專利名稱：青?；【煞壑苿┑闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明青海弧菌干粉制劑屬微生物制劑領(lǐng)域目前水質(zhì)對生物毒性的測試有多種方法但簡單易行的是采用海洋發(fā)光細(xì)菌(主要是明亮發(fā)光桿菌)進(jìn)行，如Bulich.A.A在AmericanSociety for Testing and materials，Philadolphia，PA，1979，PP98-106文章中所述的那樣，可是，海洋發(fā)光菌的發(fā)光生理要求比較苛刻，它必須在含3％NaCl，酸度在PH7左右，環(huán)境的溫度控制在15°-25℃之間，在如此的環(huán)境中，方能顯出它的正常發(fā)光本能。但在實(shí)際測定中，由于在污染水樣中加入3％NaCl后，往往使樣品的生物毒性發(fā)生改變，使測得結(jié)果的可信度降低，這樣使海洋發(fā)光菌在測試生物毒性中的運(yùn)用大大地受到限制。
本發(fā)明為改變海洋發(fā)光菌在測試水質(zhì)的生物毒性上受到的限制，在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)青?；【l(fā)光的生理要求比海洋發(fā)光菌發(fā)光生理要求低，適用范圍廣的優(yōu)點(diǎn)，并且青?；【芍瞥筛煞蹌?，使之更易保存和應(yīng)用。
本發(fā)明利用在青海湖中裸鯉的體表培養(yǎng)分離而得的發(fā)光細(xì)菌--青?；【瑢⒋饲嗪；【瞥筛煞壑苿?，其主要技術(shù)是將青海弧菌經(jīng)液體培養(yǎng)至對數(shù)期，離心分離收集弧菌體，然后將菌體洗滌干凈后，重新懸浮于保護(hù)劑溶液中，其保護(hù)劑為牛奶1-10％，蔗糖和海藻糖1-10％，精氨酸0.1-0.5％，水為余量。再將菌體的懸浮液分裝于安瓿，每瓶1ml，置于冰中使之凍結(jié)成固態(tài)，然后，取出置于冷凍干燥機(jī)上干燥至含水量約5％左右，將安瓿封口，貯于冰箱10℃以下待用。在測試中，首先使青?；【煞壑苿┘尤霃?fù)蘇液A或復(fù)蘇液B，使其復(fù)蘇后，對水質(zhì)的毒性進(jìn)行測試，其復(fù)蘇液A為0.05-0.2M PH6.0-9.0磷酸緩沖液，復(fù)蘇液B為0.5-8％葡萄糖液。
青?；【谡麴s水環(huán)境中穩(wěn)定發(fā)光一個(gè)多小對，在5％NaCl鹽液中仍繼續(xù)生長和發(fā)光良好。適應(yīng)的生長和發(fā)光的溫度和酸度分別在10°-30℃和PH5.5-9.5的范圍內(nèi)。青海弧菌這些生長，發(fā)光特性，大大優(yōu)于海洋發(fā)光細(xì)菌對生長，發(fā)光的環(huán)境要求。因此，青?；【褂玫乃岫龋瑴囟?，鹽度的范圍更廣泛，測定的結(jié)果更為可靠。
實(shí)施例1.將青?；【后w培養(yǎng)至對數(shù)中期，用3000rpm的離心機(jī)離心10分鐘，收集菌體，將菌體用蒸餾水洗滌干凈后重新懸浮于保護(hù)劑溶液，其保護(hù)劑溶液為牛奶，海藻糖，精氨酸和水，其濃度分別為8％，4％及0.3％，余量為水，接著將青?；【鷳腋∫悍盅b于安瓿，每瓶為1ml，置于干冰中使其凍結(jié)成固態(tài)，取出后再放入冷凍干燥機(jī)上干燥至含水率為5％左右，置于冰箱10℃以下待用。
在待測樣品中加入NaCl，使其鹽度為0.5％NaCl，或加入葡萄糖，其濃度為3％左右，然后取出青?；【煞壑苿?，加入3ml復(fù)蘇液A于安瓿中，搖勻，靜置5min，復(fù)蘇液A為0.07MPH9.0磷酸緩沖液，將復(fù)蘇后的青?；【?0μl加至2ml待測樣品液中，置于發(fā)光光度計(jì)上測定發(fā)光度，同時(shí)作空白液發(fā)光度測試對照試驗(yàn)。以發(fā)光抑制章依此求得水質(zhì)毒性的程度。
2.取青?；【煞壑苿?，經(jīng)復(fù)蘇液B處理，復(fù)蘇液B為2％葡萄糖，的水溶液。在2ml的待測樣品中，(含4％的葡萄糖)加入50μl復(fù)蘇液B青海弧菌葡萄液，按實(shí)施例1的方法，進(jìn)行同樣的測定，依此求得以重金屬污染為主的水質(zhì)毒性。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明為用于生物毒性測試的發(fā)光菌干粉制劑與使用，其特征在于本發(fā)明采用淡水型發(fā)光菌青?；【?jīng)培養(yǎng)，分離后，于保護(hù)劑保護(hù)下經(jīng)冷凍干燥制得的干粉劑，使用時(shí)，用不同的復(fù)蘇液復(fù)蘇青?；【?，測定水質(zhì)對生物毒性的程度。
2.根據(jù)權(quán)項(xiàng)1所述的發(fā)光菌干粉制劑制法，其特征在于洗凈的青?；【帽Ｗo(hù)劑保護(hù)，冷凍，干燥制得，其保護(hù)劑為牛奶 1-10％蔗糖和海藻糖 1-10％精氨酸0.1-0.5％水 余量
3.根據(jù)權(quán)項(xiàng)要求1所述的發(fā)光菌干粉制劑，其特征在使用中，首先進(jìn)行青?；【膹?fù)蘇，采用復(fù)蘇液A為對一般水質(zhì)生物毒性的測定，復(fù)蘇液B為對以重金屬污染為主的水質(zhì)生物毒性的測定。復(fù)蘇液A0.05-0.2MPH6.0-9.0磷酸的緩沖液復(fù)蘇液B0.5-8％葡萄糖液。
全文摘要
本發(fā)明系采用青海弧菌經(jīng)培養(yǎng)篩選,加入保護(hù)液,制成干粉制劑,在使用中,根據(jù)測試水質(zhì)不同的對象,采用不同的復(fù)蘇液使青?；【鷱?fù)蘇,對水質(zhì)進(jìn)行生物毒性的測試。
文檔編號C12Q1/04GK1187537SQ9710620
公開日1998年7月15日 申請日期1997年1月7日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月7日
發(fā)明者朱文杰, 鄭敬民, 趙曙霞 申請人:華東師范大學(xué), 上海市環(huán)境保護(hù)局