專利名稱：冬蟲夏草發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備冬蟲夏草發(fā)酵產(chǎn)物的新方法，其所得到的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物能用作食品添加劑及/或治療藥物。本發(fā)明還涉及將此蟲草發(fā)酵產(chǎn)物用于促進(jìn)健康及治療和預(yù)防多種疾病和機(jī)能失調(diào)的方法。
冬蟲夏草(Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.)為一種天然存在的稀有生物，也是久享盛譽(yù)的名貴中藥。它由真菌和昆蟲兩者所組成，存在于中國(guó)西北和西南部海拔3000-4000m山區(qū)的多草的土壤中。露在土壤表面部分為真菌的子實(shí)體，長(zhǎng)3-6cm，色黑，形如刀刃。埋在土中的蟲體部分長(zhǎng)2.5-4cm，黃色至深棕色。因其形態(tài)隨季節(jié)發(fā)生獨(dú)特的變化，冬季為蟲形夏季呈草狀，故在我國(guó)稱之為“冬蟲夏草”(Pereira et at.,1943,New York J Medicine,1:128-32)。在日本稱作Tochukaso.在亞洲不同地區(qū)還有蛹草(Cordyceps militaris),亞香棒蟲草(Cordyceps haw)和香棒蟲草(Cordyceps barnesii)等不同種的蟲草品種。
冬蟲夏草中的真菌為寄生菌，靠蟲體提供營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)而最后致蟲以死命。其宿主是一種昆蟲的幼蟲，如蟲草蝙蝠蛾(Hepialusarmoricanus)，生活在高海拔低溫度地區(qū)。隨著緯度、海拔、及局部生態(tài)因子的不同，Hepialus屬的其他種昆蟲如Hepialusganggaensis也可被寄生性真菌感染而形成蟲草。通常這類昆蟲生活在地表下15-25cm，以食一些野草(如珠芽蓼、園穗蓼)的地下莖為生。這種昆蟲在低于20℃時(shí)難以生長(zhǎng)，從每年11月至來年4月在地下冬眠。正常情況下在3-4年內(nèi)經(jīng)6-8次蛻皮，經(jīng)蛹而羽化為蛾。其生活周期中的各期，如幼蟲期的長(zhǎng)短、何時(shí)化蛹、何時(shí)羽化等，無不受溫度影響。
從冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)中也分離出過有些屬于子囊菌科(Ascomycetes)寄生性真菌的種或株，例如冬蟲夏草頭孢菌(Cephalosporium dongchongxiacao)，中國(guó)被毛孢(Hirsutellasinensis)，中國(guó)擬青霉(Paecilomyces sinensis)，蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces hepiali)，蝙蝠蛾蛀霉(Scytalidium hepiali)等。夏季來臨，真菌子囊散發(fā)孢子于地上，隨雨水進(jìn)入土壤，與蟲子接觸。經(jīng)3-4次蛻皮的蟲子最易被感染。在酶和機(jī)械力的共同作用下真菌進(jìn)入蟲體，菌絲生長(zhǎng)遍布蟲體。宿主變得脫水，通常在11月份因真菌菌絲繁殖而死亡。來年春天，溫度再次升高，真菌的子實(shí)體從蟲子的頭部長(zhǎng)出，出現(xiàn)在地面。光線促進(jìn)子實(shí)體的生長(zhǎng)，而真菌孢子的成熟約需50天(尹定華唐雪梅中國(guó)中藥雜志，20:707-709)。
傳統(tǒng)上冬蟲夏草在6-7月份從野外采集，陽(yáng)光下曬干。蟲草在中醫(yī)傳統(tǒng)上作為滋補(bǔ)藥物應(yīng)用，用于治療多種疾病和機(jī)能失調(diào)。有一種補(bǔ)藥的制法是用蟲草燉雞、鴨或肉，或者煮湯代茶。也可磨成粉加在食物中，或與其他補(bǔ)藥(例如人參)配伍制成浸膏。
冬蟲夏草的醫(yī)藥用途早在<本草從新>(公元1757年)已有記載。謂其味甘性溫，歸肺、腎經(jīng)。中醫(yī)認(rèn)為其主要作用在于補(bǔ)腎，慢性哮喘和肺機(jī)能失調(diào)與腎虛有關(guān)。蟲草還能補(bǔ)精生髓、祛痰止血保肺。也有認(rèn)為蟲草對(duì)癌癥及結(jié)核病病人有益，能補(bǔ)益精氣。還有用于治療各種嚴(yán)重?fù)p傷及治黃疸和哮喘。
蟲草在我國(guó)的主要應(yīng)用包括減輕支氣管炎癥，治慢性氣管炎、肺炎、肺氣腫及結(jié)核病。其他用途包括治療結(jié)核病人的痰中帶血、病后虛弱、無力、貧血、盜汗、自汗及各種惡性病變。
為治療病后虛弱，衰竭，貧血，盜汗，咳嗽或陽(yáng)痿，蟲草的傳統(tǒng)用法為每劑6-9克，小火慢煎，日服兩次。安神、守?cái)恳灿么藙┝?。蟲草也被認(rèn)為有滋補(bǔ)肺、腎(包括生殖腺，如睪丸、卵巢，及腎上腺)作用。
蟲草資源稀少，蟲與菌的關(guān)系獨(dú)特；但應(yīng)用廣泛，需求量大，有必要對(duì)其營(yíng)養(yǎng)學(xué)及藥理學(xué)作用及其有效成分作深入研究。文獻(xiàn)報(bào)道，用多種疾病及代謝的動(dòng)物模型可知蟲草有廣泛的生理學(xué)作用。例如孫云漢，1985，中藥通報(bào)10(12)3-5；Tsunoo et al.，日本真菌學(xué)會(huì)第3次國(guó)際討論會(huì)文集，1985年11月30日至12月，日本，千葉縣，自然歷史博物館和研究所；Chang and But,“Pharmacology andApplication of Chinese Materia Medica”,1,410-413(Philadelphia,World Scientific,1986)。
另一種蟲草，蛹草(Cordyceps militaris)能大量產(chǎn)生一種代謝產(chǎn)物--蟲草菌素(cordycepin)(Cunningham et al.,1951,J.Chem.Soc.,2299；Kredich et al.,1960,Biochem.Biophys.Acta,41:363-365)。它是一種腺嘌呤核苷，含一個(gè)帶側(cè)碳鏈的3-脫氧戊糖，可從蛹草培養(yǎng)物的乙醇或正丙醇提取物中結(jié)晶出來。蟲草菌素有抗微生物作用(Cunningham et al.,1960,Nature,166:949)，抗腫瘤作用(Jagger et al.,1961,Cancer Res.,21:216)。蟲草菌素及冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)的乙醇提取物能抗枯草桿菌(Bacillus subtilis)但不能抗金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、溶血鏈球菌(Streptococcus homiletics)、糞鏈球菌、敗血性巴斯德(Pasteurella septica)、產(chǎn)氣莢膜桿菌(Bacillus welchii)及變形桿菌。
由于蟲草可能具有如此重要的藥用價(jià)值，揭開這個(gè)傳統(tǒng)草藥的神秘面紗顯得十分有意義。據(jù)信，蟲草的各種有益的作用是因?yàn)樗亩喾N已知和未知的有效成分，但還沒有一種已被確定與某種特定的生理效應(yīng)相關(guān)。因此有必要進(jìn)一步了解這些有效成分的基礎(chǔ)生化和其對(duì)人體各種生物系統(tǒng)的作用方式。
由于其藥用價(jià)值以及資源稀少，各種產(chǎn)生蟲草的方法已被研究過。其例有陳傳盈，等的文章(中草藥，1992,23(8):409-11)及一些人的專利申請(qǐng)(Nanying等中國(guó)專利85101971,1985年4月1日申請(qǐng)；Dai等中國(guó)專利CN1075402；Kuan等中國(guó)專利CN1079653)。
在我國(guó)四川省，一組研究人員在1979-1986年對(duì)一種昆蟲貢嘎蝙蝠蛾(Hepialus ganggaensis)的生物學(xué)和生態(tài)學(xué)進(jìn)行了廣泛的研究。他們發(fā)現(xiàn)了這種蟲子的最適生長(zhǎng)和繁殖條件。最后，他們可以在低海拔的實(shí)驗(yàn)室繁殖此蟲，其生活周期從3-4年縮短到約1年。蟲子的成活率從野生的3-5％增加到40％。曾用一種寄生性真菌中國(guó)被毛孢(Hirsutlla sinensis)的孢子人工感染此蟲，而此菌最初也是從冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)中分離出來的。實(shí)驗(yàn)室得到的真菌性物質(zhì)在形態(tài)上與天然蟲草相似(尹定華唐雪梅中國(guó)中藥雜志，20:707-709)。
然而從蟲草Codyceps sinensis分離寄生菌且不用宿主來培養(yǎng)則十分困難，因?yàn)樯L(zhǎng)很慢而且有特殊的營(yíng)養(yǎng)需要。分離出來的菌形態(tài)上不一樣，但其化學(xué)組分及藥理性質(zhì)似乎相近。也有報(bào)道，從Codycepssinensis中分得一菌可以在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，不必用孢子感染活的蟲子(高俊德，等中藥通報(bào)，1981,6:3)。將其放在含有葡萄糖、蛋白及昆蟲干粉的培養(yǎng)基中，26℃、pH6.8、攪拌培養(yǎng)15天，可以得到菌絲體。
實(shí)際上，維持和補(bǔ)充大量死蟲先要化幾個(gè)月在人工氣候下飼養(yǎng)大量活蟲子，這既麻煩又不經(jīng)濟(jì)。從商業(yè)上來說，用含有死蟲子的東西作為藥品或食品添加劑也不太受歡迎，盡管說這種東西有益于健康。因此對(duì)這種有益真菌仍迫切需要有一種能滿足GMP標(biāo)準(zhǔn)的大規(guī)模商業(yè)生產(chǎn)方法。
此外，為了開發(fā)蟲草和它的有效成分作為安全、有效的藥物應(yīng)用于臨床，或作為一種食品添加劑供應(yīng)市場(chǎng)，也需要大量和穩(wěn)定的蟲草類真菌物質(zhì)。在本發(fā)明之前，大規(guī)模生產(chǎn)蟲草發(fā)酵產(chǎn)物且其能產(chǎn)生與天然蟲草相似有效成分的方法尚未被徹底研究及最適化過。本發(fā)明用大規(guī)模發(fā)酵方法生產(chǎn)蟲草菌絲體，所得的現(xiàn)代化產(chǎn)品具有可重復(fù)的營(yíng)養(yǎng)方面和醫(yī)藥方面的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明涉及制備蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces hepiali)，特別是Cs-4菌株(Paecilomyces hepialiChen et Dai)發(fā)酵產(chǎn)物的新方法。用本發(fā)明得到的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物能用于藥品及食品配方中，使之能預(yù)防和治療哺乳動(dòng)物特別是人類的多種疾病和失調(diào)。這些配方還能用于維持老年人的最適健康及促進(jìn)病后恢復(fù)期病人恢復(fù)精力。
本發(fā)明部分地根據(jù)以下發(fā)現(xiàn)而完成，即蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces hepiali)的發(fā)酵產(chǎn)物含有有效成分，其藥理和營(yíng)養(yǎng)作用與天然蟲草(Codyceps sinensis)相似。本發(fā)明的方法不用昆蟲作宿主。本發(fā)明的方法可生產(chǎn)大量蟲草發(fā)酵產(chǎn)物，它具有多種生理活性物質(zhì)，其生產(chǎn)周期較使用昆蟲作宿主的其他方法短得多。按照發(fā)酵規(guī)模大小，在約3-20天內(nèi)，用本發(fā)明的方法可重復(fù)性地生產(chǎn)高產(chǎn)量?jī)?yōu)質(zhì)的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物。例如，用本發(fā)明的方法已得到含腺嘌呤核苷及甘露醇較高的產(chǎn)品。本發(fā)明的方法符合GMP標(biāo)準(zhǔn)，所得產(chǎn)物適用于作為藥品、保健品及食品添加劑。按照本發(fā)明，蟲草發(fā)酵產(chǎn)物可做成各種劑量和組合物。
由本發(fā)明生產(chǎn)的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物，例如Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物，可作為一種天然食品添加劑，或一種藥品在哺乳動(dòng)物治療或預(yù)防多種疾病，包括(但并不限于)高血脂癥、心血管疾病、腦血管疾病、高血壓、肺疾病、腎疾病、生殖功能紊亂和免疫功能紊亂。
用本發(fā)明的方法生產(chǎn)的產(chǎn)物還可用于改善或維持正常個(gè)體的最適健康，特別是對(duì)于老年人及病后恢復(fù)者。


圖1示出了本發(fā)明的Cs-4菌株發(fā)酵過程。
本發(fā)明涉及蟲草(Paecilomyces hepiali)發(fā)酵產(chǎn)物，特別是Cs-4菌株(Paecilomyces hepiali Chen et Dai)發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法。本發(fā)明的發(fā)酵產(chǎn)物可用于藥物組合物及食品組合物，這些組合物可用于治療及預(yù)防多種疾病和功能失調(diào)，還可用于促進(jìn)和維持正常個(gè)體(特別是老年人和病后恢復(fù)期)的最適健康。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“蟲草發(fā)酵產(chǎn)物”是指蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces hepiali)的一種或多種菌株的菌絲體發(fā)酵過程的產(chǎn)物。此處所用的“Cs-4菌”、“Cs-4菌株”專一地指發(fā)酵前的蝙蝠蛾擬青霉Cs-4菌株(Paecilomyces hepiali Chen et Dai)，而“Cs-4產(chǎn)物”、“Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物”及諸如此類的術(shù)語(yǔ)則指蝙蝠蛾擬青霉Cs-4菌株的菌絲體發(fā)酵產(chǎn)物。
本發(fā)明所用的真菌是從冬蟲夏草(Codyceps sinensis)中分離得到的，屬于蝙蝠蛾擬青霉種(Paecilomyces hepiali)。具體來說，蝙蝠蛾擬青霉的菌株中被證明對(duì)本發(fā)明特別有用的菌株是Cs-4菌株。Cs-4菌株已于1997年10月21日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC NO.0327。Cs-4菌株，即Paecilomyces hepiali Chen et Dai，最初系從我國(guó)青海省化隆縣海拔3800米山上的天然蟲草(Codyceps sinensis)中分離和選育所得。
現(xiàn)將Cs-4的形態(tài)敘述于下。當(dāng)把Cs-4培養(yǎng)于馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂(PDA)培養(yǎng)基，于26℃培養(yǎng)約1個(gè)月，從疏松的棉絮狀氣生菌絲上形成單個(gè)或簇狀孢梗束。孢梗束起初為白色，隨時(shí)間慢慢變成黃色。氣生菌絲為黃至橙色，有時(shí)呈深橙色。在顯微鏡下，菌絲透明而有中隔。菌絲直徑為2毫微米-2.5毫微米，具有單生、對(duì)生或輪生的瓶狀小梗。一些瓶狀小梗(4.5-7毫微米×2-2.5毫微米)排列成刷狀結(jié)構(gòu)。瓶狀小梗上的分生孢子形狀接近圓形(2.4-2.5毫微米×2.2-2.6毫微米)，光滑，串狀排列。在不斷攪拌的液體培養(yǎng)時(shí)，分生孢子可以為圓形或橢圓形(5-6毫微米×2-2.2毫微米)。
雖然誠(chéng)如下文就要解釋的，本發(fā)明主要涉及的是Cs-4菌株，但蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces hepiali)的其他株包括Cs-4的變種、突變種也可能產(chǎn)生生理學(xué)上有效的物質(zhì)，因此在本發(fā)明中也包含了他們的應(yīng)用。從文獻(xiàn)可知，真菌(例如蝙蝠蛾擬青霉)的許多性質(zhì)不是一成不變的。真菌可能發(fā)生變異，或經(jīng)自然選擇，也可按文獻(xiàn)報(bào)道的方法進(jìn)行人工選擇。因此必須注意到，蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyceshepiali)的變種和突變株，可能產(chǎn)生與Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物相似的生理學(xué)性質(zhì)，因此本發(fā)明對(duì)之也適用。
本發(fā)明部分地根據(jù)以下發(fā)現(xiàn)，即蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyceshepiali)的發(fā)酵產(chǎn)物含有有效成分，其藥理和營(yíng)養(yǎng)作用與天然蟲草(Codyceps sinensis)相似。
已發(fā)現(xiàn)天然蟲草和本發(fā)明產(chǎn)生的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物至少含有七類基本的天然產(chǎn)物1．蛋白質(zhì)，多肽，氨基酸以及胺類；2．多糖及糖的衍生物；3．甾醇類；4．核苷類；5．脂肪酸及其他有機(jī)酸；6．維生素類；7．無機(jī)元素。
蟲草發(fā)酵產(chǎn)物含有人體所需的所有必需氨基酸，還含有特殊的環(huán)二肽。例如，環(huán)-(甘-脯)肽，環(huán)-(亮-脯)肽，環(huán)-(纈-脯)肽，環(huán)-(丙-亮)肽，環(huán)-(丙-纈)肽以及環(huán)-(蘇-亮)肽。
從蟲草發(fā)酵產(chǎn)物中分離出來的甾醇包括麥角甾醇，Δ3-麥角甾醇，麥角甾醇過氧化物，β-谷甾醇，daucosterol和campasterol.在天然蟲草和蟲草發(fā)酵產(chǎn)物中已發(fā)現(xiàn)的核苷類化合物有十一種，Cs-4中主要為腺嘌呤核苷，腺嘌呤，尿嘧啶，尿嘧啶核苷，鳥嘌呤核苷，胸腺嘧啶核苷和脫氧尿嘧啶核苷。已分離出二十八種飽和及不飽和脂肪酸及其衍生物。蟲草發(fā)酵產(chǎn)物中的極性化合物包括許多烴類、醇類和醛類化合物。
從天然蟲草及蟲草發(fā)酵產(chǎn)物中已鑒定出數(shù)種維生素，例如維生素B1,B2,B12,E和K。也鑒定出許多無機(jī)元素，包括鉀，鈉，鈣，鎂，鐵，銅，錳，鋅，Pi，硒，鋁，鎳，鍶，鈦，鉻，釩及鋯。蟲草發(fā)酵產(chǎn)物中硒含量約0.21ppm，較天然蟲草的0.0049高得多。
D-甘露醇及腺嘌呤核苷被用來控制發(fā)酵產(chǎn)物質(zhì)量的有生物活性的標(biāo)志分子。
本發(fā)明的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物通常為一種淺棕至深棕色的粉末，稍帶苦味，并有芳香的氣味。所用的蝙蝠蛾擬青霉真菌的菌株不同、發(fā)酵過程的參數(shù)不同、步驟不同、批次不同都可能使發(fā)酵物的顏色和/或氣味稍有差異。
本發(fā)明提供了制備蟲草發(fā)酵產(chǎn)物的新方法，包括培養(yǎng)一種屬于蝙蝠蛾擬青霉的真菌，然后從培養(yǎng)物中找出發(fā)酵產(chǎn)物中含有的生理活性物質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明，蝙蝠蛾擬青霉菌的各種菌株(特別是Cs-4菌株)可用于上述的發(fā)酵過程。從冬蟲夏草分離出來的真菌的菌絲體發(fā)酵的已知方法，已經(jīng)用現(xiàn)代化發(fā)酵技術(shù)和設(shè)備進(jìn)行了改進(jìn)，從而能更精確地控制溫度，酸堿度及其他發(fā)酵參數(shù)。本發(fā)明將發(fā)酵時(shí)間減少到2-20天(因發(fā)酵的規(guī)模而異)，并增加了產(chǎn)物的產(chǎn)量和效能。其結(jié)果得到的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物符合GMP標(biāo)準(zhǔn)，適用于作為藥品、保健品及食品添加劑。
本發(fā)明的方法可以用固體或液體培養(yǎng)基進(jìn)行。本發(fā)明方法所用培養(yǎng)基含有真菌能利用的碳源、氮源和無機(jī)鹽，不含從昆蟲得來的物質(zhì)。此外本發(fā)明所用培養(yǎng)基可能含有動(dòng)物脂質(zhì)。大規(guī)模發(fā)酵采用液體培養(yǎng)基。用本發(fā)明方法發(fā)酵，宜在有氧條件下進(jìn)行。
通常作為碳源的可用醣類(例如葡萄糖、果糖、右旋糖、麥芽糖、蔗糖、木糖、以及甘露醇之類)，淀粉(例如麥芽、燕麥、黑麥、玉米淀粉、玉米粉)等；可以單用或合用作為營(yíng)養(yǎng)性介質(zhì)中可利用的碳源。培養(yǎng)基中所利用碳水化合物源的確切數(shù)量部分地取決于其中其他組分的量，但一般說來碳水化合物的量為培養(yǎng)基重量的0.5％-10％，可以用1％-5％，最好為4％左右。這些碳源可以單獨(dú)應(yīng)用，也可將幾種這樣的碳源在培養(yǎng)介質(zhì)中合并應(yīng)用。例如培養(yǎng)基可以含有1-4％的葡萄糖和蔗糖。
在發(fā)酵過程中，通?？捎迷S多蛋白類物質(zhì)作氮源。適用的氮源包括蛋白胨、酵母水解產(chǎn)物、粗酵母、大豆粉、豆餅、棉籽粉(餅)、乳酪水解物、玉米漿、酒糟、花生餅、魚餅、米糠、肉羔、硝酸鈉、硝酸銨、硫酸銨或馬鈴薯塊之類。一般說來，氮源的用量為培養(yǎng)基的0.5％-5％，可以用1％-3％，最好在2％左右。
常用鹽類可加到培養(yǎng)基中作為營(yíng)養(yǎng)性無機(jī)鹽，這些常用鹽類能夠產(chǎn)生鈉、鉀、銨、鈣、磷酸根、硫酸根、氯、碳酸根等離子，培養(yǎng)基中還加入微量元素如鈷，鉬，錳，鐵和鎂。營(yíng)養(yǎng)性無機(jī)鹽的非限制性例子有碳酸鈣，磷酸二氫鉀，硫酸鎂，氯化鈉和氯化鈣。
必須注意，此處所舉的培養(yǎng)基僅為可采用的許多培養(yǎng)基的一個(gè)例子而并非限制性的?？梢晫?shí)際情況及從經(jīng)濟(jì)方面的考慮(如發(fā)酵規(guī)模及這些物品的當(dāng)?shù)毓?yīng)情況)，根據(jù)文獻(xiàn)對(duì)其作各種改變。
本發(fā)明發(fā)酵過程的溫度范圍約為20℃-37℃；但要得到最好結(jié)果，發(fā)酵過程的溫度應(yīng)控制在24℃-25℃。為適于培養(yǎng)物生長(zhǎng)并產(chǎn)生生理學(xué)活性物質(zhì)，培養(yǎng)基的酸堿度(pH)為5.0-7.0，可用6.3-6.5，最適為約6.4。
雖然表層發(fā)酵和深層發(fā)酵都可以得到發(fā)酵產(chǎn)物，但最好用深層發(fā)酵。在進(jìn)行通氣及攪拌發(fā)酵時(shí)可以應(yīng)用消沫劑，如硅油、植物油(例如0.01％豆油)，及其他表面活性劑。攪拌速度約每分鐘150轉(zhuǎn)，通氣量約每小時(shí)1.8立方米。
發(fā)酵過程最初在消毒的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)進(jìn)行，可以包括一級(jí)或多級(jí)種子培養(yǎng)。各級(jí)種子培養(yǎng)基都不含昆蟲物質(zhì)，可以有合適比例的碳源，氮源；以及如上所述的，還可以有動(dòng)物脂質(zhì)。大規(guī)模發(fā)酵采用液體培養(yǎng)基。
小規(guī)模培養(yǎng)可如下進(jìn)行將菌種(例如蝙蝠蛾擬青霉Cs-4菌株)接種于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，使之在約24℃-25℃的恒溫下生長(zhǎng)5-6天。屬于蝙蝠蛾擬青霉的混合菌株可用于接種最初培養(yǎng)物。最初培養(yǎng)物用于接種一個(gè)或多個(gè)一級(jí)種子。一級(jí)種子培養(yǎng)物于24℃-25℃培養(yǎng)2-3天，或直到真菌生長(zhǎng)良好為止。此時(shí)，一些或全部培養(yǎng)物用于接種二級(jí)種子或用于發(fā)酵培養(yǎng)。種子培養(yǎng)可以重復(fù)進(jìn)行，直到有足夠的菌量供大規(guī)模發(fā)酵。中間幾級(jí)種子基本上用同上方法產(chǎn)生，上一級(jí)種子瓶培養(yǎng)物用于接種下一級(jí)種子。通常接種后的培養(yǎng)瓶于約24℃-25℃培養(yǎng)2-3天，培養(yǎng)結(jié)束時(shí)收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)物。
大規(guī)模培養(yǎng)最好在適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)進(jìn)行?？捎?但并不限于)帶攪拌的反應(yīng)罐，它能維持恒溫、消毒培養(yǎng)液及反應(yīng)罐、及給培養(yǎng)液通氣。按照此法，培養(yǎng)液可在反應(yīng)罐中配制，加熱到約120℃進(jìn)行消毒。冷卻后，在消毒好的培養(yǎng)液中接種已生長(zhǎng)良好的真菌培養(yǎng)物(例如種子培養(yǎng)物)，經(jīng)一定時(shí)間發(fā)酵(例如5-6天)。此時(shí)要不斷給培養(yǎng)液通氣，并維持溫度在約24℃-25℃。
發(fā)酵過程繼續(xù)到培養(yǎng)液內(nèi)積累了大量蟲草菌絲體，通常為在發(fā)酵后5-6天。可用質(zhì)量檢測(cè)辦法監(jiān)控發(fā)酵過程。發(fā)酵結(jié)束后，用幾種方法適當(dāng)配合將蟲草發(fā)酵產(chǎn)物從培養(yǎng)液中分離出來。例如，將培養(yǎng)物加熱(例如用高壓蒸汽)滅菌，過濾除去發(fā)酵液，得到主要為菌絲體的固體物質(zhì)，然后烘干、磨粉。此粉可直接用于本發(fā)明所述的各種配方。圖1為Cs-4發(fā)酵過程的一個(gè)實(shí)例。
有時(shí)干菌粉可進(jìn)一步加工，即用有機(jī)溶劑提取。例如(但并不限于)，加乙醇(75％)以除去淀粉及/或瓊脂。除去溶劑、干燥后，提取物可用于本發(fā)明所述的各種配方。這樣得到的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物還可進(jìn)一步用水、熱水、有機(jī)溶劑(如乙醚或乙酸乙酯)提取，或溶于極性大一點(diǎn)的溶劑(如丙酮或乙醇)，或用一種溶劑(如石油醚或己烷)去除雜質(zhì)，或用活性炭或硅膠進(jìn)行吸附層析，或用葡聚糖柱(Pharmacia的Sephadex)進(jìn)行凝膠過濾，等等。有機(jī)溶劑可用常規(guī)的方法從產(chǎn)品中除去。
在本發(fā)明的各種具體應(yīng)用中，蟲草發(fā)酵產(chǎn)物(特別是Cs-4的產(chǎn)物)可用于如上所述的藥品及食品的配方，以治療及預(yù)防多種疾病和功能失調(diào)，還可用于促進(jìn)和維持正常個(gè)體(特別是老年人和恢復(fù)期病人)的最適健康。
前已論及，本發(fā)明提供了生產(chǎn)蟲草發(fā)酵產(chǎn)物的方法，而蟲草發(fā)酵產(chǎn)物則可用于治療哺乳動(dòng)物的許多疾病、功能失調(diào)和/或許多癥狀。除了治病之外，本發(fā)明的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物還可用于易患此類疾病、功能失調(diào)和/或癥狀的哺乳動(dòng)物，起預(yù)防作用。此處所指的哺乳動(dòng)物包括(但并不限于)寵物、家畜、牧畜等，但主要指人。
蟲草發(fā)酵產(chǎn)物可用于改進(jìn)多種與健康不良有關(guān)的身體條件，包括內(nèi)因性的(如近期患病和老化)，外因性的(如應(yīng)激和過勞)。蟲草發(fā)酵產(chǎn)物也可用于促進(jìn)和維持最適健康，使正常機(jī)體特別是老年人和恢復(fù)期病人恢復(fù)精力。
本發(fā)明的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物毒性極低，無致突、致畸性。用Cs-4蟲草發(fā)酵產(chǎn)物所作的急性毒性表明，小鼠的口服半數(shù)致死劑量小得測(cè)不出。用大鼠進(jìn)行了三個(gè)月的亞急性毒性實(shí)驗(yàn)，劑量為每公斤每天1,2或3克(相當(dāng)于人用量的20,40或60倍)。給藥組大鼠的體重增長(zhǎng)、血象、肝功、腎功與正常對(duì)照組相同，各主要臟器未發(fā)現(xiàn)明顯的病理形態(tài)改變。
小鼠給予Cs-4產(chǎn)物口服每公斤每天3、5或10克，(人劑量的60,100或200倍)共30天，未發(fā)現(xiàn)任何明顯的不良反應(yīng)。給藥30天后主要臟器的顯微鏡檢查表明，除了少數(shù)幾只最大劑量(200倍人用量)給藥小鼠的腎臟稍有腫脹外，其他均無異常。以相當(dāng)于人劑量的3倍給予狗3個(gè)月，未見對(duì)體重、器官重量、生長(zhǎng)、血液學(xué)及臨床活性指標(biāo)有不良影響。
本文所用術(shù)語(yǔ)“治療有效量”表示在治療和預(yù)防疾病、或在改善某人的一般健康和自我感覺良好方面足以提供好處的劑量。一般說來，能達(dá)到此處所述條件的Cs-4產(chǎn)物的每日劑量約0.1-30克，一次服用或分劑服用。最適每日量約3-6克?？捎煤?.33克的膠囊，每次3個(gè)每天3次口服，以達(dá)到所需的量。一療程至少一周至數(shù)周。本發(fā)明的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物的應(yīng)用，包括治療和預(yù)防高血脂疾病、心血管疾病、腦血管疾病、高血壓(遺傳性及非遺傳性)、肺部疾病、腎疾病、生殖功能紊亂、免疫功能失調(diào)或這些情況的合并存在；包括給予哺乳動(dòng)物有效量的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物或含有所述產(chǎn)物的組合物。
本文所用的心血管疾病例子包括心肌梗塞、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化；腦血管疾病的例子包括中風(fēng)及腦血栓。蟲草發(fā)酵產(chǎn)物可用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物(主要指人類)的高脂血疾病，例如高膽固醇血癥及高甘油三酯血癥。蟲草發(fā)酵產(chǎn)物也可用于調(diào)節(jié)血清脂質(zhì)和脂蛋白水平，如(但并不限于)膽固醇、甘油三酯及高密度脂蛋白，以使其水平維持在正常健康人范圍。本發(fā)明的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物用于治療哺乳動(dòng)物的肺疾病，如慢性支氣管炎及哮喘；也可用于緩解肺部疾病的有關(guān)癥狀和促進(jìn)健康的肺功能，如減輕支氣管通道的炎癥、松弛支氣管平滑肌、鎮(zhèn)咳祛痰。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，Cs-4(每公斤體重6克，灌胃)促進(jìn)氣管分泌，有祛痰作用。促進(jìn)分泌作用在給予Cs-4后第二小時(shí)達(dá)到高峰。Cs-4(每公斤體重5克，灌胃)在氨氣引起的小鼠咳嗽模型有減少咳嗽次數(shù)的作用。Cs-4也減少組織胺引起的氣管收縮。豚鼠腹腔注射Cs-4(1.74克/公斤)延緩了乙酰膽堿引起的氣管收縮的發(fā)作。Cs-4也抑制腎上腺素引起的小鼠急性肺水腫，延長(zhǎng)了存活時(shí)間。在松弛氣管的持續(xù)性收縮方面，菌絲體產(chǎn)物的作用較野生的蟲草為強(qiáng)。
蟲草發(fā)酵產(chǎn)物也能改善人的腎功能，特別是在慢性腎炎，慢性腎功能衰竭及腎病綜合征患者。
蟲草發(fā)酵產(chǎn)物的另一個(gè)應(yīng)用為治療男、女性性功能低下。與男性性功能低下有關(guān)的癥狀包括陽(yáng)萎、遺精、早泄及缺乏性欲；在女性包括月經(jīng)不調(diào)、白帶過多及性欲缺乏。
蟲草發(fā)酵產(chǎn)物有降血糖作用，故有可能用于控制病人的血糖過高，治療糖尿病。
蟲草發(fā)酵產(chǎn)物也能用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)某亞類免疫細(xì)胞的活性及增加抗體的產(chǎn)生。
冬蟲夏草及蟲草菌絲體培養(yǎng)產(chǎn)物在實(shí)驗(yàn)室已被證明對(duì)免疫系統(tǒng)有影響。它增加小鼠的脾臟重量，對(duì)抗皮質(zhì)類固醇及環(huán)磷酰胺引起的脾臟減輕(陳道明，等中西醫(yī)結(jié)合雜志，1985,5:42-45)。它明顯增加巨噬細(xì)胞的吞噬作用和天然殺傷細(xì)胞的活性(張淑蘭，等中西醫(yī)結(jié)合雜志，5:45-47)。在小鼠，冬蟲夏草及其組分增加血清IgG水平，刺激B細(xì)胞和T細(xì)胞的有絲分裂活性。此外，它對(duì)一些淋巴細(xì)胞亞類表現(xiàn)為促進(jìn)作用而對(duì)另一些亞類則為抑制?？偟恼f來，它在體外的細(xì)胞毒性很低，體內(nèi)毒性也很低；它不影響骨髓及脾臟產(chǎn)生紅細(xì)胞。
蟲草發(fā)酵產(chǎn)物也能用作輔助治療，用于減輕腫瘤病人的放療和化療的副作用。
按照本發(fā)明的方法生產(chǎn)的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物能用作藥品來治療哺乳動(dòng)物，特別是有氣短、呼吸微弱、嗜睡、頭暈、四肢發(fā)冷、耳鳴等癥狀的病人及老年體虛者。蟲草發(fā)酵產(chǎn)物能用于食品添加劑以使病人及常人(特別是老年人及恢復(fù)期病人)增強(qiáng)和恢復(fù)體力、精力和元?dú)?。因此Cs-4產(chǎn)物給機(jī)體提供維持最適健康和身體情況的方法，僅管存在內(nèi)部的(如年老或近期患過病)和外部的(如應(yīng)激和過勞)有害因子。此食品添加劑也可預(yù)防或減輕上述疾病、癥狀和反應(yīng)。
蟲草發(fā)酵產(chǎn)物特別有利于體育運(yùn)動(dòng)員和積極從事體育活動(dòng)的人增強(qiáng)體力、耐力和精力。
雖然蟲草發(fā)酵產(chǎn)物的上述治療作用及增進(jìn)健康的效能究竟如何產(chǎn)生和為什么會(huì)產(chǎn)生難以用任何一種理論來說明，但它有可能是通過促進(jìn)應(yīng)激條件下更有效地利用氧氣，增加組織的“穩(wěn)態(tài)”能量水平和增加重要臟器的血流來實(shí)現(xiàn)的。因此它可使在少氧或無氧環(huán)境下動(dòng)物存活時(shí)間較長(zhǎng)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，用異丙腎上腺素引起缺氧3-20分鐘后給予Cs-4(腹腔注射每公斤5克或口服每公斤10克)，小鼠的氧消耗大大下降，存活時(shí)間延長(zhǎng)。平均存活時(shí)間在腹腔注射組達(dá)67分鐘，口服組達(dá)49分鐘。缺氧環(huán)境下Cs-4引起的氧消耗減少及存活時(shí)間延長(zhǎng)可以解釋為對(duì)低氧環(huán)境的適應(yīng)性增強(qiáng)。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)，皮下注射Cs-4(每公斤5-20克)使低溫環(huán)境下小鼠存活時(shí)間延長(zhǎng)到51.6-100.5分鐘，且有劑量-效應(yīng)關(guān)系。
一般說來，組織中外源性86Rb量可反映其營(yíng)養(yǎng)性血流量。小鼠皮下注射Cs-4(每公斤10-20克)明顯增加心、腦的86Rb量。給予大劑量Cs-4的小鼠，其心臟86Rb平均增加114％，腦增加45.7％。
在預(yù)防和治療疾病及維持老年人和病后恢復(fù)期者的最適健康時(shí)，蟲草發(fā)酵產(chǎn)物(例如Cs-4產(chǎn)物或含有Cs-4產(chǎn)物的組合物)的劑量可因個(gè)人情況和疾病的嚴(yán)重性而異。劑量及用藥次數(shù)也可因年齡、體重及病人的反應(yīng)而有所不同。
總的說來，用液體制劑可以于此處所述各種情況時(shí)，Cs-4產(chǎn)物的每日劑量范圍約為0.1克至約30克(一次或分次服用)。較合適的劑量范圍是約1克至約20克，最好為3克至6克。例如，口服含有Cs-4產(chǎn)物0.33克的膠囊，每次3個(gè)，每天3次。一療程至少1至數(shù)周。如文獻(xiàn)報(bào)道，在某些情況下劑量可能會(huì)超出這些范圍。作為食品添加劑應(yīng)每天服，持續(xù)一段時(shí)間，在此基礎(chǔ)上可長(zhǎng)期服用。每天劑量可從約0.1克-10克；較合適的是約1克至約6克；最好為每天約2克至約4克。此外營(yíng)養(yǎng)學(xué)家，飲食調(diào)理師，臨床醫(yī)生會(huì)根據(jù)個(gè)體的反應(yīng)提出何時(shí)中斷、調(diào)整或終止治療。
蟲草發(fā)酵產(chǎn)物或按照本發(fā)明由其提取得到的提取物可以用于藥物組合物和食品組合物中。這些配方中可以含有制藥上允許使用的載體或賦形劑，有時(shí)還可有其他組分。
有蟲草發(fā)酵產(chǎn)物(包括Cs-4)的藥物組合物或食品組合物中可以有的其他組分包括但不限于維生素、抗氧化劑、氨基酸、金屬鹽、礦物質(zhì)、肉汁、蔬菜汁及增味劑。作為口服應(yīng)用，含有蟲草的組合物可以直接加到食物中，使得有效治療量的蟲草能在正常進(jìn)餐時(shí)被攝取。將Cs-4加到天然的或已加工過的食品中可以采用文獻(xiàn)報(bào)道的任何方法。
本發(fā)明提出的組合物作為口服用，可以是單一劑型的分散的固體如膠囊、藥片、扁囊劑(cachet)，每一個(gè)中含一定量的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物粉或顆粒；或?yàn)橐环N溶液或水懸浮液；一種非水的液體；一種水包油的乳劑或一種油包水的乳劑。通常，這類組合物的制備可以是將活性組分和液態(tài)載體、或分得很細(xì)的固態(tài)載體、或此兩種載體，一起均勻而完全地混合，然后有必要的話就將產(chǎn)品外形做成所要的形狀。
這樣的藥物組合物或食品組合物可以另外加入粘合劑(如預(yù)膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)，填料(如乳糖、戊聚糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)，潤(rùn)滑劑(硬脂酸鎂、滑石或硅粉)，崩解劑(馬鈴薯淀粉或淀粉羥乙酸鈉)，濕潤(rùn)劑(如月桂酸硫酸鈉)。藥片或膠囊可按文獻(xiàn)的方法褂衣。
口服的是溶液、糖漿或懸浮液；或制成干燥產(chǎn)品臨服前加水或其他適當(dāng)?shù)拿劫|(zhì)沖服。這類液體制劑可用通常的方法制備，可加藥用添加劑(如山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化的食用脂肪)；乳化劑(如卵磷脂或阿拉伯膠)；非液體媒質(zhì)(如杏仁油、油酯、乙醇或精制的植物油)；防腐劑(如甲基或丙基對(duì)羥苯甲酸或山梨酸)。這類制劑還可制成為人造食品，含有適量的緩沖鹽，增味劑，著色劑以及甜味劑。
為給病人提供有效量的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物可以采用任何劑型。包括片劑、膠囊、散劑、懸浮劑、溶液等等。因?yàn)槭褂梅奖?，片劑和膠囊是最好的服用劑型，此時(shí)采用上述的固體藥用載體。除上述普通劑型外，本發(fā)明的產(chǎn)品也可采用控釋方法。然而最適的固體口服制劑是膠囊。
片劑要用模壓制備，還常加一種以上輔助性組分。制片時(shí)蟲草產(chǎn)物為粉狀或顆粒狀，通常要加填料，潤(rùn)滑劑，惰性稀釋劑，表面活性劑或分散劑，混合后用適當(dāng)?shù)臋C(jī)器壓成型。最好做成膠囊，含約0.3克Cs-4粉。
本發(fā)明將參考下述實(shí)施例加以描述，實(shí)施例詳細(xì)描述了研究蟲草的效能和安全性的臨床試驗(yàn)。顯然，對(duì)材料和方法可以作許多改變，這些都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)施例1本例提供了本發(fā)明的生產(chǎn)蟲草發(fā)酵產(chǎn)物發(fā)酵方法的實(shí)例。此方法包括一系列按次序進(jìn)行的培養(yǎng)和發(fā)酵，需時(shí)約16天。其后約需3天對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行處理。一級(jí)種子培養(yǎng)如下進(jìn)行1．培養(yǎng)基在總量2升水中，加入如下物質(zhì)葡萄糖40克蔗糖 40克蛋白胨10克麥麩(注) 100克磷酸二氫鉀3.0克硫酸鎂1.5克注5％麥麩，水煮30分鐘，用紗布過濾取濾液。
2．20個(gè)500毫升培養(yǎng)瓶，每個(gè)加100毫升培養(yǎng)基，滅菌，放冷至25℃，酸堿度為6.4。
用Cs-4斜面菌種接種于每個(gè)瓶中。
3．接種的培養(yǎng)物于25℃培養(yǎng)4天，搖床速度每分鐘90轉(zhuǎn)。二級(jí)種子培養(yǎng)如下進(jìn)行1．培養(yǎng)基在總量20升水中，加入物的比例同上述一級(jí)種子葡萄糖 400克蔗糖 400克蛋白胨 100克麥麩 1000克磷酸二氫鉀 30克硫酸鎂 15克2．20個(gè)5升培養(yǎng)瓶，每個(gè)加1.0升培養(yǎng)基，滅菌，放冷，將上述Cs-4一級(jí)種子逐個(gè)接種于每個(gè)瓶中。
3．接種的二級(jí)種子培養(yǎng)物于25℃培養(yǎng)4天，搖床速度每分鐘90轉(zhuǎn)。一級(jí)種子罐(300升)發(fā)酵如下進(jìn)行1．發(fā)酵培養(yǎng)基總量200升的水中加入葡萄糖2％4000克蔗糖 2％4000克豆餅粉 2％ 4000克磷酸二氫鉀 0.15％300克硫酸鎂 0.075％ 150克大豆油 0.01％20毫升2．培養(yǎng)基滅菌，放冷至25℃，酸堿度6.4。
3．將20升Cs-4級(jí)種子加于發(fā)酵罐中。
4．于23℃發(fā)酵3天，攪拌速度每分鐘150轉(zhuǎn)，通氣每小時(shí)1.8立升。大規(guī)模發(fā)酵(3噸發(fā)酵罐)如下進(jìn)行1．發(fā)酵培養(yǎng)基總量2000升水中，加入葡萄糖2％ 40公斤蔗糖 2％ 40公斤豆餅粉2％ 40公斤磷酸二氫鉀0.15％3公斤硫酸鎂0.075％ 1.5公斤大豆油0.01％200毫升2．培養(yǎng)基滅菌，放冷至25。
3．將200升一級(jí)種子罐的培養(yǎng)物加到發(fā)酵培養(yǎng)基中。
4．于23℃發(fā)酵，攪拌速度每分鐘150轉(zhuǎn)，通氣每小時(shí)20立升。
5．第5天在顯微鏡下檢查發(fā)酵物中的菌絲體含量。見到菌絲體有小氣泡形成且有少量孢子，終止發(fā)酵，得到發(fā)酵物1.6噸。發(fā)酵物于每分鐘2000轉(zhuǎn)離心30分鐘。
6．離心后得到的菌絲體于90℃干燥3天，磨粉，得到約50公斤Cs-4菌絲體粉。
7．對(duì)蟲草發(fā)酵產(chǎn)物的分析表明，其腺苷含量為0.14％，甘露醇7.04％。
這樣得到的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物可用于上述藥物組合物和營(yíng)養(yǎng)組合物。實(shí)施例2本例描述Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物用于治療高血脂癥病人的臨床試驗(yàn)以觀測(cè)其療效。
273例高脂血癥病人隨機(jī)分為兩組。一組服用Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物，另一組服安慰劑作為對(duì)照。其中Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物制成膠囊，每膠囊含Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物0.33克。結(jié)果臨床試驗(yàn)結(jié)果見表1至表3。資料表明，服Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物的高脂血病人與對(duì)照組病人相比，血清脂質(zhì)有了好轉(zhuǎn)。由表1可見，服Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物的病人血清膽固醇低于對(duì)照組病人。表2表明，服Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物的病人血清甘油三酯也較對(duì)照組低。表3說明，服Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物組病人的血清高密度脂蛋白升高。
表1．Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)高脂血癥病人血清膽固醇含量的影響
表2．Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)高脂血癥病人血清甘油三酯含量的影響
表3．Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)高脂血癥病人血清高密度脂蛋白含量的影響
上述結(jié)果說明，蟲草發(fā)酵產(chǎn)物可用于調(diào)節(jié)人的血清脂質(zhì)和脂蛋白(例如，膽固醇，甘油三酯和高密度脂蛋白)含量，使其維持在健康的水平。
雖然可以對(duì)本發(fā)明的上述公布材料進(jìn)行修改，但根據(jù)在下述的專利要求可知，這種修改也屬于本發(fā)明范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1．一種生產(chǎn)蟲草發(fā)酵產(chǎn)物的方法，包括在有氧條件下用一種不含昆蟲物質(zhì)的培養(yǎng)基使蝙蝠蛾擬青霉Cs-4菌株發(fā)酵，并從培養(yǎng)物中得到蟲草菌絲體。
2．一種生產(chǎn)蟲草發(fā)酵產(chǎn)物的方法，包括(1)在一種不含昆蟲物質(zhì)的培養(yǎng)基上，接種至少一種屬于蝙蝠蛾擬青霉真菌菌株，并在約24℃的有氧條件下培養(yǎng)約2-5天；(2)在不含昆蟲物質(zhì)的新鮮培養(yǎng)基、約24℃的有氧條件下培養(yǎng)此菌約2-5天；(3)重復(fù)步驟(2)使能得到足夠的菌量，以開始用發(fā)酵罐進(jìn)行大規(guī)模的蟲草發(fā)酵；(4)在大規(guī)模的發(fā)酵罐中，從步驟(3)，用不含昆蟲物質(zhì)的新鮮培養(yǎng)基，在約24℃的有氧條件下培養(yǎng)此菌約5天；以及(5)除去培養(yǎng)基，將蟲草菌絲體干燥，得到蟲草發(fā)酵產(chǎn)物。
3．根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中發(fā)酵是采用蝙蝠蛾擬青霉Cs-4菌株進(jìn)行。
4．根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中發(fā)酵在酸堿度為約6.2至6.4時(shí)進(jìn)行。
5．根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中培養(yǎng)基含有葡萄糖和蔗糖，其濃度各為約2％。
6．根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中發(fā)酵是在溫度約24℃時(shí)進(jìn)行。
7．根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中發(fā)酵是在約2天至20天時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。
8．一種適于哺乳動(dòng)物口服或胃腸外給予的藥物組合物，包含有效量的由Cs-4發(fā)酵得來的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物及一種賦形劑。
9．一種適于哺乳動(dòng)物口服或胃腸外給予的營(yíng)養(yǎng)品組合物，包含有效量的由Cs-4發(fā)酵得的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物及一種賦形劑。
10．權(quán)利要求8或9的組合物，其中所述的組合物為適于作口服的膠囊劑、片劑或扁膠囊。
11．權(quán)利要求8或9的組合物，其中所述的組合物為適于作口服或胃腸外給予的懸浮液，溶液或其他適當(dāng)?shù)尼尫畔到y(tǒng)。
12．權(quán)利要求8或9的組合物，它還含有至少一種維生素或增味劑。
13．一種藥品，它含有權(quán)利要求1或2的方法生產(chǎn)的蟲草發(fā)酵產(chǎn)物約0.3克。
14．一種用作食品添加劑或藥品的合成性蟲草發(fā)酵產(chǎn)物，其中所述的發(fā)酵產(chǎn)物是用權(quán)利要求1或2的方法生產(chǎn)的。
15．蝙蝠蛾擬青霉Cs-4菌株，其于1997年10月21日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)，保藏號(hào)為CGMCC NO.0327。
16．一種固體劑型，它含有約100毫克至600毫克的Cs-4發(fā)酵產(chǎn)物及一種藥用賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及制備蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵產(chǎn)物的新方法,這種產(chǎn)物可用作食品添加劑和治療藥品。本發(fā)明還包含一種蝙蝠蛾擬青霉的新菌株和用此新菌株進(jìn)行發(fā)酵的方法。蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵產(chǎn)物含有活性成分,其藥理學(xué)和營(yíng)養(yǎng)學(xué)性質(zhì)與天然產(chǎn)的冬蟲夏草相似。其藥方及食品配方能用于治療和預(yù)防多種疾病,包括高脂血疾病,心血管疾病,腦血管疾病,高血壓,肺疾病,腎疾病,生殖功能紊亂及免疫功能紊亂。這些方劑也能用于維持老年人的最適健康和使病后恢復(fù)期患者恢復(fù)精力。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1215754SQ97119180
公開日1999年5月5日 申請(qǐng)日期1997年10月24日 優(yōu)先權(quán)日1997年10月24日
發(fā)明者包天桐, 岳德超 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所