一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富硒微生物制劑及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富硒微生物制劑，原料按重量份計(jì)由如下成分組成：亞硒酸鈉8-15份，動(dòng)物血水解液50-65份，復(fù)合微量元素5-15份，磷酸二氫鉀8-20份，尿素10-25份，蛋白胨8-20份，酵母粉4-10份，NaCl 8-20份，NaOH 8-15份，NaNO34-10份，NaCl 10-25份，NH4Cl 4-10份，K2HPO48-20份，牛肉膏4-10份，葡萄糖10-25份，淀粉10-25份，碳酸鈣8-20份，氨基酸10-25份，硝酸鉀2-6份，硫酸亞鐵2-6份，硫酸鎂10-25份，檸檬酸三鈉25-40份，生化酶10-25份，混合菌液800-848份；本發(fā)明的富硒微生物制劑的制備方法，發(fā)酵時(shí)間短，通過(guò)增加發(fā)酵過(guò)程中微生物的增殖速度，菌劑的保存期可以延長(zhǎng)至2年。
【專利說(shuō)明】一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑及制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種富砸營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料，具體是一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑及制備方法，屬于生物肥料【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]我國(guó)是一個(gè)缺砸大國(guó)。普查證明，我國(guó)70%以上的地區(qū)土壤中嚴(yán)重缺砸，我國(guó)95%以上的糧食和畜禽肉類中砸含量低于50 μ g/kg，屬于貧砸大國(guó)。我國(guó)人均每天砸攝入量?jī)H有39 μ g左右，不足成年人勝利需要最小量50 μ g/天的80%，距離健康需要量100?200 μ g/天相差更大；距離安全上線800 μ g更遠(yuǎn)。在我國(guó)，除少數(shù)地區(qū)外，90 %的人口需要采用生物工程技術(shù)補(bǔ)充砸。不僅人要補(bǔ)充砸，畜禽也要補(bǔ)充砸。
[0003]我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，化肥在我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中起到了重要的作用。但是，隨著單位面積的化肥用量越來(lái)越高，出現(xiàn)了嚴(yán)重的土地“越喂越瘦”的情景。與之相伴的不僅僅是土壤的退化、農(nóng)藥施用量的增加與農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)的下降，還有近40%的地下水因?yàn)橄跛猁}含量太高不能直接飲用。因此，開發(fā)環(huán)境友好型肥料是我國(guó)的發(fā)展戰(zhàn)略。富砸微生物菌肥因其具有土壤性能改良、農(nóng)作物增產(chǎn)、農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)改善、肥力持久及環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，而受到廣泛關(guān)注。微生物肥料迄今已有一百多年的歷史，己在亞洲、美洲、歐洲和非洲等世界上60多個(gè)國(guó)家推廣應(yīng)用。近年來(lái)美、英、法、日等發(fā)達(dá)國(guó)家，加大了微生物菌肥的研發(fā)投入，得到了種類更加豐富，性能更加優(yōu)良的功能化微生物菌肥，替代了大約40%的化肥使用量。我國(guó)也高度重視綠色肥料的開發(fā)與應(yīng)用，微生物肥料產(chǎn)業(yè)取得了一定發(fā)展，生產(chǎn)企業(yè)超過(guò)800家，年產(chǎn)量近千萬(wàn)噸，年產(chǎn)值過(guò)百億元，但是與同期化肥的產(chǎn)量和用量相比，僅占不足5% ο但是隨著人們對(duì)生活品質(zhì)要求的提高，開發(fā)綠色無(wú)污染食品的呼吁越來(lái)越高，這種社會(huì)需求將導(dǎo)致微生物肥料的市場(chǎng)需求量越來(lái)越大。
[0004]砸為人體所必需的營(yíng)養(yǎng)微量元素之一。人或動(dòng)物缺少或攝入過(guò)量的砸，則會(huì)引起某些疾病，如缺砸地區(qū)的克山病、大骨節(jié)病、心肌病、癌癥等發(fā)病率很高。研宄和實(shí)踐證明，砸元素對(duì)人體健康發(fā)揮著內(nèi)在的關(guān)鍵作用，它是谷胱甘肽過(guò)氧化酶、硫氧還蛋白還原酶和減碘酶等內(nèi)源性抗氧化劑的關(guān)鍵成分一一激活劑。它對(duì)于調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)、抵御疾病、延緩衰老、預(yù)防和輔助治療癌癥等多種疾病發(fā)揮著重要作用，特別是在清除脂質(zhì)自由基方面是其他抗氧化劑不可比擬和替代的。
[0005]砸是近幾十年來(lái)才被發(fā)現(xiàn)的對(duì)人體健康極為重要的、不可缺少的、具有全局作用的內(nèi)源性強(qiáng)抗氧化物質(zhì)和自由基清除劑。聯(lián)合國(guó)世界衛(wèi)生組織WHO宣布:砸是人生命中必須的微量元素，砸被國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界尊稱為“生命的火種”，享有“長(zhǎng)壽元素”、“抗癌之王”、“心臟守護(hù)神”、“天然解毒劑”等美譽(yù)。砸已被科技界公認(rèn)為“有助于人類免除各種病痛的折磨，如不良情緒、胰臟疾病、糖尿病、生殖系統(tǒng)疾病、病毒感染和癌癥等?！庇袌?bào)道，血液中含砸量最低的人死于心臟病的概率是含量高者的3倍。砸能使人體的免疫系統(tǒng)重新恢復(fù)活力。砸可排出體內(nèi)重金屬毒素，砸在體內(nèi)是以砸氨酸的形式組成砸蛋白，砸蛋白遇到鉛、汞、鎘、蛇等有害金屬灰迅速結(jié)合變成無(wú)害化合物而排出體外。砸是體內(nèi)碘的調(diào)節(jié)劑，它在甲狀腺激素代謝過(guò)程中對(duì)碘起著非常重要的調(diào)節(jié)作用。與砸結(jié)合的還有一種非常重要的抗氧化酶一一硫氧還蛋白還原酶，具有很多生物學(xué)功能，影響著核酸的合成。砸預(yù)防不孕不育，特別是預(yù)防男性死精、精子減少等癥狀，不少資料顯示，今天不孕不育癥與缺砸有直接關(guān)系。
[0006]人與動(dòng)物攝入砸的途經(jīng)主要靠含砸的食物來(lái)保證，因此，富砸殼聚糖微生物制劑的制備以及富砸產(chǎn)品的種植是極為重要的。
[0007]可以被人體所吸收的砸分為元素砸、無(wú)機(jī)砸和有機(jī)砸三種。砸的特點(diǎn)是生物活性和毒性之間范圍極端狹窄，為此，各國(guó)科學(xué)家研宄了許多砸化合物，試圖尋找活性高、毒性低的砸形式。隨著納米技術(shù)的成熟，科學(xué)家采用先進(jìn)的納米技術(shù)，將零價(jià)砸(元素砸的一種)制成納米顆粒砸一納米砸。納米砸與一般零價(jià)砸相比，發(fā)生了生物性質(zhì)的突變。具體以下特點(diǎn):1)具有抗氧化性；2)由于高活性的特性，因而對(duì)人體的危害性大大減少，可以補(bǔ)充低劑量砸相當(dāng)于以前高劑量的營(yíng)養(yǎng)含量，從而避免了給人體帶來(lái)的副作用。所以納米砸使砸的物質(zhì)結(jié)構(gòu)由原來(lái)分子態(tài)的化合物變成了納米態(tài)的零價(jià)物質(zhì)，不僅使人體充分吸收砸、降低了其毒性，而且還具備較好的生物活性。
[0008]中國(guó)專利文獻(xiàn)CN 102348516A(申請(qǐng)?zhí)?201110205067.5)公開一種植物葉面吸收的高效濃縮富砸劑，其中含有高濃度砸溶液，氨基酸營(yíng)養(yǎng)素，促吸收劑及至少為脲、磷酸鹽、硫酸鹽、葡萄糖、焦糖之一或幾種組合的輔助營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；其中所述高濃度砸溶液為含砸化合物的水溶液，以砸元素質(zhì)量百分含量計(jì)濃度為0.1%-30%M/V?應(yīng)用實(shí)施本發(fā)明高效濃縮富砸劑，較之于現(xiàn)有普通富砸溶液在同等環(huán)境下葉面噴施的生產(chǎn)富砸農(nóng)作物產(chǎn)品效率提高了 50%;成本降低了 30%;且產(chǎn)量增產(chǎn)3-8%;可使農(nóng)作物產(chǎn)品含砸量提高到110yg/kg。但該富砸制劑中砸以無(wú)機(jī)砸鹽形式存在，無(wú)機(jī)砸鹽生物活性低，不具有抗氧化性，人體對(duì)無(wú)機(jī)砸鹽吸收率很小，食用過(guò)量對(duì)人體有一定毒性，增加了對(duì)人體的危害性。
[0009]血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。其分為胎牛血清、干細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清、特殊用途胎牛血清、胎牛血清替代物、小牛血清、新生牛血清、加強(qiáng)型小牛血清、補(bǔ)鐵小牛血清、成牛血清、供體馬血清、兔血清、雞血清、豬血清、馬血清、其他動(dòng)物血清、合成血清替代品。它主要由水和各種化學(xué)成分組成，這些化學(xué)成分包括白蛋白、0 1、(!2、|3、丫-球蛋白，甘油三酯，總膽固醇，谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。血清中含多種蛋白質(zhì)(白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等)、多種金屬離子、激素、促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等、各種生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)移蛋白、不明成分。
[0010]血清可以提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。提供激素和各種生長(zhǎng)因子:胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素(氫化可的松、地塞米松)、類固醇激素(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用:有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來(lái)終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x解毒中起重要作用，如Se03，砸等。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑及制備方法，本發(fā)明的富砸微生物制劑中含有單質(zhì)砸，且單質(zhì)砸為納米級(jí)，無(wú)毒性，對(duì)人體沒(méi)有危害，對(duì)有害重金屬有拮抗作用，對(duì)于蔬菜中的硝酸鹽有降解作用，可與其他肥料混用，穩(wěn)定性好，加水施用于植物葉面，達(dá)到谷物、蔬菜、果實(shí)的富砸目的。而且其含有大量微生物以其生命活動(dòng)及其代謝產(chǎn)物導(dǎo)致農(nóng)作物得到特定肥料效應(yīng)、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)效應(yīng)、防病蟲效應(yīng)和土壤生物修復(fù)等效應(yīng)的農(nóng)業(yè)產(chǎn)品。這種富砸營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料，它能改良土壤，增加土壤微生物的數(shù)量，提高果蔬植物的抗病、抗逆能力，提高肥料利用率等優(yōu)點(diǎn)。
[0012]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0013]一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，原料按重量份計(jì)由如下成分組成:
[0014]亞砸酸鈉8-15份，動(dòng)物血水解液50-65份，復(fù)合微量元素5_15份，磷酸二氫鉀8-20 份，尿素 10-25 份，蛋白胨 8-20 份，酵母粉 4-10 份，NaCl 8-20 份，NaOH 8-15 份，NaNO34-10 份，NaCl 10-25 份，NH4Cl 4-10 份，K2HPO4 8-20 份，牛肉膏 4-10 份，葡萄糖 10-25 份，淀粉10-25份，碳酸鈣8-20份，氨基酸10-25份，硝酸鉀2_6份，硫酸亞鐵2_6份，硫酸鎂10-25份，檸檬酸三鈉25-40份，生化酶10-25份，混合菌液800-848份；
[0015]所述的動(dòng)物血水解液是以未凝固的動(dòng)物血為原料，經(jīng)升溫至75-80°C，加入水解酶水解8-15h ;水解后升溫至120°C，保溫l_2h進(jìn)行滅酶；滅酶后，降溫至常溫后制得，所述的混合菌液為解淀粉芽孢桿菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌液、蘇云金芽孢桿菌菌液和膠質(zhì)芽孢桿菌菌液的混合液。
[0016]本發(fā)明優(yōu)選的，一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，原料按重量份計(jì)由如下成分組成:
[0017]亞砸酸鈉12-13份，動(dòng)物血水解液60-62份，復(fù)合微量元素8-10份，磷酸二氫鉀10-15份，尿素15-18份，蛋白胨10-15份，酵母粉6-8份，NaCl 10-15份，NaOH 10-12份，NaN036-8 份，NaCl 15-20 份，NH4Cl 4-10 份，K2HPO4 12-18 份，牛肉膏 6-8 份，葡萄糖 15-20份，淀粉15-20份，碳酸鈣12-18份，氨基酸16-20份，硝酸鉀3_5份，硫酸亞鐵3_5份，硫酸鎂13-22份，檸檬酸三鈉30-35份，生化酶18-25份，混合菌液820-830份。
[0018]本發(fā)明優(yōu)選的，所述混合菌液是通過(guò)以下方法制備得到:
[0019](I)將解淀粉芽孢桿菌菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38?下有氧發(fā)酵24-48h，制得解淀粉芽孢桿菌菌液；發(fā)酵液原料組成:8-10%大豆粉，4-7%糖蜜，3-5%淀粉，余量為水，按重量百分比計(jì)；
[0020](2)將枯草芽孢桿菌菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38?下有氧發(fā)酵24-48h，即得枯草芽孢桿菌菌液；所述發(fā)酵液原料組成:大豆粉4-7 %，葡萄糖4-8 %，磷酸氫二鉀1-2 %，酵母膏1-2 %，硫酸鎂0.02-0.05 %，碳酸鈣0.3-0.6%，余量為水，按重量百分比計(jì)；
[0021](3)將地衣芽孢桿菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38?下有氧發(fā)酵24-48h，即得地衣芽孢桿菌液；所述發(fā)酵液原料組成:糖蜜12-20 %，玉米淀粉8-12 %，葡萄糖5-8 %，余量為水，按重量百分比計(jì)；
[0022](4)將蘇云金芽孢桿菌菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38°C下有氧發(fā)酵24-48h，即得蘇云金芽孢桿菌菌液；所述發(fā)酵液原料組成:糖蜜12-18%，氫氧化鉀3-5%，磷酸2-4%，尿素1_3%，牛肉膏0.5_2%，硫酸鎂0.1-0.2%，硫酸鋅0.1-0.2%，余量為水，按重量百分比計(jì)；
[0023](5)將膠質(zhì)芽孢桿菌菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38?下有氧發(fā)酵24-48h，即得膠質(zhì)芽孢桿菌菌液；所述發(fā)酵液原料組成:玉米淀粉8-12 %，牛肉膏1-2 %，葡萄糖1-3 %，蛋白胨0.5-1 %，碳酸鈣0.5-1 %，磷酸氫二鉀0.5-1 %，硫酸鎂0.02-0.05 %，余量為水，按重量百分比計(jì)；
[0024](6)按體積比將解淀粉芽孢桿菌菌液:枯草芽孢桿菌菌液:地衣芽孢桿菌液:蘇云金芽孢桿菌菌液:膠質(zhì)芽孢桿菌菌液按(1-6):(1-3):(1-2):(1-2):(1-2)的比例混合混勻，即得混合菌液。
[0025]進(jìn)一步優(yōu)選的，解淀粉芽孢桿菌菌液:枯草芽孢桿菌菌液:地衣芽孢桿菌液:蘇云金芽孢桿菌菌液:膠質(zhì)芽孢桿菌菌液的體積比為:(2-4): (2-3):2:2:2。
[0026]進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟⑴、⑵、(3)、(4)、(5)中使用的發(fā)酵液均于110°C?120°C下滅菌2?3小時(shí)，冷卻后再進(jìn)行接種。
[0027]本發(fā)明優(yōu)選的，步驟⑴、(2)、(3)、⑷、(5)中有氧發(fā)酵時(shí)間45_48h。
[0028]本發(fā)明優(yōu)選的，所述的解淀粉芽孢桿菌菌液中活菌含量為120?150億個(gè)/ml，枯草芽孢桿菌菌液中活菌含量為120?160億個(gè)/ml，地衣芽孢桿菌液中活菌含量為120?150億個(gè)/ml，蘇云金芽孢桿菌菌液中活菌含量為120?150億個(gè)/ml，膠質(zhì)芽孢桿菌菌液中活菌含量為120?150億個(gè)/ml。
[0029]本發(fā)明優(yōu)選的，所述的水解酶為動(dòng)物蛋白水解酶，動(dòng)物蛋白水解酶的用量為100kg動(dòng)物血添加3-4kg的動(dòng)物蛋白水解酶，動(dòng)物蛋白水解酶南寧龐博生物工程有限公司有售。
[0030]本發(fā)明優(yōu)選的，所述復(fù)合微量元素，是由等質(zhì)量的下述物質(zhì)混合而成:硫酸錳，硫酸亞鐵，硼酸，硫酸銅，硫酸鋅，鉬酸錢。
[0031]本發(fā)明優(yōu)選的，所述的生化酶為磷酸葡萄糖激酶PEK、己糖激酶、丙酮酸激酶、丙酮酸羧化酶、谷氨酸脫氫酶、氨甲酰磷酸合酶I或氨甲酰磷酸合酶II。
[0032]本發(fā)明還提供一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑的制備方法，包括步驟如下:
[0033]將原料亞砸酸鈉、動(dòng)物血水解液、復(fù)合微量元素、磷酸二氫鉀、尿素、蛋白胨、酵母粉、NaCl、NaOH, NaNO3.NaCl, NH4Cl, K2HPO4、牛肉膏、葡萄糖、淀粉、碳酸鈣、氨基酸、硝酸鉀、硫酸亞鐵、硫酸鎂、檸檬酸三鈉、生化酶、混合菌液混合均勻后，調(diào)節(jié)pH至7?7.5，得混合物料，將混合物料于30?35°C在無(wú)氧條件下經(jīng)發(fā)酵24-48h，當(dāng)混合物料的顏色從淡黃色變到紅色，即制得富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料，所述的富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料制劑含單質(zhì)砸0.3?0.4g/L，所述砸為納米級(jí)，平均粒徑為60?150nm，活性菌總數(shù)蘭150億個(gè)/mLo
[0034]本發(fā)明優(yōu)選的，混合物料在發(fā)酵過(guò)程中通入惰性氣體維持無(wú)氧環(huán)境，所述的惰性氣體為氮?dú)饣驓鍤狻?br> [0035]本發(fā)明制得的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑呈液體狀態(tài)，溶液呈紅色表明砸納米粒子的存在。
[0036]上述采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑的應(yīng)用，用于缺砸、貧砸地區(qū)的農(nóng)作物種植施肥用，包括根部施肥和葉面施肥，根部施肥時(shí)將富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料直接施用，葉面施肥時(shí)將富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料稀釋2?5倍施用。
[0037]本發(fā)明優(yōu)選的，所述的農(nóng)作物為葡萄，蘋果，西葫蘆，辣椒，黃瓜，白菜油菜，西紅柿，前子。
[0038]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述的根部施肥富砸制劑直接均勾地布灑在農(nóng)作物根部周圍土壤中，再覆土蓋嚴(yán)，或者以農(nóng)作物根部為中心等分若干條溝或穴坑，將稀釋后的富砸制劑均勻布灑在條溝或穴坑內(nèi)，再覆土蓋嚴(yán)，施肥量:每棵施5?10斤稀釋后的富砸制劑。
[0039]本發(fā)明使用的解淀粉芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，蘇云金芽孢桿菌，膠質(zhì)芽孢桿菌均為現(xiàn)有技術(shù)中已有的常規(guī)菌種，可常規(guī)市場(chǎng)購(gòu)買得到，本發(fā)明所用菌種均購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心(公開出售)，其中，解淀粉芽孢桿菌的編號(hào)為ACCC10167，枯草芽孢桿菌的編號(hào)ACCC04177，地衣芽孢桿菌的編號(hào)為ACCC02936，蘇云金芽孢桿菌的編號(hào)為ACCC11075，膠質(zhì)芽孢桿菌的編號(hào)為ACCC10013。
[0040]本發(fā)明所涉及的發(fā)酵液中的組分均為現(xiàn)有技術(shù)中已有的常規(guī)組分，均按照常規(guī)方法制備得到，比如，大豆粉，玉米淀粉，糖蜜，酵母膏，牛肉膏等。
[0041]本發(fā)明所使用的亞砸酸鈉購(gòu)自濟(jì)南莊盟生物技術(shù)有限公司。
[0042]本發(fā)明的動(dòng)物血水解液中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白質(zhì)主要為白蛋白和球蛋白。氨基酸有多種，是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，其中有些氨基酸動(dòng)物細(xì)胞本身不能合成(稱為必需氨基酸)，必須由培養(yǎng)液提供。血清激素有胰島素、生長(zhǎng)激素等及多種生長(zhǎng)因子(如表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、類胰島素生長(zhǎng)因子等)；血清還含有多種未知的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子及其他活性物質(zhì)，能促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和貼附。因此，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，要保證細(xì)胞能夠順利生長(zhǎng)和增殖，一般需添加10%?20%的血清，動(dòng)物血清還可起到酸堿度緩沖液的作用。針對(duì)長(zhǎng)期以來(lái)微生物菌劑發(fā)酵液中菌體數(shù)量難以提高的問(wèn)題，根據(jù)微生物的生理特性及生長(zhǎng)特征，在發(fā)酵過(guò)程中，通過(guò)嘗試采用動(dòng)物血清類等不同來(lái)源的氨基酸溶液，利用動(dòng)物血清類氨基酸改善培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)組份結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)了微生物的高效增殖及活性保持，有效提高了活菌數(shù)量及存活周期，顯著提高了微生物菌劑的增殖率，微生物菌劑的含菌量達(dá)到了 200億/mL，并取得了經(jīng)濟(jì)作物增產(chǎn)10-15%的優(yōu)異效果。通過(guò)增加發(fā)酵過(guò)程中微生物的增殖速度，菌劑的保存期可以延長(zhǎng)至2年。
[0043]有益效果
[0044]本發(fā)明的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑優(yōu)點(diǎn)如下:
[0045]1、本發(fā)明的富砸微生物制劑的制備方法，發(fā)酵時(shí)間短，僅需24-48h，大大提高了富砸微生物制劑的使用效率，節(jié)約了成本。
[0046]2、本發(fā)明的動(dòng)物血水解液中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白質(zhì)主要為白蛋白和球蛋白。氨基酸有多種，是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，其中有些氨基酸動(dòng)物細(xì)胞本身不能合成(稱為必需氨基酸)，必須由培養(yǎng)液提供。血清激素有胰島素、生長(zhǎng)激素等及多種生長(zhǎng)因子(如表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、類胰島素生長(zhǎng)因子等)；
[0047]3、本發(fā)明的動(dòng)物血水解液中還含有多種未知的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子及其他活性物質(zhì)，能促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和貼附。因此，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，要保證細(xì)胞能夠順利生長(zhǎng)和增殖，一般需添加10%?20%的血清，動(dòng)物血清還可起到酸堿度緩沖液的作用。
[0048]4、針對(duì)長(zhǎng)期以來(lái)微生物菌劑發(fā)酵液中菌體數(shù)量難以提高的問(wèn)題，根據(jù)微生物的生理特性及生長(zhǎng)特征，在發(fā)酵過(guò)程中，通過(guò)嘗試采用動(dòng)物血清類等不同來(lái)源的氨基酸溶液，利用動(dòng)物血清類氨基酸改善培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)組份結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)了微生物的高效增殖及活性保持，有效提高了活菌數(shù)量及存活周期，顯著提高了微生物菌劑的增殖率，微生物菌劑的含菌量達(dá)到了 200億/mL，并取得了經(jīng)濟(jì)作物增產(chǎn)10-15%的優(yōu)異效果。通過(guò)增加發(fā)酵過(guò)程中微生物的增殖速度，菌劑的保存期可以延長(zhǎng)至2年。
[0049]5，本富砸微生物制劑使用的枯草芽孢桿菌，解淀粉芽孢桿菌，膠凍樣芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，蘇云金芽孢桿菌膠質(zhì)芽孢桿菌菌種，不僅可以提高富砸微生物制劑的發(fā)酵速度，而且使砸納米顆粒的粒徑更加均勻，更有益于植物對(duì)此富砸微生物制劑的吸收。
[0050]6，本富砸微生物制劑使用的枯草芽孢桿菌，解淀粉芽孢桿菌，膠凍樣芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，蘇云金芽孢桿菌膠質(zhì)芽孢桿菌菌種，會(huì)對(duì)土壤中的微生物帶來(lái)有益影響，它可以增加土壤中微生物的數(shù)量及提高土壤中微生物的活性。此類菌種以其生命活動(dòng)及其代謝產(chǎn)物導(dǎo)致農(nóng)作物得到特定肥料效應(yīng)，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)效應(yīng)，防病蟲效應(yīng)和土壤生物修復(fù)等效應(yīng)的農(nóng)業(yè)產(chǎn)品。
[0051]7、本發(fā)明的富砸制劑對(duì)于農(nóng)作物病蟲害有抗逆作用，其所含的枯草芽孢桿菌，解淀粉芽孢桿菌，膠凍樣芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，蘇云金芽孢桿菌膠質(zhì)芽孢桿菌對(duì)有害重金屬有拮抗作用，對(duì)于蔬菜中的硝酸鹽有降解作用，可以減少農(nóng)藥施用量。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0052]圖1為本發(fā)明采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑的電鏡掃描照片，
[0053]圖2為本發(fā)明采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑的xps譜圖(a)，
[0054]圖3為本發(fā)明采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑的xps譜圖(b)。

【具體實(shí)施方式】
[0055]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明所保護(hù)范圍不限于此。
[0056]實(shí)施例1
[0057]一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，原料重量份如下:
[0058]亞砸酸鈉8份，動(dòng)物血水解液60份，復(fù)合微量元素5份，磷酸二氫鉀8份，尿素10份，蛋白胨8份，酵母粉4份，NaCl 8份，NaOH 8份，NaNO3 4份，NaCl 10份，NH4Cl 4份，K2HPO4 8份，牛肉膏4份，葡萄糖10份，淀粉10份，碳酸鈣8份，氨基酸10份，硝酸鉀2份，硫酸亞鐵2份，硫酸鎂10份，檸檬酸三鈉25份，生化酶10份，混合菌液800份；
[0059]所述混合菌液是通過(guò)以下方法制備得到:
[0060](I)將解淀粉芽孢桿菌菌種以體積比為0.25%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在35°C下有氧發(fā)酵45h，制得解淀粉芽孢桿菌菌液；發(fā)酵液原料組成:8%大豆粉，4%糖蜜，3%淀粉，余量為水，按重量百分比計(jì)；
[0061](2)將枯草芽孢桿菌菌種以體積比為0.25%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在35°C下有氧發(fā)酵45h，即得枯草芽孢桿菌菌液；所述發(fā)酵液原料組成:大豆粉4%，葡萄糖4%，磷酸氫二鉀I %，酵母膏I %，硫酸鎂0.02%，碳酸鈣0.3%，余量為水，按重量百分比計(jì);
[0062](3)將地衣芽孢桿菌種以體積比為0.25%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在35°C下有氧發(fā)酵24h，即得地衣芽孢桿菌液；所述發(fā)酵液原料組成:糖蜜12%，玉米淀粉8%，葡萄糖5%，余量為水，按重量百分比計(jì)；
[0063](4)將蘇云金芽孢桿菌菌種以體積比為0.25%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在35°C下有氧發(fā)酵45h，即得蘇云金芽孢桿菌菌液；所述發(fā)酵液原料組成:糖蜜12%，氫氧化鉀3%，磷酸2%，尿素1%，牛肉膏0.5%，硫酸鎂0.1%，硫酸鋅0.1%，余量為水，按重量百分比計(jì)；
[0064](5)將膠質(zhì)芽孢桿菌菌種以體積比為0.25%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在35°C下有氧發(fā)酵45h，即得膠質(zhì)芽孢桿菌菌液；所述發(fā)酵液原料組成:玉米淀粉8%，牛肉膏1%，葡萄糖1%，蛋白胨0.5%，碳酸鈣0.5%，磷酸氫二鉀0.5%，硫酸鎂0.02%，余量為水，按重量百分比計(jì)；
[0065](6)步驟⑴、⑵、(3)、(4)、(5)中使用的發(fā)酵液均于120°C下滅菌2小時(shí)，冷卻后再進(jìn)行接種，按體積比將解淀粉芽孢桿菌菌液:枯草芽孢桿菌菌液:地衣芽孢桿菌液:蘇云金芽孢桿菌菌液:膠質(zhì)芽孢桿菌菌液按4:3:2:2:2的比例混合混勻，即得混合菌液。
[0066]所述的動(dòng)物血水解液是以未凝固的動(dòng)物血為原料，經(jīng)升溫至80°C，加入動(dòng)物蛋白水解酶水解12h ;水解后升溫至120°C，保溫Ih進(jìn)行滅酶；滅酶后，降溫至常溫后制得，動(dòng)物蛋白水解酶的用量為100kg動(dòng)物血添加4kg的動(dòng)物蛋白水解酶。
[0067]所述復(fù)合微量元素，是由等質(zhì)量的下述物質(zhì)混合而成:硫酸錳，硫酸亞鐵，硼酸，硫酸銅，硫酸鋅，鉬酸錢。
[0068]所述的生化酶為磷酸葡萄糖激酶PEK。
[0069]制備方法:
[0070]將原料亞砸酸鈉、動(dòng)物血水解液、復(fù)合微量元素、磷酸二氫鉀、尿素、蛋白胨、酵母粉、NaCl、NaOH, NaNO3.NaCl, NH4Cl, K2HPO4、牛肉膏、葡萄糖、淀粉、碳酸鈣、氨基酸、硝酸鉀、硫酸亞鐵、硫酸鎂、檸檬酸三鈉、生化酶、混合菌液混合均勻后，調(diào)節(jié)pH至7.5，得混合物料，將混合物料于32°C通入氮?dú)獗３譄o(wú)氧條件下經(jīng)發(fā)酵30h，當(dāng)混合物料的顏色從淡黃色變到紅色，即制得富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料，所述的富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料制劑含單質(zhì)砸0.3?0.4g/L，所述砸為納米級(jí)，平均粒徑為lOOnm，活性菌總數(shù)蘭150億個(gè)/mL。
[0071]圖1為本發(fā)明采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑的掃描電鏡照片，從圖中可以看出，納米級(jí)單質(zhì)砸的平均粒徑在lOOnm。
[0072]圖2 (a)顯示，XPS光譜下，溶液中Cls，Ols的，Nls和Se3d的存在。但Se3d在XPS光譜中不明顯，即它的發(fā)射峰的強(qiáng)度非常弱，這可能是由于砸納米顆粒容易被芽孢桿菌的蛋白質(zhì)分泌物捕獲。
[0073]圖3(b)顯示，XPS光譜下，溶液中的Se3d結(jié)合能在55.74eV，它是砸元素本身的特征峰。C，N，O的存在可能是由于樣品中蛋白質(zhì)和其他生物大分子污染的存在。
[0074]我們可以從XPS光譜中得出如下結(jié)論，此反應(yīng)合成砸元素，而且是被芽孢桿菌的蛋白質(zhì)分泌物覆蓋的小尺寸的納米砸顆粒。M-Se的形成過(guò)程中中蛋白質(zhì)起重要作用。
[0075]實(shí)施例2
[0076]如實(shí)施例1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，不同之處在于，原料重量
[0077]份如下:
[0078]亞砸酸鈉10份，動(dòng)物血水解液62份，復(fù)合微量元素8份，磷酸二氫鉀10份，尿素15 份，蛋白胨 12 份，酵母粉 6 份，NaCl 10 份，NaOH 10 份，NaN036 份，NaCl 15 份，NH4Cl 4份，K2HPO4 12份，牛肉膏6份，葡萄糖15份，淀粉15份，碳酸鈣12份，氨基酸16份，硝酸鉀
3份，硫酸亞鐵3份，硫酸鎂13份，檸檬酸三鈉30份，生化酶18份，混合菌液820份。
[0079]混合菌液中解淀粉芽孢桿菌菌液:枯草芽孢桿菌菌液:地衣芽孢桿菌液:蘇云金芽孢桿菌菌液:膠質(zhì)芽孢桿菌菌液的體積比為:6:3:2:2:2。
[0080]制備方法同實(shí)施例1。
[0081]實(shí)施例3
[0082]如實(shí)施例1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，不同之處在于，原料重量
[0083]份如下:
[0084]亞砸酸鈉12份，動(dòng)物血水解液58份，復(fù)合微量元素12份，磷酸二氫鉀18份，尿素20 份，蛋白胨 18 份，酵母粉 8 份，NaCl 15 份，NaOH 12 份，NaNO3 8 份，NaCl 20 份，NH4Cl 10份，K2HPO4 18份，牛肉膏8份，葡萄糖20份，淀粉20份，碳酸鈣18份，氨基酸20份，硝酸鉀5份，硫酸亞鐵5份，硫酸鎂22份，檸檬酸三鈉35份，生化酶25份，混合菌液830份。
[0085]混合菌液中解淀粉芽孢桿菌菌液:枯草芽孢桿菌菌液:地衣芽孢桿菌液:蘇云金芽孢桿菌菌液:膠質(zhì)芽孢桿菌菌液的體積比為:1:1:1:1:1。
[0086]實(shí)施例4
[0087]如實(shí)施例1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，不同之處在于，原料重量
[0088]份如下:
[0089]亞砸酸鈉15份，動(dòng)物血水解液65份，復(fù)合微量元素15份，磷酸二氫鉀20份，尿素25 份，蛋白胨 20 份，酵母粉 10 份，NaC120 份，NaOH 15 份，NaN0310 份，NaCl 25 份，NH4CllO份，K2HPO4 20份，牛肉膏10份，葡萄糖25份，淀粉25份，碳酸鈣20份，氨基酸25份，硝酸鉀6份，硫酸亞鐵6份，硫酸鎂25份，檸檬酸三鈉40份，生化酶25份，混合菌液848份。
【權(quán)利要求】
1.一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，原料按重量份計(jì)由如下成分組成: 亞砸酸鈉8-15份，動(dòng)物血水解液50-65份，復(fù)合微量元素5-15份，磷酸二氫鉀8_20份，尿素 10-25 份，蛋白胨 8-20 份，酵母粉 4-10 份，NaCl 8-20 份，NaOH 8-15 份，NaN034_10 份，NaCl 10-25 份，NH4Cl 4-10 份，K2HP048_20 份，牛肉膏 4-10 份，葡萄糖 10-25 份，淀粉 10-25份，碳酸鈣8-20份，氨基酸10-25份，硝酸鉀2-6份，硫酸亞鐵2_6份，硫酸鎂10-25份，檸檬酸三鈉25-40份，生化酶10-25份，混合菌液800-848份； 所述的動(dòng)物血水解液是以未凝固的動(dòng)物血為原料，經(jīng)升溫至75-80°C，加入水解酶水解8-15h ;水解后升溫至120°C，保溫l_2h進(jìn)行滅酶；滅酶后，降溫至常溫后制得，所述的混合菌液為解淀粉芽孢桿菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌液、蘇云金芽孢桿菌菌液和膠質(zhì)芽孢桿菌菌液的混合液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，其特征在于，原料按重量份計(jì)由如下成分組成: 亞砸酸鈉12-13份，動(dòng)物血水解液60-62份，復(fù)合微量元素8-10份，磷酸二氫鉀10-15份，尿素 15-18 份，蛋白胨 10-15 份，酵母粉 6-8 份，NaCl 10-15 份，NaOH 10-12 份，NaN036_8份，NaCl 15-20 份，NH4Cl 4-10 份，K2HPO412-18 份，牛肉膏 6-8 份，葡萄糖 15-20 份，淀粉15-20份，碳酸鈣12-18份，氨基酸16-20份，硝酸鉀3_5份，硫酸亞鐵3_5份，硫酸鎂13-22份，檸檬酸三鈉30-35份，生化酶18-25份，混合菌液820-830份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，其特征在于，所述混合菌液是通過(guò)以下方法制備得到: (1)將解淀粉芽孢桿菌菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38°C下有氧發(fā)酵24-48h，制得解淀粉芽孢桿菌菌液；發(fā)酵液原料組成:8-10%大豆粉，4-7%糖蜜，3-5%淀粉，余量為水，按重量百分比計(jì)； (2)將枯草芽孢桿菌菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38?下有氧發(fā)酵24-48h，即得枯草芽孢桿菌菌液；所述發(fā)酵液原料組成--大豆粉4-7 %，葡萄糖4-8 %，磷酸氫二鉀1-2 %，酵母膏1-2 %，硫酸鎂0.02-0.05 %，碳酸鈣0.3-0.6%，余量為水，按重量百分比計(jì)； (3)將地衣芽孢桿菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38°C下有氧發(fā)酵24-48h，即得地衣芽孢桿菌液；所述發(fā)酵液原料組成:糖蜜12-20 %，玉米淀粉8-12 %，葡萄糖5-8 %，余量為水，按重量百分比計(jì)； (4)將蘇云金芽孢桿菌菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38°C下有氧發(fā)酵24-48h，即得蘇云金芽孢桿菌菌液；所述發(fā)酵液原料組成:糖蜜12-18%，氫氧化鉀3-5%，磷酸2-4%，尿素1_3%，牛肉膏0.5_2%，硫酸鎂0.1-0.2%，硫酸鋅0.1-0.2%，余量為水，按重量百分比計(jì)； (5)將膠質(zhì)芽孢桿菌菌種以體積比為0.25% -0.5%的接種量接入裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中，在30-38?下有氧發(fā)酵24-48h，即得膠質(zhì)芽孢桿菌菌液；所述發(fā)酵液原料組成:玉米淀粉8-12 %，牛肉膏1-2 %，葡萄糖1-3 %，蛋白胨0.5-1 %，碳酸鈣0.5-1 %，磷酸氫二鉀0.5-1%，硫酸鎂0.02-0.05%，余量為水，按重量百分比計(jì)； (6)按體積比將解淀粉芽孢桿菌菌液:枯草芽孢桿菌菌液:地衣芽孢桿菌液:蘇云金芽孢桿菌菌液:膠質(zhì)芽孢桿菌菌液按(1-6):(1-3):(1-2):(1-2):(1-2)的比例混合混勻，即得混合菌液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，其特征在于，解淀粉芽孢桿菌菌液:枯草芽孢桿菌菌液:地衣芽孢桿菌液:蘇云金芽孢桿菌菌液:膠質(zhì)芽孢桿菌菌液的體積比為:(2-4): (2-3):2:2:2，步驟(1)、⑵、⑶、⑷、(5)中使用的發(fā)酵液均于110°C?120°C下滅菌2?3小時(shí)，冷卻后再進(jìn)行接種，步驟⑴、(2)、(3)、⑷、(5)中有氧發(fā)酵時(shí)間45-48h，所述的解淀粉芽孢桿菌菌液中活菌含量為120?150億個(gè)/ml，枯草芽孢桿菌菌液中活菌含量為120?160億個(gè)/ml，地衣芽孢桿菌液中活菌含量為120?150億個(gè)/ml，蘇云金芽孢桿菌菌液中活菌含量為120?150億個(gè)/ml，膠質(zhì)芽孢桿菌菌液中活菌含量為120?150億個(gè)/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，其特征在于，所述的水解酶為動(dòng)物蛋白水解酶，動(dòng)物蛋白水解酶的用量為100kg動(dòng)物血添加3-4kg的動(dòng)物蛋白水解酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，其特征在于，所述復(fù)合微量元素，是由等質(zhì)量的下述物質(zhì)混合而成:硫酸錳，硫酸亞鐵，硼酸，硫酸銅，硫酸鋅，鉬酸銨。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑，其特征在于，所述的生化酶為磷酸葡萄糖激酶PEK、己糖激酶、丙酮酸激酶、丙酮酸羧化酶、谷氨酸脫氫酶、氨甲酰磷酸合酶I或氨甲酰磷酸合酶II。
8.權(quán)利要求1所述的一種采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑的制備方法，包括步驟如下: 將原料亞砸酸鈉、動(dòng)物血水解液、復(fù)合微量元素、磷酸二氫鉀、尿素、蛋白胨、酵母粉、NaCl、NaOH, NaNO3、NaCl、NH4Cl、K2HPO4、牛肉膏、葡萄糖、淀粉、碳酸鈣、氨基酸、硝酸鉀、硫酸亞鐵、硫酸鎂、檸檬酸三鈉、生化酶、混合菌液混合均勻后，調(diào)節(jié)pH至7?7.5，得混合物料，將混合物料于30?35°C在無(wú)氧條件下經(jīng)發(fā)酵24-48h，當(dāng)混合物料的顏色從淡黃色變到紅色，即制得富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料，所述的富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料制劑含單質(zhì)砸0.3?0.4g/L，所述砸為納米級(jí)，平均粒徑為60?150nm，活性菌總數(shù)蘭150億個(gè)/mL。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑的制備方法，其特征在于，混合物料在發(fā)酵過(guò)程中通入惰性氣體維持無(wú)氧環(huán)境，所述的惰性氣體為氮?dú)饣驓鍤狻?br> 10.權(quán)利要求1所述的采用動(dòng)物血清發(fā)酵制備的富砸微生物制劑的應(yīng)用，用于缺砸、貧砸地區(qū)的農(nóng)作物種植施肥用，包括根部施肥和葉面施肥，根部施肥時(shí)將富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料直接施用，葉面施肥時(shí)將富砸殼聚糖營(yíng)養(yǎng)型微生物肥料稀釋2?5倍施用，所述的農(nóng)作物為葡萄，蘋果，西葫蘆，辣椒，黃瓜，白菜油菜，西紅柿，茄子。
【文檔編號(hào)】C12R1/07GK104478586SQ201410757819
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月10日
【發(fā)明者】王曙光, 李曉, 肖嵐 申請(qǐng)人:山東大學(xué)