乳酸測定試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種乳酸測定試劑盒，包括依次使用的R1和R2兩種獨立液態(tài)試劑，R1試劑各成分濃度為：PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷（Tris）緩沖液5.95～6.6g/L，過氧化氫酶120～150mg/L，乳酸氧化酶90～110mg/L，其余為純化水；R2試劑各成分含量為：4-氨基安替比林0.075～0.085g/L，3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸（TBHBA）0.09～0.11g/L，其余為純化水。本發(fā)明能夠使用全自動生化分析儀直接測定乳酸容量，適合臨床實驗室對血液或脊髓液中乳酸含量測定的需要。
【專利說明】乳酸測定試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學檢測試劑【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其與一種用于體外血液或脊髓液中乳酸含量測定的試劑盒有關(guān)。
【背景技術(shù)】
[0002]血液中的乳酸含量是一個重要的生理和病理指標，乳酸水平是血液循環(huán)健全與否的常規(guī)指標，也是循環(huán)惡化程度的最好的生物學指標，血液中乳酸濃度與骨骼肌、腦、皮膚、骨髓質(zhì)和紅細胞等組織產(chǎn)生乳酸的速率以及肝臟對乳酸的代謝速度有關(guān)，如果乳酸濃度超過5nmol/L以及PH值小于7.25時就會有明顯的乳酸中毒表現(xiàn)。乳酸中毒主要在下列情況下發(fā)生，常見的是與組織氧合作用降低有關(guān)，如低血容量、休克和左心室衰竭，另外的是與糖尿病、腫瘤、肝病等疾病或先天代謝紊亂有關(guān)，測定乳酸含量對于休克等疾病的早期診斷和嚴重程度的估計具有重要意義，所以目前臨床實驗室普遍開展對乳酸含量的測定工作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的就是要適應臨床實驗室對血液或脊髓液中乳酸含量測定的需要，提供一種用于乳酸測定的試劑盒。
[0004]為此，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:乳酸測定試劑盒，包括依次使用的Rl和R2兩種獨立液態(tài)試劑，其特征是:所述的Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液5.95~6.6g/L,過氧化氫酶120~150mg/L,乳酸氧化酶90~110mg/L,其余為純化水；所述的R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.075~0.085g/L，3-羥基-2、
4、6_三溴苯甲酸(TBHBA) 0.09~0.11 g/L，其余為純化水。
[0005]優(yōu)選的，所述的Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液6.05g/L,過氧化氫酶135mg/L,乳酸氧化酶100mg/L,其余為純化水；所述的R2試劑各成分含量為:4-氨基安替比林0.0818/1，3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(了8^4)0.101 g/L,其余為純化水。
[0006]本發(fā)明是一種液體雙試劑，適用于乳酸氧化酶法測定乳酸含量，測定時可直接使用，在作為測定標本的血漿加入EDTA抗凝劑，選用兩根試管分別作為校準管和樣品管，校準管中加入3微升已知乳酸含量的標準液，樣品管中加入3微升待測標本，然后在校準管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，使用全自動生化分析儀在主波長500nm時測定各管的吸光度A1，然后再在校準管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的R2試劑60微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，使用全自動生化分析儀在主波長500nm時測定各管的吸光度A2，可以計算出使用Rl和R2測得的吸光度差值Λ A=A2-A1,乳酸含量就可以通過下述公式計算而得:乳酸(LAC)濃度=(Λ A測定標本/ Λ A標準液)X標準液LAC濃度(nmol/L)。
[0007]使用本發(fā)明可以達到以下有益效果:能夠使用全自動生化分析儀直接測定乳酸容量，適合臨床實驗室對血液或脊髓液中乳酸含量測定的需要。
【具體實施方式】
[0008]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行進行詳細描述。
[0009]實施例一:
本發(fā)明試劑盒包括依次使用的Rl和R2兩種獨立液態(tài)試劑，Rl和R2試劑按下述成分和含量配置:Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液
5.95g/L，過氧化氫酶150mg/L，乳酸氧化酶110mg/L，其余為純化水；R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.085g/L，3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(TBHBA)0.11 g/L，其余為純化水。
[0010]使用日立7060全自動生化分析儀，測定方法采用兩點終點法，測定條件設定為:主波長500nm，輔助波長700 nm反應方向正向上升；在作為測定標本的血漿加入EDTA抗凝齊U，選用兩根試管分別作為校準管和樣品管，校準管中加入3微升已知乳酸含量的標準液，樣品管中加入3微升待測標本，然后在校準管和樣品管中各加入Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A1，然后再在校準管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的R2試劑60微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A2,生化分析儀計算出使用Rl和R2測得的吸光度差值Λ A=A2-A1,并通過下述公式自動計算出乳酸含量:乳酸(LAC)濃度=(Λ A測定標本/ Λ A標準液)X標準液LAC濃度(nmol/L)。重復測10次取平均值，實測結(jié)果如下:平均值為0.86 nmol/L，標準差0.0301 ;根據(jù)精密度公式:精密度=標準差/平均值X 100%，精密度為3.5%，小于5%，符合要求。
[0011]實施例二:
本發(fā)明試劑盒包括依次使用的Rl和R2兩種獨立液態(tài)試劑，Rl和R2試劑按下述成分和含量配置:Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液6.6g/L,過氧化氫酶120mg/L，乳酸氧化酶90mg/L，其余為純化水；R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.075g/L, 3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(TBHBA) 0.09 g/L，其余為純化水。
[0012]使用日立7060全自動生化分析儀，測定方法采用兩點終點法，測定條件設定為:主波長500nm，輔助波長700 nm反應方向正向上升；在作為測定標本的血漿加入EDTA抗凝齊U，選用兩根試管分別作為校準管和樣品管，校準管中加入3微升已知乳酸含量的標準液，樣品管中加入3微升待測標本，然后在校準管和樣品管中各加入Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A1，然后再在校準管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的R2試劑60微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A2,生化分析儀計算出使用Rl和R2測得的吸光度差值Λ A=A2-A1,并通過下述公式自動計算出乳酸含量:乳酸(LAC)濃度=(Λ A測定標本/ Λ A標準液)X標準液LAC濃度(nmol/L)。重復測10次取平均值，實測結(jié)果如下:平均值為0.79 nmol/L，標準差0.0311 ;根據(jù)精密度公式:精密度=標準差/平均值X 100%，精密度為3.9%，小于5%，符合要求。
[0013]實施例三:
本發(fā)明試劑盒包括依次使用的Rl和R2兩種獨立液態(tài)試劑，Rl和R2試劑按下述成分和含量配置:Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液
6.05g/L，過氧化氫酶135mg/L，乳酸氧化酶100mg/L，其余為純化水；R2試劑各成分含量為:4-氨基安替比林0.0818/1，3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(了8^4)0.101 g/L，其余為純化水。
[0014]使用日立7060全自動生化分析儀，測定方法采用兩點終點法，測定條件設定為:主波長500nm，輔助波長700 nm反應方向正向上升；在作為測定標本的血漿加入EDTA抗凝劑，選用兩根試管分別作為校準管和樣品管，校準管中加入3微升已知乳酸含量的標準液，樣品管中加入3微升待測標本，然后在校準管和樣品管中各加入Rl試劑240微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A1，然后再在校準管和樣品管中各加入本發(fā)明所述的R2試劑60微升混勻，在溫度37°C下孵育5分鐘，測定各管的吸光度A2,生化分析儀計算出使用Rl和R2測得的吸光度差值Λ A=A2-A1,并通過下述公式自動計算出乳酸含量:乳酸(LAC)濃度=(Λ A測定標本/ Λ A標準液)X標準液LAC濃度(nmol/L)。重復測10次取平均值，實測結(jié)果如下:平均值為0.83 nmol/L，標準差0.0204 ;根據(jù)精密度公式:精密度=標準差/平均值X 100 %`，精密度為2.5 %，小于5 %，符合要求。
【權(quán)利要求】
1.乳酸測定試劑盒，包括依次使用的Rl和R2兩種獨立液態(tài)試劑，其特征在于:所述的Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液5.95?6.6g/L，過氧化氫酶120?150mg/L，乳酸氧化酶90?110mg/L，其余為純化水；所述的R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.075?0.085g/L，3-羥基_2、4、6_三溴苯甲酸(TBHBA)0.09?0.11 g/L，其余為純化水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳酸測定試劑盒，其特征在于:所述的Rl試劑各成分含量為:PH值為7.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液6.05g/L，過氧化氫酶135mg/L，乳酸氧化酶100mg/L，其余為純化水；所述的R2試劑各成分含量為:4_氨基安替比林0.081g/L,3-羥基-2、4、6-三溴苯甲酸(TBHBA) 0.101 g/L，其余為純化水。
【文檔編號】G01N21/77GK103529020SQ201310454102
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月29日
【發(fā)明者】石麗萍, 夏春偉 申請人:紹興圣康生物科技有限公司