專利名稱：抑制ace－2的化合物及其使用方法
背景技術(shù)：
高血壓或高的血壓，是影響心臟和血管的最常見疾病。統(tǒng)計學(xué)表明在超過5千萬美國人中發(fā)生高血壓。高血壓的流行率隨著年齡增加。介于85至90％之間的病例為原發(fā)性(即自發(fā)的(essential))高血壓，即不能歸因于任何具體器官原因的持久升高的血壓。剩余百分比的病例是繼發(fā)性高血壓，即具有可鑒定基本原因例如腎疾病和腎上腺分泌過多的升高的血壓。
高血壓具有相當?shù)闹貜?fù)性，因為如果它仍然得不到控制，其造成的危害能夠涉及心臟、腦和腎。心臟最常受到高血壓的影響。當血壓高時，心臟在由升高的動脈血壓引起的泵對抗增加的阻力時使用更多的能量。由于增加的努力，心肌增厚并且心臟擴大，因而需要更多的氧。如果它不能滿足其要求，就可以發(fā)生心絞痛或者甚至心肌梗塞。高血壓能夠?qū)е露喾N并發(fā)癥，包括左心室衰竭、動脈硬化心臟病、視網(wǎng)膜出血、滲出、視神經(jīng)乳頭水腫和血管意外、伴發(fā)或不伴發(fā)中風的腦血管供血不足、和腎衰竭。未經(jīng)治療的高血壓患者處于發(fā)展為病殘或致命的左心室衰竭、心肌梗塞、腦出血或梗塞、或早期(early age)腎衰竭的大的風險下。高血壓是傾向于中風的最重要的風險因素并且是傾向于冠狀動脈粥樣硬化的重要風險因素。
從具體病癥或疾病例如心力衰竭也能夠引起異常血壓。心力衰竭為當心臟不能提供足夠的心輸出量以滿足身體代謝需要時所引起的慢性或急性狀態(tài)。心力衰竭一般稱作充血性心力衰竭(CHF)，因為增加的靜脈血壓(伴隨左心室心衰的肺充血和伴隨右心室心衰的外周水腫)的癥狀經(jīng)常占據(jù)主導(dǎo)地位。CHF的癥狀和體征包括疲勞、外周與肺水腫和內(nèi)臟充血(例如，呼吸困難)。這些癥狀通過減少流至身體多種組織的血流和在多種從心臟不能泵出血液導(dǎo)致的器官中積聚過量的血液產(chǎn)生。在來自伴發(fā)心肌梗塞的動脈粥樣硬化冠狀動脈疾病的工業(yè)國家，心力衰竭能夠?qū)е聨追N最常見的疾病。心肌炎、多種心肌病、心瓣和先天缺陷也可導(dǎo)致心力衰竭(Anderoli等，CecilEssentials of Medicine，第3版，WB Saunders公司，1993)。在CHF中存在的主要問題就是左心室不能維持正常血壓，因此導(dǎo)致增加的前負荷和后負荷，且導(dǎo)致伴隨壁重新再造的進行性心室擴張。誘導(dǎo)前負荷和后負荷減少，即分別減少全身血管阻力和減少外周血管阻力的血管擴張劑現(xiàn)在用于治療CHF(Lionel H.Opie，Drugs of Heart，第3版，WB Saunders公司，1991)。
參與調(diào)節(jié)血壓的一個重要系統(tǒng)是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)。在該系統(tǒng)中，腎素，即在腎小球旁器細胞的顆粒體中形成的蛋白水解酶，催化血管緊張素原(血漿蛋白)轉(zhuǎn)化為一種十肽的血管緊張素I。然后經(jīng)主要存在于肺中、而且也存在于腎和腦中的稱作血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的轉(zhuǎn)化酶使該失活產(chǎn)物裂解為一種八肽的血管緊張素II，其為強效血管收縮劑并且也刺激醛固酮釋放。醛固酮為腎上腺皮質(zhì)激素，促進經(jīng)腎保留鹽和水并因此增加血漿體積，導(dǎo)致血壓增加。血管緊張素II也刺激腦啡肽從神經(jīng)細胞中釋放，其與血管上的特異性受體相互作用，由此導(dǎo)致鈣增加和血管收縮。血管緊張素II誘導(dǎo)血管收縮所經(jīng)歷的另一個機制是與血管上的特異性受體相互作用，因而導(dǎo)致鈣通道開啟并增加鈣，進而導(dǎo)致血管收縮。
ACE，也稱作肽基二肽酶A(EC 3.4.15.1)和激肽酶II為金屬肽酶，更具體地說是鋅肽酶，其水解血管緊張素I和其它的生物活性多肽，例如激肽如緩激肽。緩激肽為血管擴張劑，其至少部分通過誘導(dǎo)釋放血管擴張劑前列腺素起作用且其經(jīng)ACE水解失活。因此，ACE至少部分通過產(chǎn)生血管收縮劑血管緊張素II且經(jīng)使血管擴張劑緩激肽失活而增加血壓。緩激肽也參與其它的生物活性，包括介導(dǎo)疼痛和炎性反應(yīng)。
至少通過ACE抑制劑降低個體中的高血壓和治療CHF的效力進一步證實ACE在調(diào)節(jié)血壓上的作用。ACE抑制劑在高血壓和CHF中作為血管擴張劑具有主要作用且處于大多數(shù)治療這些疾病的有效藥物中(參見例如，Opie等，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑和常規(guī)血管擴張劑(Angiotensin Converting Enzyme Inhibitors and ConventionalVasodilators)，在Lionel H.Opie，Drugs for the Heart，第3版，WBSaunders公司，1991，第106頁中)。幾項臨床試驗表明，ACE抑制劑在廣大患有心肌梗塞和心力衰竭的患者中延長存活力，范圍分布在那些伴有心室機能紊亂的患者和那些患有心力衰竭但血壓正常且血液動力學(xué)穩(wěn)定的患者。例如，一項研究證實在患有嚴重心力衰竭的患者中于6個月中死亡率降低40％(The CONSENSUS Trial StudyGroup，N.Engl.J.Med.3161429(1987)；The CONSENSUS Trial StudyGroup，N.Engl.J.Med.325293(1991))。
目前，在市場上可以得到幾種ACE抑制劑(例如，卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利和雷米普利)。然而，大劑量下ACE抑制劑能夠引起多種不合乎需要的繼發(fā)性作用，包括腎病綜合征、膜性腎小球性腎炎、腎炎和白細胞減少以及血管性水腫。因此，鑒定另外的用于治療血壓疾病(例如高血壓)的療法以避免副作用并改善與目前可以得到的ACE抑制劑有關(guān)的效力將是有利的。
發(fā)明概述本發(fā)明至少部分涉及調(diào)節(jié)ACE-2活性的化合物和方法。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及抑制ACE-2的式(I)化合物，Z-L (I)其中Z為鋅配位部分，且L為氨基酸模擬部分。在一個實施方案中，L為含有非極性側(cè)鏈的氨基酸模擬物。在一個有利的實施方案中，Z為羧酸或可裂解的前藥部分。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及抑制ACE-2的式(II)化合物，
Z-A-B-E (II)其中Z為鋅配位部分，E為酶配位部分，A為輔助ACE-2袋結(jié)合(pocketbinding)部分，且B為ACE-2側(cè)鏈袋結(jié)合部分。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及抑制ACE-2的式(III)化合物， 其中R6為羥基或保護的前藥部分；R7為羧酸、芳基氨基羧基、芳?；?、烷基氨基羧基、氨基羧基、鏈烯基氨基羧基、保護的前藥部分；羥基、雜環(huán)、烷氧基、醚、硫醇或胺；R8為氫或烷基，且任選連接于D以形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)；R9為低級烷基或氫；Q為鍵、O、S、CHOH、CHSH、CHNH2、CHNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)nO(CH2)n，其中n為0、1、2或3，且R3和R4各獨立為取代或未取代的C1-C5支鏈或直鏈烷基、C2-C5支鏈或直鏈烯基、取代或未取代的?；?、芳基、用最多可達四個雜原子任選取代的C3-C8環(huán)，G為連接部分；M為錨定(anchor)部分；J為鍵、烷基、鏈烯基或鏈炔基部分；D為氫、烷基、胺、羥基、鏈烯基、鏈炔基、芳基或雜芳基，任選連接于G，M或Q形成環(huán)，t為0、1、2或3；p為0、1、2、3、4或5；q為0、1、2或3。
本發(fā)明也涉及在患者例如人中治療與ACE-2有關(guān)的疾病的方法，該方法通過給予患者治療有效量的ACE-2抑制化合物來實施，以使與ACE-2有關(guān)的疾病得到治療。在另一個實施方案中，患者患有與血壓有關(guān)的疾病或紊亂，例如優(yōu)選為充血性心力衰竭或高血壓。
本發(fā)明也涉及一種藥用組合物它包含藥學(xué)上可接受的載體和有效量的治療與ACE-2有關(guān)的疾病的ACE-2抑制化合物。
本發(fā)明也涉及通過給予患者有效量的ACE-2抑制化合物和有效量的ACE-2抑制劑，以在患者中治療與ACE-2有關(guān)的疾病的方法。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及抑制ACE-2靶肽水解的方法，該方法包括通過使ACE-2與ACE-2抑制化合物和ACE-2靶肽接觸，由此抑制ACE-2靶肽水解。
如以下詳細描述的那樣，ACE-2為具有基本上與ACE同源的區(qū)域的蛋白質(zhì)且具有血管緊張素裂解活性。單獨給予或與已知ACE抑制劑聯(lián)合給予ACE-2調(diào)節(jié)化合物例如ACE-2抑制劑，可用于治療與ACE-2有關(guān)的疾病(例如，高血壓、充血性心力衰竭)。通過使化合物與已知ACE抑制劑聯(lián)合給藥，相信將減少有效劑量的ACE抑制劑，因此減少潛在的有害副作用的風險。除這樣的聯(lián)合療法以外，單獨使用ACE-2抑制劑可更加有效并提供超過現(xiàn)有療法的替代療法。
繪圖的簡要說明

圖1顯示ACE-2將血管緊張素I(1-10)水解為Ang(1-9)。
圖2描述ACE-2將神經(jīng)降壓肽(1-13)催化水解為神經(jīng)降壓肽(1-12)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。
圖3顯示ACE-2催化des-Arg緩激肽(1-8)水解為des-Arg緩激肽(1-7)。
圖4描述當用化合物G處理時ACE-2和ACE的活性的圖。
圖5為描述當用化合物HW處理時抑制人ACE-2的圖。
圖6為描述當用化合物HX處理時抑制人ACE-2的圖。
圖7為描述當用化合物IX處理時抑制人ACE-2的圖。
發(fā)明詳細描述本發(fā)明涉及抑制ACE-2活性的化合物和方法。
ACE-2為一種具有明顯與已知血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACEs)的區(qū)域同源的蛋白。從患有充血性心力衰竭患者的人心mRNA制備的cDNA庫得到的克隆測定編碼ACE-2的全長cDNA的序列。編碼全長人ACE-2蛋白且包含5’和3’未翻譯區(qū)的cDNA為3396個核苷酸長(參見U.S.專利申請系列號09/163,648用于完全核苷酸和氨基酸序列)。成熟ACE-2蛋白具有787個氨基酸且具有氨基酸19至氨基酸805的氨基酸序列。
ACE-2蛋白包含幾種功能域。它在氨基酸374至氨基酸378之間包含一個鋅結(jié)合區(qū)(ZBD)，其在此稱作最小鋅結(jié)合域。推測至少一些鄰近的氨基酸參與到結(jié)合鋅中。最小鋅結(jié)合域具有與鋅結(jié)合域相同的氨基酸序列，其存在于已確定位于酶的催化位點的所有ACE蛋白中(Lattion等.FEBS Letters(1989)25299)。另外，許多已報道的與鋅原子相互作用或參與催化ACE的氨基酸存在于ACE-2中。
ACE-2在其C-末端域大約氨基酸741至大約氨基酸765之間具有疏水區(qū)。認為疏水區(qū)為與存在于ACE蛋白中相似的跨膜域。ACE-2的氨基酸序列核酸的BLAST搜索(Altschul等.J.Mod.Biol.(1990)215403)揭示ACE-2蛋白和cDNA的特定部分具有與先前鑒定的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的某些區(qū)域相似的同源性。先前已描述ACE蛋白的兩種形式較大的形式，稱作內(nèi)皮或體ACE，因為其以多種體組織存在，包括血管內(nèi)皮、腎小管上皮、纖毛消化道上皮、受激巨噬細胞、腦和睪丸的區(qū)域。ACE的較小形式指的是睪丸形式，因為發(fā)現(xiàn)它基本上僅以睪丸中發(fā)育的精子細胞形式存在。
經(jīng)裂解血管緊張素I的C-末端氨基酸(即亮氨酸)，ACE-2能夠水解血管緊張素I。這個9氨基酸肽(“Ang.(1-9)”)能夠進一步經(jīng)ACE水解為包含來自血管緊張素I的第一個五個氨基酸的5氨基酸肽。也已知ACE-2也催化水解其它的肽，例如des Arg緩激肽，且因此可作為內(nèi)皮ACE蛋白以相似的方式參與調(diào)節(jié)血壓。
ACE-2特征為在蛋白的羧基末端部分存在跨膜域。因此，ACE-2能夠以膜結(jié)合形式存在。還發(fā)現(xiàn)ACE蛋白以水溶性形式存在，這是由于缺乏來自表面的蛋白，或者是由于經(jīng)蛋白酶特異性水解的蛋白所致，或者水溶性形式可經(jīng)不同剪切的mRNA編碼。因而，確信ACE-2也以可溶解形式存在。
ACE-2蛋白與ACE蛋白相比較的總體相似性是相對弱的。人ACE-2和人睪丸ACE蛋白(其為具有ACE-2最高總體相似性的ACE蛋白)之間的總百分比同一性和相似性分別為大約42.9％和62％。在核苷酸水平上，人ACE-2和人睪丸ACE具有大約50.8％的同一性。
本發(fā)明至少部分涉及調(diào)節(jié)ACE-2的化合物，例如式(I)的ACE-2抑制劑Z-L (I)其中Z為鋅配位部分且L為氨基酸模擬部分。
術(shù)語“ACE-2調(diào)節(jié)化合物”指的是調(diào)節(jié)例如抑制、促進或改變ACE-2活性的化合物。ACE-2調(diào)節(jié)化合物包括ACE-2激動劑和拮抗劑。
術(shù)語“ACE-2抑制化合物”包括減少ACE-2活性例如ACE-2體內(nèi)或體外水解底物能力的化合物。ACE-2抑制化合物優(yōu)選為ACE-2拮抗劑。
術(shù)語“鋅配位部分”包括與ACE-2有關(guān)的金屬例如鋅相互作用的部分。盡管并不打算受到理論的束縛，人們認為鋅配位部分與至少一個同以上討論的ACE-2的鋅結(jié)合域有關(guān)的鋅原子相互作用。配位鋅部分的實例包括例如能夠與鋅配位的基團(例如，供電子基團，例如酯、胍、羧酸、羥基烷基、烷基、酰胺、胺、羥基、硫醇、酮、醛、羧酸酯、磺酸酯、硫化物、咪唑基或其它的雜環(huán)部分)或能轉(zhuǎn)化成可能與鋅配位的基團的那些基團，例如裂解羧酸前藥部分或給藥后能夠釋放游離酸的其它的酯前藥。此外，在一些實施方案中，鋅-配位部分可為氫原子。術(shù)語“鋅配位部分”包括與ACE-2有關(guān)的鋅或其它金屬原子配位且使本發(fā)明化合物表現(xiàn)它們計劃的功能例如調(diào)節(jié)ACE-2活性的所有部分。
術(shù)語“相互作用”包括使化合物表現(xiàn)其計劃的功能的任何相互作用。相互作用的實例包括離子相互作用、疏水相互作用、共價相互作用、氫鍵相互作用和它們的組合。
前藥為體內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性形式的化合物(參見例如，Silverman，1992，“藥物設(shè)計和藥物作用的有機化學(xué)(The Organic Chemistry of DrugDesign and Drug Action)”，Academic Press，8)。前藥能夠用于改變具體化合物的生物分布(例如，使化合物一般不進入到蛋白酶的反應(yīng)活性部位)或藥物代謝動力學(xué)。例如，能夠用例如甲基或乙基酯化羧酸基團，得到酯。當酯給予患者時，酯經(jīng)酶促或非酶促、還原、氧化或水解裂解，釋放陰離子基團。用能夠裂解釋放中間體化合物隨后分解得到活性化合物的部分(例如，酰氧基甲酯)酯化陰離子基團。
術(shù)語“可裂解的羧酸前藥部分”包括體內(nèi)能夠代謝為能配位于鋅或另一個酶結(jié)合位點的基團的部分。通過酯酶或通過其它的對于羧酸的機制，可使前藥部分代謝。在本領(lǐng)域中前藥的實例和它們的用途是熟知的(參見例如，Berge.(1977)“藥用鹽類(PharmaceuticalSalts)”，J.Pharm.Sci.661-19)。在最后分離和純化化合物期間，或經(jīng)分別使以其游離的酸形式存在的純的化合物與適宜的衍生化試劑反應(yīng)，能夠就地制備前藥。借助在催化劑存在下用醇處理，羧酸能夠轉(zhuǎn)化為酯。可裂解的羧酸前藥部分的實例包括取代的和未取代的、分支的或未分支的低級烷基酯部分(例如，乙酯)、低級鏈烯基酯、二-低級烷基-氨基低級烷基酯(例如，二甲基氨基乙酯)、酰氨基低級烷基酯、酰氧基低級烷基酯(例如，新戊酰氧基甲酯)、芳基酯(苯酯)、芳基-低級烷基酯(例如，芐基酯)、取代的(例如，用甲基、鹵素或甲氧基取代基)芳基和芳基-低級烷基酯、酰胺、低級-烷基酰胺、二-低級烷基酰胺和羥基酰胺。在一些本發(fā)明實施方案中，前藥部分本身可與配位前未轉(zhuǎn)化的鋅配位。
術(shù)語“取代的”包括能放置在部分中且使分子表現(xiàn)其預(yù)計的功能的取代基。取代基的實例包括烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、NR’R”、CN、NO2、F、Cl、Br、I、CF3、CCl3、CHF2、CHCl2、CONR’R”、S(O)NR’R”、CHO、OCF3、OCCl3、SCF3、SCCl3、COR’、CO2R’和OR’，其中R’和R”各獨立為氫、C1-C4烷基、C2-C4鏈烯基、C2-C4鏈炔基或任選取代的芳基。優(yōu)選取代能增強ACE-2調(diào)節(jié)化合物表現(xiàn)其預(yù)計的功能例如調(diào)節(jié)ACE-2活性的能力。
術(shù)語“保護前藥部分”包括通過鍵例如酯鍵連接于ACE-2調(diào)節(jié)化合物且能夠體內(nèi)代謝得到活性藥物的部分。保護前藥部分的實例包括氨基酸(例如，甘氨酸、丙氨酸)、分枝或未分枝的、取代或未取代的低級烷基(例如，甲基、乙基、丙基)、低級鏈烯基、二-低級氨基-低級烷基、酰氨基低級烷基、酰氧基低級烷基、芳基、芳基低級烷基和取代的芳基或芳基低級烷基。
術(shù)語“氨基酸模擬部分”包括與N-連接末端的天然或非天然氨基酸(例如，亮氨酸、組氨酸)相同的或結(jié)構(gòu)相似的且與ACE-2相互作用導(dǎo)致抑制或調(diào)節(jié)ACE-2活性的部分。盡管并不希望受到理論的束縛，氨基酸模擬部分被認為可與ACE-2的結(jié)合袋區(qū)域相互作用。在一個實施方案中，氨基酸模擬部分由至少一個天然或非天然氨基酸或它們的衍生物組成，包含例如荷電的、未荷電的極性或非極性側(cè)鏈(例如，以下氨基酸的側(cè)鏈，包括丙氨酸、纈氨酸、精氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、絲氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、組氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、谷氨酸和天冬氨酸)。
在一些實施方案中，氨基酸模擬部分可包括兩或多個與ACE-2相互作用的氨基酸。這些氨基酸模擬部分可通過官能團例如氨基連接。例如，在另一個實施方案中，氨基酸模擬部分可包含側(cè)鏈袋結(jié)合部分(J-D)和經(jīng)基團(Q)連接的輔助袋結(jié)合部分(G-M)。
基團Q可為例如鍵、O、S、CHOH、CHSH、CHNH2、CHNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)nO(CH2)n，其中n為0、1、2或3，且R3和R4每一個獨立為取代或未取代的C1-C5支鏈或直鏈烷基、C2-C5支鏈或直鏈的鏈烯基、芳基烷基、取代或未取代的?；⒎蓟?、C3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代。Q優(yōu)選為NH或NR3。在其它的實施方案中，R3側(cè)鏈可結(jié)合于J或D基團或結(jié)合于G或M基團以形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
術(shù)語“側(cè)鏈袋”包括與側(cè)鏈袋結(jié)合部分相互作用的ACE-2的區(qū)域。
術(shù)語“側(cè)鏈袋結(jié)合部分”包括與側(cè)鏈袋相互作用的部分?？赡艿膫?cè)鏈袋結(jié)合部分的實例包括氫、支鏈或直鏈的、取代或未取代的低級烷基、低級鏈烯基、低級鏈炔基、芳基或雜芳基部分或天然或非天然氨基酸的氨基酸側(cè)鏈。優(yōu)選的側(cè)鏈袋結(jié)合部分的實例包括取代或未取代的、支鏈或直鏈烷基、和未荷電或荷電的以下氨基酸的側(cè)鏈，包括丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、組氨酸和谷氨酰胺。也包括例如衍生于取代的天然氨基酸的非天然氨基酸側(cè)鏈、天然氨基酸的類似物、天然氨基酸的衍生物和其它的非天然存在的氨基酸。側(cè)鏈袋結(jié)合部分也可包括取代或未取代的雜環(huán)部分，其可包括咪唑、噻唑、吡唑和苯并咪唑。
另外，側(cè)鏈袋結(jié)合部分可具有下式， 其中R8為氫或烷基且可任選與D基團連接以形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)；J選自鍵、O、S、CHOH、CHSH、CHNH2、CHNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)pO(CH2)n、用C1-C6烷基、鹵素任選取代的1至5個原子(例如，碳)的鏈，其中n為0、1、2或3，p為0、1、2或3；且R3和R4每一個獨立為取代或未取代的C1-C6支鏈或直鏈烷基、C1-C6支鏈或直鏈的鏈烯基、取代或未取代的酰基、鏈炔基、芳烷基、芳基、C3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代。
D為氫、烷基、鏈烯基、胺、羥基、鏈炔基、芳基或雜芳基，它們中的任何一個可任選為分枝或取代的。
在一個實施方案中，J為鍵且D為烷基(例如，甲基、乙基、異丙基、正丙基、異丁基、正丁基、叔丁基、戊基等)或鏈炔基。另外，D可為苯基或雜芳基，例如吡啶基或咪唑基。在一些實施方案中，J和D為未取代的烷基、鏈炔基、芳基或鏈烯基。
術(shù)語“輔助袋”包括與輔助袋結(jié)合部分相互作用的ACE-2的區(qū)域。
術(shù)語“輔助袋結(jié)合部分”包括與ACE-2輔助袋相互作用的部分?？赡艿妮o助袋結(jié)合部分的實例包括氫、分枝的或直鏈的、取代或未取代的烷基、芳基、芳烷基、雜芳基烷基、鏈烯基、鏈炔基或雜芳基部分、或天然或非天然氨基酸的氨基酸側(cè)鏈。在一些實施方案中，輔助袋結(jié)合部分可與同ACE-2有關(guān)的金屬例如鋅相互作用。
“輔助袋結(jié)合部分”的實例包括下式部分， 其中R9為低級烷基或優(yōu)選為氫，G為連接部分；且M為錨定部分。
術(shù)語“連接部分”或“G”包括使錨定部分與ACE-2調(diào)節(jié)化合物連接的部分。例如，術(shù)語“連接部分”包括共價鍵、C1-C6烷基、鏈烯基、鏈炔基、醚、酯、硫醚、胺和羰基部分。在另一個實施方案中，連接部分為共價鍵、胺C1-C6、C1-C5、C1-C4、C1-C3或C1-C2烷基。連接部分可由多達三、四、五或六個雜原子取代。
術(shù)語“錨定部分”或“M”包括與ACE-2輔助接合袋相互作用的部分。在一些實施方案中，這些部分也可與金屬例如與ACE-2有關(guān)的鋅相互作用。術(shù)語“錨定部分”包括使ACE-2與表現(xiàn)其預(yù)定的功能的化合物相互作用的部分。結(jié)合部分的實例包括例如氫原子、未取代或取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、碳環(huán)基，例如取代或未取代的苯基、或雜環(huán)，例如取代或未取代的呋喃基、咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、苯并二噁唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、亞甲二氧基苯基、吲哚基、噻吩基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、嘌呤基(purinyl)或脫氮雜嘌呤基(deazapurinyl)、萘基、萘啶基或中氮茚基。取代基的實例包括烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、NR’R”、CN、NO2、F、Cl、Br、I、CF3、CCl3、CHF2、CHCl2、CONR’R”、S(O)2NR’R”、CHO、OCF3、OCCl3、SCF3、SCCl3、COR’、CO2R’和OR’，且其中R’和R”每一個獨立為氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基或任選取代的芳基。
在另一個有利實施方案中，用至少一個亞錨定部分取代錨定部分(“M”)。每一個亞錨定部分(“L”)可通過亞連接部分(“K”)任選連接于錨定部分。
術(shù)語“亞錨定部分”或“L”包括氫、烷基、鏈烯基、鏈炔基、碳環(huán)基、芳基，例如取代或未取代的苯基、聯(lián)苯基或雜環(huán)、雜芳基例如取代或未取代的呋喃基、咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、苯并二噁唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、亞甲二氧基苯基、吲哚基、噻吩基、嘧啶基、吡嗪基、嘌呤基或脫氮雜嘌呤基、聯(lián)苯基、萘基、吲唑基、萘啶基或中氮茚基。在一個有利實施方案中，亞錨定部分為脂肪族或芳族，例如未取代或取代的碳環(huán)、雜環(huán)或苯基。亞錨定部分優(yōu)選使ACE-2抑制化合物表現(xiàn)其預(yù)計的功能，例如抑制ACE-2的功能。在一些實施方案中，本發(fā)明分子可包含一或多個亞錨定部分。
亞錨定部分的實例包括例如4-氯苯基、聯(lián)苯基、3-氯苯基、3，5-二氯苯基、3-甲基苯基、3，5-二甲基苯基、3-CF3-苯基、2，5-二氯苯基、間-氟苯基、間-碘苯基、亞甲二氧基苯基、間-三氟甲基苯基、2，3-二氯苯基、2，3-二氟苯基、2，3-二甲氧基苯基、對-氟苯基、對-硝基苯基、對-叔丁基苯基、對-異丙基苯基、對-三氟甲氧基苯基、3，4-二甲基苯基、4-氰基苯基、3，4-氯苯基、4-甲基苯基和4-三氟甲基苯基。
術(shù)語“亞連接部分”或“K”包括使亞錨定部分與錨定部分連接的部分。例如，術(shù)語“亞連接部分”包括共價鍵、C1-C6烷基、鏈烯基、鏈炔基、醚、酯、硫醚、胺、酰胺和羰基部分。在另一個實施方案中，連接部分為共價鍵、胺或C1-C6烷基。亞結(jié)合部分可通過一或多個亞連接部分連接于錨定部分。亞連接部分的實例也包括O、S、CHOH、(CH2)n-SO2、CHNH2、CHNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)nO(CH2)n、用C1-C6烷基、鹵素任選取代的1至5個原子的鏈，其中n為0、1、2或3，且R3和R4每一個獨立為取代或未取代的C1-C6支鏈或直鏈烷基、芳基、芳烷基、取代或未取代的?；3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代。在另一個實施方案中，亞連接部分為共價鍵、醚、胺或C1-C3烷基(例如，-CH2-、-CH2CH2-等)。
例如，在一個實施方案中，錨定部分包括下式的環(huán)狀部分 其中λ為0、1、2、3、4或5；T1、T2、T3、T4和T5每一個獨立為任選結(jié)合于氫的碳、氮、硫或氧；T6為碳、氮、硫、氧或共價鍵(以便形成五元環(huán))；每一個K獨立選自亞連接部分；和每一個L獨立選自亞錨定部分。亞連接部分和亞錨定部分可連接于芳環(huán)或雜芳環(huán)上任何可以利用的原子上。另外，兩或多個亞連接部分可連接于相同的亞錨定部分，形成雙環(huán)或三環(huán)系統(tǒng)。
錨定部分的實例包括其中T2和T4為氮的部分，T1、T3和T5為碳且T6為共價鍵的部分。錨定部分的另一個實例包括其中T2和T3為氮，T1、T4、T5各為碳且T6為共價鍵的部分。錨定部分的另一個實例包括其中T1、T3和T5各為碳，T2為氮且T4為硫的部分。
例如，在一個實施方案中，錨定部分為取代或未取代的吡唑基、噻唑基、或噁唑基或咪唑基。在另一個實施方案中，用一或多個通過亞連接部分(“K”)連接于咪唑基錨定部分的亞錨定部分(“L”)取代咪唑基錨定部分。在一個實施方案中，下式表示咪唑基錨定部分 其中λ為0、1、2、3或4；每一個K獨立選自亞連接部分；和每一個L獨立選自亞錨定部分。亞連接部分和亞錨定部分可連接于咪唑環(huán)上任何可以利用的原子上。另外，兩或多個亞連接部分可連接于相同的亞錨定部分，形成雙環(huán)或三環(huán)系統(tǒng)。
在一個實施方案中，咪唑基錨定部分具有下式
在一個實施方案中，K為共價鍵、氨基羰基、(CH2)n或(CH2)pO(CH2)n，其中n為0、1、2、3、4或5且p為0、1、2、3、4或5。在另一個實施方案中，L為亞錨定部分，例如(但不局限于)未取代或取代的苯基、烷基或環(huán)烷基。可由一或多個使化合物表現(xiàn)其預(yù)計的功能例如調(diào)節(jié)ACE-2活性的取代基取代L例如苯基或另一個亞錨定部分。取代基的實例包括烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、NR’R”、CN、NO2、F、Cl、Br、I、CF3、CCl3、CHF2、CHCl2、CONR’R”、S(O)NR’R”、CHO、OCF3、OCCl3、SCF3、SCCl3、COR’、CO2R’和OR’，且其中R’和R”每一個獨立為氫、C1-C4烷基或任選取代的芳基。在一個實施方案中，L為苯基且用硝基取代。在其它的實施方案中，L為4-氯苯基、聯(lián)苯基、3-氯苯基、3，5-二氯苯基、3-甲基苯基、3，5-二甲基苯基、3-CF3-苯基、2，5-二氯苯基、間-氟苯基、間-碘苯基、亞甲二氧基苯基、間-三氟甲基苯基、2，3-二氯苯基、2，3-二氟苯基、2，3-二甲氧基苯基、對-氟苯基、對-硝基苯基、對-叔丁基苯基、對-異丙基苯基、對-三氟甲氧基苯基、3，4-二甲基苯基、4-氰基苯基、3，4-氯苯基、4-甲基苯基和4-三氟甲基苯基。
可通過測定化合物的Ki的試驗鑒定本發(fā)明ACE-2調(diào)節(jié)化合物，例如ACE-2抑制劑。這樣試驗的實例為ACE-2競爭性底物試驗(ACS試驗)。通過使受試化合物與已知ACE-2底物競爭并測定已知底物經(jīng)ACE-2轉(zhuǎn)化為其裂解產(chǎn)物的量，ACS試驗測定化合物抑制ACE-2活性的能力。在實施例8中更詳細描述ACE-2試驗。本發(fā)明包括與ACE-2相互作用的具有以下Ki的ACE-2抑制化合物，包括50μM或更少、40μM或更少、20μM或更少、10μM或更少、1μM或更少、0.75μM或更少、0.1μM或更少、0.50μM或更少、0.25μM或更少、0.10μM或更少、0.075μM或更少、0.050μM或更少、0.040μM或更少、0.030μM或更少、0.025μM或更少、0.01μM或更少、0.0075μM或更少、0.005μM或更少、0.0025μM或更少、或有利為0.0015μM或更少。
本發(fā)明也涉及式(II)的ACE-2抑制化合物，Z-A-B-E (II)其中Z為鋅配位部分，E為酶配位部分，A為輔助結(jié)合袋部分，且B為側(cè)鏈結(jié)合袋部分。化合物優(yōu)選為ACE-2抑制化合物。
術(shù)語“酶配位部分”或“E”優(yōu)選包括羧酸、氫和可裂解的羧酸前藥部分。它包括能夠與酶配位以有利于抑制ACE-2的富電子部分。酶配位部分也包括能夠體內(nèi)水解為活化形式的前藥。術(shù)語“酶配位部分”包括在體內(nèi)和/或體外使ACE-2調(diào)節(jié)化合物和ACE-2之間發(fā)生相互作用的任何部分。在一個實施方案中，E為羧酸或羧酸等價物。
術(shù)語“羧酸等價物”包括使ACE-2調(diào)節(jié)化合物表現(xiàn)其預(yù)計的功能，例如調(diào)節(jié)ACE-2功能的部分。羧酸等價物的實例包括例如-SO3H、-PO3H、-SO2NH2、-SO2NHCH3、-CONHSO2R、-SO2NHCF3、-NHSO2CH3、-NHSO2CF3、-CONHOH、-CONHCN和其它的羧酸等價體(isoteres)。在一個實施方案中，E為CO2H、CO2-R5、CONH2、CONHR5、CONR5R5或氫，其中R5為取代或未取代的C1-C5支鏈或直鏈烷基、C2-C5支鏈或直鏈鏈烯基、芳基、C3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及式(HI)的ACE-2抑制化合物 其中R6為羥基或保護的前藥部分；
R7為氫原子、羧酸、芳基氨基羧基、芳酰基、烷基氨基羧基、氨基羧基、鏈烯基氨基羧基、保護的前藥部分、羥基、雜環(huán)、烷氧基、醚、硫醇或胺；R8為氫或烷基，且任選連接于D以形成環(huán)；R9為低級烷基或氫；Q為鍵、O、S、CHOH、CHSH、CHNH2、CHNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)nO(CH2)n，其中n為0、1、2或3，且R3和R4每一個獨立為取代或未取代的C1-C5支鏈或直鏈烷基、C2-C5支鏈或直鏈烯基、取代或未取代的?；?、芳基、C3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代；G為連接部分；M為錨定部分；J為鍵、烷基、鏈烯基或炔基部分；D為氫、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基或雜芳基，任選連接于G、M或Q以形成環(huán)；t為0、1、2或3；p為0、1、2、3、4或5；和q為0、1、2或3。
在另一個實施方案中，R6為羥基、氨基酸(例如，甘氨酸、丙氨酸)、分枝或未分枝的、取代或未取代的低級烷基(例如，甲基、乙基、丙基)、低級鏈烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基)、二-低級氨基-低級烷基(二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙基氨基、二-正丙基氨基、甲基乙基氨基、甲基丙基氨基等)、酰氨基低級烷基、酰氧基低級烷基、芳基(例如，苯基、呋喃基、聯(lián)苯基、萘啶基、吡唑基等)、芳基低級烷基和取代的芳基或芳基低級烷基。
在另一個實施方案中，R8為氫或烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基)，任選連接于D以形成環(huán)。
在另一個實施方案中，R9為低級烷基(例如，甲基、乙基、丙基或丁基)或氫。
在另一個實施方案中，Q為鍵、O、S、CHOH、CHSH、CHNH2、CHNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)nO(CH2)n，其中n為0、1、2或3，且R3和R4每一個獨立為取代或未取代的C1-C5支鏈或直鏈烷基、C2-C5支鏈或直鏈烯基、取代或未取代的?；?、芳基、C3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代。
在另一個實施方案中，G為鍵、C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基、鏈烯基、鏈炔基、醚、酯、硫醚、胺或羰基，由最多可達三、四、五或六個雜原子任選取代。
在另一個實施方案中，M為氫原子、烷基(直鏈、支鏈或環(huán)烷基)、鏈烯基、鏈炔基、雜環(huán)基、碳環(huán)、芳基，例如苯基、聯(lián)苯基、雜芳基、例如呋喃基、咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、苯并二噁唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、苯并噻唑基、異噁唑基、亞甲二氧基苯基、吲哚基、噻吩基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、嘌呤基、脫氮雜嘌呤基、萘基、萘啶基或中氮茚基，其中M由例如烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、NR’R”、CN、NO2、F、Cl、Br、I、CF3、CCl3、CHF2、CHCl2、CONR’R”、S(O)2NR’R”、CHO、OCF3、OCCl3、SCF3、SCCl3、COR’、CO2R’和OR’任選取代，且其中R’和R”每一個獨立為氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基或取代或未取代的芳基。
多種基團能夠連接形成環(huán)。例如，在另一個實施方案中，R8和R9為氫或烷基。在另一個實施方案中，R8為烷基且連接于D以形成環(huán)。在另一個實施方案中，R9為烷基且連接于M以形成環(huán)。在另一個實施方案中，D和Q連接形成環(huán)。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及式(IV)的ACE-2抑制化合物 其中R6為-OH或保護的前藥部分；R7為氫原子、羧酸、酰胺、保護的前藥部分、羥基、硫醇、雜環(huán)(例如，咪唑、噻唑或噁唑)、醚、烷氧基或胺；Q為CH2、O、NH或NR3；G為如上所述的連接部分、共價鍵、C1-C5烷基、鏈烯基、鏈炔基、醚、硫醚、胺或羰基；M為如上所述的錨定部分、烷基、氫、芳基、雜芳基、雜環(huán)基或碳環(huán)；J為鍵、烷基、鏈烯基或鏈炔基部分；且D為烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基或雜芳基、任選連于G或M以形成環(huán)。在另一個實施方案中，M包含如上定義的亞錨定部分。
在一個實施方案中，R7為羧酸基團；G為共價鍵，C1-C3烷基或氨基烷基；且M為苯基或雜芳基(例如，噻吩基、三唑基、噻唑基或咪唑基)。在另一個實施方案中，J為共價鍵或炔基。D可為烷基(例如，正丙基、甲基、異丙基、乙基、環(huán)烷基或丁基)、天然或非天然氨基酸的側(cè)鏈或雜芳基(例如，吡啶基或咪唑基)。
在一個實施方案中，本發(fā)明ACE-2化合物不包括化合物BD、2-(1-羧基-乙基氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸。
ACE-2抑制化合物的實例包括2-{1-羧基-2-[3-(3-硝基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[2-(3-芐基-3H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-己酸；2-[2-(3-芐基-3H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-苯基-丁酸；2-[2-(3-芐氧基甲基-3H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(甲基-苯基-氨基)-乙基氨基]-4-甲基戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(1-芐基-1H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-苯基-乙基氨基)-3-(3H-咪唑-4-基)-丙酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(4-羥基-苯基)-乙基氨基]-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-苯基-丁酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-戊酸；2-[2-(1H-咪唑-4-基)-1-甲氧基羰基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-5-吡啶基-2-基戊-4-炔酸；2-{1-羧基-2-[1-(4-氯-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[2-(1-芐基-1H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-己酸；2-(1-羧基-2-噻吩-2-基-乙基氨基)-4-甲基-戊酸；6-氨基-2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-己酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-3-甲基-戊酸；2-[(羧基-苯基-甲基)-氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(2，4-二硝基-苯基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-噻唑-2-基-乙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-比啶-2-基-乙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-乙基氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸；2-(1-羧基-3-甲硫基(methylsulfanyl)-丙基氨基)-4-苯基-丁酸；2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基)-丁二酸；2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基)-己酸；2-(1-羧基-3-甲硫基-丙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-甲基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-苯基-乙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-苯基-乙基氨基)-戊酸；2-(1-羧基-2-苯基-乙基氨基)-4-苯基-丁酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-4，4-二甲基-戊酸；2-(1-羧基-乙基氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸；2-(1-羧基-2-噻吩-2-基-乙基氨基)-戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-[1，2，4]三唑-3-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-環(huán)丙基-乙基氨基)-4-苯基-丁酸；2-[1-羧基-2-(4-羥基-苯基)-乙基氨基]-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸；2-[2-(1-芐基-1H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-環(huán)己基-乙基氨基)-4-苯基-丁酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-5-苯基-戊-4-炔酸；2-[2-(1H-咪唑-4-基)-1-甲氧基羰基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(4-甲氧基-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(4-三氟甲基-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[(羧基-苯基-甲基)-氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-丙基氨基)-4-甲硫基-丁酸；2-(1-羧基-2-苯基-乙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-[2-(1H-咪唑-4-基)-1-甲氧基羰基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(4-甲氧基-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(4-三氟甲基-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[(羧基-苯基-甲基)-氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-丙基氨基)-4-甲硫基-丁酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-5-吡啶-2-基-戊-4-炔酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-萘-1-基甲基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；4-{5-[2-羧基-2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基)-乙基]-咪唑-1-基甲基}-苯甲酸；4-{5-[2-羧基-2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基)-乙基]-咪唑-1-基甲基}-苯甲酸；2-[1-羧基-2-(2-苯基-噻唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(1-芐基-1H-苯并咪唑-2-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(芐基-苯基-氨基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(2-氨基-噻唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3，4-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-甲基-噻唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-氰基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3，5-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{2-[3-(4-丁基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-1-羧基-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3，4-二甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[2-(2-芐基氨基-噻唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3，5-二甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-三氟甲氧基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-異丙基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{2-[3-(4-叔丁基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-1-羧基-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{2-[3-(2-苯磺酰基甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-1-羧基-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-硝基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[2-(3-聯(lián)苯-2-基甲基-3H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{2-[3-(3，5-雙-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-1-羧基-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-苯基-噻唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(5-甲基-異噁唑-3-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(1-芐基-1H-吡唑-3-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，3-二甲氧基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-甲基-聯(lián)苯-3-基甲基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-甲氧基-萘-1-基甲基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，3-二氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(2，3-二氟-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，3-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，5-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；和2-{1-羧基-2-[3-(2，6-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；4-甲基-2-[1-甲基氨基甲酰基-2-(3-苯基氨基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-戊酸；2-[2-(4-芐基-呋喃-3-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-苯基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(吡啶-3-基氧基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-硝基-苯氧基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-苯氧基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-硝基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-硝基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-羥基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-羥基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[2-(3-芐基-3H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-苯基氨基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{[2，3-二氧代-1-(3-苯基氨基-3H-咪唑-4-基甲基)-丁基]-甲基-氨基}-4-甲基-戊酸；2-{[2，3-二氧代-1-(4-苯基氨基-呋喃-3-基甲基)-丁基]-甲基-氨基}-4-甲基-戊酸；2-[2，3-二氧代-1-(4-苯基氨基-呋喃-3-基甲基)-丁基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(4-苯基氨基-呋喃-3-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-鄰-甲苯基-2H-異吲哚-1-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(2-芐基-2H-異吲哚-1-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-苯基-2H-異吲哚-1-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-吡啶基-2-基-2H-異吲哚-1-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[2-(3-硝基-苯基)-2H-異吲哚-1-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[2-(4-硝基-苯基)-2H-異吲哚-1-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[2-(4-硝基-芐基)-2H-異引哚-1-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-({羧基-[3-(4-硝基-苯基)-萘-1-基]-甲基}-氨基)-4-甲基-戊酸；2-({羧基-[3-(4-硝基-芐基)-萘-1-基]-甲基}-氨基)-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，5-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，6-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-環(huán)己基甲基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-乙基-丁基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-碘-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-苯基乙炔基-1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(1-甲基-2-苯基乙炔基-1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-苯基乙基-1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-3-(3-苯基-3H-咪唑-4-基)-丙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-苯基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(3-芐基-2，5-二甲基-3H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-4-(3-苯基-3H-咪唑-4-基)-丁基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(2-芐基-噻唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；和2-[2-(5-芐基-2-甲基-噻唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸。
ACE-2抑制化合物的優(yōu)選實施例包括那些具有如下所示結(jié)構(gòu)的化合物 在實施例部分和表2中討論其它的示例性化合物。
術(shù)語“烷基”包括飽和脂肪族基團，包括直鏈烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等)、支鏈烷基(異丙基、叔丁基、異丁基等)、環(huán)烷基(脂環(huán))基團(環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基)、烷基取代的環(huán)烷基和環(huán)烷基取代的烷基。術(shù)語烷基還包括其能夠另外包括置換烴骨架上一或多個碳的氧、氮、硫或磷原子的烷基。在一些實施方案中，直鏈或支鏈烷基在其骨架(例如，對直鏈C1-C6、對支鏈C3-C6)上具有6個或更少的碳原子且更優(yōu)選具有4個或更少的碳原子。同樣優(yōu)選環(huán)烷基在它們的環(huán)結(jié)構(gòu)上具有3-8個碳原子，且更優(yōu)選在環(huán)結(jié)構(gòu)上具有5或6個碳。術(shù)語C1-C6包括含有1至6個碳原子的烷基。
此外，術(shù)語烷基包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”兩者，后者指的是具有在烴骨架的一或多個碳上置換氫的取代基的烷基部分。這樣的取代基可包括例如鏈烯基、鏈炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸酯、phosphonato、phosphinato、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷基硫代、芳基硫代、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亞硫?；?、sulfonato、氨磺酰、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。例如用以上討論的取代基可進一步取代環(huán)烷基。
術(shù)語“芳基”包括以下基團，包括可包含零至四個雜原子的5-和6-元單環(huán)芳族基團，例如苯、苯基、吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、咪唑、三唑、四唑、吡唑、噁唑、異噁唑、吡啶、吡嗪、噠嗪和嘧啶等。另外，術(shù)語“芳基”包括多環(huán)芳基例如三環(huán)、二環(huán)等。例如萘、苯并噁唑、苯并二噁唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、亞甲二氧基苯基、喹啉、異喹啉、萘啶基、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、脫氮雜嘌呤或中氮茚基。這些在環(huán)結(jié)構(gòu)中具有雜原子的芳基也可指的是“芳基雜環(huán)”、“雜環(huán)”、“雜芳基”或“雜芳族”。如以上描述的那樣，用以下這樣的取代基可在一或多個環(huán)位置上取代芳族環(huán)，包括例如鹵素、羥基、烷氧基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷基氨基羰基、芳烷基氨基羰基、鏈烯基氨基羰基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、鏈烯基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫代羰基、磷酸酯、phosphonato、phosphinato、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亞氨基、巰基、烷基硫代、芳基硫代、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞硫酰基、sulfonato、氨磺酰、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。芳基也可與為非芳族的脂環(huán)或雜環(huán)稠和或橋接以形成多環(huán)(例如，1，2，3，4-四氫化萘)。
術(shù)語“鏈烯基”包括在長度和可能的取代度與以上描述的烷基類似的，但包含至少一個雙鍵的不飽和脂肪基類似物。
例如，術(shù)語“鏈烯基”包括直鏈烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等)、支鏈烯基、環(huán)烯基(脂環(huán))基團(環(huán)丙烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)庚烯基、環(huán)辛烯基)、烷基或鏈烯基取代的環(huán)烯基和環(huán)烷基或環(huán)烯基取代的鏈烯基。術(shù)語鏈烯基另外包括包含置換烴骨架上一或多個碳的氧、氮、硫或磷原子的鏈烯基。在一些實施方案中，直鏈或支鏈烯基在其骨架(例如，對直鏈C2-C6、對支鏈C3-C6)上具有6個或更少的碳原子。同樣環(huán)烯基在它們的環(huán)結(jié)構(gòu)上具有3-8個碳原子，且更優(yōu)選在環(huán)結(jié)構(gòu)上具有5或6個碳。術(shù)語C2-C6包括含有2至6個碳原子的鏈烯基。
此外，術(shù)語鏈烯基包括“未取代的鏈烯基”和“取代的鏈烯基”兩者，后者指的是具有在烴骨架的一或多個碳上置換氫的取代基的鏈烯基部分。這樣的取代基能夠包括例如烷基、鏈炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸酯、phosphonato、phosphinato、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷基硫代、芳基硫代、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞硫酰基、sulfonato、氨磺酰、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。
術(shù)語“炔基”包括在長度和可能的取代度與以上描述的烷基類似的，但包含至少一個叁鍵的不飽和脂肪基類似物。
例如，術(shù)語“炔基”包括直鏈炔基(例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基等)、支鏈炔基、和環(huán)烷基或環(huán)烯基取代的炔基。術(shù)語炔基另外包括包含置換烴骨架上一或多個碳的氧、氮、硫或磷原子的炔基。在一些實施方案中，直鏈或支鏈炔基在其骨架(例如，對直鏈C2-C6、對支鏈C3-C6)上具有6個或更少的碳原子。術(shù)語C2-C6包括含有2至6個碳原子的炔基。
此外，術(shù)語炔基包括“未取代的炔基”和“取代的炔基”兩者，后者指的是具有在烴骨架的一或多個碳上置換氫的取代基的炔基部分。這樣的取代基能夠包括例如烷基、鏈炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸酯、phosphonato、phosphinato、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷基硫代、芳基硫代、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞硫?；?、sulfonato、氨磺酰、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。
除非碳的數(shù)目另外指明，如在此使用的“低級烷基”意指如上定義的但在其骨架結(jié)構(gòu)上具有一至五個碳原子的烷基?！暗图夋溝┗焙汀暗图壢不本哂欣?-5個碳原子的鏈長度。
術(shù)語“酰基”包括包含?；?CH3CO-)或羰基的化合物和部分。術(shù)語“取代?；卑ㄓ梢韵禄鶊F取代一或多個氫原子的?；?，包括例如烷基、鏈炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸酯、phosphonato、phosphinato、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、硫代烷基、硫代芳基、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亞硫?；?、sulfonato、氨磺酰、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。
術(shù)語“酰氨基”包括其中?；糠纸Y(jié)合于氨基的部分。例如，該術(shù)語包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基。
術(shù)語“芳?；卑ê薪Y(jié)合于羰基的芳基或雜芳族部分的化合物和部分。芳?；膶嵗ū交然?、萘基羧基等。
術(shù)語“烷氧基烷基”、“烷基氨基烷基”和“硫代烷氧基烷基”包括如上描述的烷基，其另外包含在烴骨架上置換一或多個碳的氧、氮或硫原子，例如，氧、氮或硫原子。
術(shù)語“烷氧基”包括共價結(jié)合于氧原子的取代和未取代的烷基、鏈烯基和炔基。烷氧基的實例包括甲氧基、乙氧基、異丙氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基。取代烷氧基的實例包括鹵代烷氧基。烷氧基可用以下基團取代，包括例如鏈烯基、鏈炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、硫代烷基羰基、烷氧基、磷酸酯、phosphonato、phosphinato、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷基硫代、芳基硫代、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亞硫酰基、sulfonato、氨磺酰、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。鹵代烷氧基的實例包括(但不局限于)氟代甲氧基、二氟代甲氧基、三氟代甲氧基、氯代甲氧基、二氯代甲氧基、三氯代甲氧基等。
術(shù)語“胺”或“氨基”包括其中氮原子共價結(jié)合于至少一個碳或雜原子的化合物。術(shù)語“烷基氨基”包括其中氮原子結(jié)合于至少一個另外的烷基的基團和化合物。術(shù)語“二烷基氨基”包括其中氮原子結(jié)合于至少兩個另外的烷基的基團。術(shù)語“芳基氨基”和“二芳基氨基”包括其中氮分別結(jié)合于至少一或兩個芳基的基團。術(shù)語“烷基芳基氨基”、“烷基氨基芳基”或“芳基氨基烷基”指的是其結(jié)合于至少一個烷基和至少一個芳基的氨基。術(shù)語“烷基氨基烷基”指的是與也結(jié)合于烷基的氮原子結(jié)合的烷基、鏈烯基或炔基。
術(shù)語“酰胺”或“氨基羧基”包括包含結(jié)合于羰基或硫代羰基的碳的氮原子的化合物或部分。該術(shù)語包括包含結(jié)合于結(jié)合于羧基的氨基的烷基、鏈烯基或炔基的“烷基氨基羧基”。它包括包含結(jié)合于氨基的芳基或雜芳基部分的芳基氨基羧基，而所述氨基又結(jié)合于羰基或硫代羰基的碳上。術(shù)語“烷基氨基羧基”、“鏈烯基氨基羧基”、“炔基氨基羧基”和“芳基氨基羧基”包括其中烷基、鏈烯基、鏈炔基和芳基部分分別結(jié)合于氮原子的部分，所述氮原子依次結(jié)合于羰基的碳上。
術(shù)語“羰基”或“羧基”包括包含經(jīng)雙鍵連接于氧原子的碳的化合物和部分。其包含羰基的部分的實例包括醛、酮、羧酸、酰胺、酯、酸酐等。
術(shù)語“硫代羰基”或“硫代羧基”包括包含經(jīng)雙鍵連接于硫原子的碳的化合物和部分。
術(shù)語“醚”包括包含結(jié)合于兩個不同的碳原子或雜原子的氧的化合物和部分。例如，該術(shù)語包括涉及共價結(jié)合于氧原子的烷基、鏈烯基或炔基的“烷氧基烷基”，所述氧原子與另一個烷基共價結(jié)合。
術(shù)語“酯”包括包含結(jié)合于其結(jié)合于羰基碳的氧原子的碳或雜原子的化合物和部分。術(shù)語“酯”包括烷氧基羧基例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、丁氧基羰基、戊氧基羰基等。烷基、鏈烯基或炔基如上定義。
術(shù)語“硫醚”包括包含結(jié)合于兩個不同的碳或雜原子的硫原子的化合物和部分。硫醚的實例包括(但不局限于)烷基硫代烷基、烷基硫代鏈烯基和烷基硫代炔基。術(shù)語“烷基硫代烷基”包括具有結(jié)合于硫原子的烷基、鏈烯基或炔基的化合物，所述硫原子結(jié)合于烷基。相似地，術(shù)語“烷基硫代鏈烯基”和烷基硫代炔基”指的是其中烷基、鏈烯基或炔基結(jié)合于硫原子的化合物或部分，所述硫原子共價結(jié)合于炔基。
術(shù)語“羥基”或“羥基”包括含有-OH或-O-的基團。
術(shù)語“鹵素”包括氟、溴、氯、碘等。術(shù)語“全鹵代”通常指的是其中所有氫被鹵素原子置換的部分。
術(shù)語“多環(huán)基”或“多環(huán)基團”指的是其中兩或多個碳對兩個相鄰的環(huán)為共同的兩或多個環(huán)(例如，環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基和/或雜環(huán)基)，例如，該環(huán)為“稠和環(huán)”。通過非相鄰的原子結(jié)合的環(huán)定義為“橋”環(huán)。能夠用如上描述的以下這樣的取代基取代多環(huán)的每一個環(huán)，包括例如鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷氧基羰基、烷基氨基羰基、芳烷基氨基羰基、鏈烯基氨基羰基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、鏈烯基羰基、氨基羰基、硫代烷基羰基、烷氧基、磷酸酯、phosphonato、phosphinato、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亞氨基、巰基、烷基硫代、芳基硫代、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亞硫酰基、sulfonato、氨磺酰、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基、烷基芳基、或芳族或雜芳族部分。
術(shù)語“雜原子”包括除碳或氫以外的任何元素的原子。優(yōu)選雜原子為氮、氧、硫和磷。
值得一提的是一些本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)包含不對稱碳原子。除非另外指明，人們應(yīng)相應(yīng)理解從這樣的不對稱現(xiàn)象(例如，所有對映體和非對映體)產(chǎn)生的異構(gòu)體包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。通過經(jīng)典分離技術(shù)和通過立體化學(xué)控制合成，能夠得到以基本上純的形式存在的這樣的異構(gòu)體。另外，在本申請書中討論的結(jié)構(gòu)和其它的化合物和部分也包括它們的所有互變異構(gòu)體。
通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，從市場上可以得到的化合物可合成本發(fā)明化合物。流程I描述其中Q為NH的本發(fā)明化合物的合成通法。 流程1樹脂結(jié)合的FMOC保護的氨基酸可從Novabiochem購得。通過用20％在DMF中的哌啶處理30分鐘，能夠?qū)被┒嗣摮Ｗo。然后用在DMF中的乙酸和多種市場上可以得到的α-酮酯處理胺。然后用氫化劑例如NaBH3CN處理生成的Schiff堿以轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的仲胺。通過用強酸例如三氟乙酸處理，能夠從樹脂除去酸。如果需要，用相應(yīng)的醇處理，能夠酯化生成的酸。經(jīng)常規(guī)方法分離在此制備的非對映體。
通過本領(lǐng)域熟知的方法，可合成其中Q為CHSH的本發(fā)明硫醇化合物。在以下流程2中概述樣品的合成。 流程2例如，通過用適宜取代的丙烯酸加熱硫羥乙酸以形成硫代酸酯，可合成硫醇。通過用堿處理，能夠把硫代酸酯水解為硫醇。如果需要，通過用合適的醇處理酸化合物以形成要求的酯，可以形成酯。通過常規(guī)方法例如手性HPLC色譜法，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠分離生成的對映體。 流程3使用在流程3中概述的方法，可合成本發(fā)明咪唑化合物。在中性至堿性溶液中，胺與α-酮酸的羰基反應(yīng)，形成Schiff堿，其易于轉(zhuǎn)化為仲胺，形成產(chǎn)物。通過用適宜鹵代化合物例如芐基溴處理α-保護的組氨酸，可合成本發(fā)明取代的咪唑化合物。然后在流程3所示的合成中，取代組氨酸衍生物可用于替代組氨酸。
使用在流程4中概述的方法，也可合成本發(fā)明化合物。在流程4中，通過在-78℃下用在二氯甲烷中的三氟乙酸酐和2，6-二甲基吡啶處理乙基酯，合成苯基ACE-2抑制化合物。向該混合物中，加入亮氨酸甲酯以形成仲胺。然后用堿水溶液處理酯以形成生成的二酸。在實施例部分中給出另外的合成實施例。 流程4本發(fā)明也涉及治療患者中與ACE-2有關(guān)的疾病的方法，通過給予患者治療有效量的ACE-2抑制化合物，以治療與ACE-2有關(guān)的疾病。
術(shù)語“與ACE-2有關(guān)的疾病”包括那些與ACE-2、ACE-2底物、或其代謝途徑產(chǎn)物有關(guān)的疾病。與ACE-2有關(guān)的疾病也包括其特征在于ACE-2活性、和/或ACE-2底物水平和/或ACE-2代謝產(chǎn)物的異常水平的疾病。與ACE-2有關(guān)的疾病可包括例如高血壓、與高血壓有關(guān)的疾病和紊亂，且尤其是動脈高血壓。其它的與ACE-2有關(guān)的疾病包括充血性心力衰竭(CHF)。
血壓指的是血液向血管例如動脈的壁施加的壓力，且通常借助復(fù)式血壓計在橈動脈上測量，并以毫米汞柱表達。以下血壓范圍通常用作正常對異常血壓的標準正常血壓相當于小于85mm Hg的舒張性血壓；高的正常血壓相應(yīng)介于85至89mm Hg之間的舒張性血壓；較輕微的的高血壓相應(yīng)介于90-104mm Hg之間的舒張性血壓；中等高血壓相應(yīng)介于105至114mm Hg之間的舒張性血壓；而嚴重高血壓相應(yīng)高于115mm Hg的舒張性血壓?；谑湛s性血壓(當舒張性血壓小于90mm Hg時)，也能夠測量異常血壓。因此，正常血壓相應(yīng)小于140mm Hg的收縮性血壓；臨界收縮高血壓相應(yīng)介于140至159mm Hg之間的收縮性血壓；且分開的收縮高血壓相應(yīng)高于160mm Hg的收縮性血壓。這種分類取自CecilEssentials of Medicine，第3版，Andreoli等.W.B.Saunders公司(1993)。如果在至少兩次隨后的訪問中有兩或多個血壓測量平均值為90mm Hg或更高的舒張壓或140mm Hg的收縮壓，通常在18歲以上的成人中進行，在此也稱作“異常高血壓”的高血壓的診斷。因為兒童和孕婦具有較低的血壓，認為高于120/80(即120mm Hg收縮性血壓/80mm Hg舒張性血壓)的血壓即為異常。分開的收縮高血壓(ISH)指的是其中收縮性血壓高于160mm Hg且舒張性血壓少于85mm Hg的疾病。ISH與增加的發(fā)病率有關(guān)。
與ACE-2有關(guān)的疾病也包括其它的與血壓有關(guān)的疾病或癥狀，例如，CHF(充血性心力衰竭)、慢性心力衰竭、左心室肥大、急性心力衰竭、心肌梗塞和心肌病。
優(yōu)選與ACE-2有關(guān)的疾病為CHF。CHF其特征在于左心室維持正常血壓無力。這導(dǎo)致在交感神經(jīng)放電中壓力感受反射介導(dǎo)的反射增加，交感神經(jīng)放電刺激心肌搏動更快和更強，也增加外周血管收縮以至于后載荷上升且衰竭心肌上的載荷增加(Lionel H. Opie，Drugsfor the，第3版，W.B.Saunders公司，1991)。過度腎上腺素能活性也導(dǎo)致腎素-血管緊張素系統(tǒng)活性增強，進而增加外周血管阻力且通過刺激醛固酮分泌而使液體潴留(水腫)。另外，血管緊張素促進釋放降壓素以有助于異常體積調(diào)節(jié)和嚴重CHF中的低鈉血癥。左心室的過度載荷也導(dǎo)致血管肌肉肥大，導(dǎo)致其收縮性減少，進一步有助于疾病。
早先已發(fā)現(xiàn)血管舒張劑例如ACE-甲制劑在治療CHF和減少發(fā)病率上是有效的。本發(fā)明設(shè)計其中抑制ACE化合物與ACE-2調(diào)節(jié)化合物同時或分開給予患者的治療方法和組合物。抑制ACE化合物是用于治療CHF的特別優(yōu)選治療藥物，因為它們能夠抑制包括血管緊張素-腎素-醛固酮在內(nèi)的有害神經(jīng)元介質(zhì)粘性循環(huán)。因此，相信也調(diào)節(jié)血管緊張素水解的ACE-2抑制化合物也將用于治療和預(yù)防CHF。
與ACE-2有關(guān)的疾病也包括與調(diào)節(jié)細胞增殖例如平滑肌細胞增殖的狀態(tài)。分布動脈內(nèi)膜中的平滑肌細胞增殖為動脈粥樣硬化、血管手術(shù)后和冠狀血管成形術(shù)后血管狹窄的主要原因。幾種動物研究表明腎素-血管緊張素系統(tǒng)在其對損傷的血管應(yīng)答中起重要作用。通過血管緊張素II受體(亞型ATI)介導(dǎo)血管緊張素II在心血管系統(tǒng)中細胞生長和復(fù)制上的刺激作用，該系統(tǒng)可在一些受治療者中導(dǎo)致心肌肥大和導(dǎo)管和阻力血管的肥大或增生(Rosendorff C.J.Am.Coll.Cardiol.(1996)28803)。例如ACE在動脈粥樣硬化中的重要性在Malik等，Am.Heart J(1997)134514中被進一步描述。它也顯示血管緊張素引起與幾種早期應(yīng)答基因mRNA(c-fos、c-jun、jun B、Egr-1和c-myc)、血管緊張素原和轉(zhuǎn)移生長因子β誘導(dǎo)有關(guān)的肌細胞肥大和成纖維細胞增殖(TGFβ)(Rosendorff C.J.Am.Coll.Cardiol.(1996)28803-12；Paquet等.J.Hypertens.(1990)8565-72)。
因此，在一個實施方案中，本發(fā)明涉及減少或抑制平滑肌細胞增殖的方法，該方法包括通過給予ACE-2抑制化合物，給予受治療者有效量的組合物?？扇砘蚓植拷o予ACE-2抑制化合物，例如在血管損傷的部位上。
與ACE-2有關(guān)的疾病的其它實例包括腎疾病或紊亂，例如腎衰竭。血管緊張素和ACEs在成人的腎功能和結(jié)構(gòu)的完整性的發(fā)育和維持是重要的(參見例如，Hilgers.Semin.Nephrol.(1997)17492)。通過包括至少部分由血管緊張素II介導(dǎo)的增強小球內(nèi)壓力和血漿蛋白超濾在內(nèi)的作用，慢性腎疾病發(fā)展為晚期腎衰竭。據(jù)報道ACE抑制劑減少毛細血管內(nèi)壓力且改善小球體積-選擇性功能(參見例如，Ruggenenti和Remuzzi Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.(1997)6489)。因此，至少部分基于ACE-2在腎中表達且與ACE同源的事實，ACE-2調(diào)節(jié)化合物單獨或與已知ACE抑制劑聯(lián)合可用于治療和預(yù)防腎疾病或紊亂。
術(shù)語與另一個治療藥物“聯(lián)合”包括聯(lián)合給予ACE-2抑制劑和其它的治療藥物，首先給予ACE-2抑制劑隨后給予其它的治療藥物和首先給予其它的治療藥物隨后給予ACE-2抑制劑。其它的治療藥物可為本領(lǐng)域已知的治療、預(yù)防或減少與ACE-2有關(guān)的疾病的癥狀的任何藥物。另外，當與給予ACE-2抑制化合物聯(lián)合給藥時，其它的治療藥物可為有利于患者的任何藥物。另外，ACE-2化合物也能夠與用于與ACE-2有關(guān)的疾病的其它的已知療法聯(lián)合給藥。治療與ACE-2有關(guān)的疾病例如心血管疾病、腎疾病、炎癥等的其它的方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的。在一個實施方案中，其它的治療藥物可為ACE抑制劑。
與ACE-2有關(guān)的疾病也包括多種其它的腎上腺素能亢進癥狀，例如急性心肌梗塞(AMI)和一些室性心律失常。本發(fā)明另外提供治療與kinetensin有關(guān)的癥狀的方法。如在此描述的那樣，ACE-2從kinetensin裂解C-末端氨基酸(亮氨酸)。kinetensin為一種具有SEQ ID號23的九個氨基酸肽(參見U.S.S.N.09/163,648)，據(jù)報道當皮內(nèi)注射進入到大鼠中時，它從肥大細胞中誘導(dǎo)劑量-依賴性釋放組胺，以及誘導(dǎo)劑量-依賴性增加血管通透性(Sydbom等.Agents Actions(1989)2768)。因此，調(diào)節(jié)kinetensin的血漿和/或組織水平，例如通過調(diào)節(jié)來自kinetensin的C-末端氨基酸的水解，應(yīng)有用于治療通過異常kinetensin水平引起或促發(fā)的疾病。這樣的癥狀包括那些通過從肥大細胞異常組胺釋放和/或異常血管通透性引起或促進的癥狀。因為過度組胺釋放與局部或全身變應(yīng)性反應(yīng)有關(guān)，包括exzema、哮喘、過敏性休克，這些癥狀包括在“與ACE-2有關(guān)的疾病”的定義中。
與ACE-2有關(guān)狀態(tài)的其它的實例包括例如SIRS(系統(tǒng)性炎性反應(yīng)綜合征)、膿毒、多損傷、炎性腸道疾病、急性和慢性疼痛、類風濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎中的骨壞死及牙周病、痛經(jīng)、早產(chǎn)、病灶性損傷后腦水腫、彌散性軸突損傷、中風、重灌注損傷和蛛網(wǎng)膜下出血后的腦血管痙攣、變應(yīng)性疾病包括哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、傷口愈合和瘢痕形成。
至少基于睪丸中ACE-2的存在，與ACE-2有關(guān)的疾病也可包括不育癥或其它與配子成熟有關(guān)的疾病。另外，與ACE-2有關(guān)的疾病也可包括認知疾病和與緩激肽和des-Arg緩激肽有關(guān)的疾病。
術(shù)語“治療”包括治愈以及改善至少一種疾病狀態(tài)、疾病或紊亂的癥狀。
術(shù)語“給予”包括使ACE-2抑制化合物顯示其預(yù)計的功能，例如抑制ACE-2的功能和/或治療與ACE-2有關(guān)的疾病的給藥途徑。能夠使用的給藥途徑的實例包括非腸道注射(例如，皮下、靜脈和肌內(nèi))、腹膜內(nèi)注射、口服、吸入和經(jīng)皮。注射可以為大劑量注射或可以是連續(xù)輸注。依給藥途徑而定，ACE-2抑制化合物能夠用選擇的材料包衣或在選擇的材料中處理以保護它避免對藥物發(fā)揮其預(yù)計功能的能力存在不利的影響的自然條件。ACE-2抑制化合物可單獨給予或與藥學(xué)上可接受的載體一起給予。另外，ACE-2抑制化合物可作為ACE-2抑制化合物的混合物給藥，它也能夠與藥學(xué)上可接受的載體一起給藥。在ACE-2介導(dǎo)的疾病發(fā)生前或在ACE-2介導(dǎo)的疾病發(fā)生后，可給予ACE-2抑制化合物。ACE-2抑制化合物也可作為在體內(nèi)能轉(zhuǎn)化為另一種形式的前藥給予。
術(shù)語化合物的“治療有效量”為治療或預(yù)防與ACE-2有關(guān)的疾病，例如預(yù)防多種與ACE-2有關(guān)疾病的形態(tài)學(xué)和軀體癥狀所必需或足夠的量。有效量能夠依賴這樣的因素例如受治療者的體積和體重、疾病的種類或具體的ACE-2抑制化合物而變化。例如，ACE-2抑制化合物的選擇可影響所構(gòu)成“有效量”。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠研究以上提及的因素且可確定關(guān)于ACE-2抑制化合物的有效量而無須進行不適當?shù)膶嶒灐?br> 經(jīng)細胞培養(yǎng)或?qū)嶒瀯游锷系臉藴仕帉W(xué)方法，例如測定LD50(50％群體的致死劑量)和ED50(50％群體的治療有效劑量)，通過考慮ACE-2抑制化合物的毒性和治療效力，能夠確定有效量。毒性與治療作用之間的劑量比值為治療指數(shù)且其可表示為LD50/ED50的比值。呈現(xiàn)大的治療指數(shù)的化合物為優(yōu)選。當可使用呈現(xiàn)毒副作用的化合物時，應(yīng)精心設(shè)計傳遞系統(tǒng)以使這樣的化合物瞄準受影響組織的部位以便于對未感染的細胞潛在的損害減至最小且因此降低副作用。
本發(fā)明也涉及包含藥學(xué)上可接受的載體和有效量的治療與ACE-2有關(guān)疾病的ACE-2抑制化合物的藥用組合物。
如在此使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”意指藥學(xué)上可接受的材料、組合物或媒介物，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包囊材料，在患者中參與運載或轉(zhuǎn)運本發(fā)明化合物或到達患者，以使它能發(fā)揮其預(yù)計的功能。一般這樣的化合物從一個器官或身體的部分，運載或轉(zhuǎn)運至另一個器官或身體的部分。在與制劑的其它的成分相適配且不損害患者的意義上，每一種載體必須是可接受的。能夠用作藥學(xué)上可接受的載體的材料的一些實例包括糖類例如乳糖、葡萄糖和蔗糖，淀粉例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉，纖維素和其衍生物例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素，粉末狀黃原膠、麥芽、明膠、滑石粉，賦形劑例如可可豆脂和栓劑臘，油類例如花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和豆油，二元醇例如丙二醇、多元醇例如甘油、山梨醇、甘露糖醇和聚乙二醇，酯類例如油酸乙酯和月桂酸乙酯、瓊脂、緩沖劑例如氫氧化鎂和氫氧化鋁、藻酸、無熱原水、等滲鹽水、林格氏溶液、乙醇、磷酸鹽緩沖溶液和在藥用制劑中使用的其它的非毒性可適配物質(zhì)。
如以上列出的那樣，一些實施方案的本發(fā)明化合物可包含堿性官能團，例如氨基或烷基氨基，且因此能夠與藥學(xué)上可接受的酸形成藥學(xué)上可接受的鹽。在這方面術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指的是本發(fā)明化合物的相對無毒性的、無機酸和有機酸加成鹽。在最終分離和純化本發(fā)明化合物期間，或通過使以其游離堿形式存在的純的本發(fā)明化合物與合適的有機酸或無機酸反應(yīng)分離，且因此形成分離的鹽，可就地制備這些鹽。代表性的鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、枸櫞酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘甲酸鹽(napthylate)、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽和月桂酰磺酸鹽等(參見例如，Berge等.(1977)，“藥用鹽類(Pharmaceutical Salts)”，J.Pharm.Sci.661-19)。
在其它的情況中，本發(fā)明化合物可包含一或多個酸性官能團，且因此能夠與藥學(xué)上可接受的堿形成藥學(xué)上可接受的鹽。在這些情況中術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指的是本發(fā)明化合物的相對無毒性的、無機堿和有機堿加成鹽。在最終分離和純化化合物期間，或通過使以其游離酸形式存在的純的本發(fā)明化合物與合適的堿例如藥學(xué)上可接受的金屬陽離子，與氨、或與藥學(xué)上可接受的有機伯、仲或叔胺的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽反應(yīng)分離，可類似地就地制備這些鹽。代表性堿或堿土金屬鹽包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁鹽等。用于形成堿加成鹽的代表性有機胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。
潤濕劑、乳化劑和潤滑劑例如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、矯味劑和香味劑、防腐劑和抗氧化劑也能夠存在于本發(fā)明中。
藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實例包括水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；油溶性抗氧化劑，例如棕櫚酸抗壞血酸酯、叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、叔丁基對羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等；及金屬螯合劑，例如枸櫞酸、乙二胺、四乙?；叶?EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
本發(fā)明制劑包括適宜于口服、鼻、局部、經(jīng)皮、頰、舌下、直腸、陰道和/或非腸道給藥的那些制劑。制劑可便利以劑型存在且可經(jīng)藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任何方法制備?？膳c載體材料聯(lián)合以產(chǎn)生單一劑型的量的活性成分將一般為化合物產(chǎn)生治療作用的量。通常，在百分之一百范圍以外，該量將處于大約百分之一至大約百分之九十九，優(yōu)選介于大約百分之五至大約百分之七十，最優(yōu)選介于大約百分之十至大約百分之三十的活性成分的范圍內(nèi)。
制備這些制劑或組合物的方法包括使本發(fā)明化合物與載體和任選一或多種輔助成分混合的步驟。通常，通過使本發(fā)明化合物與液體載體、或細分的固體載體、或兩者均勻且緊密混合，然后，如果必要，使產(chǎn)物成型，制備制劑。
適宜于口服給藥的本發(fā)明制劑可以膠囊劑、扁囊劑、丸劑、片劑、錠劑(使用矯味基質(zhì)，通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)、粉劑、顆粒劑，或作為在水或非水液體中的溶液劑或混懸劑存在、或作為水包油或油包水液體乳劑存在、或作為酏劑或糖漿劑、或作為軟錠劑(使用惰性基質(zhì)、例如明膠和甘油、或蔗糖和阿拉伯膠)和/或作為漱口劑等形式存在，每劑型包含預(yù)確量的作為活性成分的本發(fā)明化合物。本發(fā)明化合物也可作為大丸劑、藥糖劑或糊劑給藥。
在本發(fā)明用于口服給藥的固體劑型(膠囊劑、片劑、丸劑、糖錠劑、粉劑、顆粒劑等)中，活性成分與一或多種藥學(xué)上可接受的載體例如枸櫞酸鈉或磷酸二鈣和/或以下任何物質(zhì)混合，包括填充劑或增充劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸，粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠，濕潤劑，例如甘油，崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、一些硅酸鹽和碳酸鈉，溶液阻滯劑，例如石蠟，吸收促進劑，例如季銨化合物、潤濕劑，例如單硬脂酸辛醇和甘油酯，吸收劑，例如高嶺土和膨潤土、潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉和它們的混合物，及著色劑。在膠囊劑、片劑和丸劑情況中，藥用組合物也可包含緩沖劑。使用這樣的賦形劑例如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等，相似類型的固體組合物也可用作軟和硬填充明膠膠囊劑的填充劑。
可通過任選與一或多種輔助成分壓制或模壓，制備片劑。使用粘合劑(例如，明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如，淀粉乙醇酸鈉或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑，可制備壓制片劑。通過在合適的機械中模壓用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀化合物的混合物，可制備模壓片劑。
本發(fā)明藥用組合物的片劑和其它的固體劑型例如糖錠劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可任選被刻痕或用包衣劑和殼體例如腸包衣和藥劑領(lǐng)域熟知的其它的包衣劑制備。使用例如以不同比例存在以提供所需釋放性質(zhì)的羥丙基甲基纖維素、其它的聚合物物質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球，也可配制它們以便提供緩釋和控釋的本文的活性成分。經(jīng)例如通過細菌滯留濾膜過濾，或經(jīng)摻入能夠溶于滅菌水的滅菌固體組合物形式的滅菌劑，或臨用前摻入一些其它的滅菌注射介質(zhì)，可將它們滅菌。這些組合物也任選包含遮光劑且具有屬于僅能釋放活性成分，或任選以延遲的方式，優(yōu)選在胃腸道特定部位釋放的組合物。能夠使用的包埋組合物的實例包括聚合物物質(zhì)和臘?；钚猿煞忠材軌蛞晕⒛倚问酱嬖?，如果合適，包含一或多種上述的賦形劑。
用于口服給予本發(fā)明化合物的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑。除活性成分以外，液體劑型可包含本領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑，例如水或其它的溶劑、助溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油類(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃甲醇、聚乙二醇和山梨醇的脂肪酸酯和它們的混合物。除惰性稀釋劑以外，口服組合物也能夠包含佐劑，例如潤濕劑、乳化劑、助懸劑、甜味劑、矯味劑、著色劑、香味劑和防腐劑。
除活性化合物以外，混懸劑可包含助懸劑例如乙氧基異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨酸酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂和黃原膠，及其混合物。
用于直腸或陰道給藥的本發(fā)明藥用組合物的制劑可作為栓劑存在，其可通過使一或多種本發(fā)明化合物與一或多種包括例如可可脂、聚乙二醇、栓劑臘或水楊酸酯在內(nèi)的適宜的非刺激性賦形劑或載體混合來制備，且其在室溫下為固體，但在體溫下為液體，并因此在直腸或陰道腔內(nèi)融化且釋放出活性化合物。
適宜于陰道給藥的本發(fā)明制劑也包括陰道栓劑、棉塞劑、霜劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧劑，這些制劑含有本領(lǐng)域己知是合適的此類載體。
用于本發(fā)明化合物局部或經(jīng)皮給藥的劑型包括粉劑、噴霧劑、膏劑、糊劑、霜劑、洗劑、凝膠劑、溶液劑、貼劑和吸入劑。在滅菌條件下，活性化合物可與藥學(xué)上可接受的載體混合，且可與任何防腐劑、緩沖劑或其可需要的拋射劑混合。
除本發(fā)明活性化合物以外，膏劑、糊劑、霜劑和凝膠劑可包含賦形劑例如動物和植物脂肪、油類、臘類、石蠟、淀粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨潤土、硅酸、滑石粉和氧化鋅或它們的混合物。
除本發(fā)明化合物以外，粉劑和噴霧劑可包含賦形劑例如乳糖、滑石粉、硅酸、氫氧化鋁、硅酸鈣和聚酰胺粉末或這些物質(zhì)的混合物。噴霧劑能夠另外包含常規(guī)拋射劑，例如氯氟烴類和揮發(fā)性不飽和烴類，例如丁烷和丙烷。
經(jīng)皮貼劑具有提供控制傳遞本發(fā)明化合物至身體的優(yōu)點。通過將化合物溶解或分散在合適的介質(zhì)中，能夠制備這樣的劑型。也能夠使用吸收增強劑以增加化合物穿透皮膚的流量。通過提供速率控制膜或在聚合物基質(zhì)或凝膠中分散活性化合物，能夠控制這樣的流量的速率。
眼科用制劑、眼膏劑、粉劑、溶液劑等也包括本發(fā)明范圍內(nèi)。
適宜于非腸道給藥的本發(fā)明藥用組合物包含與一或多種藥學(xué)上可接受的滅菌等滲水或非水溶液、分散液、懸浮液或乳劑或其臨用前可重新配制到滅菌注射溶液或分散液中的滅菌粉末組合的一或多種本發(fā)明化合物，它可包含抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑、使制劑與接受者的血液等滲的溶質(zhì)、助懸劑或增稠劑。
可用于本發(fā)明藥用組合物的適宜的水和非水溶液載體的實例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和它們的適宜的混合物，植物油例如橄欖油和注射有機酯例如油酸乙酯。例如，通過使用包衣材料例如卵磷脂，通過在分散劑中維持需要的粒子大小，和通過使用表面活性劑，能夠維持合適的流動性。
這些組合物也可包含輔助劑例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。通過包含多種抗菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等，可確保預(yù)防微生物的作用。也可要求在組合物中包含等滲劑，例如糖、氯化鈉等。另外，通過包含延遲吸收的試劑例如一硬脂酸鋁和明膠，可使注射藥用劑型的吸收延長。
在一些情況中，為延長藥物的作用，可要求減緩來自皮下或肌內(nèi)注射的藥物的吸收。這通過使用具有不佳水溶性的結(jié)晶或無定形材料的液體懸浮液來實現(xiàn)。那么藥物的吸收速率依其溶出速率而定，所述速率又可依晶體大小和結(jié)晶形式而定?；蛘撸ㄟ^把藥物溶解或懸浮在油媒介物中，實現(xiàn)非腸道給藥的藥物形式的延遲吸收。
通過在可生物降解的聚合物例如聚交酯-聚乙醇酸交酯中形成受試化合物的微囊基質(zhì)，制備注射貯庫型劑型。依藥物對聚合物的比率和所使用的具體聚合物的性質(zhì)而定，能夠控制藥物釋放速率。其它的可生物降解的聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。通過將藥物包埋在與身體組織可適配的脂質(zhì)體或微乳中，也可制備注射貯庫型制劑。
可口服、非腸道、局部或直腸給予本發(fā)明制劑。當然它們通過適合于每一種給藥途徑的形式給予。例如，它們可以以經(jīng)片劑或膠囊形式、注射劑、吸入劑、眼洗劑、膏劑、栓劑等給藥，經(jīng)注射劑、吸入劑、眼洗劑、膏劑、栓劑等、經(jīng)注射、輸注或吸入給藥，經(jīng)洗劑或膏劑局部給藥，及經(jīng)栓劑直腸給藥。口服給藥為優(yōu)選。
在此使用的術(shù)語“非腸道給藥”和“非腸道給予”意指除經(jīng)腸和局部給藥以外的給藥模式，通常是經(jīng)注射給藥，包括(但不局限于)靜脈、肌內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眼眶內(nèi)、心臟內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)腔內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊椎內(nèi)和胸骨內(nèi)注射和輸注。
在此使用的術(shù)語“全身給藥”、“全身給予”、“外周給藥”和“外周給予”意指的給予化合物、藥物或其它的材料，以至于它進入到患者的系統(tǒng)中且因此經(jīng)歷代謝過程和其它的像例如皮下給藥一樣的過程，而并非直接給予進入到中樞神經(jīng)系統(tǒng)。
經(jīng)以下任何合適的給藥途徑，包括口服、鼻腔(例如經(jīng)噴霧劑)、的直腸、陰道內(nèi)、非腸道、腦池內(nèi)和局部給藥、例如經(jīng)粉劑、膏劑或滴劑給藥，包括口腔和舌下給藥，可將這些化合物給予人和其它動物以用于治療。
不考慮所選擇的給藥途徑，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法，可將以適宜的水合物形式使用的本發(fā)明化合物和/或本發(fā)明藥用組合物配制成藥學(xué)上可接受的劑型。
本發(fā)明藥用組合物中的活性成分的實際劑量水平可以變化，以便獲到對具體患者達到所需的有效治療應(yīng)答的一定量的活性成分、組合物和給藥模式，而對患者沒有毒性。
選擇的劑量水平將依以下多種因素而定，包括所使用的本發(fā)明的具體化合物或它們的酯、鹽或酰胺的活性、給藥途徑、給藥時間、所使用具體化合物的排泄速率、治療的持續(xù)時間、用于與所使用具體化合物聯(lián)合的其它藥物、化合物和/或材料、受治療患者的年齡、性別、體重、癥狀、一般健康和先前的治療史等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中熟知的因素。
具有本領(lǐng)域普通技術(shù)的醫(yī)師或獸醫(yī)能夠易于確定并開出有效量的所需藥用組合物的處方。例如，醫(yī)師或獸醫(yī)能夠在比所需要的劑量較低的所用本發(fā)明化合物的劑量開始以得到所需的治療效果并逐漸增加劑量直到達到所需的作用。
當單獨給予本發(fā)明化合物是可能時，優(yōu)選作為藥用組合物給予化合物。
給藥方案能夠影響組成有效量。與ACE-2有關(guān)的疾病發(fā)生前或發(fā)生后給予患者可抑制ACE-2。另外，能夠每天或連續(xù)給予幾種分開的劑量以及交差(staggered)劑量，或者可連續(xù)灌注給予，或者能夠是大劑量注射。另外，如由治療或預(yù)防情形的緊急狀態(tài)指明的那樣，可按比例增加或減少ACE-2抑制化合物的劑量。
本發(fā)明也包括通過給予所述患者與有效量的ACE抑制劑聯(lián)合的有效量的ACE-2抑制化合物用于治療患者與ACE-2有關(guān)的疾病的方法。優(yōu)選與ACE-2有關(guān)的疾病包括例如充血性心力衰竭、血壓疾病、細胞增殖疾病、腎疾病、與kinetensin有關(guān)的疾病、與炎癥有關(guān)的疾病或變應(yīng)性疾病。優(yōu)選與ACE-2有關(guān)的疾病為與血壓有關(guān)的疾病。
術(shù)語“ACE抑制劑”打算包括減少ACE活性的化合物。ACE抑制劑的實例為本領(lǐng)域熟知的。優(yōu)選ACE抑制劑包括例如卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利和雷米普利。
術(shù)語與ACE抑制劑的“聯(lián)合”包括同時給予ACE-2抑制劑和ACE抑制劑，首先給予ACE-2抑制劑，隨后給予ACE抑制劑和首先給予ACE抑制劑，隨后給予ACE-2抑制劑。本領(lǐng)域任何在治療學(xué)上有用的ACE抑制劑能夠用于本發(fā)明的方法。
本發(fā)明涉及用于抑制ACE-2靶肽水解的方法，該方法通過使ACE-2與ACE-2抑制化合物和ACE-2靶肽接觸，由此抑制ACE-2靶肽水解。
術(shù)語“靶肽”打算包括可經(jīng)ACE-2水解的化合物。靶肽的實例包括血管緊張素、激肽和kinetensin。
通過以下實施例進一步闡明本發(fā)明，所述實施例不應(yīng)構(gòu)成限制。貫穿申請引用的所有參考文獻和公開的專利和專利申請的內(nèi)容在此通過引用結(jié)合到本文中。本發(fā)明示例實施例1ACE和ACE-2多肽的生成如下在CHO細胞中生成ACE和ACE-2多肽。通過使5’RACE克隆(cchr 002)的EcroRJ/Afl III片段和起源庫的Afl III/Not I片段克隆到pc DNA 3.1(離體遺傳)的EcoRI/Not I部位，生成全長ACE-2表達載體(pFLA-2)。通過將具有絲氨酸迅速插入前跨膜域后的終止密碼子的小的PCR片段亞克隆到pACE-2中，生成用于分泌ACE-2(pMD 37)的表達載體。從James Riordan得到睪丸ACE cDNA且亞克隆到用于表達的pc DNA 3.1中。為了轉(zhuǎn)染，在第0天，在37℃下，于濕潤的5％CO2孵育器中，將在無血漿Ultra CHO培養(yǎng)基(Biowhittaker)中維持的CHO K1細胞接種1×106細胞/10cm盤中，且在第1天按照生產(chǎn)商的說明書用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺轉(zhuǎn)染。簡言之，在Opti-MEM培養(yǎng)基中，將10μg的DNA與40μl脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺結(jié)合且在細胞上將混合物孵育5-6小時。然后將Ultra CHO培養(yǎng)物加入到細胞中且在37℃下將它們孵育過夜。在第2天，改換培養(yǎng)基且在第4天收集培養(yǎng)基。對于以下實施例，在Centriplus 30濃縮器(Amicon)中，將包含分泌ACE-2蛋白的條件培養(yǎng)基濃縮。實施例2ACE-2的純化以下方案為用于隨后的實施例的ACE-2純化的方案的實施例。
在pH 6.5和4℃下，將ACE-2 CHOKl細胞上清液透析進入到50mM Bis Tris丙烷/Tris HCl中過夜。然后使用0.2濾膜單位將透析的上清液過濾。然后把濾液填充到Mono Q陰離子交換柱上且用0-250mM NaCl梯度洗脫。將包含ACE-2(如經(jīng)Coumassie Blue染色十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-Page)凝膠或蛋白質(zhì)印跡測定的那樣)的部分合并且加入1M Am2SO4直到最終濃度為大約1M。然后把這些部分離心，且保留上清液。然后將上清液填充到苯基superose疏水柱上且在pH 7下于100mM NaPi中用1M-0.5M Am2SO4反相梯度洗脫。然后于4℃將包含ACE-2的部分合并且透析到20mMHEPES/15mM NaCl(pH7)中過夜。然后在最后時間通過注射器過濾透析部分。實施例3化合物D和E的合成 流程5用在DMF(約100mL)中的20％哌啶將Fmoc-Leu-Wang樹脂(從Novabiochem可市售得到，載荷0.8mmol/g，2.61g，2.09mmol)處理30分鐘。然后過濾樹脂并用DMF、THF、CH2Cl2和甲醇洗滌孔。然后把樹脂懸浮于52mL的DMF中，并加入乙酸(6.5mL)和2-氧代-4-苯基丁酸乙酯(9.8mL，52.20mmol)。將該漿狀物振搖10分鐘且加入NaBH3CN(5.26g，83.60mmol)，這導(dǎo)致放出熱和氣體(Blackburn等.Biorg.and Med.Chem.Lett.(1997)7(7)823-828)。把反應(yīng)混合物密封并振搖2天。然后經(jīng)過濾從反應(yīng)混合物中分離樹脂并用甲醇、CH2Cl2、在THF中的10％乙酸、THF、DMF和甲醇連續(xù)洗滌。然后把樹脂懸浮于大約10mL在CH2Cl2中的50％三氟乙酸中并振搖30分鐘。經(jīng)過濾從反應(yīng)混合物中分離樹脂，并用100mL在CH2Cl2中的50％三氟乙酸將樹脂再次處理30分鐘。過濾后，用50mL在CH2Cl2中的50％三氟乙酸洗滌樹脂。濃縮合并的濾液，得到褐色的油。經(jīng)柱層析法(SiO2，7.5∶0.5，CH2Cl2∶EtOAc含有0.1％乙酸的甲醇)純化該油，得到2批物料-172mg所需產(chǎn)物和192mg更高Rf的物料污染的所需產(chǎn)物(所需產(chǎn)物Rf0.45，污染物Rf0.55在7∶2∶1 CH2Cl2∶EtOAc含有0.1％乙酸的甲醇)。經(jīng)1H NMR將兩批物料清楚確定。經(jīng)HPLC(C18柱，用100％的95％H2O、1％乙腈、0.1％甲酸開始梯度洗脫，用60％的95％H2O、1％乙腈、0.1％甲酸和40％的95％乙腈、0.5％H2O、0.1％甲酸結(jié)束梯度洗脫，30mL/min.)進一步純化172mg所需的物料。該HPLC方法分離單酯的2種非對映體，得到37mg白色粉末(保留時間11.5分鐘)和58mg白色粉末(保留時間13.2分鐘)。兩個化合物確定清楚且單一異構(gòu)體經(jīng)1H NMR確定清楚。
將圓底燒瓶中含有的18mg先前洗脫的單酯溶于1mL的95％乙醇中，并加入400μL的1N NaOH水溶液。攪拌反應(yīng)混合物18小時。然后真空干燥反應(yīng)混合物并再次溶于水中。滴加2N HCl溶液直到達到pH 1且已出現(xiàn)白色沉淀。用水和乙酸乙酯研磨白色沉淀，然后真空濃縮，得到12mg白色固體，化合物D)。
將圓底燒瓶中含有的18mg后來洗脫的單酯溶于1mL的95％乙醇中并加入200μL的1N NaOH水溶液。攪拌反應(yīng)混合物18小時并經(jīng)TLC檢測未完成。加入另外100μL的NaOH水溶液，并把反應(yīng)混合物攪拌另外48小時。然后真空干燥反應(yīng)混合物并再次溶于水中。加入1N HCl溶液直到達到pH 1且已出現(xiàn)白色沉淀。加入乙酸乙酯并用乙酸乙酯(含有2.5％THF)將兩相混合物提取兩次。用鹽水提取合并的有機相，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮，得到白色固體(化合物E)。實施例4化合物G的合成
流程6通過加熱硫羥乙酸和甲基丙烯酸形成硫代酯(Neustadt等.，J.Med.Chem.(1994)372461-2476)合成化合物G。然后用1N NaOH(水溶液)和MeOH處理硫代酯并水解為硫醇(化合物G)。實施例5化合物EA和EB的合成將炔丙基甘氨酸(1當量)溶于苯和甲醇(50∶50)的混合物中，并向反應(yīng)混合物中滴加TMS重氮甲烷在己烷中的溶液(2M，1.5當量)。在室溫下，把該反應(yīng)混合物攪拌6小時，然后濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷中，并用飽和NaHCO3溶液洗滌生成的溶液，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，并濃縮，得到為油的所需酯。
將4-苯基-2-羥基-丁酸乙酯(從LiAlH4還原4-苯基-2-氧代-丁酸乙酯以外消旋形式制備)溶于二氯甲烷中，并把溶液冷卻至-78℃。然后滴加三氟甲磺酸酐(1.05當量)和2，6-二甲基吡啶(1.1當量)。在-78℃下攪拌反應(yīng)混合物1小時并然后使之溫熱至室溫。向反應(yīng)混合物中加入水，并分離有機相，用鹽水洗滌，干燥，過濾，并濃縮，得到黃色油。經(jīng)柱層析法(硅膠，10％乙酸乙酯/己烷)純化該油，得到為油的要求的三氟乙酸酯(Walker，Tetrahedron，(1997)372461-2476)。
將以上制備的三氟乙酸酯溶于二氯甲烷中，并把溶液冷卻至-78℃。加入2，6-二甲基吡啶(1.1當量)，然后滴加炔丙基甘氨酸的甲基酯(以上制備)在二氯甲烷中的溶液。在-78℃下攪拌反應(yīng)混合物1小時，然后使之溫熱至室溫且攪拌過夜。向反應(yīng)混合物中加入水，并分離有機相，用水和鹽水洗滌，干燥，過濾并濃縮，得到黃色油。經(jīng)柱層析法(Biotage Quad 3，硅膠，15％乙酸乙酯/己烷)純化該油，得到為油的所需仲胺。
將以上制備的仲胺溶于脫氣的DMF中，并向該溶液中加入2-溴代吡啶(1.1當量)。依次加入四(三苯基膦)鈀(0.05當量)、三乙胺(2.0當量)和碘化銅(0.2當量)。使反應(yīng)混合物避免光照并攪拌3小時。加入水，并用乙酸乙酯把該混合物提取3次。用水和鹽水洗滌合并的有機相，干燥，過濾，并濃縮，得到棕色油。經(jīng)柱層析法(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)純化該油，得到黃色半固體。經(jīng)柱層析法(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)進一步純化，得到為無色油的所需炔基吡啶二酯(Wallace等.J.Med.Chem.(1998)411513-1523)。
將以上制備的二酯溶于乙醇中，并滴加1N的NaOH溶液(8.0當量)。在室溫下，把溶液攪拌1小時。濃縮反應(yīng)混合物，并使殘余物溶于水中。用2N HCl溶液把溶液酸化至pH 1，然后濃縮，得到白色固體。把該固體溶于水中并吸附到DOWEX樹脂(陽離子的，預(yù)先洗滌過的)上且首先用水且然后用2％吡啶/水洗脫來純化，濃縮堿性部分，得到黃色固體。經(jīng)HPLC進一步純化該物質(zhì)，得到兩種二酸(EA和EB)。實施例6化合物EZ和FA的合成用三苯甲基氯化物(28.5g，1.02mol)處理Boc-His-OMe(0.92mol，25g)在甲苯(300mL，0.3M)和三乙胺(1.1mol，15.5mL)中的懸浮液。在60℃下，把反應(yīng)物加熱24小時(Anthony，N.J.，等.J.Med.Chem.，(1999)423356-3368；Kitajima，Y.，等.Bull.Chem.Soc.Japan，(1982)553870-3872)。用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物并用飽和NaHCO3(3x)和鹽水(1x)洗滌。干燥(MgSO4)，且真空濃縮后得到棕色油。從乙醚、己烷和甲醇研磨得到37.6g(80％)為白色固體的三苯甲基保護的組氨酸衍生物。
在N2氣氛下，將三苯甲基保護的組氨酸衍生物(5.0g，9.77mmol)懸浮于無水MeCN(10mL，1M)中并溫和加熱至35℃，在該溫度下，混合物變得均勻。然后加入芐基溴化物(9.77mmol，1.16mL)并把反應(yīng)溫度升至55℃。15小時后，把反應(yīng)混合物濃縮完全且再次溶于MeOH(60mL，0.16M)中。將該溶液回流1小時然后完全濃縮。把固體殘余物溶于CH2Cl2中并用飽和NaHCO3(2x)和鹽水(1x)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥。經(jīng)柱層析法(0-2％MeOH在CH2Cl2中)純化粗品棕色的油，得到2.1g(58％)的N-3芐基組氨酸衍生物(經(jīng)ROESY NMR證實N-3烷基化)。
將N-3芐基組氨酸衍生物(7.8g，22mmol)溶于在二噁烷(85mL)中的4N HCl中且反應(yīng)1小時，然后完全濃縮。把生成的白色固體溶于1N NaOH(130mL)中且使用6N HCl把pH調(diào)至9-10。然后加入α-酮異己酸鈉鹽(16.6g，109mmol)。15-30分鐘后，加入NaBH3CN(4.1g，66mmol)。48小時后，使用6N HCl把pH調(diào)至3并通過Dowex(50WX2-200)墊過濾反應(yīng)混合物，先后用水和NH4OH洗脫。合并產(chǎn)物部分并純化，得到EZ和FA。實施例7EZ和FA的純化將含有鹽、未反應(yīng)的原料和非對映體(EZ和FA)的反應(yīng)混合物(21.4g)溶于水(50mL)中并通過HP-20柱以除去鹽。用蒸餾水(500mL)洗脫柱，最后用甲醇(500mL)洗滌。除去溶劑，得到殘余物(8.5g)，經(jīng)RP-18硅膠柱(MeOH∶H2O；60∶40)將殘余物層析。收集幾個部分且經(jīng)TLC監(jiān)測。合并含有非對映體的部分(3.2g)并經(jīng)制備型HPLC(Varian，C-18柱，H2O∶ACN∶0.1HCOOH)進一步純化，得到為白色無色固體的純的非對映體EZ(1.02g)和FA(1.78g)。把更多活性的非對映體EZ通過Sephadex LH-20柱以除去甲酸酯雜質(zhì)。合并產(chǎn)物部分，得到為無色粉末的EZ(0.93g)，從乙醇和甲醇混合物中將其結(jié)晶，得到無色針晶。實施例8所選擇化合物的光譜數(shù)據(jù)化合物EN1H-NMR(D2O)δ8.33(s，1H)；7.41-7.48(m，5H)；7.26(s，1H)；5.68(ABq，2H，J＝11.5Hz，δA＝5.69，δB＝5.67)；4.71(s，2H)；3.84(dd，1H，J＝7.3，6.4Hz)；3.57(t，1H，J＝7.6，6.3Hz)；3.37-3.45(m，2H)；1.76-1.80(m，1H)；1.54-1.63(m，2H)；0.93(d，6H，J＝6.6Hz)?；衔顴Z1H NMR(CD3OD)δ8.58(s，1H)，7.48(s，1H)，7.32-7.45(m，3H)，7.24-7.31(m，2H)，3.72(t，1H，J＝6.8Hz)，3.60(dd，1H，J＝7.6，6.1Hz)，3.13-3.21(m，2H)，1.88-1.97(m，1H)，1.64-1.78(m，2H)，0.98(d，6H，J＝6.5Hz)，(8.12，s甲酸，0.1eq)，經(jīng)ROESY NMR證實N-3烷基化?；衔颎A1H NMR(CD3OD)δ8.19(bd，1H，J＝7.9Hz)，8.06(bs，1H)，7.91(bs，1H)，7.63(t，1H，J＝7.8Hz)，7.57(bd，1H，J＝7.8Hz)，7.17(bs，1H)，5.46(s，2H)，3.63(t，1H，J＝6.5Hz)，3.55(t，1H，J＝6.9Hz)，3.10-3.16(m，2H)，1.89-1.94(m，1H)，1.70(t，2H，J＝6.8Hz)，0.97(d，6H，J＝6.5Hz)，(1.97，s，乙酸，0.6eq)?；衔颎M1H NMR(CD3OD)δ8.28(s，1H)；7.39-7.32(m，3H)；7.27(s，1H)；7.16-7.14(m，1H)；5.36(s，2H)；3.69(t，1H，J＝6Hz)；3.57(t，1H，J＝6Hz)；3.16-3.13(m，2H)；1.99-1.86(m，1H)；1.71-1.65(m，2H)；和0.96(d，6H，J＝6Hz)。化合物HE1H NMR(CD3OD)δ8.37(s，1H)；7.42(t，1H，J＝1.8Hz)；7.36(s，1H)；7.21(d，2H，J＝1.8Hz)；5.37(s，2H)；3.70(t，1H，J＝6Hz)；3.59(dd，1H)；3.15-3.12(m，2H)；1.98-1.85(m，1H)；1.70-1.64(m，2H)；和0.96(d，6H，J＝6Hz)。化合物HO1H NMR(CD3OD)δ8.48(s，1H)；7.42-7.39(m，3H)；7.34(s，1H)；7.19-7.14(m，1H)；5.40(s，2H)；3.61-3.51(m，2H)；3.27(d，2H，J＝6Hz)；2.38(s，3H)；1.97-1.77(m，1H)；1.74-1.69(m，2H)；和0.99-0.96(m，6H)?；衔颒Q1H NMR(CD3OD)δ8.47(s，1H)；7.41(s，1H)；7.19(s，1H)；6.99(s，2H)；5.36(s，2H)；3.63(t，1H，J＝9Hz)；3.53(t，1H，J＝6Hz)；3.27(d，2H，J＝9Hz)；2.35(s，6H)；1.83-1.77(m，1H)；1.71-1.68(m，2H)；和0.98(d，6H)。實施例9ACE-2競爭性底物試驗(ACS試驗)在-70℃下，將ACE-2在10mM HEPES(Sigma)、15nM NaCl(Sigma)中的儲備液作為等分試樣貯存。
質(zhì)譜測定ACE-2為羧肽酶，其接受多種含有游離羧酸基團的P1’氨基酸(圖1、2和3)。在圖1A和1B中分別顯示ACE-2將血管緊張素I(1-10)水解為血管緊張素I(1-9)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。圖1A顯示在不含有ACE-2的樣品中，血管緊張素I并不水解。圖1B顯示當用ACE-2處理時，血管緊張素I(1-10)轉(zhuǎn)化為血管緊張素I(1-9)。相似地，圖2顯示ACE-2將神經(jīng)降壓肽(1-13)(頂部)水解為神經(jīng)降壓肽(1-12)(底部)。在圖3A(無ACE-2)和圖3B(ACE-2)中分別顯示des-Arg緩激肽(1-8)至des-Arg緩激肽(1-7)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。
通過以下方法，在微滴板上測定ACE-2酶促活性。所使用的ACE-2試驗緩沖液包含pH 6.5的50mM MES(Boehringer-Mannheim)、300mM NaCl(Sigma)和0.01％Brij-35(Pierce Chemical公司)。
制備包含在試驗緩沖液中的25μl的1nM ACE-2、在試驗緩沖液中的20μl的125μM底物(參見如下)和5μl對照組溶劑或受試化合物的50μl反應(yīng)混合物。將反應(yīng)物混合且在25℃下孵育。經(jīng)熒光變化(在328nm激發(fā)下，在393nm下發(fā)射)標記底物的酶促裂解。當使用BMG LabTechnologies PolarStar板讀數(shù)計，在320nm激發(fā)下，在405nm發(fā)射下測量反應(yīng)物的熒光讀數(shù)時，發(fā)現(xiàn)測定ACE-2酶促活性是可能的。
Caspase 1底物(Bachem M-2195，Mca-Tyr-Val-Ala-Asp-Ala-Pro-(Dnp)Lys-OH)作為ACE-2的合成底物被進行試驗。質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析也顯示ACE-2水解介于P1脯氨酸至P1’(DNP)Lys之間的該底物。通過Mca-Ala-Pro-(Dnp)Lys-OH(AnaSpec MIPH 1)的常規(guī)合成，得到底物最優(yōu)化。在表1中顯示從底物最優(yōu)化得到的結(jié)果。
表1
使用以下方案，在微滴板上測定ACE(Sigma，A2580)酶促活性。從pH 7.5的50mM HEPES(Sigma)、300mM氯化鈉(Sigma)和0.01％Brij-35(Pierce Chemical公司)制備ACE測定緩沖液。
制備包含在ACE測定緩沖液中的25μl的2nM ACE、20μl的125μM底物、在ACE測定緩沖液中的Abz-Gly-對硝基Phe-Pro-OH(Bachem M1100)和5μl對照組溶劑或受試化合物的50μl反應(yīng)混合物。將反應(yīng)物混合且在25℃下孵育。經(jīng)熒光變化(在330nm激發(fā)下，在415nm下發(fā)射)標記底物的酶促裂解。當使用BMGLabTechnologies PolarStar板讀數(shù)計(德國)，在320nm激發(fā)下，在405nm發(fā)射下測量反應(yīng)物的熒光讀數(shù)時，發(fā)現(xiàn)測定ACE酶促活性是可能的。
使用文獻中的測定法(Holmquist和Riordan，“CarboxypeptidaseA”，Methods of Enzymatic Analysis(1984)第44-60頁)，測定羧肽酶A活性。通過調(diào)至300μl測定體積使測定適合于96孔格式板且使用超薄底板(Costar/Corning)在328nm下讀數(shù)。使用EDTA終止測定。
使用以上概述的方法，研究受試化合物的活性。在5％DMSO中試驗化合物。在12種化合物濃度下測量酶活性。經(jīng)使用Ki＝Kiapp/(1+[S]/Km)計算Ki。結(jié)果列于表2中。
在表2中，以下為用于Ki的數(shù)據(jù)。
在圖4中描繪化合物G的結(jié)合曲線。結(jié)合曲線顯示，與ACE相比，化合物G選擇性抑制ACE-2的活性。
圖5、6和7分別為用化合物HW、HX和IX抑制人ACE-2的圖。這些圖顯示這些化合物抑制人ACE-2的活性。
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
表2
在表3中給出非常良好的ACE-2抑制化合物的Ki值。
表3
實施例10轉(zhuǎn)基因ACE-2小鼠使用驅(qū)動全長人ACE-2 cDNA的5.5kB α-肌球蛋白重鏈啟動子，產(chǎn)生在心臟過度表達人ACE-2的轉(zhuǎn)基因小鼠。選擇兩種轉(zhuǎn)基因系表達蛋白(如經(jīng)蛋白質(zhì)印跡分析測定的那樣)用于進一步的評價。對a3312系69％(11/16)的雌性和38％(3/8)的雄性在4-6周齡死亡。對a3320系8％(1/13)的雌性和17％(4/23)的雄性在13-22周齡死亡。這些小鼠的心臟病理學(xué)分析表明肌纖維組織破裂?？山?jīng)常觀察到空泡形成且在這些心臟中偶可觀察到出血。等價物使用常規(guī)實驗，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到或能夠確定，許多在此描述的具體實施方案和方法的等價物。打算把這樣的等價物包括在以下權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
本申請與1998年9月30日提交的標題為“血管緊張素轉(zhuǎn)化酶同源物及其治療與診斷的用途”的U.S.專利申請09/163,648號和1997年12月11日提交的標題為“血管緊張素轉(zhuǎn)化酶同源物及其治療與診斷的用途”的U.S.專利申請08/989,299號有關(guān)，其中每一個專利申請表達的全部內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
在此引用的所有專利、專利申請和參考文獻通過引用結(jié)合到本文中。
權(quán)利要求
1.一種下式的ACE-2調(diào)節(jié)化合物Z-L其中Z為鋅配位部分；和L為氨基酸模擬部分。
2.權(quán)利要求1的ACE-2調(diào)節(jié)化合物，其中所述ACE-2調(diào)節(jié)化合物為ACE-2抑制化合物。
3.權(quán)利要求2的ACE-2抑制化合物，其中L包括天然或非天然氨基酸側(cè)鏈或其衍生物。
4.權(quán)利要求3的ACE-2抑制化合物，其中L包括絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、精氨酸、天冬酰胺、組氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、谷氨酸或天冬氨酸的側(cè)鏈。
5.權(quán)利要求3的ACE-2抑制化合物，其中L為非極性的。
6.權(quán)利要求5的ACE-2抑制化合物，其中L包括丙氨酸、甘氨酸、亮氨酸、脯氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或甲硫氨酸。
7.權(quán)利要求2的ACE-2抑制化合物，其中Z包括羧酸基團、羥基烷基、硫醇、烷基、咪唑基、酰胺或可裂解的羧酸前藥部分。
8.權(quán)利要求7的ACE-2抑制化合物，其中Z包括羧酸基團。
9.權(quán)利要求2的ACE-2抑制化合物，其中所述ACE-2抑制化合物與ACE-2相互作用具有50μM或更少的Ki。
10.權(quán)利要求9的ACE-2抑制化合物，其中所述ACE-2抑制化合物與ACE-2相互作用具有10μM或更少的Ki。
11.權(quán)利要求10的ACE-2抑制化合物，其中所述ACE-2抑制化合物與ACE-2相互作用具有2.5μM或更少的Ki。
12.權(quán)利要求11的ACE-2抑制化合物，其中所述ACE-2抑制化合物與ACE-2相互作用具有1μM或更少的Ki。
13.權(quán)利要求12的ACE-2抑制化合物，其中所述ACE-2抑制化合物與ACE-2相互作用具有0.5μM或更少的Ki。
14.權(quán)利要求13的ACE-2抑制化合物，其中所述ACE-2抑制化合物與ACE-2相互作用具有0.25μM或更少的Ki。
15.權(quán)利要求14的ACE-2抑制化合物，其中所述ACE-2抑制化合物與ACE-2相互作用具有0.1μM或更少的Ki。
16.權(quán)利要求16的ACE-2抑制化合物，其中所述ACE-2抑制化合物與ACE-2相互作用具有0.05μM或更少的Ki。
17.權(quán)利要求16的ACE-2抑制化合物，其中所述ACE-2抑制化合物與ACE-2相互作用具有0.025μM或更少的Ki。
18.一種下式的ACE-2調(diào)節(jié)化合物Z-A-B-E其中Z為鋅配位部分；E為酶配位部分；A為輔助袋結(jié)合部分；和B為側(cè)鏈結(jié)合袋部分。
19.權(quán)利要求18的ACE-2抑制化合物，其中Z為酯、可裂解的前藥部分、羧酸、雜環(huán)、烷基部分、酰胺、胺、羥基、硫醇、酮、醛或氫原子。
20.權(quán)利要求19的ACE-2抑制化合物，其中Z為羧酸。
21.權(quán)利要求19的ACE-2抑制化合物，其中Z為可裂解的羧酸前藥部分。
22.權(quán)利要求18的ACE-2抑制化合物，其中E為羧酸、羧酸等價物、酰胺、氫原子、可裂解的羧酸前藥部分或酯。
23.權(quán)利要求22的ACE-2抑制化合物，其中E為羧酸。
24.權(quán)利要求18的ACE-2抑制化合物，其中A具有下式 其中R9為氫或低級烷基；G為連接部分；和M為錨定部分。
25.權(quán)利要求24的ACE-2抑制化合物，其中R9為氫。
26.權(quán)利要求24的ACE-2抑制化合物，其中G為共價鍵、C1-C6烷基、鏈烯基、鏈炔基、醚、硫醚、胺或羰基部分。
27.權(quán)利要求26的ACE-2抑制化合物，其中G為共價鍵、C1-C3烷基或胺。
28.權(quán)利要求24的ACE-2抑制化合物，其中M為烷基、氫、雜芳基、芳基、鏈烯基或環(huán)烷基。
29.權(quán)利要求28的ACE-2抑制化合物，其中M為未取代的苯基。
30.權(quán)利要求28的ACE-2抑制化合物，其中M為取代的苯基。
31.權(quán)利要求28的ACE-2抑制化合物，其中M由NR’R”、CN、NO2、F、Cl、Br、I、CF3、CCl3、CHF2、CHCl2、CONR’R”、S(O)2NR’R”、CHO、OCF3、OCCl3、SCF3、SCCl3、COR’、CO2R’、OR’、或通過一或多個亞連接部分連接于M的一或多個亞錨定部分取代；且其中R’和R”各獨立為氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6鏈炔基或取代或未取代的芳基。
32.權(quán)利要求28的ACE-2抑制化合物，其中M為取代或未取代的雜芳基。
33.權(quán)利要求32的ACE-2抑制化合物，其中M為取代或位取代的呋喃基、咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、苯并二噁唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、亞甲二氧基苯基、吲哚基、噻吩基、嘧啶基、吡嗪基、嘌呤基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、萘啶基、噻唑基、異噻唑基或脫氮雜嘌呤基。
34.權(quán)利要求33的ACE-2抑制化合物，其中M為咪唑基。
35.權(quán)利要求33的ACE-2抑制化合物，其中M為噻唑基。
36.權(quán)利要求28的ACE-2抑制化合物，其中M為雙環(huán)。
37.權(quán)利要求36的ACE-2抑制化合物，其中M為萘基、喹啉基、異喹啉基、萘啶基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并咪唑基或中氮茚基。
38.權(quán)利要求34的ACE-2抑制化合物，其中M為未取代的咪唑基。
39.權(quán)利要求34的ACE-2抑制化合物，其中M為取代的咪唑基。
40.權(quán)利要求31的ACE-2抑制化合物，其中所述亞連接部分選自共價鍵、O、S、CHOH、CHSH、CHNH2、(CH2)nSO2、CHNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)nO(CH2)n、用C1-C6烷基、鹵素任選取代的1至6個原子的鏈，其中n為0、1、2或3，且R3和R4各獨立為取代或未取代的C1-C6支鏈或直鏈烷基、C1-C6支鏈或直鏈烯基、芳基、C3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代。
41.權(quán)利要求40的ACE-2抑制化合物，其中所述亞連接部分選自共價鍵、醚、胺或C1-C3烷基。
42.權(quán)利要求41的ACE-2抑制化合物，其中所述亞連接部分為-CH2-。
43.權(quán)利要求31的ACE-2抑制化合物，其中所述亞錨定部分選自取代或未取代的芳基、雜芳基、聯(lián)芳基、環(huán)烷基、烷基、鏈烯基或鏈炔基。
44.權(quán)利要求43的ACE-2抑制化合物，其中所述亞錨定部分為聯(lián)苯基。
45.權(quán)利要求43的ACE-2抑制化合物，其中所述亞錨定部分為未取代的苯基。
46.權(quán)利要求43的ACE-2抑制化合物，其中所述亞錨定部分為取代的苯基。
47.權(quán)利要求46的ACE-2抑制化合物，其中所述亞錨定部分由至少一個選自以下的取代基取代烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、NR’R”、CN、NO2、F、Cl、Br、I、CF3、CN、CCl3、CHF2、CHCl2、CONR’R”、S(O)2NR’R”、CHO、OCF3、OCCl3、SCF3、SCCl3、COR’、CO2R’和OR’，且其中R’和R”各獨立為氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6鏈炔基或任選取代的芳基。
48.權(quán)利要求47的ACE-2抑制化合物，其中所述亞錨定部分由低級烷基、芳基、CN、NO2、CF3、I、F、Cl、-OCF3或F取代。
49.權(quán)利要求46的ACE-2抑制化合物，其中所述亞錨定部分為4-氯苯基、聯(lián)苯基、3-氯苯基、3，5-二氯苯基、3-甲基苯基、3，5-二甲基苯基、3-CF3-苯基、2，5-二氯苯基、間-氟苯基、間-碘苯基、亞甲二氧基苯基、間-三氟甲基苯基、2，3-二氯苯基、2，3-二氟苯基、2，3-二甲氧基苯基、對-氟苯基、對-硝基苯基、對-叔丁基苯基、對-異丙基苯基、對-三氟甲氧基苯基、3，4-二甲基苯基、4-氰基苯基、4-三氟甲基苯基、3，4-氯苯基或4-甲基苯基。
50.權(quán)利要求18的ACE-2抑制化合物，另外包括共價結(jié)合于A和B的Q，其中Q為鍵、O、S、CHOH、CHNH2、CHNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)nO(CH2)n，其中n為0、1、2或3，且R3和R4各獨立為取代或未取代的C1-C5支鏈或直鏈烷基、C2-C5支鏈或直鏈烯基、?；⑷〈；?、芳基、C3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代。
51.權(quán)利要求50的ACE-2抑制化合物，其中Q為NH。
52.權(quán)利要求18的ACE-2抑制化合物，其中B具有下式 其中J選自鍵、O、S、CHOH、CHSH、CHNH2、CNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)nO(CH2)n、由C1-C6烷基、鹵素任選取代的1至5個原子的鏈，其中n為0、1、2或3，且R3和R4各獨立為取代或未取代的C1-C6支鏈或直鏈烷基、C1-C6支鏈或直鏈烯基、鏈炔基、芳基、C3-C7環(huán)，由最多可達3個雜原子任選取代；R8為烷基或氫；和D為烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基或雜芳基。
53.權(quán)利要求52的ACE-2抑制化合物，其中J為取代或未取代的烷基。
54.權(quán)利要求52的ACE-2抑制化合物，其中J為炔基。
55.權(quán)利要求52的ACE-2抑制化合物，其中J為鍵和D為天然或非天然氨基酸的側(cè)鏈。
56.權(quán)利要求52的ACE-2抑制化合物，其中D為正丙基、甲基、異丙基、乙基、異丁基、叔丁基、正丁基或戊基。
57.權(quán)利要求52的ACE-2抑制化合物，其中D為雜芳基。
58.權(quán)利要求57的ACE-2抑制化合物，其中D為吡啶基或咪唑基。
59.權(quán)利要求50的ACE-2抑制化合物，其中D為苯基。
60.權(quán)利要求18的ACE-2抑制化合物，其中E為CO2H、CO2-R5、CONH2、CONHR5、CONR5R5或氫，其中R5為取代或未取代的C1-C5支鏈或直鏈烷基、C2-C5支鏈或直鏈鏈烯基、芳基、C3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代。
61.權(quán)利要求60的ACE-2抑制化合物，其中E為CO2H。
62.一種式III的ACE-2抑制化合物 其中R6為羥基或保護的前藥部分；R7為氫原子、羧酸、芳基氨基羰基、芳?；?、芳基、烷基氨基羰基、氨基羰基、鏈烯基氨基羧基、羥基、烷氧基、醚、硫醇、氨基或雜環(huán)，R8為氫或烷基，且任選連接于D以形成環(huán)結(jié)構(gòu)；R9為低級烷基或氫；Q為鍵、O、S、CHOH、CHSH、CHNH2、CHNHR3、CHNR3R4、NH、NR3、(CH2)n、O(CH2)n、(CH2)nO(CH2)n，其中n為0、1、2或3，且R3和R4各獨立為取代或未取代的C1-C5支鏈或直鏈烷基、C2-C5支鏈或直鏈的鏈烯基、取代或未取代的?；⒎蓟?、C3-C8環(huán)，由最多可達四個雜原子任選取代；G為連接部分；M為錨定部分；J為鍵、烷基、鏈烯基或鏈炔基部分；D為氫、烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基或雜芳基，任選連接于G、M或Q以形成環(huán)；t為0、1、2或3；p為0、1、2、3、4或5；和q為0、1、2或3。
63.權(quán)利要求62的ACE-2抑制化合物，其中R6為羥基，R7為氫原子、羧酸，R8為氫，且R9為氫，p為0，t為1，q為0，且Q為NH。
64.權(quán)利要求62的ACE-2抑制化合物，其中所述化合物具有下式 其中Q為CH2、O、NH或NR3，其中R3為取代或未取代的C1-C5支鏈或直鏈烷基、C2-C5支鏈或直鏈烯基、取代或未取代的?；⒎蓟駽3-C8環(huán)；R6為羥基或保護的前藥部分；R7為氫原子、羧酸、酰胺、保護的前藥部分、羥基、硫醇、雜環(huán)、烷基或胺；G為共價鍵、C1-C5烷基、鏈烯基、鏈炔基、醚、硫醚、胺或羰基；M為烷基、氫、雜環(huán)或碳環(huán)；J選自鍵、取代或未取代的烷基、鏈烯基或鏈炔基部分；和D為烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基或雜芳基、任選連于G或M以形成環(huán)。
65.權(quán)利要求64的化合物，其中Q為NH。
66.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中R6為羥基。
67.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中R7為羧酸。
68.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中G為共價鍵。
69.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中G為C1-C3烷基。
70.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中G為胺。
71.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中M為苯基或聯(lián)苯基。
72.權(quán)利要求71的ACE-2抑制化合物，其中M為取代的苯基。
73.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中M為雜芳基。
74.權(quán)利要求73的ACE-2抑制化合物，其中M為咪唑基、噻吩基、三唑基、吡唑基或噻唑基。
75.權(quán)利要求74的ACE-2抑制化合物，其中M為未取代的咪唑基。
76.權(quán)利要求74的ACE-2抑制化合物，其中M為取代的咪唑基。
77.權(quán)利要求73的ACE-2抑制化合物，其中M由至少一個通過亞連接部分連接于M的亞錨定部分取代。
78.權(quán)利要求77的ACE-2抑制化合物，其中所述亞連接部分為(CH2)n或(CH2)nO(CH2)n，其中n為0、1、2或3。
79.權(quán)利要求74的ACE-2抑制化合物，其中所述亞錨定部分為取代或未取代的苯基。
80.權(quán)利要求79的ACE-2抑制化合物，其中所述亞錨定部分由至少一個鹵素、CF3、氰基、烷氧基、硝基、醚、硫醇、羥基、烷基、鏈烯基、鏈炔基或醛部分取代。
81.權(quán)利要求77的ACE-2抑制化合物，其中所述亞連接部分為CH2且所述亞錨定部分選自4-氯苯基、聯(lián)苯基、3-氯苯基、3，5-二氯苯基、3-甲基苯基、3，5-二-甲基苯基、3-CF3-苯基、2，5-二氯苯基、間-氟苯基、間-碘苯基、亞甲二氧基苯基、間-三氟甲基苯基、2，3-二氯苯基、2，3-二氟苯基、2，3-二甲氧基苯基、對-氟苯基、對-硝基苯基、對-叔丁基苯基、對-異丙基苯基、對-三氟甲氧基苯基、3，4-二甲基苯基、3，4-氯苯基、4-甲基苯基、4-氰基苯基、環(huán)烷基或4-三氟甲基苯基。
82.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中J為取代或未取代的烷基。
83.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中J為鏈炔基。
84.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中J為鍵且D為烷基、芳基或雜芳基。
85.權(quán)利要求84的ACE-2抑制化合物，其中D為甲基、乙基、異丙基、正丙基、叔丁基、正丁基、異丁基或戊基。
86.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中D為雜芳基。
87.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中D為吡啶基或咪唑基。
88.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中D為取代或未取代的苯基。
89.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中D為環(huán)烷基。
90.權(quán)利要求64的ACE-2抑制化合物，其中所述化合物選自2-[1-羧基-2-(甲基-苯基-氨基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-苯基-乙基氨基)-3-(3H-咪唑-4-基)-丙酸；2-[1-羧基-2-(4-羥基-苯基)-乙基氨基]-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-苯基-丁酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-3-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-己酸；2-[2-(3-芐氧基甲基-3H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(1-芐基-1H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(1H-咪唑-4-基)-1-甲氧基羰基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-5-吡啶-2-基-戊-4-炔酸；2-{1-羧基-2-[1-(4-氯-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[2-(1-芐基-1H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(1-芐基-1H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-噻吩-2-基-乙基氨基)-4-甲基-戊酸；6-氨基-2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-己酸；2-[(羧基-苯基-甲基)-氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(2，4-二硝基-苯基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-噻唑-2-基-乙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-乙基氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸；2-(1-羧基-3-甲硫基-丙基氨基)-4-苯基-丁酸；2-(1-羧基-2-吡啶-2-基-乙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基)-丁二酸；2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基)-己酸；2-(1-羧基-3-甲硫基-丙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-甲基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-苯基-乙基氨基)-戊酸；2-(1-羧基-2-苯基-乙基氨基)-4-苯基-丁酸；2-(1-羧基-2-苯基-乙基氨基)-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-4，4-二甲基-戊酸；2-(1-羧基-乙基氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸；2-(1-羧基-2-噻吩-2-基-乙基氨基)-戊酸；2-[1-羧基-2-(1H-[1，2，4]三唑-3-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-環(huán)丙基-乙基氨基)-4-苯基-丁酸；2-[1-羧基-2-(4-羥基-苯基)-乙基氨基]-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸；2-[2-(1-芐基-1H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-2-環(huán)己基-乙基氨基)-4-苯基-丁酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-5-苯基-戊-4-炔酸；2-[2-(1H-咪唑-4-基)-1-甲氧基羰基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(4-甲氧基-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(4-三氟甲基-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[(羧基-苯基-甲基)-氨基]-4-甲基-戊酸；2-(1-羧基-丙基氨基)-4-甲硫基-丁酸；2-(1-羧基-3-苯基-丙基氨基)-5-吡啶-2-基-戊-4-炔酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-萘-1-基甲基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；4-{5-[2-羧基-2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基)-乙基]-咪唑-1-基甲基}-苯甲酸；4-{5-[2-羧基-2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基)-乙基]-咪唑-1-基甲基}-苯甲酸；2-[1-羧基-2-(2-苯基-噻唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(1-芐基-1H-苯并咪唑-2-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(芐基-苯基-氨基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(2-氨基-噻唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3，4-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-甲基-噻唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-氰基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3，5-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{2-[3-(4-丁基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-1-羧基-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3，4-二甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[2-(2-芐基氨基-噻唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3，5-二甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-三氟甲氧基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-異丙基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{2-[3-(4-叔丁基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-1-羧基-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{2-[3-(2-苯磺?；谆?芐基)-3H-咪唑-4-基]-1-羧基-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-硝基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[2-(3-聯(lián)苯-2-基甲基-3H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{2-[3-(3，5-雙-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-1-羧基-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(4-氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-苯基-噻唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(5-甲基-異噁唑-3-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(1-芐基-1H-吡唑-3-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，3-二甲氧基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-甲基-聯(lián)苯-3-基甲基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-甲氧基-萘-1-基甲基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，3-二氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[1-(2，3-二氟-芐基)-1H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，3-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，5-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；和2-{1-羧基-2-[3-(2，6-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-三氟甲基-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，5-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2，6-二氯-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-環(huán)己基甲基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(2-乙基-丁基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-碘-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-{1-羧基-2-[3-(3-氟-芐基)-3H-咪唑-4-基]-乙基氨基}-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-苯基乙炔基-1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(1-甲基-2-苯基乙炔基-1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(2-苯基乙基-1H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-3-(3-苯基-3H-咪唑-4-基)-丙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-2-(3-苯基-3H-咪唑-4-基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(3-芐基-2，5-二甲基-3H-咪唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[1-羧基-4-(3-苯基-3H-咪唑-4-基)-丁基氨基]-4-甲基-戊酸；2-[2-(2-芐基-噻唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸；和2-[2-(5-芐基-2-甲基-噻唑-4-基)-1-羧基-乙基氨基]-4-甲基-戊酸。
91.權(quán)利要求62的ACE-2抑制化合物，其中所述化合物具有下式
92.一種在患者中治療與ACE-2有關(guān)疾病的方法，該方法包括給予所述患者治療有效量的一或多個ACE-2抑制化合物，以便治療與ACE-2有關(guān)的疾病。
93.權(quán)利要求92的方法，其中所述ACE-2抑制化合物為權(quán)利要求1、2、18、64、90或91中任何一項的化合物。
94.權(quán)利要求92的方法，其中所述患者為人。
95.權(quán)利要求92的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病與血壓相關(guān)的疾病或紊亂有關(guān)。
96.權(quán)利要求92的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病選自慢性心力衰竭、左心室肥大、急性心力衰竭和心肌病。
97.權(quán)利要求92的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病為充血性心力衰竭。
98.權(quán)利要求92的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病為動脈高血壓。
99.權(quán)利要求92的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病為心肌梗塞。
100.權(quán)利要求92的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病與細胞增殖疾病有關(guān)。
101.權(quán)利要求100的方法，其中細胞增殖疾病為平滑肌細胞增殖疾病。
102.權(quán)利要求101的方法，其中所述平滑肌細胞增殖疾病為血管狹窄。
103.權(quán)利要求92的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病為腎疾病或紊亂。
104.權(quán)利要求92的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病為與kinetensin有關(guān)的疾病。
105.權(quán)利要求104的方法，其中所述與kinetensin有關(guān)的疾病選自由異常血管通透性、局部或全身變應(yīng)性反應(yīng)、exzema、哮喘和過敏性休克引起的疾病。
106.權(quán)利要求92的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病與炎癥有關(guān)。
107.權(quán)利要求106的方法，其中所述炎癥與SIRS、多損傷、炎性腸道疾病、急性和慢性疼痛、類風濕病和骨關(guān)節(jié)炎中的骨壞死、牙周疾病、痛經(jīng)、早產(chǎn)、病灶性損傷后的腦水腫、彌散性軸突損傷、變應(yīng)性疾病、傷口愈合和瘢痕形成有關(guān)。
108.一種治療與ACE-2有關(guān)的疾病的藥用組合物，它包含藥學(xué)上可接受的載體和有效量的ACE-2抑制化合物。
109.權(quán)利要求108的藥用組合物，其中所述ACE-2抑制化合物為權(quán)利要求1、2、18、64、90或91中任何一項的化合物。
110.權(quán)利要求109的藥用組合物，其中所述ACE-2抑制化合物的有效量為治療與血壓有關(guān)的疾病或紊亂、細胞增殖疾病、腎疾病、與kinetensin有關(guān)的疾病、與炎癥有關(guān)的疾病或變應(yīng)性疾病的有效量。
111.一種在患者中治療與ACE-2有關(guān)的疾病的方法，該方法包括給予所述患者有效量的ACE-2抑制化合物和有效量的ACE抑制劑，由此治療與ACE-2有關(guān)的疾病。
112.權(quán)利要求111的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病選自細胞增殖疾病、腎疾病、與kinetensin有關(guān)的疾病、與炎癥有關(guān)的疾病或變應(yīng)性疾病。
113.權(quán)利要求111的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病為與血壓有關(guān)的疾病或紊亂。
114.權(quán)利要求111的方法，其中所述與ACE-2有關(guān)的疾病為充血性心力衰竭。
115.一種抑制ACE-2靶肽水解的方法，該方法包括使ACE-2與ACE-2抑制化合物和ACE-2靶肽接觸，由此抑制ACE-2靶肽的水解。
116.權(quán)利要求115的方法，其中所述ACE-2靶肽為血管緊張素、激肽或kinetensin。
全文摘要
公開ACE－2抑制化合物。也對使用化合物的方法和包含該化合物的藥用組合物提出了權(quán)利要求。
文檔編號A61K31/381GK1377259SQ00809781
公開日2002年10月30日 申請日期2000年4月28日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月30日
發(fā)明者S·L·阿克頓, T·D·奧凱恩, A·E·古爾德, N·A·達勒斯, B·關(guān), J·A·布朗 申請人:千年藥品公司