專利名稱：谷氨酸(味精)產(chǎn)生菌溶源性的測(cè)定的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品發(fā)酵技術(shù)。
在味精生產(chǎn)中，一個(gè)重要的威協(xié)是遇到噬菌體的感染，給生產(chǎn)造成相當(dāng)嚴(yán)重的損失。防止噬菌體的關(guān)鍵，是測(cè)定產(chǎn)生菌是否溶源性，具溶源性的菌種在發(fā)酵中有很多因素，如發(fā)酵培養(yǎng)基、通氣攪拌以及不正確的PH控制，皆能引起溶源噬菌體的釋放。
在味精發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)程中，關(guān)于溶源噬菌體的釋放特點(diǎn)，發(fā)生的條件以及如何檢查產(chǎn)生菌是否溶源性，尚未被生產(chǎn)廠家所了解及掌握，因此不易達(dá)到正常生產(chǎn)。如周顯蘭在1987年《發(fā)酵科技通訊》第一期中“溶源性噬菌體的探討”一文提到“……1983年曾有一段時(shí)間，發(fā)酵上出現(xiàn)了一些很象烈性噬菌體造成的′三高一低′現(xiàn)象，但用通常的平板檢查又沒(méi)有出現(xiàn)噬菌斑的現(xiàn)象，我們做了一些實(shí)驗(yàn)之后，認(rèn)為這些現(xiàn)象有可能是溶源性噬菌體在發(fā)酵上的表現(xiàn)?！壳霸谖覈?guó)溶源性噬菌體(溶源菌)的問(wèn)題還是一個(gè)嶄新的研究課題”。周顯蘭的報(bào)告，是我國(guó)各味精生產(chǎn)廠家普遍用于生產(chǎn)的菌種，天津短桿菌T6-13(此菌種對(duì)鈍齒棒狀桿菌AS1.542專一性很強(qiáng)的噬菌體也敏感，關(guān)于此菌的分類有待探討)在發(fā)酵中釋放溶源噬菌體的某些表現(xiàn)的報(bào)告，但是該文對(duì)所產(chǎn)生的現(xiàn)象推測(cè)是溶源噬菌體引起的，由于原因不能明確加以肯定，對(duì)生產(chǎn)不能起指導(dǎo)作用。
我國(guó)味精生產(chǎn)的幾個(gè)菌種是否溶源菌，只有杭州味精廠分離的鈍齒棒狀桿菌HU7251變株B-9(CorynebacteriumCrenatumHU7251VarB-9)，于1979年翁繩周等作過(guò)報(bào)告(廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，18(1979)153-159)。檢查這一溶源菌，作者等是用土壤中分離的尚未定名的棒狀桿菌(CorynebacteriumSP)為測(cè)定的指示菌，自B-9菌株誘導(dǎo)出來(lái)的噬菌體在此指示菌上可形成噬斑，但不能傳代，所以不能做進(jìn)一步的研究，關(guān)于B-9菌株，在生產(chǎn)上也證明是溶源菌，許多廠家皆放棄使用這菌株了。
Momose，H.等公開(kāi)的是乳糖短桿菌為對(duì)象，以紫外線方法誘導(dǎo)溶源噬菌體(J.Gen.Appl.Microbiol.，22(1976)119-129)。
Shapiro，J.A.的工作主要也是短桿菌，其指示菌系統(tǒng)不適用于我國(guó)普遍用于生產(chǎn)的菌種。
本發(fā)明的目的是測(cè)定現(xiàn)在國(guó)內(nèi)味精生產(chǎn)上的菌種天津短桿菌T6-13和北京棒狀桿菌1.299的溶源性，以避免味精生產(chǎn)中產(chǎn)生菌發(fā)生噬菌體感染所造成的損失。
其測(cè)定的方法是用誘變劑誘導(dǎo)溶源噬菌體，再用敏感的指示菌測(cè)定噬菌體釋放特性。誘變劑為絲裂霉素C，濃度控制在0.1～1.2r/ml。指示菌是杭州味精廠的鈍齒棒狀桿菌HU7251，經(jīng)氯化鋰處理后選育在生產(chǎn)上使用的變株B-9(陳騊聲著中國(guó)微生物工業(yè)發(fā)展史，輕工業(yè)出版社，228頁(yè))用硫酸二乙酯處理，濃度為5r/ml，選出精氨酸缺陷，但是對(duì)紫外線及噬菌體較敏感的菌株，稱為B-9-5。該菌株可以在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂斜面上培養(yǎng)、保存，培養(yǎng)溫度為30～32℃。菌種的保存以凍干法或1%營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂深柱穿刺法皆可，該菌株性能穩(wěn)定。
本發(fā)明的具體方法是將待測(cè)的菌株經(jīng)培養(yǎng)后加入誘變劑絲裂霉素C，繼續(xù)培養(yǎng)并將誘導(dǎo)后的菌體收集起來(lái)種入新鮮營(yíng)養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)，取其上清液與上述指示菌B-9-5制成雙層平板，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)即可得到可傳代的噬斑。
誘變劑絲裂霉素C的濃度控制在0.1～1.2r/ml。
待測(cè)菌株的培養(yǎng)可接種于普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中常溫培養(yǎng)過(guò)夜，取此菌液以1%接種量接入新鮮營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
誘導(dǎo)后收集起來(lái)的菌體其培養(yǎng)時(shí)間為8～12小時(shí)。制成雙層平板后的培養(yǎng)時(shí)間為12～24小時(shí)。
味精生產(chǎn)是我國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)中的一個(gè)重要行業(yè)。本發(fā)明解決了久已需要檢查的國(guó)內(nèi)味精生產(chǎn)的各廠家所使用的菌種是否溶源性問(wèn)題。解決這問(wèn)題，才有可能培育一個(gè)無(wú)溶源的菌株在生產(chǎn)上應(yīng)用，避免經(jīng)常發(fā)生噬菌體感染，使生產(chǎn)受到損失。另外知道了生產(chǎn)菌種是否溶源菌，就能分析在發(fā)酵罐中發(fā)生不正常現(xiàn)象的特征，也能指導(dǎo)如何掌握避免溶源噬菌體釋放的工藝控制條件。不同廠家來(lái)源的T6-13菌株，對(duì)誘導(dǎo)釋放溶源噬菌體的特性不一，有的菌株較易釋放噬菌體，有的菌株不易釋放噬菌體，這特性在生產(chǎn)上也能同樣的表現(xiàn)，如某廠的生產(chǎn)菌種，經(jīng)測(cè)定很易釋放噬菌體，在生產(chǎn)上于二級(jí)罐就常有噬菌體出現(xiàn)。而另一比較不易誘導(dǎo)釋放噬菌體者，在二級(jí)罐中從不表現(xiàn)，而在發(fā)酵罐中表現(xiàn)，同時(shí)發(fā)生噬菌體感染的情況也比較少。這就提出，工廠中選用菌種必須注意選擇。應(yīng)用本發(fā)明就能夠分離谷氨酸產(chǎn)生菌的溶源噬菌體，這種噬菌體有許多方面可以開(kāi)發(fā)利用，如產(chǎn)生菌的遺傳學(xué)研究以及作為菌種改良的遺傳載體等等。由此可見(jiàn)，本發(fā)明為工業(yè)生產(chǎn)提供一種有效的測(cè)定方法。
實(shí)施例根據(jù)味精生產(chǎn)廠家提供的谷氨酸產(chǎn)生菌天津短桿菌T6-13或北京棒狀桿菌1.299置于肉湯中常溫培養(yǎng)過(guò)夜，取培養(yǎng)液接于新鮮肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。加入誘變劑絲裂霉素C。(其濃度見(jiàn)表1)，繼續(xù)培養(yǎng)約一小時(shí)后離心處理，取其沉淀的菌體接入與原培養(yǎng)相同體積的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)8-12小時(shí)，最后取其上清液與指示菌B-9-5制成雙層平板，即可顯示如表1的結(jié)果。
顯然，誘導(dǎo)后培養(yǎng)的培養(yǎng)基的PH值和二價(jià)陽(yáng)離子如Ca++等對(duì)誘導(dǎo)形成有活性的噬菌體和噬斑的數(shù)量有關(guān)。不同PH值對(duì)形成噬斑的比較結(jié)果如表2所示，其中誘變劑采用絲裂霉素C，濃度為1.0r/ml，表中僅列出兩株T6-13菌株的情況，其它菌株情況相似。
不同鈣離子濃度對(duì)形成噬斑的比較結(jié)果如表3所示，其中誘變劑及其濃度與表2相同。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定谷氨酸(味精)產(chǎn)生菌溶源性的方法，用誘變劑將產(chǎn)生菌中溶源噬菌體誘導(dǎo)出來(lái)，再用指示菌測(cè)定噬菌體的釋放特性，本發(fā)明的特征在于將待測(cè)的菌株經(jīng)培養(yǎng)后加入誘變劑絲裂霉素C，經(jīng)第二次培養(yǎng)后將誘導(dǎo)后的菌體收集起來(lái)繼續(xù)培養(yǎng)，取其上清液與指示菌B-9-5制成雙層平板，所說(shuō)的指示菌B-9-5是變株B-9用硫酸二乙酯處理，選出精氨酸缺陷，但對(duì)紫外線及噬菌體較敏感的菌株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于誘變劑絲裂霉素C的濃度控制在0.1～1.2r/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于待測(cè)菌株的第一次培養(yǎng)可接種于普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中常溫培養(yǎng)過(guò)夜，取此菌液以1%接種量接入新鮮營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于誘導(dǎo)后收集起來(lái)的菌體其培養(yǎng)時(shí)間為8～12小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于制成雙層平板后的培養(yǎng)時(shí)間為12～24小時(shí)。
全文摘要
谷氨酸(味精)產(chǎn)生菌溶源性的測(cè)定，屬于食品發(fā)酵技術(shù)，本發(fā)明提出測(cè)定目前國(guó)內(nèi)味精生產(chǎn)上常用菌種天津短桿菌T6—13和北京棒狀桿菌1.299的溶源性的一種方法，它采用誘變劑絲裂霉素C誘導(dǎo)產(chǎn)生菌中的溶源噬菌體，再用敏感的指示菌B—9—5測(cè)定噬菌體的釋放特性。味精生產(chǎn)是食品發(fā)酵工業(yè)中的重要行業(yè)，由于生產(chǎn)上常感染噬菌體，給生產(chǎn)造成重大的損失。本發(fā)明解決味精生產(chǎn)中噬菌體發(fā)生的原因和途徑，為工業(yè)生產(chǎn)提供有效的測(cè)定方法。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK1033464SQ8710768
公開(kāi)日1989年6月21日 申請(qǐng)日期1987年11月4日 優(yōu)先權(quán)日1987年11月4日
發(fā)明者翁繩周, 吳宗偉 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)