采用黃芪提取液提高羊肚菌深層發(fā)酵菌絲體多糖含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用采用黃芪提取液提高羊肚菌深層發(fā)酵菌絲體多糖含量的方法。本發(fā)明通過(guò)在羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)液中添加黃芪提取液，以促進(jìn)羊肚菌菌絲體的生長(zhǎng)，提高羊肚菌多糖含量。黃芪中的活性成分（生物堿、皂苷、黃酮等）可促進(jìn)或抑制藥用真菌菌絲體的生長(zhǎng)及代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】采用黃芪提取液提高羊肚菌深層發(fā)酵菌絲體多糖含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及采用黃芪提取液提高羊肚菌深層發(fā)酵菌絲體多糖含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羊肚菌(Morchella sp.)是一種珍貴稀有的野生食藥用菌,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，羊肚菌生物活性有效組分食(藥)用真菌多糖的含量很高，其子實(shí)體多糖入藥有消積殺蟲的作用，能增強(qiáng)人體免疫功能，具有抗病毒、抗腫瘤作用，能降低膽固醇含量，防止動(dòng)脈硬化等。
[0003]雖有報(bào)道稱已實(shí)現(xiàn)羊肚菌的人工栽培，但迄今未見商品化人工栽培羊肚菌的報(bào)道，究其原因主要是羊肚菌子實(shí)體形成階段對(duì)空氣十分敏感。利用野生子實(shí)體來(lái)提取羊肚菌多糖成本高，原料來(lái)源有限。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種采用黃芪提取液提高羊肚菌深層發(fā)酵菌絲體多糖含量的方法。
[0005]本發(fā)明采用黃芪提取液提高羊肚菌深層發(fā)酵菌絲體多糖含量的方法包括下列步驟:
A、將黃芪提取液添加入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中；
B、接入羊肚菌液體菌種至含黃芪提取液的羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行羊肚菌深層發(fā)酵，其中羊肚菌液體菌種由羊肚菌一級(jí)種接入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中制得。
[0006]優(yōu)選方案，所述步驟A和步驟B所述的羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基按重量百分比計(jì)的組成為，玉米粉1%~5%、黃豆粉0.1%~0.5%、硫酸鎂0.05%~0.1%、磷酸二氫鉀0.1%~
0.2%、磷酸氫二鉀0.1%~0.2%，其余為水。
[0007]優(yōu)選方案,所述步驟A黃苗提取液的濃度為5mg/ml~15mg/ml。
[0008]優(yōu)選方案，所述步驟A中的黃芪提取液的制備過(guò)程為，將黃芪浸泡30min，然后用文火熬煮30min，用四層紗布過(guò)濾，再將藥渣加水熬煮一遍過(guò)濾，然后將兩遍濾液混合在一起，制得黃芪提取液。
[0009]優(yōu)選方案，所述步驟B羊肚菌深層發(fā)酵過(guò)程為，在無(wú)菌條件下將羊肚菌液體菌種按10%的體積比接種到添加了黃芪提取液培養(yǎng)基中，在溫度25°C，pH值為6，轉(zhuǎn)速160r/min的恒溫振蕩器內(nèi)振蕩培養(yǎng)，5—8d后測(cè)定發(fā)酵液中羊肚菌菌絲體干重和菌絲體多糖含量。羊肚菌多糖的含量達(dá)到峰值。
[0010]優(yōu)選方案，羊肚菌液體菌種的制備過(guò)程為，
將羊肚菌一級(jí)種無(wú)菌操作接入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種塊的大小、薄厚以菌種塊浮在液面不沉下去為準(zhǔn)，先置于恒溫培養(yǎng)箱，25°C靜置48-72小時(shí)，待菌絲萌發(fā)后，置于搖床上，以160r/min的轉(zhuǎn)速、在25°C的溫度下?lián)u瓶培養(yǎng)7d，制得羊肚菌液體菌種。[0011]羊肚菌(Morchella sp.) 一級(jí)種購(gòu)買于四川省綿陽(yáng)食用菌研究所。
[0012]中藥黃苗dtragaJiAs membranaceus -(Fisch.}伽/7職)，別名綿苗，為豆科草本植物蒙古黃芪、膜莢黃芪的根。黃芪含皂昔、黃酮、氨基酸、亞油酸、生物堿、多種礦物質(zhì)及維生素等化學(xué)成分。黃芪中的活性成分(生物堿、皂苷、黃酮等)可促進(jìn)或抑制藥用真菌菌絲體的生長(zhǎng)及代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)，在羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)液中添加黃芪提取液，可以促進(jìn)羊肚菌菌絲體的生長(zhǎng)，提高羊肚菌多糖含量。
[0013]本發(fā)明在甘肅名貴食(藥)用真菌羊肚菌的深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，添加適量濃度的甘肅特色中藥黃芪提取液，利用發(fā)酵過(guò)程中的相互增效作用來(lái)提高羊肚菌多糖得率，為羊肚菌多糖的開發(fā)利用及生產(chǎn)提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐，減少由于人們對(duì)羊肚菌野生資源的過(guò)渡采摘而造成的生態(tài)破壞?！揪唧w實(shí)施方式】
[0014]下面的實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本項(xiàng)技術(shù)，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0015]實(shí)施例1:
1.羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基組成:玉米粉(煮汁)1%，黃豆粉(煮汁)0.5%，硫酸鎂0.05%，磷酸二氫鉀0.1%，磷酸氫二鉀0.1%，以上組分均按重量百分含量計(jì)算，其余為水。
[0016]2.黃芪提取液的準(zhǔn)備，稱取黃芪250g，在500ml水中浸泡30min，然后用文火熬煮30min,用四層紗布過(guò)濾，再將藥渣加水熬煮一遍過(guò)濾，然后將兩遍濾液混合在一起，制得黃芪提取液。
[0017]3.黃芪提取液的添加:將10mg/ml的黃芪提取液加入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中共計(jì)300ml，裝入500ml的三角瓶中，棉花塞封口，0.12MPa滅菌30min，冷卻后待用。
[0018]4.羊肚菌液體菌種準(zhǔn)備:將羊肚菌一級(jí)種無(wú)菌操作接入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種塊的大小、薄厚以菌種塊浮在液面不沉下去為準(zhǔn)，先置于恒溫培養(yǎng)箱，25°C靜置60小時(shí)，待菌絲萌發(fā)后，置于搖床上，以160r/min、25°C搖瓶培養(yǎng)7d，制得羊肚菌液體菌種。
[0019]5.羊肚菌深層發(fā)酵:在無(wú)菌條件下抽取30ml制備好的羊肚菌液體菌種，接種到添加了黃芪提取液培養(yǎng)基中，在溫度25V, pH值為6，轉(zhuǎn)速160r/min的恒溫振蕩器內(nèi)振蕩培養(yǎng)5d，測(cè)定發(fā)酵液中羊肚菌菌絲體干重和菌絲體多糖含量。
[0020]對(duì)照例:空白對(duì)照組為不加黃芪提取液的深層發(fā)酵培養(yǎng)基300ml，裝入500ml的三角瓶中，棉花塞封口，0.12MPa滅菌30min，冷卻后待用。接入羊肚菌液體菌種進(jìn)行羊肚菌深層發(fā)酵，在無(wú)菌條件下抽取30ml制備好的羊肚菌液體菌種，接種到空白對(duì)照組中，在溫度25V, pH值為6，轉(zhuǎn)速160r/min的恒溫振蕩器內(nèi)振蕩培養(yǎng)5d，測(cè)定發(fā)酵液中羊肚菌菌絲體
干重和菌絲體多糖含量。
[0021]實(shí)施例1與對(duì)照組相比，添加黃芪提取液的發(fā)酵液中羊肚菌菌絲體的干重提高了25.6%，菌絲體多糖的含量提高了 22.7 %。
[0022]實(shí)施例2:與實(shí)施例1不同在于羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基組分的含量不同:玉米粉(煮汁)3%，黃豆粉(煮汁)0.3%,硫酸鎂0.1%，磷酸二氫鉀0.15%，磷酸氫二鉀0.20%,以上組分均按重量百分含量計(jì)算，其余成分為水。
[0023]與對(duì)照組相比，添加黃芪提取液的發(fā)酵液中羊肚菌菌絲體的干重提高了 18.2%，菌絲體多糖的含量提高了 8.5%。
[0024]實(shí)施例3:與實(shí)施例1不同在于羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基組分的含量不同:玉米粉(煮汁)5%,黃豆粉(煮汁)0.1%,硫酸鎂0.1%，磷酸二氫鉀0.2%，磷酸氫二鉀0.15%，以上組分均按重量百分含量計(jì)算，其余成分為水。
[0025] 與對(duì)照組相比，添加黃芪提取液的發(fā)酵液中羊肚菌菌絲體的干重提高了 16.4%，菌絲體多糖的含量提高了 6.1%。
[0026]實(shí)施例4:與實(shí)施例1不同在于將15mg/ml的黃芪提取液加入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中。羊肚菌液體菌種制備時(shí)間為48小時(shí)，羊肚菌液體菌種進(jìn)行羊肚菌深層發(fā)酵在恒溫振蕩器內(nèi)振蕩培養(yǎng)8d。與對(duì)照組相比，添加黃芪提取液的發(fā)酵液中羊肚菌菌絲體的干重提高了 9.1%，菌絲體多糖的含量提高了 4.9%。
[0027]實(shí)施例5:與實(shí)施例1不同在于將5mg/ml的黃芪提取液加入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中。羊肚菌液體菌種制備時(shí)間為72小時(shí)，羊肚菌液體菌種進(jìn)行羊肚菌深層發(fā)酵在恒溫振蕩器內(nèi)振蕩培養(yǎng)7d。與對(duì)照組相比，添加黃芪提取液的發(fā)酵液中羊肚菌菌絲體的干重提高了 10.6%，菌絲體多糖的含量提高了 7.3%。
【權(quán)利要求】
1.采用黃芪提取液提高羊肚菌深層發(fā)酵菌絲體多糖含量的方法，它包括下列步驟: A、將黃芪提取液添加入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中； B、接入羊肚菌液體菌種至含黃芪提取液的羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行羊肚菌深層發(fā)酵，其中羊肚菌液體菌種由羊肚菌一級(jí)種接入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中制得。
2.由權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟A和步驟B所述的羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基按重量百分比計(jì) 的組成為，玉米粉1%~5%、黃豆粉0.1%~0.5%、硫酸鎂0.05%~0.1%、磷酸二氫鉀0.1%~0.2%、磷酸氫二鉀0.1%~0.2%，其余為水。
3.由權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述步驟A黃芪提取液的濃度為5mg/ml ~15mg/ml。
4.由權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:所述步驟A中的黃芪提取液的制備過(guò)程為，將黃芪浸泡30min，然后用文火熬煮30min，用四層紗布過(guò)濾，再將藥渣加水熬煮一遍過(guò)濾，然后將兩遍濾液混合在一起，制得黃芪提取液。
5.由權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述步驟B羊肚菌深層發(fā)酵過(guò)程為，在無(wú)菌條件下將羊肚菌液體菌種按10%的體積比接種到添加了黃芪提取液培養(yǎng)基中，在溫度25°C，pH值為6，轉(zhuǎn)速160r/min的恒溫振蕩器內(nèi)振蕩培養(yǎng)，5 — 8d后測(cè)定發(fā)酵液中羊肚菌菌絲體干重和菌絲體多糖含量。
6.由權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于:羊肚菌液體菌種的制備過(guò)程為，將羊肚菌一級(jí)種無(wú)菌操作接入羊肚菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，先置于恒溫培養(yǎng)箱，25°C靜置48-72小時(shí)，待菌絲萌發(fā)后，置于搖床上，以160r/min的轉(zhuǎn)速、在25°C的溫度下?lián)u瓶培養(yǎng)7d，制得羊肚菌液體菌種。
【文檔編號(hào)】C12R1/645GK103952451SQ201410176638
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年4月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月29日
【發(fā)明者】韓融冰, 路等學(xué), 趙玉卉, 王龍, 秦鵬 申請(qǐng)人:甘肅省科學(xué)院生物研究所