一種用于乳酸脫氫酶試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于乳酸脫氫酶試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定劑，所述復(fù)合穩(wěn)定劑包括三羥甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二鈉、海藻糖、β-環(huán)糊精、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、液體生物防腐劑Proclin300。通過上述方式，本發(fā)明的用于乳酸脫氫酶試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定劑，所述復(fù)合穩(wěn)定劑由緩沖劑、螯合劑、糖類、表面活性劑、有機(jī)溶劑、防腐劑組成。本發(fā)明的復(fù)合穩(wěn)定劑加入到乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒中后，可顯著提高檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性，有效延長(zhǎng)乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒的保存時(shí)間。
【專利說明】一種用于乳酸脫氫酶試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及體外診斷領(lǐng)域，特別是涉及一種用于乳酸脫氫酶試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定 劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 血清乳酸脫氫酶（LDH)是一種氧化還原酶，催化丙酮酸和乳酸的相互轉(zhuǎn)化反應(yīng)。乳 酸脫氫酶根據(jù)亞單位分5種同工酶，有兩種類型：肌肉型和心肌型。乳酸脫氫酶的活性用來 評(píng)價(jià)細(xì)胞或組織的損害狀況，基于還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰 胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+)，引起340nm波長(zhǎng)處吸光度的變化，從而來定量測(cè)定乳酸脫氫酶的 活性，乳酸脫氫酶的含量與NADH的消耗量成正比，而NADH作為一種輔酶，其活性易受各種 因素的干擾，且自身極易被氧化，直接影響乳酸脫氫酶含量的測(cè)定結(jié)果，致使乳酸脫氫酶測(cè) 定試劑盒缺乏穩(wěn)定性，保存時(shí)間短，直接影響到臨床使用。
[0003] 目前關(guān)于乳酸脫氫酶測(cè)定試劑穩(wěn)定性的報(bào)道非常有限。專利CN200980105640中 通過加入葡糖脫氫酶對(duì)輔酶進(jìn)行化學(xué)修飾，生成一種相對(duì)穩(wěn)定的輔酶衍生物，從而使其達(dá) 到穩(wěn)定的作用，且不影響試劑的應(yīng)用，但這種方法成本較高，不便于推廣；專利CN1179792A 中利用一種酶和底物將已氧化的輔酶還原成還原型輔酶，這樣便于在貯存過程中輔酶再 生，但這種方法實(shí)施成本高，而且加入的酶自身也不穩(wěn)定；專利CN02139298通過加入NAD+， 利用酶-底物-NAD +或酶-底物-NADP+系統(tǒng)循環(huán)將氧化型輔酶轉(zhuǎn)化成還原型輔酶，當(dāng)還原型 輔酶積累到一定濃度時(shí)即可進(jìn)行測(cè)定，但是該方法較為復(fù)雜，且不能保證在系統(tǒng)循環(huán)中還 原型輔酶的產(chǎn)生速率和總量能滿足試劑盒的要求；專利200610030784. 8提供了一種NADH 的復(fù)合穩(wěn)定劑，但是只能證明該復(fù)合穩(wěn)定劑對(duì)單獨(dú)存在的NADH具有一定的穩(wěn)定作用，并不 能說明加入到成分較為復(fù)雜的試劑盒中也能有類似的穩(wěn)定效果。因此，研究開發(fā)一種配制 簡(jiǎn)單、成本低廉，對(duì)乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒有良好穩(wěn)定效果的穩(wěn)定劑是非常必要的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種用于乳酸脫氫酶試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定劑，該 復(fù)合穩(wěn)定劑要配制簡(jiǎn)單、成本低廉且對(duì)乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒有良好的穩(wěn)定效果。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種用于乳酸脫氫酶 試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定劑，所述復(fù)合穩(wěn)定劑包括三羥甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二鈉、海藻 糖、β-環(huán)糊精、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、液體生物防腐劑Proclin 300,各組分的含量為： 三羥甲基氨基甲烷（Tris) 3?9 g/L、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na) 4(T60 g/L、海藻糖 2(T30 g/L、i3-環(huán)糊精15?25 g/L、甘油5?15 g/L、聚乙烯吡咯烷酮15?25 g/L、液體生物 防腐劑 Proclin 300 1 ?10 g/L。
[0006] 在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述復(fù)合穩(wěn)定劑各組分的含量為：Tris 6. 06g/L、 EDTA-2Na 50 g/L、海藻糖25 g/L、β-環(huán)糊精20 g/L、甘油10 g/L、聚乙烯吡咯烷酮20 g/L >Proclin300 5 g/L〇
[0007] 在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述復(fù)合穩(wěn)定劑應(yīng)用于乳酸脫氫酶試劑盒中，所述 乳酸脫氫酶試劑盒包括第一試劑和第二試劑，所述第一試劑的組分為：磷酸氫二鈉25. 069 g/L、磷酸二氫鉀2.435 g/L、a-酮丁酸鈉鹽0.496 g/L，所述第二試劑的組分為：Tris 8.479 g/L、NADH 0.0851 g/L、鹽酸 5.6 mL/L。
[0008] 在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述復(fù)合穩(wěn)定劑的使用量在乳酸脫氫酶試劑盒中的 體積分?jǐn)?shù)為5%。
[0009] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的用于乳酸脫氫酶試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定劑，所述復(fù)合 穩(wěn)定劑由緩沖劑、螯合劑、糖類、表面活性劑、有機(jī)溶劑、防腐劑組成。本發(fā)明的復(fù)合穩(wěn)定劑 加入到乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒中后，可顯著提高檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性，有效延長(zhǎng)乳酸脫氫酶 測(cè)定試劑盒的保存時(shí)間。另外，該復(fù)合穩(wěn)定劑成本低廉，配制簡(jiǎn)單。

【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施 例僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通 技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范 圍。
[0011] 本發(fā)明涉及的儀器有：uv Blue Star紫外分光光度計(jì)1臺(tái)（北京萊伯泰科儀器有 限公司，亦或者其它品牌)、恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋1臺(tái)（上海梅香儀器有限公司，亦或者其它品 牌)。
[0012] 實(shí)施例1 提供一種用于乳酸脫氫酶試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定劑，所述復(fù)合穩(wěn)定劑各組分的含量為： Tris 6.06 g/L、EDTA-2Na 50 g/L、海藻糖 25 g/L、0-環(huán)糊精 20 g/L、甘油 10 g/L、聚乙 烯吡咯烷酮20 g/L、Pr〇Clin300 5 g/L。將上述各組分充分溶解、混合后，即可制得一種 液體復(fù)合穩(wěn)定劑成品。
[0013] 將實(shí)施例1應(yīng)用于乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒，并從穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度和使用量方面進(jìn) 行評(píng)價(jià)。
[0014] (一）穩(wěn)定性及準(zhǔn)確度試驗(yàn) 1、供試穩(wěn)定劑：實(shí)施例1所述復(fù)合穩(wěn)定劑。
[0015] 2、供試試劑盒為乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒，由試劑1和試劑2組成。組分如下： 試劑1 :磷酸氫二鈉25. 069 g/L、磷酸二氫鉀2. 435 g/L、α -酮丁酸鈉鹽〇· 496 g/L ; 試劑 2 :Tris 8.479 g/L、NADH 0.0851 g/L、鹽酸 5.6 mL/L。
[0016] 3、試驗(yàn)方法及結(jié)果 將實(shí)施例1配制的復(fù)合穩(wěn)定劑按3% (v/v)的量加入乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒中(試劑1 和試劑2均按此量添加)，與不添加復(fù)合穩(wěn)定劑的乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒分別測(cè)定樣本中乳 酸脫氫酶含量。本試驗(yàn)以英國(guó)朗道質(zhì)控血清水平2 (質(zhì)控2)和質(zhì)控血清水平3 (質(zhì)控3)為 樣本，采用紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)一個(gè)空白測(cè)試、兩個(gè)樣本測(cè)試(空白測(cè)試以蒸 餾水代替樣本)。樣本與試劑1和試劑2的比例為20 μ L :1000 μ L :250 μ L，設(shè)定的主波長(zhǎng)為 340nm、副波長(zhǎng)為405nm，樣品與試劑混勻后延遲Imin讀數(shù)，讀數(shù)時(shí)間為I. 5min，得出Λ A/ min (每分鐘吸光度變化)，根據(jù)公式LDH (U/L)= Λ A/min X F計(jì)算出樣本LDH含量(計(jì)算 因子F=12500)。質(zhì)控2中LDH的靶值為402U/L，質(zhì)控3中LDH的靶值為754U/L，允許偏差 范圍±10%。
[0017] 根據(jù)以上測(cè)定方法，以同批次同瓶裝的質(zhì)控血清2、質(zhì)控血清3作為檢測(cè)樣本，分 別用添加3% (v/v)復(fù)合穩(wěn)定劑的乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒和不添加復(fù)合穩(wěn)定劑的乳酸脫氫 酶測(cè)定試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，每5天測(cè)試一次，每次做三個(gè)平行并取其平均值，檢測(cè)周期35天， 得到針對(duì)質(zhì)控血清2、質(zhì)控血清3的測(cè)試結(jié)果，計(jì)算得到測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD)和有效期 天數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)偏差這項(xiàng)可反映測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定性。試驗(yàn)結(jié)果見下表。

【權(quán)利要求】
1. 一種用于乳酸脫氫酶試劑盒的復(fù)合穩(wěn)定劑，其特征在于，所述復(fù)合穩(wěn)定劑包括三羥 甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二鈉、海藻糖、￠-環(huán)糊精、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、液體生物防 腐劑Proclin 300,各組分的含量為：三羥甲基氨基甲烷（Tris) 3、g/L、乙二胺四乙酸二 鈉（EDTA-2Na) 40?60 g/L、海藻糖 20?30 g/L、￠-環(huán)糊精 15?25 g/L、甘油 5?15 g/L、聚 乙烯吡咯烷酮15?25 g/L、液體生物防腐劑Proclin 300 flO g/L。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合穩(wěn)定劑，其特征在于，所述復(fù)合穩(wěn)定劑各組分的含量為： Tris 6.06 g/L、EDTA-2Na 50 g/L、海藻糖 25 g/L、P-環(huán)糊精 20 g/L、甘油 10 g/L、聚乙 烯吡咯烷酮 20 g/L、Proclin300 5 g/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合穩(wěn)定劑，其特征在于，所述復(fù)合穩(wěn)定劑應(yīng)用于乳酸脫氫 酶試劑盒中，所述乳酸脫氫酶試劑盒包括第一試劑和第二試劑，所述第一試劑的組分為：磷 酸氫二鈉25. 069 g/L、磷酸二氫鉀2. 435 g/L、a -酮丁酸鈉鹽0. 496 g/L，所述第二試劑的 組分為：Tris 8.479 g/L、NADH 0.0851 g/L、鹽酸 5.6 mL/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合穩(wěn)定劑，其特征在于，所述復(fù)合穩(wěn)定劑的使用量在乳酸 脫氫酶試劑盒中的體積分?jǐn)?shù)為5%。
【文檔編號(hào)】C12Q1/32GK104388531SQ201410554433
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年10月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月20日
【發(fā)明者】周立霞, 楊靈勇, 王燕華, 李勛波 申請(qǐng)人:蘇州康銘誠(chéng)業(yè)醫(yī)用科技有限公司