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功能性三聯(lián)吡啶-金屬配合物,其制備方法和帶有三聯(lián)吡啶-金屬配合物的寡核苷酸結(jié)合物的制作方法

文檔序號:449093閱讀:462來源:國知局

專利名稱::功能性三聯(lián)吡啶-金屬配合物,其制備方法和帶有三聯(lián)吡啶-金屬配合物的寡核苷酸結(jié)合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明涉及環(huán)狀三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物,在其所成之大環(huán)上有8個氮原子和10個碳原子,在其三聯(lián)吡啶部分含一個功能基,一種通過三聯(lián)吡啶肼與吡啶-2,6-二醛或酮縮合的制備方法,這些配合物與寡核苷酸的締合以及這些締合物用于RNA序列專一性裂解的方法。RNA在金屬離子催化條件下水解久已為人熟知。這種裂解一般發(fā)生在RNA的未配對區(qū)域,在英語中稱之為“環(huán)”“l(fā)oops”。對于t-RNAphe裂解的同一應(yīng)用目的,W.J.Krzyzosiak等人在‘生物化學(xué)’1988,27,5771-5777文中建議用二醋酸鉛,G.J.Murakawa等在‘核酸研究’1989,17,5361-5375文中述及嵌入1,10-菲咯啉的銅配合物,J.Ciesiolka等人在‘歐洲生化雜志’1989,182,445-450著文揭示了三氯化銪應(yīng)用于同一目的裂解tRNAphe。C.S.Chow等人在‘美國化學(xué)會志’1990,112,2839-2841文中應(yīng)用了釕和銠與菲咯啉配體的配合物。而在‘生物化學(xué)’29卷2515至2523頁L.S.Behlen等提及tRNAphe與二醋酸鉛的變體。此后,N.Hayashi等人在‘無機化學(xué)’1993年32卷5899至5900頁描述了鑭系配合物也適于tRNA裂解。后來D.Magda等人在美國化學(xué)會志1994年116卷7439-7440報告,由銪(III)-Texaphyrin和帶DNA-片段的寡核苷酸之結(jié)合物來裂解一靶RNA,其中在RNA/寡核苷酸配合物中的Texaphyrin配合物僅被裂解約30%。這種Texaphyrin配合物也有不利之處,在配體中須有另外的羥丙基結(jié)合,才能保證足夠的溶解度。配體的亞胺基不耐水解,所以在水性環(huán)境中其效力相當(dāng)快地減低,這就是說作治療應(yīng)用時只有一個微不足道的存留時間。通過配體的水解金屬被激離出來,引起嚴(yán)重的毒性問題和非選擇性RNA裂解。因為它是弱路易斯酸,當(dāng)銪離子電荷經(jīng)一個配體中和,一個二元配體配合物就形成了。上述的配合物都是通過昂貴的合成方法得到的。我們知道,細(xì)胞中生理上有害的多肽發(fā)生是通過基因調(diào)控下的mRNA合成而完成。為了抵抗或阻止疾病就希望有種方法阻止mRNA的作用。特別是能夠通過在確定位點不可逆裂解而破壞mNRA,因之失去其所含信息。因此還可以希望通過RNA鏈的序列特異性裂解提供一種碎片,以迅速在反義區(qū)構(gòu)成寡核苷酸為診斷目的之用(生物傳感器)或能用于疾病治療中以影響細(xì)胞內(nèi)代謝過程。人們發(fā)現(xiàn),一個對于靶RNA是序列互補并且結(jié)合一個三聯(lián)吡啶-鑭系配合物的寡核苷酸是高效的,并且能夠?qū)崿F(xiàn)靶RNA的序列專一裂解。本發(fā)明就是通式I的化合物其中R1為H或一個取代基和R5為一個一價功能基,或R1為一個一價功能基,R5為H或一取代基,這里功能基直接通過一個基團Z連接到吡啶環(huán)上,基團Z是在必要時以-O-,-S-,-NR12-,-C(O)O-或-C(O)NR12-隔開的選自下列基團的殘基C1-C20亞烷基,C2-C12亞烯基,C2-C12亞炔基,C5-C8亞環(huán)烷基,C6-C12亞芳基和C7-C12亞芳烷基,R2和R7彼此獨立地表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳烷基,C6-C16芳基或鹵素,R3和R6彼此獨立地表示H,C1-C4烷基,C7-C12芳烷基或C6-C16芳基,R4為H,C1-C20烷基,C5-C8環(huán)烷基,C6-C12芳基或C7-C12芳烷基,R12為H或C1-C6烷基,Me表示一個鑭系金屬或釔,Y表示一種酸的陰離子,n表示數(shù)字2或3,和m為數(shù)字1、2或3。在這里烷基、環(huán)烷基、芳基烷基、芳基和基團Z殘基是未被取代的或以C1-C4烷氧基、F、Cl、Br、-CN、C1-C4烷基或-NO2取代。R1和R5作為取代基優(yōu)選選擇C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基或C6-C16芳基,帶有O,S,N作為雜原子的C4-C16芳基,C6-C12雜芳基,C1-C4烷基硫基,雙(C1-C4烷基)氨基,鹵素基、磺酰胺基或羧酰胺。R1和R5優(yōu)選是連接在吡啶環(huán)氮原子的對位。R2、R3、R6和R7代表烷基時優(yōu)選是甲基和乙基,作烷氧基時優(yōu)選是甲氧基和乙氧基,作芳烷基優(yōu)選是亞芐基或亞苯乙基,而作芳基則優(yōu)選是萘基和特別是芐基。在一種實施方案中R2和R7為H和R3、R6為烷基,尤其是R2和R7為H及R3和R6為C1-C4烷基,并且特別是都為甲基。R2、R3、R6和R7也可以是以O(shè)、S、N作雜原子的C4-C12雜環(huán)芳基,例如吡啶基、噻唑基、咪唑基、噁唑基、呋喃基、吡啶基、苯硫基。此外還能是C1-C4烷基硫基,鹵素基、雙(C1-C4烷基)氨基、磺酰胺和羧酰胺。R4作為烷基含有1-12C、優(yōu)選1-8C,特別是1-4C原子。烷基的若干例子如甲基、乙基和丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十八烷基、十九烷基和二十烷基的各異構(gòu)體。R4作為環(huán)烷基優(yōu)選含有5或6環(huán)碳原子。作為環(huán)烷基的若干例子如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)戊基和環(huán)辛基。R4表示芳基則優(yōu)選是萘基特別是苯基。當(dāng)R4為芳基烷基時,它優(yōu)選是芐基或苯乙基。對R4而言一組優(yōu)選的基團是H,C1-C4烷基,特別是甲基及苯基或芐基。R1以及R5作為烷基優(yōu)選是甲基或乙基,作為烷氧基優(yōu)選是甲氧基或乙氧基,作為芳基優(yōu)選是萘基或苯基,作為芳烷基優(yōu)選是芐基或苯乙基,優(yōu)選是R1及R5是為H、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基。在本項發(fā)明范圍內(nèi)其一價功能基主要由下列基團中選取-OR10,-SR10,-NCO,-NCS,-NHR11,-C(O)OR11,-C(O)SH,-C(O)NHR11,-C(O)Cl,-C(S)SR11,-C(S)NHR11,-C(S)OR11,-SO3R11,-SO2NHR11-SO2Cl,-P(O)(OH)2,-P(O)(OH)-NHR11,-P(S)(SH)2,-P(S)(SH)-NHR11,-P(S)(OH)2,-P(S)(OH)-NHR11,-P(O)(SH)2,-P(O)(SH)-NHR11,-P(O)(OH)H,-P(O)(NHR11)H,-P(S)(SH)H,-P(S)(NHR11)H,-P(S)(OH)H,-P(O)(SH)H,其中R10為H,-C(O)NH2,-C(S)NH2,-C1-C6-烷基,-CxH2x-NH2,-CxH2x-SH或-(CxH2xO)y-H和R11為H,-C1-C6-烷基,-CxH2x-NH2,-CxH2x-SH或-(CxH2xO)y-H,x等于一個2到6的數(shù)字,y等于一個1到20的數(shù)。尤其優(yōu)選的功能基選自這些-OR10,-SR10,-NCO,-NCS,-NHR11,-C(O)OR11和-P(O)(OH)2,特別是選自-NCS,-C(O)OR11和-P(O)(OH)2這些基團。通式I的化合物可優(yōu)選自其中R2和R7表示H,R3和R6代表C1-C4烷基,R4是H,C1-C4烷基、苯基或芐基,R1是一個通過C1-C3亞烷基、C3-亞炔基、亞苯基或C7-亞芳烷基,特別是C2-C3亞烷基或亞苯連接的一價功能基,R5是H、甲基或甲氧基,或者R5是一個經(jīng)C1-C3亞烷基、C3-亞炔基、亞苯基或C7-亞芳烷基,尤其是C2-C3亞烷基或亞苯基連接的一價功能基,以及R1是H、甲基或甲氧基。在本發(fā)明范圍內(nèi)鑭系金屬是全部的鑭系,即認(rèn)為是鑭(La),鈰(Ce),鐠(Pr),釹(Nd),钷(Pm),釤(Sm),銪(Eu)、釓(Gd)、鋱(Tb),鏑(Dy),鈥(Ho)、鉺(Er),銩(Tm),鐿(Yb)和镥(Lu),優(yōu)選是鑭、鈰、釹、銪和釓,特別是鑭和銪,尤其是優(yōu)選銪。絡(luò)合鹽的適當(dāng)陰離子可由下列一類中選出鹵素離子(如Cl-,Br-和I-),含氧酸的陰離子,BF4-,PF6-,SiF6-和AsF6-。含氧酸的陰離子可舉出的例子如硫酸根、磷酸根、高氯酸根、高溴酸根、高碘酸根、銻酸根、硝酸根、碳酸根、C1-C8羧酸的陰離子例如甲酸根、乙酸根、丙酸根、丁酸根、苯甲酸根、苯乙酸根、一取代、二取代或三取代氯或氟乙酸根,磺酸根類如甲磺酸根、乙磺酸根、丙磺酸根、丁磺酸根、三氟甲磺酸根(Triflat),必要時帶C1-C4烷氧基、C1-C4烷氧基或鹵素取代基,特別是氟、氯或溴取代基的苯磺酸或芐基磺酸,例如甲苯磺酸、甲磺酸、對溴苯磺酸、對甲氧或?qū)σ已趸交撬?、五氟苯磺酸?,4,6-三異丙基苯磺酸,和膦酸例如甲基膦酸、乙基膦酸、丙基膦酸、丁基膦酸、苯基膦酸、對甲基苯基膦酸和芐基膦酸根。適當(dāng)?shù)年庪x子還有酒石酸根、檸檬酸根和乳酸根。在本發(fā)明的范圍優(yōu)選的陰離子是F-,Cl-,Br-,I-,PF6-,SbF6-,BF4-,B(Ph)4-,醋酸根,NO3-,硫酸根和磷酸根,特別優(yōu)選的陰離子是Cl-,醋酸根和NO3-。上述的那些優(yōu)選和注釋,特別是那些取代基,適于所述的通式I化合物也適于下述通式V的化合物。本項發(fā)明的另一方面是通式V的化合物。其中R2和R7彼此獨立地表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基或鹵素,R3和R6彼此獨立地表示H,C1-C4烷基,C7-C12芳基烷基或C6-C16芳基,R4是H,C1-C20烷基,C5-C8環(huán)烷基,C6-C12芳基或C7-C12芳基烷基,這里的烷基、環(huán)烷基、芳基烷基和芳基或不被取代或以C1-C4烷氧基、F、Cl、Br、-CN、C1-C4烷基或-NO2取代;Me表示一個鑭系金屬或釔,Y表示一個酸的陰離子,n是一個2或3的數(shù),m是一個1、2或3的數(shù),R9表述為式VI的一個殘基-Xp-A-X′q-A′r-Oligo(VI)R8是H或一個取代基或者R9表示H或一個取代基和R8為式VI的一個殘基,p、q和r彼此獨立地為0或1,X和X′相互獨立地表示一個未被取代基團或者以C1-C4烷氧基、F,Cl,Br,-CN,C1-C4烷基或-NO2取代的選自C1-C20亞烷基,C2-C12亞烯基,C2-C12亞炔基,-(CxH2xO)y-,其中x等于一個2到6的數(shù),y是一個1到20的數(shù),C5-C8亞環(huán)烷基,C6-C12亞芳基和C7-C12亞芳烷基的基團。A和A′相互獨立地代表-O-,-S,-S-S,-NR12-CO-NR12-,-NR12-CS-NR12-,-NR12-,-NR12-C(O)-O-,-C(O)O-,-C(O)S-,-C(O)NR12-,-C(S)S-,-C(S)O-,-C(S)NR12-,-SO2NR12-,-SO2-,-P(O)(OH)O-,-P(S)(SH)S-,-P(S)(SH)O-,-P(S)(OH)O-,-P(O)(SH)S-,-P(O)(OH)S-,-P(O)(SH)O-,-P(O)(OH)-NR12-,-P(S)(SH)-NR12-,-P(S)(OH)-NR12-,-P(O)(SH)-NR12-,-HP(O)O-,-HP(S)S-,-HP(O)NR12-或HP(S)NR12-,其中R12表示H或C1-C6烷基,以及Oligo表述為一個由天然的、修飾的或合成的脫氧核苷或肽核酸片段衍生而來的天然、修飾或合成的序列,它經(jīng)過一個核酸堿基、一個核苷酸間的橋或一個糖基來連接,并且在其區(qū)域內(nèi)部互補,特別是對于靶RNA是完全互補的。因此q優(yōu)選1。作為取代基的R8和R9適用上述對R5和R1的已有規(guī)定及相應(yīng)的優(yōu)選。在本發(fā)明的范圍內(nèi)靶RNA意味著必須存在一個RNA序列靶物。因此能存在多聚核糖核酸(RNA),優(yōu)選地涉及m-RNA(信使RNA),pre-m-RNA(前體信使RNA),t-RNA(轉(zhuǎn)移RNA),sn-RNA(小核RNA),r-RNA(核糖體RNA)和病毒RNA。它也能存在由RNA和脫氧核糖核酸(DNA)的混合序列,例如嵌合的RNA-DNA(Okazaki片段)。RNA提供同樣多的片段(Bausteine),一個與寡核苷酸的復(fù)合物(雙鏈)就得以構(gòu)成。在本發(fā)明范圍內(nèi)一個序列是被理解為在其區(qū)域內(nèi),例如序列的外部核苷酸片段可有多至5個,優(yōu)選是3個,優(yōu)選是1到2個不必與靶RNA互補。這樣就有其優(yōu)點,聯(lián)接上三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物的序列的末端能夠運動并從而起作用。寡核苷酸可以部分地或完全由與靶RNA互補天然DNA片段,或者同樣由互補于靶RNA的非天然的合成核苷酸來構(gòu)成,在此部分意味著,在寡核苷酸序列中靶RNA天然DNA片段通過同樣的互補非天然合成核苷酸替代。合成的片段包含著對天然片段在核酸堿基、呋喃糖環(huán)和/寡核苷酸的橋基團的修飾。合成的結(jié)構(gòu)一般著眼于以增強雙鏈結(jié)構(gòu)的配合物的形成和/或寡核苷酸穩(wěn)定性,來提高其抗核苷酶分解能力。修飾的核苷在‘反義技術(shù)’領(lǐng)域作為合成或修飾互補的寡核苷酸已有大量已知結(jié)果,這里不再贅述(例見于E.Uhlmann等,化學(xué)評論,1990年,90卷,4期,543-584頁)。作為修飾,可以考慮基團的改變,這些改變發(fā)生在核素堿基部分(如取代、取代基的刪除),在核苷酸橋聯(lián)基團(如磷酸酯基團改變或為另一橋聯(lián)基團替代),在呋喃糖環(huán)(如在2′-羥基上取代,呋喃糖的O原子被替代,呋喃糖環(huán)被單或雙碳環(huán)替代,呋喃糖環(huán)為開鏈結(jié)構(gòu)所替代)。在寡核苷酸序列中片段的選擇和順序依靶RNA必要的雙螺旋結(jié)構(gòu)選定,并且與三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物聯(lián)結(jié)的種類和位置也影響到片段的選擇和次序。在寡核苷酸中片段和數(shù)目是按與靶RNA雜合的完成而確定。這種寡核苷酸可具有5到100個,優(yōu)選是5到50個,更好地是8到30個,優(yōu)選是10到25個片段。與靶RNA高級結(jié)構(gòu)配對(核苷酸堿基配對)優(yōu)選是排在寡核苷酸的中間序列部分,例如在后四個之間,或后三個,后兩個或該序列的最后一個片段。例如一個有20個片段的寡核苷酸其配對的片段優(yōu)選是在其4到7片段。寡核苷酸優(yōu)選是由嘌呤類和嘧啶型核苷構(gòu)成,特別是2′-脫氧-2-氨基腺苷,2′-脫氧-5-甲基胞苷,2′-脫氧腺苷,2′-脫氧胞苷,2′-脫氧尿苷,2′-脫氧鳥苷和2′-胸苷。特別優(yōu)選的是2′-脫氧腺苷(A),2′-脫氧胞苷(C),2′-脫氧鳥苷(G)和2′-胸苷(T)。修飾的結(jié)構(gòu)單元按嘌呤型和嘧啶型天然核苷來進(jìn)行,特別優(yōu)選是腺苷,胞苷,鳥苷,2-氨基腺苷,5-甲基胞苷,胸苷和其脫氧衍生物。這些核苷也可采用2′-修飾的核糖核酸。在本發(fā)明中一個很優(yōu)選的實施方案是向一個靶RNA互補由天然的脫氧核苷來的寡核苷酸,特別是由2′-脫氧腺苷(A),2′-脫氧胞苷(C),2′-脫氧鳥苷(G)和2′-胸苷(T)或者由互補的非天然合成的片段所構(gòu)成。在本發(fā)明范圍內(nèi)所有這些修飾的寡核苷酸,抗核苷酶的穩(wěn)定性提高的核苷均是優(yōu)選的。寡核苷酸也可由肽核酸(PNA)的序列組成,這樣三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物就優(yōu)選是在核酸堿基上連接氨基或羧基端。對于DNA序列的構(gòu)成,關(guān)于寡核苷酸的優(yōu)先選擇的同樣適用。例證可見于‘科學(xué)雜志’254卷,14970-1500頁。三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物主要通過一個橋聯(lián)基團連接到寡核苷酸序列中的3′-或5′-端基的N-或O-原子上,但也可連接到核酸堿基的C、N-或O-原子上或在序列末端中呋喃糖環(huán)的2′-位置,或連接于序列中核苷酸橋基的O-,S-或N-原子上。結(jié)合的方式有賴于三聯(lián)吡啶-鑭系配合物及其功能基團的種類。一個橋聯(lián)基團可以是改造了的功能基,它能直接地或通過一化合物基團連接到三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物或寡核苷酸上。在寡核苷酸上結(jié)合的可以是離子鍵,優(yōu)選是共價鍵。三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物也能連接到一個碳環(huán)核苷酸類似物的6′-碳原子上。作為三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物和寡核苷酸之間的橋組成部分,X和X′有直接結(jié)合的形式X0或X0′,或以X1或X1′形式,這是些二價的具有1-22個碳原子的開鏈或環(huán)狀碳?xì)浠鶊F,這些基團不斷開或以-S-,-NR12-,-C(O)O-或-C(O)NR12-斷開,或具有1-12個亞噁烷基單元的聚亞噁烷基,且在亞烷基中含2-3個碳原子。碳?xì)浠衔锘鶊F可如一線性或分枝的C1-C20亞烷基,優(yōu)選是C1-C18亞烷基,特別優(yōu)選是C1-C12亞烷基,最優(yōu)選是C1-C8亞烷基,還有C3-C8亞環(huán)烷基,優(yōu)選的是C5-或C6-亞環(huán)烷基,C12-亞芳基或C7-C12亞芳烷基。二價烴類基的一些例子是亞甲基,亞乙基,1,2-或1,3-亞丙基,1,2-,1,3-或1,4-亞丁基,1,2-,1,3-,1,4-或1,5-亞戊基,1,2-,1,3-,1,4-,1,5-或1,6-亞己基,1,2-,1,3-,1,4-,1,5-,1,6-或1,7-亞庚基,1,2-,1,3-,1,4-,1,5-,1,6-,1,7-或1,8-亞辛基,以及亞壬基,亞癸基、亞十一烷基,亞十二烷基、亞十三烷基,亞十四烷基,亞十五烷基,亞十六烷基,亞十七烷基,亞十八烷基,亞十九烷基,亞二十烷基,亞環(huán)戊基、亞環(huán)己基,亞環(huán)萘基和尤其是亞苯基,亞芐基和亞苯乙基的異構(gòu)體。亞聚噁烷基的一些例子是亞乙氧基,雙亞乙氧基,三亞乙氧基,四亞乙氧基和1,2-丙氧基。尤為優(yōu)選的是橋聯(lián)基團,在其中X為C1-C3亞烷基,C3-亞炔基、亞苯基或C7-亞芳基,特別優(yōu)選是C2-C3亞烷基或亞苯基。還有一些優(yōu)選的橋聯(lián)基團,其中X′為C1-C20亞烷基,特別優(yōu)選是C1-C10亞烷基。二價的基團A可以是-NR12-CS-NR12-或-C(O)NR12,特別優(yōu)選是-NH-CS-NH-或-C(O)NH-。通式V的優(yōu)選化合物是這樣一些,其中A′不是現(xiàn)有的基團或是-P(O)(OH)O-。通式V的優(yōu)選化合物是這樣一些,其中R2和R7相互獨立地表示H或C1-C4烷基。R3和R6各自獨立地表示H或C1-C4烷基是有利的。在另一些優(yōu)選的實施方式中R4表示H或C1-C20烷基。關(guān)于適當(dāng)?shù)蔫|系金屬及陰離子的優(yōu)化是選內(nèi)容是已經(jīng)列舉過的,這也適用于通式V的化合物。本發(fā)明的另一方面是為通式I化合物合成的中間產(chǎn)物。這就是通式II的化合物。其中R1表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳烷基或C6-C16芳基,或一個一價功能基,這個功能基直接或經(jīng)過一個基團Z連接到吡啶環(huán)上,基團Z必要時可由-O-,-S-,-NR12-,-C(O)-或-C(O)NR12-斷開,可選自C1-C20亞烷基,C2-C12亞烯基,C2-C12亞炔基,C5-C8亞環(huán)烷基,C6-C12亞芳基和C7-C12亞芳烷基,R2和R7各自獨立地表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳烷基,C6-C16芳基或鹵素,和R3和R6分別獨立地是H,C1-C4烷基,C7-C12芳烷基或C6-C16芳基,R12是H或C1-C6烷基,這里殘基是烷基,環(huán)烷基,芳烷基,芳基,基團Z不被取代或以C1-C4烷氧基,F(xiàn),Cl,Br,-CN,C1-C4烷基或-NO2取代。制備通式I化合物過程中的另一中間產(chǎn)物,及本發(fā)明的另一目的是通式III的化合物。其中R5表示一個經(jīng)過C2-C20亞烷基連接在吡啶環(huán)上的一價功能基,這里的功能基選自-C(O)-OR12,-C(O)-NHR12,-SO2-R12和-SO2NHR12,R12是H或C1-C6烷基,和R4為H或C1-C20烷基。對這些中間產(chǎn)物,那些對最終產(chǎn)物所作描述的優(yōu)選方案也相應(yīng)地適用。本發(fā)明的又一目的是制造通式I化合物的方法,其中通式II的三聯(lián)吡啶與通式III的吡啶二醛或吡啶二酮在式IV的一種鹽類存在下縮合Men+(Ym-)n/m(IV)其中R1,R2,R3,R4,R5,R6,R7,Me,Y,n和m在此前已描述其定義,特別是對于通式I化合物的定義,優(yōu)選和注釋。作為實例的方法實施,是將通式II、III和IV的化合物以優(yōu)選的當(dāng)量數(shù)溶于一種溶劑,然在升高的溫度一同轉(zhuǎn)化。同時使用縮合催化劑,例如濃無機酸,特別是鹽酸或酸性離子交換樹脂。加入吸水劑或從反應(yīng)混合物中移去反應(yīng)水可能是符合目的的。反應(yīng)溫度可在例如40到220℃,優(yōu)選在50到150℃。使用有機極性質(zhì)子惰性溶劑為溶劑是有益的。適當(dāng)?shù)娜軇┤缢蜆O性質(zhì)子惰性溶劑,可與水混溶的為佳。這樣一些溶劑的例子有醇類(甲醇、乙醇、n-或i-丙醇,丁醇,1,2-亞乙基二醇,丙二醇,乙二醇單甲醚,二乙二醇,二乙二醇單甲醚),醚類(乙醚,二丁醚,四氫呋喃,二噁烷,乙二醇二甲醚,乙二醇二乙醚,二乙二醇二乙醚,三乙二醇二甲醚),鹵代烴(二氯甲烷,氯仿,1,2-二氯乙烷,1,1,1-三氯乙烷,1,1,2,2-四氯乙烷,氯苯),羧酸酯及內(nèi)酯類(乙酸乙酯,丙酸甲酯,苯甲酸乙酯,2-甲氧基乙酸乙酯,γ-丁內(nèi)酯,δ-戊內(nèi)酯,新戊內(nèi)酯),N-烷基化羧酰胺和內(nèi)酰胺(N,N-二甲基甲酰胺,N,N-二乙基甲酰胺,N,N-二甲基乙酰胺,四甲基脲,六甲基磷酸三酯,N-甲基-γ-丁內(nèi)酰胺,N-甲基-ε-己內(nèi)酰胺,N-甲基吡咯烷酮),亞砜類(二甲亞砜,四亞甲亞砜),砜類(二甲基砜,二乙基砜,三亞甲砜,四亞甲砜),季胺(三甲胺,三乙胺,N-甲基哌啶,N-甲基嗎啉,吡啶),取代苯類(氯苯,O-二氯苯,1,2,4-三氯苯,硝基苯,甲苯,二甲苯)和腈類(乙腈,丙腈,苯腈,苯乙腈)。通式IV的金屬鹽類是一般所知的并且大部分可購得。通式II所包含化合物的新功能基制備可類似地依E.C.Constable在‘多面體’雜志1988年7卷24期2531-2536頁所述方法實現(xiàn),這些功能基在必要時可帶保護基。帶有或沒有功能基的式II和式III化合物一般都是已知的或者能按照已知或類似的方法制備。通式III的化合物中,R4為H,R5表示C2-C18亞烷基-X5,而X5表示-C(O)-OR,-C(O)-NHR,-SO2-R或-SO2-NHR,以及R是H或C1-C6烷基,這些都是新的化合物并可由下述方法得到在鈀催化下將一個相應(yīng)的3-鹵代吡啶-1,5-二羧酸酯以一個通式為CH2=CH-C1-C15-亞烷基羧酸酯的烯使之烯化,催化氫化烯基,還原成相應(yīng)的1,5-二羥基甲基吡啶烷基羧酸酯,氧化羥基甲基成為醛基并且在必要時水解酯基成為羧酸基或?qū)Ⅴセ0坊婶人狨0贰Mㄊ絀II的化合物,其中R4表示C1-C12烷基,R5為C2-C18亞烷基-X5,X5表示-C(O)-OR,-C(O)-NHR,-SO2-R或者-SO2-NHR,R是H或C1-C6烷基,這些化合物是新的并可由下述方法得到在鈀催化下將一相應(yīng)的化合物如乙酰保護的3-鹵代-1,5-二羥基甲基吡啶(得自相應(yīng)的3,5-二羧酸甲酯還原)以一個式為CH2=CH-C1-C6亞烷基羧酸酯的烯使之烯基化,氫化烯基例如催化氫化,羥基脫保護并在必要時氧化成相應(yīng)的3,5-吡啶醛,這些醛基能以例如格氏試劑作C1-C12烷基化,在必要時再將酯水解成為羧酸或?qū)Ⅴセ0坊蔀轷0?,并將仲醇基氧化成為酮基。本發(fā)明的另一個方面是式V化合物的制備方法,其中一個式I的化合物a)與式VIa的化合物反應(yīng)A″-X′-A′0或1-Oligo(VIa)其中A″是一個選自下述基團中的適當(dāng)一價功能基-OR10,-SR10,-NCO,-NCS,-NHR11,-C(O)OR11,-C(O)SH,-C(O)NHR11,-C(O)Cl,-C(S)SR11,-C(S)NHR11,-C(S)OR11,-SO3R11,-SO2NHR11,-SO2Cl,-P(O)(OH)2,-P(O)(OH)-NHR11,-P(S)(SH)2,-P(S)(SH)-NHR11,-P(S)(OH)2,-P(S)(OH)-NHR11,-P(O)(SH)2,-P(O)(SH)-NHR11,-P(O)(OH)H,-P(O)(NHR11)H,-P(S)(SH)H,-P(S)(NHR11)H,-P(S)(OH)H,-P(O)(SH)H,其中R10是H,-C(O)NH2,-C(S)NH2,-C1-C6-烷基,-CxH2x-NH2,-CxH2x-SH或-(CxH2xO)y-H,R11表示H,-C1-C6-烷基,-CxH2x-NH2,-CxH2x-SH或-(CxH2xO)y-H,x是一個2到6的數(shù),y是一個1到20的數(shù),X′是一個不被取代或以C1-C4烷氧基,F(xiàn),Cl,Br,-CN,C1-C4烷基或-NO2取代的下述基團C1-C20亞烷基,C2-C12亞烯基,C2-C12亞炔基,-(CxH2xO)y-,其中x是2到6的數(shù),y是1到20的數(shù),C5-C8亞環(huán)烷基,C6-C12亞芳基,C7-C12亞芳烷基,A′表示-O-,-S-,-S-S-,-NR12-CO-NR12-,-NR12-CS-NR12-,-NR12-,-NR12-C(O)-O-,-C(O)O-,-C(O)S-,-C(O)NR12-,-C(S)S-,-C(S)O-,-C(S)NR12-,-SO2NR12-,-SO2-,-P(O)(OH)O-,-P(S)(SH)S-,-P(S)(SH)O-,-P(S)(OH)O-,-P(O)(SH)S-,-P(O)(OH)S-,-P(O)(SH)O-,-P(O)(OH)-NR12-,-P(S)(SH)-NR12-,-P(S)(OH)-NR12-,-P(O)(SH)-NR12-,-HP(O)O-,-HP(S)S-,-HP(O)NR12-或-HP(S)NR12-,其中R12為H或C1-C6烷基,和Oligo可描述為一個由天然的、修飾的或合成的脫氧核苷或肽核酸片段而來的天然、修飾或合成的序列,它們通過一個核堿基、一個核苷酸內(nèi)的橋或一個糖基相連接并且其內(nèi)部區(qū)域與靶RNA互補,或者(b)與一個式VIb的化合物反應(yīng)A″-Oligo(VIb)其中A″和Oligo的意義已如(a)項中所述。本發(fā)明的制造寡核苷酸結(jié)合物方法可以如下進(jìn)行,將一種在必要時功能化的寡核苷酸溶解在一種溶劑或混合溶劑中,然后加入帶適當(dāng)功能基的三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物,必要時在攪拌下進(jìn)行反應(yīng)。所得的結(jié)合產(chǎn)物再以很熟知的方法提純并在必要時進(jìn)行分離。反應(yīng)溫度可在0°到120℃之間,優(yōu)選是20到80℃,優(yōu)選使反應(yīng)在室溫進(jìn)行。酯化、酯交換(Umesterungs)或酰胺化是互相聯(lián)系的,有關(guān)的羧酸基可用熟知的方式活化,例如經(jīng)由與碳化二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺反應(yīng)。反應(yīng)物按克分子關(guān)系加入是合乎目的的,但可使用過量的催化劑或寡核苷酸。為了純化可用些通常的方法,例如滲析,電泳和色譜法,像高效液相色譜(HPLC),反相HPLC,親合色譜,離子交換色譜和凝膠色譜都是有利的。所使用的功能化寡核苷酸能以已知方法用自動合成儀制造,這些都可購得。用于此合成的核苷是已知的,部分可買到或按類似方法制造。本發(fā)明的三聯(lián)吡啶-寡核苷酸結(jié)合物特別適于RNA序列的序列專一性裂解,只須微不足道量的加進(jìn)去就有催化作用。本項發(fā)明的另一目的是在生理條件下和在一種合成的三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物影響下裂解核糖核酸的磷酸核苷酸橋的方法,其特征在于,a)靶RNA與一個寡核苷酸復(fù)合,其內(nèi)部序列與靶RNA互補,再在它上面結(jié)合一個三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物;b)然后再起反應(yīng)并裂解。本發(fā)明的方法能經(jīng)體內(nèi)施用寡核苷酸或在體外配合靶RNA和本發(fā)明相關(guān)的,所使用的寡核苷酸來實行。方法的施行可在專家們熟悉的生理條件下進(jìn)行,如在水性介質(zhì)中pH5到9范圍內(nèi),優(yōu)選是pH5到8優(yōu)選是pH5到范圍內(nèi),該水介質(zhì)亦可含惰性組分,例如堿金屬或堿土金屬的鹽,以及在一個緩沖體系中。此方法可在0°到100℃的溫度下施行,優(yōu)選是在20°到50℃,優(yōu)選是在30°到40℃。以本發(fā)明的方法實現(xiàn)了以形成帶有2′,3′-環(huán)磷酸酯基和5′-羥基端基片段,將磷酸酯橋連化合物經(jīng)酯交換反應(yīng)裂解。這種環(huán)磷酸酯可以接著進(jìn)行進(jìn)一步水解。本發(fā)明的三聯(lián)吡啶-寡核苷酸結(jié)合物被發(fā)現(xiàn)可作為藥物使用。它對于核苷酶降解具有很高的穩(wěn)定性。特別意外的是它們與RNA-Typ的互補核苷酸鏈的極好的配對。此外還表現(xiàn)出意外的高度細(xì)胞吸收性。這種發(fā)明的寡核苷酸特別適用于反義技術(shù),這就是說通過結(jié)合到mRNA上一個適當(dāng)?shù)幕パa核苷酸序列以阻止不希望的蛋白產(chǎn)物表達(dá)(EP266099,WO87/07300和WO89/08146)。它們能通過在核酸水平上阻斷生物活性蛋白的表達(dá)來治療感染或疾病。本發(fā)明的另一目的也是關(guān)于所發(fā)明的寡核苷酸在治療方法中的應(yīng)用,這是通過在體內(nèi)失活核苷酸序列而治療溫血動物包括人類疾病的治療方法。體重約70kg的溫血動物每日用藥量為0.01到1000mg。給藥尤以胃腸外制劑形式給藥,例如靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥。為了胃腸外給藥首先一種水溶性生物活性物質(zhì)的水溶液是適用的,例如一種水溶性生理上無須多慮的鹽,或這一生物活性物質(zhì)的水性懸浮液,其中含有增粘度物質(zhì)如羧甲基纖維鈉、山梨醇和/或葡聚糖和特別的穩(wěn)定劑,這樣生物活性物質(zhì)必要時與助劑一起以一種凍干形式存在,給藥前補加適當(dāng)溶劑配成溶液使用。本發(fā)明的結(jié)合物也能以一種吸入或以一種脂質(zhì)體形式的給藥方式應(yīng)用。本發(fā)明的結(jié)合物也能作診斷目的之用,或作為序列特異性內(nèi)核糖核酸酶的分子生物學(xué)助劑。本發(fā)明的又一目的是關(guān)于一種含水組合物尤其是基于一種含水溶液或懸浮液的藥物制劑,其中僅含有效量的式V化合物或與另一種生物活性一起,水作為藥物賦形劑,優(yōu)選以大量存在,必要時,含有助劑。藥理學(xué)有效的化合物可以胃腸外給藥的制劑或輸注溶液(Infusionsloungen)的形式應(yīng)用。這樣的溶液主要是等滲水溶液或懸浮液,例如用親水性制劑,其中只含有有效物質(zhì)或同時含一種載體物質(zhì)如甘露糖制備而應(yīng)用。藥物制劑可以被滅菌,并/或含有助劑,例如防腐劑、穩(wěn)定劑、浸潤劑和/或乳化劑、溶解促進(jìn)劑,鹽類以調(diào)節(jié)滲透壓和/或作緩沖劑。這種藥物制劑,根據(jù)需要還可含有其它的治療上有效的物質(zhì)如抗生素類,用已知熟知的方法來制造,例如用方便的溶解法或親水化處理方法,其中所含有的活性物質(zhì)約0.1到90%,優(yōu)選是0.5到30%,如1%到5%之間。圖中是由一個反義寡核苷酸和一個底物RNA分子得到的雜種分子結(jié)構(gòu)實例。圖1所示為一個由底物RNA(標(biāo)有5′的線)和一個反義寡核苷酸(標(biāo)有3′的線)結(jié)合到發(fā)明的配合物(以Ln表示)所成的雜種分子(所謂結(jié)合物)。底物RNA的核苷酸片段所給的編號如此定義,編號如此進(jìn)行底物RNA的核苷酸互補于反義寡核苷酸的核苷酸,在其結(jié)合于配合物之處,編號為“0”。然后其它的編號為凡在底物RNA3′-方向的依次升高為+1,+2等,在5′方向則為-1,-2等。圖2表示一個由具體的底物RNA(CG-1352,見實例)和一個本發(fā)明的反義寡核苷酸結(jié)合物(以3′注明)雜種分子的表示線。底物RNA的粗體印刷核苷酸(此處為G)互補于反義寡核苷酸結(jié)合物的核苷酸,配合物在此處結(jié)合。下述實施例用以說明本發(fā)明。A.制備三吡啶-鑭系金屬配合物的初始化合物實施例A1三聯(lián)吡啶雙肼類化合物制備a)向6-乙?;?2-溴吡啶(100mMol)在200ml甲醇中的溶液冰浴冷卻下加入40ml2N氫氧化鉀水溶液。再加入相應(yīng)取代的苯甲醛(400mMol)后移去冰浴,反應(yīng)混合物在室溫下繼續(xù)4小時。產(chǎn)物被過濾,水洗3次并用冷甲醇洗兩次,于高真空下干燥。按這種方法制得的化合物a.1(R1,苯基-4-OCH3。MS317.7),a.2(R1,苯基-4-NO2,MS333.6),a.3(R1,苯基-3-NO2,MS334),a.4(R1,苯基-2-NO2,MS334)和a.5(R1苯基)。(b)由(a)所得的α,β-不飽和羰基化合物(30mMol),1-(2-溴代吡啶羰基甲基)吡啶碘化物(12.1.克,30mMol)和醋酸銨(13.9克,180mMol)置燒瓶中并加100ml醋酸。該混合物被加熱回流,2小時后冷卻室溫,過濾所得產(chǎn)物于高真空下烘干。按此方法制得的化合物.b.1(R1,苯基-4-OCH3,MS497.1),b.2(R1,苯基-4-NO2,MS512),b.3(R1,苯基-3-NO2,MS513),b.4(R1,苯基-2-NO2,MS512)和b.5(R1,苯基)。向四氯化鈦(30mMol)在75ml無水四氫呋喃溶液于室溫并在氬氣氛下分次加入氫化鋁鋰(22mMol)。該懸浮液于室溫攪拌20分鐘,接著冷卻到0℃。加入化合物b.2(10mMol),此懸浮液于室溫攪拌30分鐘。于0℃小心滴加50ml水后再加入25ml25%氨水溶液。該混合物中加150ml氯仿經(jīng)硅藻土過濾。分離出水相并用氯仿提取三次。將有機相合并,水洗一次后在硫酸鈉上干燥并濃縮。按這個程序制備化合物b.6(R1,苯基-4-NH2,MS482.5),同類化合物b.7(R1苯基-3-NH2,MS482)和b.8(R1,苯基-2-NO2,MS482)也被制得。(c)由(b)所得的相應(yīng)二溴代三聯(lián)吡啶化合物(10mMol)溶于30ml甲肼中,加熱回流17小時。冷卻到室溫后濃縮,殘渣溶于20ml甲醇。產(chǎn)物被過濾并于高真空下烘干。按這個方法制得化合物c.1(R1,苯基-4-OCH3,M要427),c.2(R1,苯基-4-NH2,MS412.5),c.3(R1,苯基-3-NH2,MS412),c.4(R1,苯基-2-NH2,MS412)和c.5(R1,苯基)?;衔颿.1(10mMol)懸浮于100ml氯仿中,用冰浴冷卻20分鐘再加入1當(dāng)量濃度的三溴化硼在二氯甲烷中的溶液(50ml)。此懸浮液被加熱回流5天,冷卻到室溫后倒入300ml冰水中,以200ml2N鹽酸水溶液酸化。乙醚提取(兩次)后水相用10%硫酸鈉水溶液調(diào)pH9.0并且攪拌30分鐘。沉淀的化合物c.6(R1,苯基-4-OH,MS413.5)被過濾并在高真空下烘干。實施例A23-[4′-(2′,6′-二甲?;拎?]丙酸制備(a)3.5克4-溴吡啶-2,6-羧酸二甲酯,390毫克三甲苯基膦,9.3ml丙烯酸特丁酯,7.1ml三乙胺,30ml二甲基甲酰胺和287mg醋酸鈀混合并加熱到110℃。90分鐘后反應(yīng)混合物被冷卻到室溫,用乙醚/二氯甲烷(1∶1)稀釋并用NH4Cl/H2O震搖提取。有機相用Na2SO4干燥,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮并在高真空下烘干。CHN計算值59.815.964.36測定值59.86.04.1250mg鈀活性碳(5%)和2.5克上述化合物溶在250ml甲醇中于室溫下氫氣氛中氫化過夜。產(chǎn)物用Hyflo過濾,濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮并在室溫下高真空烘干。CHN計算值59436.554.33測定值59.36.64.35.0克上述化合物溶于50ml甲醇和50ml四氫呋喃中,冷卻到0℃后加入1.1克NaBH4。50分鐘后再加1.1克NaBH4,并在130分鐘后加0.5克NaBH4。溫?zé)岬绞覝毓?65分鐘后再冷卻到0℃。3.5小時后再次加入1.1克NaBH4。6小時后濃縮到60ml體積。然后滴加飽和氯化銨溶液,用二氯甲烷提取4次,有機相用氯化銨溶液洗一次,用Na2SO4干燥,過濾并濃縮。CHN計算值62.907.925.24測定值63.07.95.219.8克上述化合物溶于330ml二噁烷,然后加入16.2克二氧化硒。反應(yīng)混合物被加熱到100℃并攪拌,45分鐘后冷卻到室溫。再攪拌兩小時反應(yīng)混合物被過濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。CHN計算值63.876.515.32測定值64.146.535.434.7克上述化合物加入17.2ml冰冷卻的三氟乙酸,轉(zhuǎn)化成酸后該混合物于0℃濃縮。CHN計算值57.974.386.76測定值57.554.216.61(b)5克4-溴吡啶-2,6-二羧酸二甲酯于室溫溶于175ml氫呋喃,然后加入75ml甲醇。冷卻到0℃,于45分鐘內(nèi)分次加入3.44克硼氫化鈉并溫?zé)嶂潦覝亍?小時后在10分鐘內(nèi)滴入30ml丙酮。加熱反應(yīng)混合物使回流1小時,然后將反應(yīng)混合物以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至干,殘渣于室溫下混入50ml吡啶。然后加入0.1克4-二甲胺基吡啶,冷卻至0℃。于30分鐘內(nèi)滴加34.4ml醋酸酐,將此懸浮液溫?zé)嶂潦覝?,再加?0ml四氫呋喃。在室溫下攪拌過夜后反應(yīng)混合物被過濾并以約50ml四氫呋喃洗滌兩次,濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮,產(chǎn)物經(jīng)重結(jié)晶得4-溴-2,6-二(乙酰氧甲基)吡啶(熔點66-69℃)。0.982克4-溴-2,6-二(乙酰氧甲基)吡啶,1.5克3-(三丁基錫基)丙烯酸乙酯和176毫克四(三苯基膦)鈀溶于25ml二噁烷并加熱到90℃。90分鐘后反應(yīng)混合物被冷卻,分離固體產(chǎn)物并從正己烷/乙酸乙酯中重結(jié)晶。MS321(M+)2.74克上述得到的化合物和70毫克Wilkinson催化劑溶于150ml苯中,加入12.2ml三乙基硅烷,此溶液被加熱回流,再于1小時內(nèi)分次加入270mg催化劑三乙基硅烷。產(chǎn)物經(jīng)色譜法純化。MS323。267mg鈉溶于50ml己醇中,7.2ml此溶液加于1.845克上述所得化合物于35ml乙醇的溶液中。于室溫下攪拌2.5小時后此反應(yīng)混合物經(jīng)過硅膠過濾,濾液濃縮至干,產(chǎn)物在高真空下干燥過夜。NMR(CDCl3)δ7.0(2H,s),4.7(4H,s),4.1(2H,q),2.9(2H,t),1.2(3H,t)。1.27克上述產(chǎn)物溶于30ml二噁烷,向其中加入714mg二氧化硒。反應(yīng)混合物被加熱并在2小時后經(jīng)棉花過濾,濾液濃縮至干。殘渣溶于乙酸乙酯/二氯甲烷(5%)再經(jīng)硅膠過濾。1H-NMR(CDCl3)δ10.1(2H,s),8.0(2H,s),4.1(2H,q),3.1(2H,t),2.7(2H,t),1.2(3H,t)。向45ml乙醚和350mg上述產(chǎn)物的溶液于0℃加13ml一制備好的溶液(0.949克溴化銅,二甲亞砜在10ml乙醚中;冷卻到0℃后加入5.9ml甲基鋰)。室溫攪拌5.5小時后冷卻到0℃,加入2ml冰醋酸在8ml乙醚中的溶液。于室溫攪拌過夜后加入的60ml水,用二氯甲烷萃取四次。有機相用硫酸鈉干燥,過濾,濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮,產(chǎn)物經(jīng)色譜純化。MS266(M+H)+。向4.5ml二氯甲烷和草酰氯的溶液于-78℃加入0.5mlDMSO(二甲亞砜)。15分鐘后此溶液加于193mg上述產(chǎn)物于4ml二氯甲烷的溶液中。于-78℃兩小時后再加1.5ml三乙胺。于0℃攪拌30分鐘后加入15ml水,用乙醚提取四次。有機相以Na2SO4干燥,并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮,經(jīng)色譜純化。CHN計算值63.876.515.32測定值63.966.555.450.464克上述產(chǎn)物和5ml4NHCl-起被加熱到50℃。90分鐘后反應(yīng)被冷卻到室溫并用冰水稀釋,得晶體產(chǎn)物。CHN計算值61.275.575.95測定值61.25.56.2實施例A3.其它三聯(lián)吡啶-雙肼化合物和2,6-二羰基吡啶類化合物的制備1.2,6-二羰基化合物(f)的制備(a)化合物(d)的制備0.3克(1.4mMol)2,6-雙(羥甲基)4-溴吡啶,0.25克(2.8mMol)N-甲基氨基乙酸和0.11克(2.8mMol)NaOH加于15ml甲醇和15ml水的溶液部,用氮氣加壓到250巴,再于100℃加熱到無固形的2,6-雙(羥甲基)-4-溴吡啶時止。兩天后反應(yīng)結(jié)束。棕色的反應(yīng)物被濃縮,產(chǎn)物被色譜純化(流動相,20-80%MeOH/CH2Cl2),得一種黃色油狀物。1H-NMR(MeOH)δ6.6(2H,s),4.5(4H,s),3.8(2H,s),3.1(2H,s),3.0(2H,s)。(b)化合物(e)的制備將5.4g上述的產(chǎn)物(d)懸浮于450ml甲醇中并加熱至沸,向其中加入6ml濃硫酸,這樣得一清亮溶液。此溶液加熱回流3小時后冷卻,向溶液中加5克碳酸鉀并攪拌10分鐘。固體物被過濾,濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。粗產(chǎn)物在硅膠柱上純化(硅膠44克,流動相1/9/50,乙酸/甲醇/二氯甲烷),得黃色晶體。1H-NMR(MeOD)δ6.8(2H,s),4.6(4H,s),3.7(2H,s),3.7(3H,s),3.2(3H,s)。(c)化合物(f)的制備上述產(chǎn)物(e)(0.557g,2.31mmol)在8ml吡啶/二惡烷(1∶1)中的溶液被加熱至沸,向所得的黃色溶液中加入1.54g二氧化硒(13.7mmol),并加熱回流4小時(直至不再有離析物)。冷卻到室溫后用約100ml丙酮/二氯甲烷(1∶9)處理,經(jīng)一個小硅膠柱過濾再用少量溶劑洗脫。得到的清亮黃色溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮,粗產(chǎn)物用柱色譜純化(流動相丙酮/二氯甲烷1∶40),得白色固體。1H-NMR(CDCl3)δ10.1(2H,s),7.3(2H,s),4.2(2H,s),3.8(3H,s),3.2(3H,s)。2.2,6-二羰基吡啶類化合物(k)的制備(a)化合物(g)的制備580mg叔丁醇鉀(5.17mmol)及20ml二甲亞砜置于氬氣保護的100ml三口瓶中,1克4-羥基-2,6-吡啶二羧酸二甲酯(4.7mmol)分次加入(微入熱反應(yīng))。10分鐘后緩慢滴加1.04ml溴乙酸叔丁醇酯(7.05mmol)在2ml二甲亞砜中的溶液并繼續(xù)攪拌3小時。然后加入冰水停止反應(yīng),反應(yīng)物用乙醚提取3次,乙醚相用30ml水洗一次后用硫酸鈉干燥。溶液在放置蒸發(fā)器上濃縮并在高真空烘干。得到白色微黃晶體,再于硅膠柱上(70g硅膠60F,Merck9385,流動相甲醇/二氯甲烷1∶100)純化,得到白色晶體。1H-NMR(CDCl3)δ7.8(2H,s),4.7(2H,s),4.0(6H,s),1.5(9H,s)。(b)化合物(h)的制備1.17克(3.6mmol)上述制得的化合物(g)溶于65ml二甲氧基乙烷并冷卻至0℃。680mgNaBH4分小份加入,于0℃攪拌15分鐘后,反應(yīng)物被熱到室溫。在室溫下反應(yīng)3小時后該反應(yīng)物再冷至0℃。加入12ml丙酮并攪拌15分鐘。反應(yīng)物溫?zé)岬绞覝剡^夜。濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮并隨之于高真空下烘干。由第一個反應(yīng)的粗產(chǎn)物溶于55ml吡啶并冷卻至0℃,加入6.8ml(72mmol)醋酸酐和44mg(0.36mmol)二甲基胺基吡啶。此混合物被加熱到室溫,用水稀釋后乙醚提取3次。有機相用Na2SO4干燥并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮,然后在高真空下烘干,殘留一種棕色油狀物。此產(chǎn)物用柱色譜純化(100g硅膠,流動相1%甲醇的CH2Cl2),得純化產(chǎn)物。1H-NMR(CDCl3)δ6.8(2H,s),5.2(4H,s),4.6(2H,s);(c)化合物(i)的制備170mg(0.46mmol)上述得到的化合物(h)溶于6.5ml甲醇并冷卻到0℃。加入1.7ml32%氨水,繼續(xù)攪拌1.5小時。反應(yīng)混合物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮并在高真空下烘干。得一種黃色膠狀物,此物經(jīng)柱色譜(20g硅膠60F,Merck編號9385,流動相甲醇/二氯甲烷,1∶15)純化,最終產(chǎn)物為白色固體。1H-NMR(CD3OD)δ7.0(2H,s),4.8(2H,s),4.5(4H,s),1.5(9H,s);(d)化合物(j)的制備在25ml錐形瓶中于氬氣保護下溶解260微升(μl)草酰氯(3.0mmol)在6ml二氯甲烷中,冷卻到-78℃,接著加入370μl二甲亞砜(5.25mmol)。反應(yīng)物于-78℃攪拌混合15分鐘。再加入上述所得化合物(i)(200mg,0.75mmol)在2ml二氯甲烷/200μl二甲亞砜中的溶液加入(控制溫度!)。然后繼續(xù)在-78℃攪拌2小時,用1.04ml三乙胺(2.5mmol)在2ml二氯甲烷中的溶液萃滅反應(yīng)。于0℃繼續(xù)攪拌15分鐘后,反應(yīng)物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮并在高真空烘干。得棕色晶體,再經(jīng)硅膠60F過濾(流動相正己烷∶乙酸乙酯,2∶1)。1H-NMR(CDCl3)δ10.1(2H,s),7.6(2H,s),4.7(2H,s),1.5(9H,s);(e)化合物(k)的制備65mg上述制得的化合物(j)在14ml4N鹽酸溶液中室溫下攪拌1.5小時,此反應(yīng)物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至干并在高真空下干燥。得微黃色晶體粗產(chǎn)物。1H-NMR(CD3OD)δ7.4(2H,s),5.1(2H,s);3.三聯(lián)吡啶-雙肼基化合物(o)的制備(a)化合物(m)的制備11.49g(205mmol)KOH磨細(xì),再與20g(164mmol)4-羥基苯甲醛和1.66g(4.09mmol)Aliguat336(三辛基甲基氯化銨)一起用單錨式攪拌混合,在冰浴冷卻下小心滴加l2.24ml(164mmol)3-溴丙醇。反應(yīng)混合物被加熱到100℃。暗棕色懸浮液在氬氣保護下于100℃加熱過夜。向反應(yīng)混合物中加入250mlCH2Cl2繼續(xù)攪拌。所得的懸浮液經(jīng)Hyflo過濾、濃縮并在高真空下烘干。粗產(chǎn)物分兩部分以快速柱色譜純化(流動相2%THF/CH2Cl2),得最終產(chǎn)物。1H-NMR(CDCl3)δ9.9(1H,s),7.8(2H,d),7.0(4H,d),4.2(2H,t),3.9(2H,m),1.9(1H,s)。(b)化合物(n)的制備13g上述制得的化合物(m)(0.072mol),28.86g2-乙?;?6-溴吡啶(0.144mol),63.72g乙酰胺(1.08mol)和41.58g乙酸銨(0.54mol)置于一燒瓶中,并于180℃攪拌2小時。此棕色懸浮液冷卻到120℃并滴加140克氫氧化鈉在300ml水中的溶液。反應(yīng)混合物再加熱2小時。反應(yīng)物結(jié)成暗棕色膠狀物,然后傾去溶劑,再用水洗一次。黑色膠狀物溶于盡可能少的醋酸中,在熱溶液中加入等當(dāng)量的溴化氫水溶液(48%水溶液)并放置過夜。吸濾出亮黃色晶體,用水溶解并用4當(dāng)量氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值7-8。此黃色懸浮液用二氯甲烷萃取3次,有機相經(jīng)棉花過濾,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮并于高真空下烘干。粗產(chǎn)物用乙醇重結(jié)晶,得黃色晶體。MS計算峰值543m/z(M+H+)測定峰值542m/z(M+H+)(c)化合物(o)的制備6.38g上述得到的化合物(n)置于88ml甲基肼中,加熱到85℃并攪拌2小時。冷卻后加入150mlMeOH,產(chǎn)物沉淀出來。該懸浮液被過濾,所得晶體烘干。1H-NMR(DMSO)δ8.5(2H,s),7.8(4H,m),7.7(2H,t),7.2(2H,d),7.1(2H,d),4.6(2H,t),4.1(2h,t),3.5(2H,m),3.3(2H,s),1.9(2H,m)。4.三聯(lián)吡啶-雙肼基化合物(q)的制備(a)化合物(p)的制備2.6g9-醛基蒽(12.5mmol),5g2-乙?;?6-溴吡啶(25mmol),11.2g乙酰胺(187.5mmol)和7.1g醋酸銨(93.7mmol)置于一燒瓶中,所得棕色液體被加熱回流2小時(浴溫180℃),然后冷卻到110℃,滴加33g氫氧化鈉溶于71ml水中的溶液。反應(yīng)物再回流2小時,再冷卻到90℃。所得溶液被傾析,固體物用水洗兩次。此黑色物質(zhì)溶解在25ml醋酸中。加入1.75ml48%溴化氫水溶液并放置5天。此懸浮物被過濾,所得綠色沉淀用乙醚洗滌。該晶體懸浮于水中,用2當(dāng)量氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值到8。用二氯甲烷提取,有機相用硫酸鈉干燥后,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮并在高真空下干燥,得綠色物質(zhì)。此物用約400ml乙醇重結(jié)晶。所得晶體溶解于乙醇/二氯甲烷混合溶劑中,以飽和碳酸銨溶液提取兩次。有機相再在硫酸鈉上干燥,復(fù)原并在高真空干燥。粗產(chǎn)物在一柱上純化(流動相乙酸乙酯/正己烷,1∶9),得綠棕色晶體。MS計算峰值568m/z(M+H+)測定峰值569m/z(M+H+)(b)化合物(q)的制備1.43g(2.5mmol)如上所得的化合物(p)加到50ml甲基肼中并加熱回流過夜,得一暗棕色溶液,反應(yīng)物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。產(chǎn)物懸浮于熱甲醇中然后過濾,得400mg綠色晶體。由CH3CN中重結(jié)晶,先是清亮濾液,冷卻后過濾。在高真空下干燥后得綠色晶體。這些晶體由CH3CN再重結(jié)晶一次以得純化,仍得一綠色結(jié)晶物。母液也同樣被濃縮,可得1g棕色晶體。由CH3CN同樣經(jīng)重結(jié)晶再高真空干燥后,得一淡棕色晶體。元素分析計算值74.83%C5.47%H19.70%N測定值74.76%C5.55%H19.42%N5.2,6-二羰基化合物(r)的制備118μl(1.38mmol)草酰氯在氬氣保護下加入2mlCH2Cl2中并冷卻到-78℃,然后小心滴加195μl(2.75mmol)DMSO。此反應(yīng)物于-78℃攪拌15分鐘。另將100mg(0.458mmol)2,6-二(羥甲基)-4-吡啶溶于100μlDMSO中并以1mlCH2Cl2稀釋。將此溶液加到上述反應(yīng)物中,并在-78℃攪拌1小時。再加381μl(2.75mmol)Et3N后在0℃攪拌15分鐘。濃縮后殘渣溶于H2O和CH2Cl2。兩相分離,水相用CH2Cl2洗兩次。有機相經(jīng)棉花過濾。濃縮后在高真空下干燥,得淡棕色晶體。1H-NMR(CDCl3)δ10.1(2H,s),8.7(2H,s);6.三聯(lián)吡啶-雙肼基化合物(s)的制備72mg實施例A1(b)中所得化合物b.5(0.16mmol)加到480mg丁基肼(5.44mmol)中,并在氬氣保護下加熱到110℃。此懸浮物繼續(xù)加熱過夜。然后反應(yīng)混合物被冷卻,用乙醚和甲醇稀釋,濾去固體物。濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,再加入甲醇使沉淀溶解。由冷卻的溶液中濾出結(jié)晶并用少量甲醇清洗。產(chǎn)物在低真空干燥,得本色晶體。MS計算峰值482m/z(M+H+)測定峰值481m/z(M+H+)B.三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物的制備實施例B11.)1mMol由實施例A1(c)所述三聯(lián)吡啶-雙-肼基化合物在氬氣保護下溶于60ml絕對甲醇中,加入鑭系金屬(III)醋酸鹽(1mMol),并加熱回流10分鐘。向此溶液依次加入1.2mMol前述2,6-二羰基化合物和5mMol濃鹽酸水溶液,煮沸兩天。冷卻到室溫后過濾產(chǎn)物并在高真空下干燥。按此程序可制備表1中化合物1.1到1.28。2.)由實施例A1(c)所述的三聯(lián)吡啶-雙肼基化合物1mMol在氬氣保護下溶于60ml無水甲醇中,加入鑭系金屬(III)氯化物(1mMol)并加熱回流10分鐘。向此溶液依次加1.2mMol實施例A2(a)中得到的化合物,再煮沸過夜。冷卻到室溫后除去溶劑,產(chǎn)物由二甲亞砜和甲苯中重結(jié)晶。按此程序制備表1中的化合物1.29到1.32及同類物1.33到1.44。3.)帶取代基R5的三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物的制備(a)化合物1.45的制備168mg實施例A1(c)所得產(chǎn)物c.5(0.423mmol)溶在20ml干燥甲醇中并加熱至沸。然后向其中加入155mg三氯化銪六水合物(0.423mmol),此黃色懸浮物繼續(xù)攪拌15分鐘。再加入100mg實施例Al(c)所得產(chǎn)物(f)(0.423mmol)在15ml干燥甲醇中的溶液后,此懸浮液在氬氣保護下加熱回流過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫后,使其過濾,并取出獲得的黃色溶液的2/3溶劑加入乙醚從溶液中沉淀出桔黃色晶體并經(jīng)微孔過濾器過濾。固體物在高真空下干燥,得桔黃色晶體。MS計算峰值821m/z(M-Cl-)實測峰值821m/z(M-Cl-)表1中的同類化合物1.46到1.58也可同樣得到。(b)化合物1.59的制備10mg(0.0116mmol)上述得到的化合物1.45加入5ml水中并加熱回流,得一黃色溶液。三天后反應(yīng)物被過濾,濃縮并在高真空下干燥,得一黃色固體。4.)帶其它取代基R5的三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物制備(a)化合物1.60的制備48mg實施例A1(c)所得物質(zhì)c.5(0.12mmol)于7.5ml甲醇中在氬氣中加熱回流,向其中加入44mg三氯化銪六水合物(0.12mmol)并繼續(xù)加熱回流15分鐘。然后加入實施例A3.2(e)所得化合物(k)在2.5ml甲醇中溶液,使此溶液保持回流45分鐘。冷卻的懸浮物經(jīng)濾過后,清亮的黃色濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至約2ml。加入乙醚以沉淀出黃色沉淀,然后以乙醚/甲醇1∶1溶劑洗一次和用乙醚洗兩次。殘渣在高真空下干燥,得黃色晶體。MS計算峰值807m/z(M-Cl-)實測峰值809m/z(M-Cl-)(b)化合物1.61的制備化合物1.61由化合物1.60制得,方法類似于從化合物(1.45)制備化合物(1.59)。MS計算峰值1056m/z[M-3Cl-+2(C8H7O4)-]實測峰值1055m/z[M-3Cl-+2(C8H7O4)-]5.帶有另一些取代基R1的三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物的制備(a)化合物1.62的制備136mg實施例A3.3(c)所得化合物(o)(9.54mmol)溶于干燥甲醇并在氬氣保護下加熱回流。然后加入1.53g三氯化銪六水合物(5.94mmol),反應(yīng)物加熱回流0.5小時。再將溶于100ml干燥甲醇中的1g2,6-二乙酰基吡啶(5.94mmol)和兩滴濃鹽酸加入所得之清亮黃色溶液。將此反應(yīng)混合物加熱回流8天,冷卻至室溫過濾此懸浮液。所得之清亮黃色溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮,加入乙醚得到沉淀物。用乙醚/甲醇1∶1混合溶液洗滌沉淀一次,再以乙醚洗滌兩次,沉淀物在高真空下干燥,得桔黃色固體。MS計算峰值822m/z(M-Cl-)實測峰值822m/z(M-Cl-)6.帶其它取代基R5的三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物的制備(a)化合物1.63的制備96mg實施例A1(c)所得化合物c.2(0.234mmol)溶于20ml干燥甲醇中并于氬氣保護下加熱回流,然后加入60mg三氯化銪六水合物(0.234mmol),此反應(yīng)混合物加熱回流0.5小時。再將溶于15ml干燥甲醇中的實施例A3.5所得化合物(r)(0.234mmol)和2滴濃鹽酸加入所得之清亮黃色溶液。將此反應(yīng)物加熱回流過夜,冷至室溫后將此暗紅色懸浮液經(jīng)Hydrofilter過濾。所得之清亮紅色濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮并加入乙醚使之沉淀。沉淀物用乙醚/甲醇1∶1混合溶劑洗一次再用乙醚洗兩次。產(chǎn)物在高真空下干燥,得暗紅色固體。MS計算峰值813m/z(M-Cl-)實測峰值812m/z(M-Cl-)7.帶有取代基R1或R5的三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物的制備(a)化合物1.64到1.74的制備按上述的類似的反應(yīng)如化合物1.62和1.63制備,由所述的取代2,6-二羰基吡啶類化合物和所述之取代三聯(lián)吡啶-雙肼基化合物制得表1中的化合物1.64到1.74。表1化合物編號Ln3+R1R4R5分子量[M-Cl]計算值/實測值1.1LaPhHH706/7051.2LaPh-4-OHHH722.4/722.31.3LaPh-4-OCH3HH736.4/735.61.4LaPh-4-NH2HH1.5LaPhCH3H734.4/734.41.6LaPh-4-OHCH3H750.4/750.91.7LaPh-4-OCH3CH3H764.5/765.01.8LaPh-4-NH2CH3H749.5/749.51.9EuPhHH719.4/718.91.10EuPh-4-OHHH735.4/735.81.11EuPh-4-OCH3HH749.5/749.31.12EuPh-4-NH2HH734.5/734.51.13EuPhCH3H747.5/7471.14EuPh-4-CHCH3H763.5/763.71.15EuPh-4-OCH3CH3H777.5/777.31.16EuPh-4-NH2CH3H762.5/762.51.17CePh-4-NH2CH3H750.7/749.31.18PrPh-4-NH2CH3H751.4/750.91.19NdPh-4-NH2CH3H754.8/752.71.20GdPh-4-NH2CH3H767.8/766.31.21TbPh-4-NH2CH3H769.5/768.71.22DyPh-4-NH2CH3H773.1/773.21.23HoPh-4-NH2CH3H775.5/774.41.24ErPh-4-NH2CH3H777.8/776.81.25TmPh-4-NH2CH3H779.5/778.81.26YbPh-4-NH2CH3H783.6/783.01.27LuPh-4-NH2CH3H785.5/784.71.28YPh-4-NH2CH3H699.4/698.11.29LaHHCH2CH2COOH1.30EuHHCH2CH2COOH1.31LaPhHCH2CH2COOH*1.32EuPhHCH2CH2COOH**1.33CePhHCH2CH2COOH911/9121.34PrPhHCH2CH2COOH782/7811.35NdPhHCH2CH2COOH915/9151.36GdPhHCH2CH2COOH1060/10591.37TbPhHCH2CH2COOH1062/10621.38DyPhHCH2CH2COOH1066/10651.39HoPhHCH2CH2COOH1068/10681.40ErPhHCH2CH2COOH1070/10701.41TmPhHCH2CH2COOH905/9031.42YbPhHCH2CH2COOH1076/10761.43LuPhHCH2CH2COOH911/9081.44YPhHCH2CH2COOH922/9221.46CePhHN(CH3)CH2C(O)OCH31071/10711.47PrPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31072/10711.48NdPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31075/10731.49GdPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31089/10911.50TbPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31091/10921.51DyPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31094/10941.52HoPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31097/10971.53ErPhHN(CH3)CH2C(O)CCH31099/10991.54TmPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31101/11021.55YbPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31104/11021.56LuPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31107/11041.57YPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31020/10201.58LaPhHN(CH3)CH2C(O)OCH31071/10701.64EuPh-4-NH2BuH888/8881.65EuPh-4-NH2PhH847/8491.66EuPh-4-NH2Ph-4-OCH3H947/9481.67EuPh-4-NCSBuH889/8921.68EuPh-4-NCSPhH1.69EuPh-4-NCSPh-4-OCH3H1085/1086***1.70Eu9-AnthracenylHCH2CH2C(O)CCH3906/9081.71EuPh-2-NH2CH3H763/7621.72EuPh-2-NH2CH3H805/8041.73EuPh-3-NH2CH3H727/7291.74EuPh-3-NH2CH3H805/804Ph苯基Bu丁基*CHNCl計算值(+2DMSO)45.814.1611.5510.96測定值45.54.311.810.6**CHNCl計算值(+2DMSO+4H2O)42.114.5810.6210.07測定值42.24.610.69.5***反離子是THA-(C8H7O4-)實施例B2異硫氰酸酯衍生物的制備向4.4mMol碳酸氫鈉和3.5mMol硫光氣在4ml氯中的懸浮液加入一種表1所列配合物的溶液。該混合物于室溫下劇烈攪拌2.5小時。氯仿相被分離并以水洗一次。所有的水相合并并被弄干,所得的表2中產(chǎn)物2.1到2.15無需進(jìn)一步純化。類似地由表1中其它一些含有伯胺基作取代基的化合物制得相應(yīng)的異硫氰基化合物。表2化合物L(fēng)n3+R1R4R5-分子質(zhì)量數(shù)[M-Cl]編號計算值/實測值2.1CePh-NCSCH3H792.7/792.72.2PrPh-NCSCH3H793.5/791.22.3GdPh-NCSCH3H809.9/807.42.4TbPh-NCSCH3H811.5/811.72.5DyPh-NCSCH3H815.1/815.92.6HoPh-NCSCH3H817.5/816.22.7ErPh-NCSCH3H819.9/819.02.8TmPh-NCSCH3H821.5/820.12.9YbPh-NCSCH3H825.6/826.42.10LuPh-NCSCH3H827.6/825.52.11YPh-NCSCH3H741.5/740.22.12LaPh-NCSCH3H791.5/792.12.13EuPh-NCSCH3H804.6/804.72.14LaPh-NCSHH2.15EuPh-NCSHHC.氨基寡核苷酸的制備約30mg可控微孔玻璃(CPG)固相裝入一個作1.5μMol合成用的標(biāo)準(zhǔn)實用生物合成反應(yīng)器中。此CPG-固相(1)帶有為合成氨基寡核苷酸的連接3′-片段(例如dc)。為了寡聚,加入氨基亞磷酸脂(6),(7),(8),(9)。為了后面經(jīng)氨基打開金屬配合物,特定的氨基亞磷酸酯(10),(11),(12),(13),(14),(15)和(16)被插入。(14)n=3,R=P(N(i-Propyl)2)OCH2CH2CN(15)n=4,R=P(N(i-Propyl)2)OCH2CH2CN(16)n=5,R=P(N(i-Propyl)2)OCH2CH2CN氨基亞磷酸酯(14),(15)和(16)制備實施例-初始化合物(14a)(n=3,R=H)的制備4.0g3-氨基-1-丙醇,3.28g4-甲氧基三苯基氯甲烷和35ml吡啶置于一無水燒瓶中,于室溫和氬氣氛中攪拌4.5小時左右。溶劑被蒸去,殘渣用甲苯洗一次,乙腈處理兩次并不時攪動。所得殘渣溶于二氯甲烷并用飽和碳酸氫鈉溶液洗兩次。水相用二氯甲烷提取三次,有機相合并,在硫酸鈉上干燥并濃縮。然后粗產(chǎn)物經(jīng)快速色譜法(硅膠)純化(流動相乙酸乙酯/正己烷=1∶2),得到一黃色的油。1H-NMRδ值于CDCl3中,OCH3=3.65初始化合物(15a)(n=4,R=H)和(16a)(n=5,R=H)類似地由4-氨基-1-丁醇及5-氨基-1-戊醇制得。1H-NMRδ值于CDCl3中,OCH3=3.65(15a)和3.65(16a)。-氨基亞磷酸酯(14)的制備于氬氣氛中將1.99gN,N-二異丙胺四唑復(fù)鹽和3.5g2-氰乙基-N,N,N′,N′-四異丙胺基亞磷酸酯置于150ml二氯甲烷中,在20分鐘內(nèi)滴加上述所得化合物(14a)在120ml二氯甲烷中的溶液。此黃色的細(xì)懸浮物攪拌4.5小時,然后以250ml二氯甲烷稀釋并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌二次。水相用二氯甲烷提取三次,有機相合并后于硫酸鈉上干燥,濃縮,然后粗產(chǎn)物以快速柱色譜(硅膠)純化(流動相乙酸乙酯/正己烷=1∶4+0.5%N-甲基嗎啉),得一黃色油。13P-NMRδ值在CDCl3中,146.9。氨基亞磷酸酯(15)和(16)類似地由上述所得化合物(15a)和(16a)制得。13P-NMRδ值于CDCl3中,146.9(15)和147.0(16)。按AppliedBiosystem公司的標(biāo)準(zhǔn)記錄,使用該公司的394型合成器合成周期是有變化的〔脫氧序列(6),(7),(8)和(9)的氨基亞磷酸酯偶合時間共2分鐘,(10)和(11)為10分鐘,(12)為5分鐘,(13)共40分鐘;(13)使用了100倍于剩下那些的時間〕。為了所得的寡核苷酸與金屬配合物偶合,相應(yīng)的保護基要在標(biāo)準(zhǔn)條件下裂解??梢再彽玫脑噭┯?.1M氨基亞磷酸四唑/乙腈4%,96%叔丁基苯氧乙酸酐/吡啶/四氫呋喃10%,10%,80%N-甲基咪唑/四氫呋喃16%,84%,三氯乙酸/二氯甲烷2%,98%碘/水/吡啶/四氫呋喃3%,2%,20%,75%下列的氨基寡核苷酸被合成(821)5′-GACTGGCGAGAT*CGGCAGTCGGCTAG-3′,其中T*代表這里T表示胸腺嘧啶(823)5′-GACTGGCGAGAT*CGGCAGTCGGCTAG-3′,其中T*代表這里T為胸腺嘧啶(940)5′-GACTGGCGAGATCGGCAGT*CGGCTAG-3′,其中T*代表(1759)5′-H2N(CH2)3OP(O)2-CGAGATCGGGAGTCGGCTAG-3′,(1760)5′-H2N(CH2)4OP(O)2-CGAGATCGGCAGTCGGCTAG-3′,(1761)5′-H2N(CH2)5OP(O)2-CGAGATCGGCAGTCGGCTAG-3′,und(1757)5′-H2N(CH2)6OP(O)2-GGAGATCGGCAGTCGGCTAG-3′.D.三聯(lián)吡啶-鑭系金屬-寡核苷酸結(jié)合物的制備實施例D1寡核苷酸結(jié)合到鑭系配合物的三聯(lián)吡啶部分的結(jié)合物的制備(a)0.2mg所述之氨基寡核苷酸溶于15μl吡啶/水/三乙胺(90∶15∶1)中,加入1mg表2中所述之異硫氰基配合物后,該混合物于室溫攪拌1小時。此反應(yīng)混合物在0.1克分子氯化鉀溶液中滲析一次,水中滲析三次。所得產(chǎn)物經(jīng)反相HPLC(90分鐘溶劑梯度0.05M醋酸三乙胺中乙腈由0%到30%)從Nucleosil-C18柱精制,或經(jīng)離子排阻-HPLC于60℃由PVDI.400DA-柱,5μm精制(梯度10分鐘20%1M氯化鉀溶液和80%20mMpH6磷酸鉀溶液,其中含20%乙腈,然后用80%氯化鉀溶液60分鐘),得到表3的結(jié)合物3.1到3.13和3.18,3.21。(b)3mg所述之氨基寡核苷酸懸浮于200μlDMSO/100μlN-甲基嗎啉中,加入1mg所述之異硫氰酸酯配合物后(見表2及表1制得的異硫氰酸酯配合物的所述化合物),此混合物于室溫放置2-3小時。產(chǎn)物以32%氨水處理以使固相裂解和完全脫保護(室溫3小時)。經(jīng)反相-HPLC純化制得表3的化合物3.26到3.44。實施例D2寡核苷酸連接到鑭系金屬配合物的吡啶部分上的結(jié)合物制備(a)3μMol前述羧酸衍生物1.29到1.32(表1)在200μl二甲亞砜中的溶液,加入3.3μMol二環(huán)己基羰二亞胺和3.3μMolN-羥基丁二酰亞胺,室溫放置16小時。加入100μMolN,N-二異丙基乙胺后再加0.2mg所述之氨基寡核苷酸。室溫下四天后在50mM三乙胺酸或碳酸鹽溶液中滲析兩次,并在水中滲析兩次。再經(jīng)反相-HOLC[(見D1(a)]純化得表3中3.14到3.17,3.19,3.20和3.22到3.25這些化合物。(b)3μMol所述的羧酸衍生物(見表1)于200μl二甲亞砜中的溶液,加入3.3μmol二環(huán)己基羰二亞胺和3.3μmolN-羥基丁二酰亞胺,室溫放置16小時。加入3mg氨基寡核苷酸后再加100μlN-甲基嗎啉。室溫3天之后以DMSO洗兩次,水洗一次。產(chǎn)物以32%氨水處理以使固相裂解并完全脫保護(室溫下3小時)。經(jīng)反相-HPLC純化得表3的化合物3.45到3.49。表3化合物L(fēng)nR4R9R8MM(MS)RZ編號3.1LaCH3Ph-4-691H7082/70933.2EuCH3Ph-4-691H7095/70903.3CeCH3Ph-4-691H27,43.4PrCH3Ph-4-691H42,5*3.5GdCH3Ph-4-691H27,03.6TbCH3Ph-4-691H27,73.7DyCH3Ph-4-691H27,63.8HoCH3Ph-4-691H26,73.9ErCH3Ph-4-691H27,23.10TmCH3Ph-4-691H27,53.11YbCH3Ph-4-691H28,83.12LuCH3Ph-4-691H27,93.13YCH3Ph-4-691H27,43.14EuH-苯基A-6917060/70653.15LaH-苯基A-6917048/70723.16EuHHA-6913.17LaHHA-6913.18EuCH3Ph-4-821H9843/98533.19LaH-苯基A-8219800/98003.20EuH-苯基A-8219813/98393.21EuCH3Ph-4-823H9842/98613.22LaH-苯基A-82335,6*3.23EuH-苯基A-8239811/98263.24LaH-苯基A-9409757/98293.25EuH-苯基A-9409770/97943.26EuCH3Ph-3-691H7092/71173.27EuCH3Ph-4-1759H7050/70433.28EuCH3Ph-4-1760H7064/70713.29EuCH3Ph-4-1761H7078/70783.30EuHPh-4-691H7067/70663.31LaHPh-4-691H7078/70603.32EuCH3Ph-3-1759H7053/70583.33EuCH3Ph-3-1760H7067/70643.34EuCH3Ph-3-1761H7081/70853.35EuCH3Ph-2-691H7096/70983.36EuCH3Ph-2-1759H7053/70553.37EuCH3Ph-2-1760H7067/70653.38EuCH3Ph-2-1761H7081/70833.39EuHPh-4-1759H7025/70303.40DyHPh-4-1759H7036/70433.41GdHPh-4-1759H7031/70343.42DyHPh-3-1759H7036/70383.43GdHPh-3-1759H7031/70293.44EuHPh-3-1759H7025/70263.45EuH-苯基A-17597018/70213.46EuH-苯基A-17577100/71233.47GdH-苯基A-6917065/72173.48TbH-苯基A-6917078/70673.49EuH-苯基B-6917075/7097MM分子質(zhì)量數(shù)計算值/實測值RZ離子排阻高效液相色譜保留時間(分)Ph-4-691-苯基-4-N(H)C(S)-oligo691Ph-4-821-苯基-4-N(H)C(S)-oligo821Ph-4-823-苯基-4-N(H)C(S)-oligo823Ph-3-NH-691-苯基-3-N(H)C(S)-oligo691Ph-2-NH-691-苯基-2-N(H)C(S)-oligo691Ph-4-1759-苯基-4-N(H)C(S)-oligo1759Ph-4-1760-苯基-4-N(H)C(S)-oligo1760Ph-4-1761-苯基-4-N(H)C(S)-oligo1761Ph-3-1759-苯基-3-N(H)C(S)-oligo1759Ph-3-1760-苯基-3-N(H)C(S)-oligo1760Ph-3-1761-苯基-3-N(H)C(S)-oligo1761Ph-2-1759-苯基-2-N(H)C(S)-oligo1759Ph-2-1760-苯基-2-N(H)C(S)-oligo1760Ph-2-1761-苯基-2-N(H)C(S)-oligo1761A-691-4-CH2CH2C(O)-oligo691A-821-4-CH2CH2C(O)-oligo821A-823-4-CH2CH2C(O)-oligo823A-940-4-CH2CH2C(O)-oligo940A-1759-4-CH2GH2C(O)-oligo1759A-1757-4-CH2CH2C(O)-oligo1757B-691-4-N(CH3)CH2C(O)-oiigo691*反相-HPLC保留時間(分)E底物RNA(鈀RNA)的制備實施例E1底物RNA合成約30mg‘可控微孔玻璃’(CPG)固相放在一個標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用生物系統(tǒng)反應(yīng)器以作1.5μmol量合成。此CPG-固相(1)含有作合成RNA的保護的3′-片段(實施例中rC)。為了寡聚加入氨基亞磷酸酯(2),(3),(4)和(5)。按AppliedBiosystem公司的標(biāo)準(zhǔn)方案,用394型該公司的自動合成儀時進(jìn)行合成循環(huán)(脫氧核糖序列的氨基亞磷酸酯的偶合時間共10分鐘),(使用手冊,第二部(1992),1.0μmol,附錄1-41)。其它可購買的試劑0.1M氨基亞磷酸酯四唑/乙腈4%,96%叔丁基苯氧乙酸酐/吡啶/四氫呋喃10%,10%,80%N-甲基咪唑/四氫呋喃16%,84%三氯乙酸/二氯甲烷2%,98%碘/水/吡啶/四氫呋喃3%,2%,20%,75%下列的底物-RNA被合成CG-6905′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCCACUCUAC)CG-13525′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCUGACUGAC)實施例E2固相(CPG)裂解和堿基的脫保護固相物(1.5μMol合成量)以800μl氨飽和乙醇處理并在室溫培育過夜。氨飽和的乙醇由一份乙醇和三份33%氨液制得。溫育后將氨飽和的乙醇溶液傾析,CPG有氨化乙醇清洗,純化了的溶液凍干。實施例E3叔丁基二甲硅烷基(TBDMS)保護基的脫保護。凍干的樣品以800μl1M氟化四丁銨-四氫呋喃溶液處理,樣品被劇烈混合30分鐘,再避光于室溫培育24小時。此RNA和50mM三乙胺碳酸氫鹽(TAHC)溶液pH7.0(1+1)混合并直接在4℃滲析(水要有毫微級10-9純度)。實施例E4滲析滲析在7.5mMTAHC溶液中pH7.0進(jìn)行3次(此溶液用毫微級10-9純水配制,以CO2調(diào)整pH7.0并冷卻到4℃)。樣品被凍干并以焦碳酸二乙酯處理〔參見Sambrook,F(xiàn)ritsch,Mamatis,分子克隆,實驗室手冊,第二版,ColdSpringHabor實驗室出版社(1989)〕,再于壓熱器中吸收水(DEPC-H2O)。取一份在260nm作濃度測定。其余帶RNA部分與RNA酶作用并去雜離子。實施例E5用33[P]-γATP5′-標(biāo)記底物RNA由上述合成記錄的100μMolRNA為進(jìn)行激酶反應(yīng)在20μl體積中于37℃溫育20分鐘,反應(yīng)溶液中含0.5μlT4聚核苷酸激酶(Promega產(chǎn),10單位/微升),2μl激酶緩沖液(50mMTris-HCl,pH7.5,10mMMgCl2,5mM1,4-二硫DL-蘇糖醇,0.1mM亞精胺)和0.5μl33[P]γ-ATP(Amersham,>1000Ci/mMol,10μCi/μl)。接著加入138μlTris-HCl/EDTA(10mM/1mM,pH7.5),2μl糖原(35mg/ml)和40μlNH4CH3COO(10M)。加600μl乙醇之后樣品被冷卻至-20℃,然后于4℃離心20分鐘。所得沉淀經(jīng)凍干,再以15μl染色液(0.025%溴酚蘭,0.025%二甲苯蘭(酸性蘭)于80%甲酰胺中1∶1混合,和7M尿素,20mM檸檬酸,1mMEDTA)處理,在95℃變性處理1分鐘,立即放在冰上并上樣于1.0cm×1mm袋中作凝膠電泳分離。凝膠電泳在55瓦進(jìn)行40分鐘后再在55瓦進(jìn)行2.5小時。實施例E6.經(jīng)激酶處理的底物RNA純化和分離為作酶反應(yīng)物的電泳分離先制備12%聚丙烯酰胺凝膠(1mm×30cm×40cm)。聚合反應(yīng)在170ml體積中,將51ml丙烯酰胺溶液(40%丙烯酰胺/雙丙烯酰胺,10∶1),17mlTBE-緩沖液(0.89M三個(羥甲基)氨基甲烷,0.89M硼酸,0.02M乙二胺四乙酸)和71.4g尿素與所述量的水混合。聚合作用以170μl過氧二硫酸銨溶液(25%w/v)和170μlTEMED(N,N,N′,N′-四甲基乙二胺)引起。1小時后該凝膠即可使用。作為工作緩中液(Laufpuff)可用10倍稀釋的TBE緩沖液。分離的RNA在360μl洗脫液中用40μlNaCH3COO(3MpH5.2)和1ml乙醇處理,樣品在-20℃冷凍20分鐘然后在4℃離心20分鐘。所得沉淀以30μlH2O滲析,溶液按Czerenkow記錄在閃爍計數(shù)器上測定并調(diào)整到12000cpm/μl。F以三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物-寡核苷酸結(jié)合物進(jìn)行裂解的實驗。實施例F1用寡核苷酸鑭系金屬配合物結(jié)合物進(jìn)行底物RNA裂解為了作裂解反應(yīng)后RNA產(chǎn)物的凝膠電泳分離和鑒定,要制備一種LongRanger凝膠(ATBiochem,改性聚丙烯酰凝膠)(0.4mm×30cm×40cm)。聚合反應(yīng)在90ml體積中進(jìn)行。21mlLongRanger溶液(50%),11mlTBE緩沖液(0.89M三個(羥甲基)氨基甲烷,0.89M硼酸,0.02M乙二胺四乙酸)和37g尿素與所述數(shù)量的H2O混合,用450μl過氧二硫酸銨溶液(10%w/v)和45μlTEMED引發(fā)聚合作用,1小時后凝膠即可使用。作工作緩沖液的可用稀釋16.66倍的TBE-緩沖液。分離在60瓦進(jìn)行75分鐘。凝膠電泳分離之后,標(biāo)記的裂解產(chǎn)物(RNA-寡聚物)放在一張X光膠片上或借助于磷光檢測器來分別計數(shù)。裂解反應(yīng)在10μl體積進(jìn)行。向1μl底物-RNA(12000cpm)用吸管加入1μl寡核苷酸結(jié)合物(10μM),4μlTris-HCl緩沖液(50mM,37℃pH7.4)和所述數(shù)量的H2O。此混合物于85℃加熱1分鐘,再在37℃培育16小時。加入5μl染色緩中液(0.025%溴酚蘭,0.025%二甲苯蘭(酸性蘭)在80%甲酰胺中1∶1混合,并帶7M尿素,20mM檸檬酸和1mMEDTA)使反應(yīng)結(jié)束。為了作凝膠電泳分離將7.5μl樣品于95℃失活1分鐘,立即放在冰上并上樣在凝膠板上。此底物RNA濃度是下述估算的25倍按所述的原始記錄以100pMolRNA粗產(chǎn)物和凝膠純化10%收率,發(fā)現(xiàn)底物RNA最終濃度0.04mM,在反應(yīng)混合物中是1mM寡核苷酸結(jié)合物。只有三聯(lián)吡啶-鑭系金屬配合物用來比較,所以需要400mM配合物才能達(dá)到大致相同的裂解。對于底物-RNA則以10000倍過量配合物處理。實施例F2底物RNACG-690以寡核苷酸-銪配合物第3.2號化合物溫育裂解反應(yīng)依實施例F1所述之基本原則進(jìn)行。(80%未裂解的起始物)CG-6905′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCCACUCUAC)主要裂解產(chǎn)物(∑15%)5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCCACUCUAcp5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCCACUCUcp5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCCcp5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGcp其它裂解產(chǎn)物(∑5%)5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCcp5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCcp實施例F3底物RNACG-690和寡核苷酸-鑭配合物結(jié)合物第3.15號化合物溫孵裂解反應(yīng)按實施例F1所述之基本原則進(jìn)行。(80%未裂解的起始物)CG-6905′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCCACUCUAC)主要產(chǎn)物(∑20%)5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCCACUCUcp5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCCcp(CP=2′,3′-環(huán)磷酸酯)實施例F4底物RNACG-1352用寡核苷酸-銪配合物結(jié)合物第3.14號化合物溫孵裂解反應(yīng)按實施例F1所述之基本原則進(jìn)行。(<5%未裂解之起始物)CG-13525′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCUGACUGAC)主要產(chǎn)物(>70%)5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCUGcp)殘余裂解產(chǎn)物(∑25%)5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCUcp)5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCUGAcp)5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCUGACcp)5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCUGACUcp)5′r(CUAGCCGACUGCCGAUCUCGCUGACUGcp)實施例F5底物RNACG-1352以寡核苷酸-三聯(lián)吡啶-金屬配合物結(jié)合物進(jìn)一步裂解進(jìn)一步裂解反應(yīng)依實施例F1所述之基本原則進(jìn)行。表4列出底物RNACG-1352用表3中各種三聯(lián)吡啶-金屬配合物-寡核苷酸結(jié)合物裂解的結(jié)果。符號+3表示主要裂解發(fā)生在底物RNA的核苷酸+3和+4之間(見表1和表2及注釋)。人們知道,在制造中裂解最好是發(fā)生在+3位置。表4低物RNACG-1352的主要裂解產(chǎn)物(黑體位置)。指明的是所用的結(jié)合物(亦見表3)。</tables>權(quán)利要求1.通式I的化合物其中R1表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基,以O(shè),S或N作雜原子的C4-C12雜芳基,C1-C4烷硫基,二(C1-C4烷基)氨基,鹵素,磺酰胺或羧酰胺和一個一價功能基R5;或者R1是一個一價功能基,R5是H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基,以O(shè)、S或N作雜原子的C4-C12雜芳基,C1-C4烷硫基,二(C1-C4烷基)氨基,鹵素、磺酰胺或羧酰胺;這里功能基直接或通過一個基團X連接到吡啶環(huán)上,基團Z是必要時可通過-O-,-S-,-NR12-,-C(O)O-或-C(O)NR12-斷開的選自下述這些基團的殘基C1-C4亞烷基,C2-C12亞烯基。C2-C12亞炔基,C5-C8亞環(huán)烷基,C6-C12亞芳基和C7-C12亞芳烷基;R2和R7相互獨立地表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基,鹵素,O,S或N作雜原子的C4-C12雜芳基,C1-C4烷硫基,二(C1-C4烷基)氨基,磺酰胺或羧酰胺;R3和R6相互獨立地為H,C1-C4烷基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基,鹵素,以O(shè),S或N作雜原子的C4-C12雜芳基,C1-C4烷硫基,二(C1-C4烷基)氨基,磺酰胺或羧酰胺,R4代表H,C1-C20烷基,C5-C8環(huán)烷基,C6-C12芳基或C7-C12芳基烷基,R12代表H或C1-C6烷基,Me代表一種鑭系金屬或釔,Y表示一個酸陰離子,n是一個2或3的數(shù),和m是一個1、2或3的數(shù)。這里的基團為烷基、環(huán)烷基、芳烷基和芳基和基團Z為不被取代或以C1-C4烷氧基、F、Cl、Br、-CN、C1-C4烷基或-NO2取代。2.權(quán)利要求1之化合物,其特征在于,R1代表H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基,和R5為一價功能基;或R1為一價功能基和R5為H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基。3.權(quán)利要求1或2的化合物,其特征在于,基團Z代表C1-C3亞烷基,C3-亞炔基,亞苯基或C7-亞芳烷基。4.權(quán)利要求1至3的化合物,其特征在于基團Z是C2-C3亞烷基或亞苯基。5.權(quán)利要求1至4的化合物,其特征在于R2和R7各自獨立地為H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基或鹵素。6.權(quán)利要求1至5之化合物,其特征在于R2和R7各自獨立地為H或C1-C4烷基。7.權(quán)利要求1至6之化合物,其特征在于R3和R8各自獨立地為H,C1-C4烷基,C7-C12芳基烷基或C6-C16芳基。8.權(quán)利要求1至7之化合物,其特征在于R3和R8各自獨立地為H或C1-C4烷基。9.權(quán)利要求1至8之化合物,其特征在于R4代表H或C1-C20烷基。10.權(quán)利要求1至9之化合物,其特征在于一價功能基選自下述基團-OR10,-SR10,-NCO,-NCS,-NHR11,-C(O)OR11,-C(O)SH,-C(O)NHR11,-C(O)Cl,-C(S)SR11,-C(S)NHR11,-C(S)OR11,-SO3R11,-SO2NHR11,-SO2Cl,-P(O)(OH)2,-P(O)(OH)-NHR11,-P(S)(SH)2,-P(S)(SH)-NHR11,-P(S)(OH)2,-P(S)(OH)-NHR11,-P(O)(SH)2,-P(O)(SH)-NHR11,-P(O)(OH)H,-P(O)(NHR11)H,-P(S)(SH)H,-P(S)(NHR11)H,-P(S)(OH)H,-P(O)(SH)H,其中R10為H,-C(O)NH2,-C(S)NH2,-C1-C6-烷基,-CxH2x-NH2,-CxH2x-SH或-(CxH2xO)y-H,R11為H,-C1-C6-烷基,-CxH2x-NH2,-CxH2x-SH或-(CxH2xO)y-H,x等于一個2到6的數(shù),y等于一個1到20的數(shù)。11.權(quán)利要求10之化合物,其特征在于R10表示H。12.權(quán)利要求1至11之化合物,其中之功能基選自如下基團-OH,-SH,-NCO,-NCS,-NHR11,-C(O)-OR11和-P(O)(OH)2。13.權(quán)利要求1至12之化合物,其中之功能基選自如下基團-NCS,-NHR11,-C(O)-OR11和-P(O)(OH)2。14.權(quán)利要求1至13之化合物,其中之鑭系金屬是鑭、鈰、釹、銪和釓。15.權(quán)利要求1至14之化合物,其中之鑭系金屬是鑭和銪。16.權(quán)利要求1至15之化合物,其中之鑭系金屬是銪。17.權(quán)利要求1至16之化合物,其中之陰離子是F-,Cl-,Br-,J-,PF6-,SbF6-,BF4-,B(Ph)4-,醋酸根,NO3-,硫酸根或磷酸根。18.權(quán)利要求1至17之化合物,其中之陰離子是Cl-,醋酸根或NO3-。19.通式V的化合物其中R2和R7各自獨立地表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基,鹵素,以O(shè),S或N作雜原子的C4-C12雜芳基,C1-C4烷硫基,二(C1-C4烷基)氨基,磺酰胺或羧酰胺;R3和R6各自獨立地為H,C1-C4烷基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基,鹵素,以O(shè),S或N作雜原子的C4-C12雜芳基,C1-C4烷硫基,二(C1-C4烷基)氨基,磺酰胺或羧酰胺;R4代表H,C1-C20烷基,C5-C8環(huán)烷基,C6-C12芳基或C7-C12芳基烷基;這里的烷基、環(huán)烷基、芳基烷基和芳基或未被取代,或以C1-C4烷氧基、F、Cl、Br、-CN、C1-C4烷基或-NO2取代;Me代表鑭系金屬或釔,Y表示一個酸的陰離子,n是一個2或3的數(shù),m是一個1、2或3的數(shù),R9表示一個式VI的殘基-Xp-A-X′q-A′r-Oligo(VI)R8表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基,以O(shè),S或N作雜原子的C4-C12雜芳基,C1-C4烷硫基,二(C1-C4烷基)氨基,鹵素,磺酰胺或羧酰胺,或者R9表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基,以O(shè),S或N作雜原子的C4-C12雜環(huán)芳基,C1-C4烷硫基,二(C1-C4烷基)氨基,鹵素,磺酰胺或羧酰胺和R8代表一個式VI的殘基,p、q和r各自獨立地表示0或1,X和X′分別獨立地表示一個未取代的或是以C1-C4烷氧基,F(xiàn),Cl,Br,-CN,C1-C4烷基或-NO2取代的下述基團C1-C20亞烷基,C2-C12亞烯基,C2-C12亞炔基,-(CxH2xO)y-,其中x等于一個2到6的數(shù),y是一個1到20的數(shù),C5-C8亞環(huán)烷基,C6-C12亞芳基和C7-C12亞芳烷基;A和A′分別表示-O-,-S-,-S-S-,-NR12-CO-NR12-,-NR12-CS-NR12-,-NR12-,-NR12-C(O)-O-,-C(O)O-,-C(O)S-,-C(O)NR12-,-C(S)S-,-C(S)O-,-C(S)NR12-,-SO2NR12-,-SO2-,-P(O)(OH)O-,-P(S)(SH)S-,-P(S)(SH)O-,-P(S)(OH)O-,-P(O)(SH)S-,-P(O)(OH)S-,-P(O)(SH)O-,-P(O)(OH)-NR12-,-P(S)(SH)-NR12-,-P(S)(OH)-NR12-,-P(O)(SH)-NR12-,-HP(O)O-,-HP(S)S-,-HP(O)NR12-或-HP(S)NR12-,其中R12表示H或C1-C6烷基,和Oligo代表一個由天然的,修飾或合成的脫氧核苷或肽核酸片段(Bausteinen)衍生來的天然、修飾或合成的序列,它經(jīng)一個核酸堿基、一個寡核苷酸間的橋或一個糖基聯(lián)接,并且其內(nèi)部區(qū)域互補于一個靶RNA。20.權(quán)利要求19的化合物,其特征在于,R9是一個式VI的殘基-Xp-A-X′q-A′r-O1igo(VI)R8表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基或C6-C16芳基,或R9是H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基或C6-C16芳基和R8代表一個式VI的殘基,和p、q和r分別獨立地表示0或1。21.權(quán)利要求10或20之化合物,其特征在于,q代表1。22.權(quán)利要求19至21的化合物,其特征在于,R2和R7各自獨立地表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基或鹵素。23.權(quán)利要求19至22之化合物,其特征在于,R2和R7各自獨立地表示H或C1-C4烷基。24.權(quán)利要求19至23之化合物,其特征在于,R3和R6各自獨立地表示H,C1-C4烷基,C7-C12芳基烷基或C6-C16芳基。25.權(quán)利要求19至24之化合物,其特征在于R3和R6各自獨立地表示H或C1-C4烷基。26.權(quán)利要求19至25之化合物,其特征在于R4代表H或C1-C20烷基。27.權(quán)利要求19至26之化合物,其中之鑭系金屬是鑭、鈰、釹、銪和釓。28.權(quán)利要求19至27之化合物,其中之鑭系金屬是鑭或銪。29.權(quán)利要求19至28之化合物,其中之鑭系金屬是銪。30.權(quán)利要求19至29之化合物,其中之陰離子是F-,Cl-,Br-,J-,PF6-,SbF6-,BF4-,B(Ph)4-,醋酸根,NO3-,硫酸根或磷酸根。31.權(quán)利要求19至30之化合物,其中之陰離子是Cl-,醋酸根或NO3-。32.權(quán)利要求19至31之化合物,其中之陰離子是Cl-。33.權(quán)利要求19至32之化合物,其特征在于x表示C1-C3亞烷基,C3-亞炔基,亞苯基或C7-亞芳烷基。34.權(quán)利要求19至33之化合物,其特征在于x是C2-C3亞烷基或亞苯基。35.權(quán)利要求19至34之化合物,其特征在于A代表-NR12-CS-NR12-或-C(O)NR12-。36.權(quán)利要求19至35之化合物,其特征在于A代表-NH-CS-NH-或-C(O)NH-。37.權(quán)利要求19至36之化合物,其特征在于X′表示C1-C20亞烷基。38.權(quán)利要求19至37之化合物,其特征在于X′表示C1-C10亞烷基。39.權(quán)利要求19至38之化合物,其特征在于A′表示非已有的或-P(O)(OH)O-基。40.通式II的化合物其中,R1表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基或C6-C16芳基或一個一價功能基,這里功能基直接或通過一個基團Z連接到吡啶環(huán)上,基團Z是必要時通過-O-,-S-,-NR12-,-C(O)O-或-C(O)NR12-斷開的選自下述基團的殘基C1-C20亞烷基,C2-C12亞烯基,C2-C12亞炔基,C5-C8亞環(huán)烷基,C6-C12亞芳基和C7-C12亞芳烷基,R2和R7各自獨立地表示H,C1-C4烷基,C1-C4烷氧基,C7-C12芳基烷基,C6-C16芳基或鹵素,R3和R6分別獨立地為H,C1-C4烷基,C7-C12芳基烷基或C6-C16芳基,R12表示H或C1-C6烷基,這里的烷基,環(huán)烷基,芳烷基,芳基殘基,基團Z不被取代或以C1-C4烷氧基,F(xiàn),Cl,Br,-CN,C1-C4烷基或-NO2取代。41.通式III的化合物R5表示一個經(jīng)C2-C20亞烷基連接在吡啶環(huán)上的一價功能基,這個功能基選自下述基團-C(O)-OR12,-C(O)NHR12,-SO2-R12和-SO2NHR12,其中R12是H或C1-C6烷基,和R4是H或C1-C20烷基。42.通式I的化合物制備方法,其特征在于通式II的三聯(lián)吡啶與通式III的吡啶二醛或吡啶二酮在式IV的鹽類存在下縮合Men+(Ym-)n/m(IV)其中R1,R2,R3,R4,R5,R6,R7,Me,Y,n和m有著前面指定的意義。43.權(quán)利要求19至39之通式(V)的化合物制備方法,其特征在于將權(quán)利要求1-18之任一的通式(I)的化合物(a)與一個式VIa的化合物相反應(yīng)A″-X′-A′0或1-Oligo(VIa)其中A″表示一個選自下述基團的適當(dāng)一價功能基-OR10,-SR10,-NCO,-NCS,-NHR11,-C(O)OR11,-C(O)SH,-C(O)NHR11,-C(O)Cl,-C(S)SR11,-C(S)NHR11,-C(S)OR11,-SO3R11,-SO2NHR11,-SO2Cl,-P(O)(OH)2,-P(O)(OH)-NHR11,-P(S)(SH)2,-P(S)(SH)-NHR11,-P(S)(OH)2,-P(S)(OH)-NHR11,-P(O)(SH)2,-P(O)(SH)-NHR11,-P(O)(OH)H,-P(O)(NHR11)H,-P(S)(SH)H,-P(S)(NHR11)H,-P(S)(OH)H,-P(O)(SH)H,其中R10為H,-C(O)NH2,-C(S)NH2,-C1-C6-烷基,-CxH2x-NH2,-CxH2x-SH或-(CxH2xO)y-H,R11為H,-C1-C6-烷基,-CxH2x-NH2,-CxH2x-SH或-(CxH2xO)y-H,x等于一個2到6的數(shù),y是一個1到20的數(shù),X′是一個不被取代或以C1-C4烷氧基,F(xiàn),Cl,Br,-CN,C1-C4烷基或-NO2取代的選自下述基團的殘基C1-C20亞烷基,C2-C12亞烯基,C2-C12亞炔基,-(CxH2xO)y-,其中x等于一個2到6的數(shù),y是一個1到20的數(shù),C5-C8亞環(huán)烷基,C6-C12亞芳基和C7-C12亞芳烷基,A′表示-O-,-S-,-S-S-,-NR12-CO-NR12-,-NR12-CS-NR12-,-NR12-,-NR12-C(O)-O-,-C(O)O-,-C(O)S-,-C(O)NR12-,-C(S)S-,-C(S)O-,-C(S)NR12-,-SO2NR12-,-SO2-,-P(O)(OH)O-,-P(S)(SH)S-,-P(S)(SH)O-,-P(S)(OH)O-,-P(O)(SH)S-,-P(O)(OH)S-,-P(O)(SH)O-,-P(O)(OH)-NR12-,-P(S)(SH)-NR12-,-P(S)(OH)-NR12-,-P(O)(SH)-NR12-,-HP(O)O-,-HP(S)S-,-HP(O)NR12-或-HP(S)NR12-,其中R12表示H或C1-C6烷基,和Oligo代表一個由天然的,修飾的或合成的脫氧核苷或肽核酸片段而來的天然、修飾或合成的序列,它通過一個核酸堿基、一個核苷酸內(nèi)的橋或一個糖基連接,并在內(nèi)部區(qū)域與靶RNA互補,或者(b)與一個式VIb的化合物相反應(yīng)A″-Oligo(Vib)其中A″和Oligo具有(a)項中所述的意義。44.權(quán)利要求43的方法,其特征在于R10是H。45.一種在生理條件下,和一種由金屬配合物和寡核苷酸結(jié)合物的作用下,裂解核糖核酸的磷酸核苷酸橋的方法,其特征在于(a)靶RNA與一個如權(quán)利要求19至39的化合物配合,(b)再經(jīng)反應(yīng)并裂解。46.權(quán)利要求19至39的式(V)化合物在治療溫血動物包括人類疾病的一種療法中的應(yīng)用,它通過使體內(nèi)核苷酸序列失活而起作用。47.一種基于一種水溶液或懸浮液的藥物制劑,其中含有單獨的或與另一種生物活性物質(zhì)一起的有效量的權(quán)利要求19至39項之式(V)化合物,作為藥物載體的水及必要的助劑。48.權(quán)利要求19至39之式(V)化合物在治療溫血動物包括人類疾病中的應(yīng)用。它通過使體內(nèi)核苷酸序列失活而起作用。全文摘要通式V的化合物,其中R文檔編號C12Q1/68GK1162317SQ95195985公開日1997年10月15日申請日期1995年8月30日優(yōu)先權(quán)日1995年8月30日發(fā)明者R·漢納,J·豪爾,D·赫斯金,U·皮爾利斯,H·穆沙申請人:諾瓦蒂斯有限公司
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