一種廣譜抑菌酵母菌的制作方法
【專利摘要】一種廣譜抑菌酵母菌。它涉及一種酵母菌。其為德爾布有孢圓酵母(Torulaspora?delbrueckii)M9，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO：M?2013278。德爾布有孢圓酵母(Torulaspora?delbrueckii)M9對志賀氏菌、白色念珠球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌均具有穩(wěn)定、優(yōu)異的抑菌效果。本發(fā)明應用于微生物領域。
【專利說明】一種廣譜抑菌酵母菌

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種酵母菌。

【背景技術】
[0002] 酵母是一種單細胞微生物，屬于高等微生物的真菌類，在有氧和無氧環(huán)境下都能 生存，屬于兼性厭氧菌。酵母是人類直接食用量最大的一種微生物，目前用于發(fā)酵食品。
[0003] 在食品中果蔬類難以保鮮，貨架期短，而且表面容易感染致病菌。為了保持果蔬更 新鮮，目前主要采用化學合成的防腐劑進行保鮮。雖然化學合成防腐劑可以在一定程度上 延長果蔬的貨架期，抑菌效果顯著；但是清洗不徹底易被人體食入、吸收，進入體內的這些 化學防腐劑會損傷人體的臟器，影響人體健康。而目前對人體無毒無害的天然防腐劑種類 稀少，且價格昂貴，不適用于大眾消費品。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明是為了解決化學合成防腐劑對人體健康有損害作用，而提供一種廣譜抑菌 酵母菌。
[0005] 本發(fā)明廣譜抑菌酵母菌為德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9,保 藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO :M 2013278。
[0006] 德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9菌體形態(tài)為橢圓形，單邊芽殖， 長3. 75?4 μ m，寬2. 75?3 μ m ;菌落形態(tài)為圓形、表面光滑、邊緣整齊，菌落為白色、不透 明，濕潤。
[0007] 德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9能夠利用D-葡萄糖、甘油、 2_酮基-葡萄糖酸鈣、D-半乳糖、D-蔗糖、D-棉子糖；不能利用L-阿拉伯糖、木糖、側金盞 花醇、木糖醇、D-山梨醇、肌醇、甲基-D-葡萄糖甙、N-乙酰-葡萄糖胺、D-纖維二糖、D-乳 糖（牛源）、D-麥芽糖、D-海藻糖、D-松三糖。
[0008] 德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9對志賀氏菌、白色念珠球菌、大 腸桿菌、沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌均具有穩(wěn)定、優(yōu)異的抑菌效果。
[0009] 酵母菌生存營養(yǎng)需求簡單，繁殖速度快，不會產生威脅人類和環(huán)境安全的有害物 質，而且被人或動物食用后可以促進消化，因此是天然、安全的食品防腐劑和抑菌劑。
[0010] 德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9能夠在較干燥的果蔬表面生 存，并與病菌競爭營養(yǎng)與空間，對其它抗菌劑影響?。欢宜a生抑菌物質多是水果、蔬菜 上的正常菌落成分，對人體安全。
[0011] 德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9中的抑菌物質可做為天然防腐 劑添加到果汁、牛奶等飲品中，利用其抑菌形成延長產品的保質期
[0012] 德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9中的可以制成發(fā)酵劑，其發(fā)酵 產品可以抑制腸道常見致病菌。
[0013] 利用生物發(fā)酵技術可以大規(guī)模、大批量的發(fā)酵培養(yǎng)具有廣譜抑菌功能的本發(fā)明德 爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9,具有價格低廉，抑菌效果顯著，適于高、 中、低端各類食品等優(yōu)點。
[0014] 廣譜抑菌酵母菌德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9為德爾布有 抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)，屬于球抱酵母屬（Torulaspora);保藏于中國典型 培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC)，保藏地址是武漢大學，保藏日期為2013年6月23日，保藏號為 CCTCC NO ：M2013278〇

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1是實施例1中對志賀氏菌的抑菌效果圖，圖1中A中加入的是德爾布有孢圓 酵母（Torulaspora delbrueckii)M9, B 中加入的是效價為 5IU 的 Nisin。
[0016] 圖2是實施例1中對大腸桿菌的抑菌效果圖，圖2中A中加入的是德爾布有孢圓 酵母（Torulaspora delbrueckii)M9, B 中加入的是效價為 5IU 的 Nisin。
[0017] 圖3是實施例1中對白色念珠菌的抑菌效果圖，圖3中A中加入的是德爾布有孢 圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9, B 中加入的是效價為 5IU 的 Nisin。
[0018] 圖4是實施例1中對沙門氏菌的抑菌效果圖，圖4中A中加入的是德爾布有孢圓 酵母（Torulaspora delbrueckii)M9, B 中加入的是效價為 5IU 的 Nisin。
[0019] 圖5是實施例1中對枯草芽孢桿菌的抑菌效果圖，圖5中A中加入的是德爾布有 抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9, B中加入的是效價為5IU的Nisin。
[0020] 圖6是實施例1中對金黃色葡萄球菌的抑菌效果圖，圖6中A中加入的是德爾布 有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9, B中加入的是效價為5IU的Nisin。
[0021 ] 圖7是實施例2①中65 *€水浴處理后德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9對大腸桿菌的抑菌效果圖，圖7中A中德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/16,圖7中B中德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/8,圖7中C中德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/4。
[0022] 圖8是實施例2①中80 *€水浴處理后德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9對大腸桿菌的抑菌效果圖，圖8中A中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/16,圖8中B中德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/8,圖8中C中德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/4。
[0023] 圖9是實施例2①中90 *€水浴處理后德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9對大腸桿菌的抑菌效果圖，圖9中A中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/16,圖9中B中德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/8,圖9中C中德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/4。
[0024] 圖10是實施例2①中100 水浴處理后德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9對大腸桿菌的抑菌效果圖，圖10中A中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/16，圖10中B中德爾布有孢圓酵母 (Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/8,圖10中C中德爾布有孢圓酵 母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液濃縮至原體積的1/4。
[0025] 圖11是實施例2②中不同發(fā)酵pH條件下德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9對大腸桿菌的抑菌效果圖，圖11中A中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液pH值調節(jié)為3，圖11中B中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液pH值調節(jié)為5，圖11中C中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液pH值調節(jié)為7，圖11中D中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液pH值調節(jié)為9，圖11中E中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9發(fā)酵液pH值調節(jié)為5. 5。
[0026] 圖12是實施例2③中投加不同酶條件下德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9對大腸桿菌的抑菌效果圖，圖12中A中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9加入木瓜蛋白酶，圖12中B中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9未加入酶（對照），圖12中C中德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9加入膜蛋白酶，圖12中D中德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9加入胃蛋白酶。
[0027] 圖13為德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9和相近菌株進行同源 性比對構建的系統(tǒng)發(fā)育樹圖。

【具體實施方式】
[0028] 本發(fā)明技術方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的 任意組合。

【具體實施方式】 [0029] 一：本實施方式廣譜抑菌酵母菌為德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC Ν0:Μ 2013278。
[0030] 德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9米集自西藏，從我國傳統(tǒng)發(fā)酵 乳制品西藏靈菇中分離獲得。將西藏靈菇置于10%的脫脂乳中傳代培養(yǎng)，活化后將其發(fā) 酵液涂于含氯霉素的YEro固體培養(yǎng)基中劃線分離得到德爾布有孢圓酵母（TOTulaspora delbrueckii)M9〇
[0031] 德爾布有抱圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9 的 26s rDNA D1/D2 區(qū)喊基長 度為566bp，堿基序列如SEQ ID N0:2所示，18S ri)NA長度為1657bp，堿基序列如SEQ ID N0:1所示；經26S ri)NA D1/D2區(qū)序列和18S ri)NA序列比對，并通過微生物形態(tài)和生理 生化指標鑒定，確認廣譜抑菌酵母菌M9為球孢酵母屬（Torulaspora)德爾布有孢圓酵母 (Torulaspora delbrueckii)，與 Torulaspora delbrueckii CBS 1146 同源性最為接近。
[0032] Torulaspora delbrueckii CBS 1146 的生化試驗結果如表 1 所不，Torulaspora delbrueckii CBS 1146菌落為黃色或紫色。
[0033] 表 1
[0034]

【權利要求】
1. 一種廣譜抑菌酵母菌，其為德爾布有孢圓酵母（Torulaspora delbrueckii)M9,保藏 于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO :M 2013278。
【文檔編號】C12N1/16GK104152362SQ201410449301
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年9月5日 優(yōu)先權日:2014年4月1日
【發(fā)明者】孟利, 劉峰, 韓德權, 史玲玲, 李鵬飛 申請人:黑龍江大學