3mmol)的偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)，反應混合物在室溫下攪拌兩天。濾去固體不溶物，濾液濃縮，柱層析分離，以氯仿/甲醇20∶1洗脫，所得化合物(2S，4S)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-[N2-異丁?；?O6-(2-(4-硝基苯基)乙基)鳥嘌呤-9]四氫吡咯溶于2毫升吡啶中，加入100微升DBU(0.67mmol)，室溫下攪拌過夜，減壓蒸去吡啶，殘留物柱層析分離，以乙酸乙酯/甲醇10∶1洗脫，得到產(chǎn)物71毫克，收率21％，m.p.126-128℃。1HNMR(CDCl3)1.28(m，6H，CH(CH3)2)，1.44(s，9H，(CH3)C)，1.78-3.44(m，9H)，3.76(s，3H，OCH3)，5.00(m，1H，C4’H)，8.12(s，1H)。FAB-MS492.2(M＋H)+。(11)(2S，4S)-N-羧甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N3-苯甲酰基胸腺嘧啶-1)四氫吡咯(6a)(2S，4S)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N3-苯甲酰基胸腺嘧啶-1)四氫吡咯1.5克(3.0mmol)溶于30毫升甲醇，攪拌下加入1M的氫氧化鋰溶液10毫升，室溫反應40分鐘，此時水解完全。冰浴冷卻下，用10％硫酸氫鉀中和至pH6-7，加入100毫升甲醇，過濾，濾液濃縮，柱層析分離，以氯仿/甲醇5∶1洗脫，得到產(chǎn)物1.02克，收率70％，m.p.121-122℃。1HNMR(CDCl3)1.44(s，9H，(CH3)C)，1.98-3.54(m，9H)，5.27(m，1H，C4’H)，5.35(m，1H)，7.47-7.92(m，6H)。FAB-MS487.3(M＋H)+。元素分析計算值，C24H30N4O7(M486)，C59.25，H6.21，N11.52(％)，測定值，C59.36，H6.54，N11.97.(12)(2S，4S)-N-羧甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N6-苯甲酰基腺嘌呤-9)四氫吡咯(6b)(2S，4S)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N3-苯甲?；叵汆奏?1)四氫吡咯1.02克(2.0mmol)溶于30毫升甲醇，攪拌下加入1M的氫氧化鋰溶液8毫升，室溫反應30分鐘。冰浴冷卻下，用10％硫酸氫鉀中和至pH6-7，加入100毫升甲醇，過濾，濾液濃縮，柱層析分離，以氯仿/甲醇3∶1洗脫，得到產(chǎn)物0.73克，收率74％，m.p.126-128℃。1HNMR(CDCl3)1.35(s，9H，(CH3)C)，2.07-3.50(m，11H)，5.25(m，1H，C4’H)，7.54-7.65(m，5H)，8.04-8.05(m，2H)，11.18(s，1H，COOH)。FAB-MS496.3(M＋H)+。元素分析計算值，C24H29N7O5(M495)，C58.17，H5.90，N19.79(％)，測定值，C58.61，H6.09，N20.13。(13)(2S，4S)-N-羧甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N4-苯甲?；奏?1)四氫吡咯(6c)(2S，4S)-N-甲氧羰甲基-2-(N-叔丁氧羰基)氨甲基-4-(N4-苯甲酰基胞嘧啶-1)四氫吡咯0.45克(1.0mmol)溶于10毫升甲醇，攪拌下加入1M的氫氧化鋰溶液5毫升，室溫反應30分鐘。冰浴冷卻下，用10％硫酸氫鉀中和至pH7，加入60毫升甲醇，過濾，濾液濃縮，柱層析分離，以氯仿/甲醇5∶1洗脫，得到產(chǎn)物0.31克，收率74％，m.p.141-142℃。1HNMR(CDCl3)1.46(s，9H，(CH3)C)，2.03-3.44(m，11H)，5.18-5.43(m，2H)，7.51-7.66(m，5H)，7.98(d，1H)，8.58(d，1H)。FAB-MS478.2(M＋Li)+。實施例4肽核酸序列(1)A10-lys(結(jié)構(gòu)式如下)的合成 (1)在固相反應器中加入樹脂MBHA-(2-Cl-Cbz)-lys100毫克(0.55毫摩爾/克)，分別以CH2Cl2，CH3OH，CH2Cl2洗滌兩次。(2)以8％N-甲基嗎啡啉(NMM)的二氯甲烷溶液中和，5分鐘×2次，抽干反應液，分別以CH2Cl2，CH3OH，CH2Cl2洗滌兩次。加入50mg(0.11mmol)化合物(4e)，DCC(二環(huán)己基碳二亞胺)51mg，HOBt34mg，CH2Cl22.5ml，DMF0.5ml，室溫下電磁攪拌反應3小時，充分洗滌后，茚三酮檢測，陽性結(jié)果表明反應未完全，重新與化合物(4b)反應；陰性結(jié)果表明反應完全。(3)向反應樹脂中加入4N的鹽酸/二氧六環(huán)溶液3ml，5min×1次，30min×1次，抽干反應液，以CH2Cl2，CH3OH，CH2Cl2洗滌兩次。(4)重復以上步驟(2)，(3)9次，縮合反應完畢。向樹脂中加入1∶1的氨水-甲胺混合溶液3ml脫側(cè)鏈保護基，5分鐘×1次，2.5小時×1次。洗滌，干燥樹脂。以氟化氫裂解樹脂，洗脫液冰凍干燥后得到序列(1)的粗產(chǎn)物70mg。(5)以上粗產(chǎn)物經(jīng)Sephadex G25凝膠過濾純化，得到15mg白色粉末。進一步以反相HPLC純化，得到肽核酸純品(純度≥98％)，色譜條件色譜柱Kromasil C-18反相柱；流動相A1％CF3COOH/H2O，B50％CH3CN/1％CF3COOH/H2O。序列(1)的分子式為C126H165N68O11，計算分子量2806.1，MALDI-TOF測得分子量2805.3。實施例5肽核酸序列(2)T10-lys(結(jié)構(gòu)式如下)的合成 按與實施例4相同的方法和步驟，由化合物(6a)起始，得到標題化合物，分子式C126H175N43O31，計算分子量2788.0，Tofspec測得分子量2790.6。實施例6肽核酸序列(1)識別DNA序列的活性將實施例4合成的肽核酸序列(1)與它的互補DNA序列5’-TTT TTT TTTT-3’(dT10)雜交，并以互補DNA雜交序列5’-AAA AAA AAA A-3’(dA10)/dT10為對照，以UV-260紫外分光光度儀記錄雜交復合物在不同溫度的OD260(在260nm的吸光度)，以OD260對溫度作圖，得到雜交螺旋的熔解曲線

圖1，并計算對應的解鏈溫度(Tm)。得到肽核酸序列(1)與互補DNA雜交的Tm為22℃，對照的DNA雜交序列dA10/dT10的Tm為23℃，可見，實施例4合成的肽核酸序列(1)能夠識別互補DNA序列。
權(quán)利要求
1.通式I的化合物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽 其中n為2～200，B為保護的和未保護的堿基，且所述堿基可相同或不同；包括天然堿基腺嘌呤，鳥嘌呤，胸腺嘧啶，胞嘧啶和尿嘧啶，和它們的類似物，如黃嘌呤和次黃嘌呤等，及具有能與天然堿基形成Watson-Crick或Hoogsteen，反Hoogsteen配對能力的雜環(huán)化合物，R1為不存在或式(a)代表的基團 R2為式(b)或(c)代表的基團 其中Z為O，NR，其中R為H，CH3，或C2-C8直鏈、支鏈、環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷基，或氨基的保護基，S，SO，SO2，PO2，CR7R8。R3，R4，R5，R6，R7，R8分別為H或C1-C15，尤其C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基等，C6-C12的取代或未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，C1-8烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代或未取代烷氨基，C1-C15烷基，尤其是C1-C8直鏈，支鏈和環(huán)狀烷基，Y為H，或NH2的保護基，以及C1-C15烷基，尤其是C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，C6-C12的取代或未取代的芳香基或雜芳香基，取代基包括鹵素，氰基，硫氰基，羥基，C1-8烷氧基，磺酸酯，硝基，亞硝基，C1-C8取代烷氨基，C1-C15烷基，尤其是C1-C8的直鏈，支鏈和環(huán)狀烷基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中n＝5-60。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中B為保護的和未保護的天然堿基腺嘌呤，鳥嘌呤，胸腺嘧啶，胞嘧啶和尿嘧啶。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中Y為H，或氨基保護基Boc，Cbz或Fmoc。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中Z為O，NH，NCH3，S，SO，SO2，PO2。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R1，R2，R3，R4都為H，R5，R6為H或CH3。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中骨架的構(gòu)型為D-，或L-型異構(gòu)體。
8.權(quán)利要求1的化合物，其中B和2位取代基呈順式，或反式構(gòu)型。
9.權(quán)利要求1的化合物，其由式Ia或Ib表示， 其中B，R3，R4，R5，R6，Y如權(quán)利要求1中定義。
10.藥物組合物，其包括權(quán)利要求1-9任一的化合物及藥用載體或賦形劑。
11.通式(5)的化合物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽， 其中B，Y，R3、R4、R5和R6的定義同權(quán)利要求1中定義，X為H，羧基保護基，羧基的活化基團，堿金屬或堿土金屬離子，含1-20個碳原子烷基的季銨離子。
12.通式(6)的化合物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽， 其中B，Y，R3、R4、R5和R6的定義同權(quán)利要求1中定義，X為H，羧基保護基，羧基的活化基團，堿金屬或堿土金屬離子，含1-20個碳原子烷基的季銨離子。
13.式I肽核酸衍生物，其立體異構(gòu)體或其藥用鹽的制備方法，其包括(a)將N端保護的化合物通式(4)或(5)或(6)連于固相載體上(樹脂或帶有氨基酸的樹脂)；(b)脫去N端的保護基，使氨基游離；(c)將N端保護的化合物通式(4)或(5)或(6)以肽鍵與樹脂上的游離氨基連接；(d)根據(jù)所需鏈的序列組成，重復(b)和(c)；(e)脫去序列上的保護基，并將序列從樹脂上切割下來；(f)將(e)步所得粗產(chǎn)物以凝膠過濾和高效液相色譜純化。
全文摘要
本發(fā)明涉及肽核酸衍生物,其立體異構(gòu)體或其藥用鹽,用于制備它們的中間體,制備它們的方法,含它們的藥物組合物及它們在抗病毒及抗腫瘤方面的用途。
文檔編號A61K31/519GK1330073SQ01108938
公開日2002年1月9日 申請日期2001年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月21日
發(fā)明者劉克良, 何軍林, 李英, 白金泉, 金濤, 湯立合, 許笑宇, 吳杰 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所