一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法
【專利摘要】本發(fā)明主要涉及一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,包括以下步驟:1)牡丹籽原料除雜、清洗、干燥、脫殼,將牡丹籽皮干燥、粉碎,置于超聲提取器內(nèi),加入乙醇進(jìn)行超聲提取,過(guò)濾,重復(fù)向?yàn)V渣中加入乙醇、超聲提取和過(guò)濾操作,收集的所有濾液,濃縮得提取浸膏,2)將提取浸膏用乙醇溶解,除去不溶物后加入到吸附劑中,吸附12-24h后得到吸附混合料,3)將吸附混合料裝入分離柱內(nèi),用不同質(zhì)量濃度的乙醇溶液洗脫,收集芪類化合物含量大于85%的餾分段;4)將收集的芪類化合物的餾分段減壓濃縮至無(wú)溶劑,即得總芪類化合物。該方法成本低,不使用有毒有機(jī)溶劑,且提取率高,制備得到的芪類化合物具有較好的抑制腫瘤細(xì)胞,抗氧化等活性。
【專利說(shuō)明】一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明主要涉及一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]芪類化合物(Stilbeniods)是指具有1,2_ 二苯乙烯骨架的單體及其聚合物的總稱。低聚芪類屬于酚酸類化合物。這類化合物具有廣泛的生物活性,如抗細(xì)菌和抗真菌活性,抗炎活性,抗氧化活性,抗腫瘤活性,抗艾滋病活性及保肝活性等?!纠钚∶茫钅?,黃開勝,林茂.白藜蘆醇低聚體類似物的光譜特征、生源與生物活性,藥學(xué)學(xué)報(bào),2002,37(1):69-74 ;陳莉,陳堅(jiān)波.芪類化合物的藥理研究綜述,廣東藥學(xué),2005,15(3):84-86】
牡丹籽油含有多種不飽和脂肪酸,尤其是含有罕見的奇數(shù)脂肪酸,是一種具有重要開發(fā)價(jià)值的食用油脂來(lái)源。目前,我國(guó)油用牡丹籽的種植量在逐漸增多,油用牡丹籽的產(chǎn)量也逐年增加。目前,牡丹籽油的制備工藝是先將牡丹籽干燥脫殼。按照目前的產(chǎn)量,油用牡丹籽產(chǎn)量為3萬(wàn)噸,經(jīng)過(guò)脫殼會(huì)產(chǎn)生大約3000-5000噸左右的牡丹籽皮,這些牡丹籽皮的開發(fā)利用將會(huì)是一個(gè)非常重要且任務(wù)艱巨的研究課題。
[0003]本課題組前期研究表明,牡丹籽餅中含有較多的低聚芪類化合物,進(jìn)一步活性測(cè)試表明這些芪類化合物具有較好的活性。因此,從牡丹籽餅中分離芪類化合物,并研究其活性具有非常重要的意義。近年來(lái),已有課題組對(duì)藥用植物牡丹籽中芪類化合物進(jìn)行了研究:文獻(xiàn)【何春年.芍藥屬 藥用植物親緣學(xué)研究,中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)[D],2010】報(bào)道了9中芪類化合物的分離過(guò)程,其所得到的芪類化合物收率非常低,從4公斤原料中所得到的單體芪類化合物最多100多毫克,難于產(chǎn)業(yè)化。另外,其所用的分離材料為牡丹種子,研究過(guò)程中還存在著有毒有機(jī)溶劑的應(yīng)用問題。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足,提供一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,該方法簡(jiǎn)單,成本低,不使用有毒有機(jī)溶劑,安全環(huán)保,無(wú)污染,且提取率高,可以規(guī)?;a(chǎn)。
[0005]本發(fā)明實(shí)現(xiàn)上述目的采用的技術(shù)方案是:一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,包括以下步驟:
O取牡丹籽原料,除去雜質(zhì),并用清水清洗2-3遍,然后置于恒溫干燥箱中,在60-80°C條件下干燥3-9h,烘干后加入脫殼機(jī)中去皮,然后將得到的牡丹籽皮干燥至含水量不超過(guò)10%,粉碎,置于超聲提取器內(nèi),然后加入其重量10-20倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60-80%,在溫度為30-40 °C條件下超聲提取30-40min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;向得到的濾渣中加入其重量10-20倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60-80%,在溫度為30-40 °C條件下超聲提取30-40min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;重復(fù)上述向?yàn)V渣中加入乙醇、超聲提取和過(guò)濾操作1-2次,將收集的所有濾液混合,蒸發(fā)濃縮,得到提取浸膏,備用; 2)將步驟I)得到的提取浸膏用其重量6-10倍的乙醇溶液充分溶解,乙醇的質(zhì)量濃度為20-40%,除去不溶物,得到樣品液,備用;將樣品液加入到其重量100-200倍的吸附劑中,吸附12-24 h后得到吸附混合料,備用;
3)將步驟2)得到的吸附混合料裝入分離柱內(nèi),依次用以水為溶劑的不同質(zhì)量濃度的乙醇溶液進(jìn)行洗脫,其中各次洗脫用乙醇溶液的質(zhì)量濃度依次為0%、20%、30%、40%、50%、70%、80%以及95%,洗脫過(guò)程中收集芪類化合物含量大于85%的餾分段,備用;
4)將步驟3)收集的芪類化合物的餾分段,在小于60°C條件下減壓濃縮至無(wú)溶劑,即得總芪類化合物。
[0006]所述的牡丹籽原料為鳳丹牡丹籽或紫斑牡丹籽,也可以是芍藥科其它物種的籽皮。
所述的步驟3)中的吸附劑為聚酰胺樹脂、DlOl大孔吸附樹脂或AB-8大孔吸附樹脂中的一種。
[0007]所述的從牡丹籽中提取總芪類化合物的過(guò)程中應(yīng)用到的乙醇均為食用酒精。
[0008]本發(fā)明的有益效果:
其一、本發(fā)明的采用超聲提取,提取溫度低,具有提取效率高,有效成分不容易發(fā)生變化的特點(diǎn);提取后得到的組分采用吸附劑吸附,然后采用不同濃度的乙醇洗脫,整個(gè)過(guò)程中用到的有機(jī)溶劑僅僅為乙醇,所以整個(gè)制備方法簡(jiǎn)單,生產(chǎn)成本低,符合中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化要求,該方法可以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn),其純化工藝具有較強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值。
[0009]其二、本發(fā)明的整個(gè)提取過(guò)程沒有使用有毒有機(jī)溶劑,所用到的乙醇可以回收再利用,安全、環(huán)保,既可以節(jié)約能源,又幾乎不產(chǎn)生對(duì)環(huán)境有害的廢棄物。
[0010]其三、本發(fā)明充分利用了牡丹籽榨油過(guò)程中的副產(chǎn)物一牡丹籽皮,降低了廢棄的排放,增加了牡丹深加工產(chǎn)品的附加值。
[0011]其四、通過(guò)本發(fā)明提供的方法提取的芪類化合物含量較高,大于90%,可以滿足進(jìn)一步開發(fā)的要求,如開發(fā)成高品質(zhì)的食品添加劑、藥物等。
[0012]其五、本發(fā)明制備得到的牡丹總芪類化合物,經(jīng)過(guò)藥理學(xué)試驗(yàn)證明,具有抗氧化和抗腫瘤活性,可以單獨(dú)或與適宜的賦形劑等結(jié)合,作為食品添加劑用于食品中,或用于制備抗腫瘤的藥物。因此具有重要的研究開發(fā)價(jià)值。
[0013]【具體實(shí)施方式】:
一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,包括以下步驟:
O取牡丹籽原料,除去雜質(zhì),并用清水清洗2-3遍,然后置于恒溫干燥箱中,在60-80°C條件下干燥3-9h,烘干后加入脫殼機(jī)中去皮,然后將得到的牡丹籽皮干燥至含水量不超過(guò)10%,粉碎,置于超聲提取器內(nèi),然后加入其重量10-20倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60-80%,在溫度為30-40 °C條件下超聲提取30-40min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;向得到的濾渣中加入其重量10-20倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60-80%,在溫度為30-40 °C條件下超聲提取30-40min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;重復(fù)上述向?yàn)V渣中加入乙醇、超聲提取和過(guò)濾操作1-2次,將收集的所有濾液混合,蒸發(fā)濃縮,得到提取浸膏,備用;
2)將步驟I)得到的提取浸膏用其重量6-10倍的乙醇溶液充分溶解,乙醇的質(zhì)量濃度為20-40%,除去不溶物,得到樣品液,備用;將樣品液加入到其重量100-200倍的吸附劑中,吸附12-24h后得到吸附混合料,備用;
3)將步驟2)得到的吸附混合料裝入分離柱內(nèi),依次用以水為溶劑的不同質(zhì)量濃度的乙醇溶液進(jìn)行洗脫,其中各次洗脫用乙醇溶液的質(zhì)量濃度依次為0%、20%、30%、40%、50%、70%、80%以及95%,洗脫過(guò)程中收集芪類化合物含量大于85%的餾分段,備用;
4)將步驟3)收集的芪類化合物的餾分段,在小于60°C條件下減壓濃縮至無(wú)溶劑,即得總芪類化合物。
[0014]所述的牡丹籽原料為鳳丹牡丹籽或紫斑牡丹籽,也可以是芍藥科其它物種的籽皮。
所述的步驟3)中的吸附劑為聚酰胺樹脂、DlOl大孔吸附樹脂或AB-8大孔吸附樹脂中的一種。
[0015]所述的從牡丹籽中提取總芪類化合物的過(guò)程中應(yīng)用到的乙醇均為食用酒精。
[0016]總芪類化合物含量的測(cè)定方法:
參考文獻(xiàn)【倪網(wǎng)東,滿瑞林,李志明,盧紅梅.紫外分光光度法同時(shí)測(cè)定虎杖中芪類和蒽醌類化合物,化學(xué)工程師,2006,125(2):35-36,39】的方法,進(jìn)行改進(jìn)。用在研究過(guò)程中分離得到的芪類化合物牡丹醇A作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品,利用紫外-可見分光光度法,在338 nm處測(cè)試:稱取10毫克牡丹醇A,調(diào)節(jié)PH=8,采用95%乙醇配置成100 μ g/mL的儲(chǔ)備液,再取一定量的儲(chǔ)備液稀釋成5.00,4.00,3.00,2.00、1.00,0.50 μ g/mL,在338 nm處測(cè)定紫外吸收,以吸光度A和濃度C進(jìn)行線性回歸分析,得標(biāo)準(zhǔn)曲線。由測(cè)定的樣品吸光度A,按照下列公式計(jì)算出總芪類化合物的含量。
[0017]總芪類化合物(%)=(牡丹醇A質(zhì)量X提取液稀釋倍數(shù))/ (樣品粉末質(zhì)量X IO6) 以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明:
實(shí)施例1:
一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,包括以下步驟:
O取鳳丹牡丹籽原料,除去雜質(zhì),并用清水清洗2遍,然后置于恒溫干燥箱中,在60°C條件下干燥3h,烘干后加入脫殼機(jī)中去皮,然后將得到的牡丹籽皮干燥至含水量不超過(guò)10%,取出1kg粉碎,置于超聲提取器內(nèi),然后加入其重量10倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60%,在溫度為30°C條件下超聲提取30min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,收集濾液,備用;向得到的濾渣中加入其重量10倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60%,在溫度為30°C條件下超聲提取30min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;重復(fù)上述向?yàn)V渣中加入乙醇、超聲提取和過(guò)濾操作1次,收集所有濾液,蒸發(fā)濃縮,得到提取浸膏,備用;
2)將步驟I)得到的提取浸膏用其重量6倍乙醇溶液充分溶解,乙醇的質(zhì)量濃度為20%,除去不溶物,得到樣品液,備用;將樣品液加入到其重量100倍的吸附劑聚酰胺樹脂中,吸附12h后得到吸附混合料,備用;
3)將步驟2)得到的吸附混合料裝入分離柱內(nèi),依次用以水為溶劑的不同質(zhì)量濃度的乙醇溶液進(jìn)行洗脫,其中各次洗脫用乙醇溶液的質(zhì)量濃度依次為0%、20%、30%、40%、50%、70%、80%以及95%,洗脫過(guò)程中收集芪類化合物含量大于85%的餾分段,備用;
4)將步驟3)收集的芪類化合物的餾分段,在小于60°C條件下減壓濃縮至無(wú)溶劑,即得總芪類化合物。
所述的從牡丹籽中提取總芪類化合物的過(guò)程中應(yīng)用到的乙醇均為食用酒精。[0018]經(jīng)檢測(cè),本實(shí)施例提取得到的芪類化合物的總含量為93.2%。
[0019]實(shí)施例2:
一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,包括以下步驟:
O取鳳丹牡丹籽原料,除去雜質(zhì),并用清水清洗3遍,然后置于恒溫干燥箱中,在80°C條件下干燥9h,烘干后加入脫殼機(jī)中去皮,然后將得到的牡丹籽皮干燥至含水量不超過(guò)10%,取出I kg粉碎,置于超聲提取器內(nèi),然后加入其重量20倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為80%,在溫度為40°C條件下超聲提取40min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;向得到的濾渣中加入其重量20倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為80%,在溫度為40°C條件下超聲提取40min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;重復(fù)上述向?yàn)V渣中加入乙醇、超聲提取和過(guò)濾操作2次,將收集的所有濾液混合,蒸發(fā)濃縮,得到提取浸膏,備用;
2)將步驟I)得到的提取浸膏用其重量10倍乙醇溶液充分溶解,乙醇的質(zhì)量濃度為40%,除去不溶物,得到樣品液,備用;將樣品液加入到其重量200倍的吸附劑DlOl大孔吸附樹脂中,吸附24h后得到吸附混合料,備用;
3)將步驟2)得到的吸附混合料裝入分離柱內(nèi),依次用以水為溶劑的不同質(zhì)量濃度的乙醇溶液進(jìn)行洗脫,其中各次洗脫用乙醇溶液的質(zhì)量濃度依次為0%、20%、30%、40%、50%、70%、80%以及95%,洗脫過(guò)程中收集芪類化合物含量大于85%的餾分段,備用;
4)將步驟3)收集的芪類化合物的餾分段,在小于60°C條件下減壓濃縮至無(wú)溶劑,即得總芪類化合物。
所述的從牡丹籽中提取總芪類化合物的過(guò)程中應(yīng)用到的乙醇均為食用酒精。
[0020]經(jīng)檢測(cè),本實(shí)施例提取得到的芪類化合物的總含量為92.1%。
[0021]實(shí)施例3:
一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,包括以下步驟:
O取鳳丹牡丹籽原料,除去雜質(zhì),并用清水清洗2遍,然后置于恒溫干燥箱中,在70°C條件下干燥6h,烘干后加入脫殼機(jī)中去皮,然后將得到的牡丹籽皮干燥至含水量不超過(guò)10%,取出I kg粉碎,置于超聲提取器內(nèi),然后加入其重量15倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為70%,在溫度為35°C條件下超聲提取35min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;向得到的濾渣中加入其重量15倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為70%,在溫度為35°C條件下超聲提取35min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;重復(fù)上述向?yàn)V渣中加入乙醇、超聲提取和過(guò)濾操作2次,將收集的所有濾液混合,蒸發(fā)濃縮,得到提取浸膏,備用;
2)將步驟I)得到的提取浸膏用其重量8倍乙醇溶液充分溶解,乙醇的質(zhì)量濃度為30%,除去不溶物,得到樣品液,備用;將樣品液加入到其重量150倍的吸附劑AB-8大孔吸附樹脂中,吸附20h后得到吸附混合料,備用;
3)將步驟2)得到的吸附混合料裝入分離柱內(nèi),依次用以水為溶劑的不同質(zhì)量濃度的乙醇溶液進(jìn)行洗脫,其中各次洗脫用乙醇溶液的質(zhì)量濃度依次為0%、20%、30%、40%、50%、70%、80%以及95%,洗脫過(guò)程中收集芪類化合物含量大于85%的餾分段,備用;
4)將步驟3)收集的芪類化合物的餾分段,在小于60°C條件下減壓濃縮至無(wú)溶劑,即得總芪類化合物。
所述的從牡丹籽中提取總芪類化合物的過(guò)程中應(yīng)用到的乙醇均為食用酒精。
[0022]經(jīng)檢測(cè),本實(shí)施例提取得到的芪類化合物的總含量為91.0%。[0023]實(shí)施例4:
一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,包括以下步驟:
O取紫斑牡丹籽原料,除去雜質(zhì),并用清水清洗3遍,然后置于恒溫干燥箱中,在60°C條件下干燥3h,烘干后加入脫殼機(jī)中去皮,然后將得到的牡丹籽皮干燥至含水量不超過(guò)10%,取出I kg粉碎,置于超聲提取器內(nèi),然后加入其重量10倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60%,在溫度為30°C條件下超聲提取30min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;向得到的濾渣中加入其重量10倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60%,在溫度為30°C條件下超聲提取30min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;重復(fù)上述向?yàn)V渣中加入乙醇、超聲提取和過(guò)濾操作2次,將收集的所有濾液混合,蒸發(fā)濃縮,得到提取浸膏,備用;
2)將步驟I)得到的提取浸膏用其重量6倍乙醇溶液充分溶解,乙醇的質(zhì)量濃度為20%,除去不溶物,得到樣品液,備用;將樣品液加入到其重量100倍的吸附劑DlOl大孔吸附樹脂中,吸附12h后得到吸附混合料,備用;
3)將步驟2)得到的吸附混合料裝入分離柱內(nèi),依次用以水為溶劑的不同質(zhì)量濃度的乙醇溶液進(jìn)行洗脫,其中各次洗脫用乙醇溶液的質(zhì)量濃度依次為0%、20%、30%、40%、50%、70%、80%以及95%,洗脫過(guò)程中收集芪類化合物含量大于85%的餾分段,備用;
4)將步驟3)收集的芪類化合物的餾分段,在小于60°C條件下減壓濃縮至無(wú)溶劑,即得總芪類化合物。
[0024]所述的從牡丹籽中提取總芪類化合物的過(guò)程中應(yīng)用到的乙醇均為食用酒精。
[0025]經(jīng)檢測(cè),本實(shí)施例提取得到的芪類化合物的總含量為90.8%。
[0026]活性測(cè)試試驗(yàn):
1.抗腫瘤活性藥理研究 I)試驗(yàn)材料
胎牛血清,96孔培養(yǎng)板,恒溫箱,RPM1640培養(yǎng)液。
[0027])方法
對(duì)上述實(shí)施例富集得到的芪類化合物進(jìn)行細(xì)胞毒活性測(cè)試,采用的方法為MTT法。
[0028])試驗(yàn)步驟
(I)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,用含10%胎牛血清的RPM1640培養(yǎng)液,制成單細(xì)胞懸液5 X IO4個(gè)/mL,將該懸液加到96孔培養(yǎng)板中,每孔加入IX IO4個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)24 h后,加入受試藥物,化學(xué)單體濃度分別為30 μ g/mL>10 μ g/mL。
[0029](2)將平板在37 °C,含5%C02空氣及100%濕度的恒溫箱中孵育3天,去除培養(yǎng)液。
[0030](3) MTT用無(wú)血清的RPM1640培養(yǎng)液配成I mg/mL溶液,每孔加100 μ L,37°C溫育4 h,使MTT還原為甲臢。
[0031](4)吸出上層清液,加入150 yL DMSO使甲臢溶解,于ELISA儀570 nm處測(cè)OD值。
[0032])試驗(yàn)結(jié)果
表1:分離化合物細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(n=6)
【權(quán)利要求】
1.一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,其特征在于:包括以下步驟: O取牡丹籽原料,除去雜質(zhì),并用清水清洗2-3遍,然后置于恒溫干燥箱中,在60-80°C條件下干燥3-9h,烘干后加入脫殼機(jī)中去皮,然后將得到的牡丹籽皮干燥至含水量不超過(guò)10%,粉碎,置于超聲提取器內(nèi),然后加入其重量10-20倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60-80%,在溫度為30-40 °C條件下超聲提取30-40min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;向得到的濾渣中加入其重量10-20倍的乙醇溶液,乙醇的質(zhì)量濃度為60-80%,在溫度為30-40 °C條件下超聲提取30-40min,提取結(jié)束后過(guò)濾,收集濾液,備用;重復(fù)上述向?yàn)V渣中加入乙醇、超聲提取和過(guò)濾操作1-2次,將收集的所有濾液混合,蒸發(fā)濃縮,得到提取浸膏,備用; 2)將步驟I)得到的提取浸膏用其重量6-10倍的乙醇溶液充分溶解,乙醇的質(zhì)量濃度為20-40%,除去不溶物,得到樣品液,備用;將樣品液加入到其重量100-200倍的吸附劑中,吸附12-24h后得到吸附混合料,備用; 3)將步驟2)得到的吸附混合料裝入分離柱內(nèi),依次用以水為溶劑的不同質(zhì)量濃度的乙醇溶液進(jìn)行洗脫,其中各次洗脫用乙醇溶液的質(zhì)量濃度依次為0%、20%、30%、40%、50%、70%、80%以及95%,洗脫過(guò)程中收集芪類化合物含量大于85%的餾分段,備用; 4)將步驟3)收集的芪類化合物的餾分段,在小于60°C條件下減壓濃縮至無(wú)溶劑,即得總芪類化合物。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,其特征在于:所述的牡丹籽原料為鳳丹牡丹籽或紫斑牡丹籽,也可以是芍藥科其它物種的籽皮。
3.如權(quán)利要求1所述的一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,其特征在于:所述的步驟3)中的吸附劑為聚酰胺樹脂、DlOl大孔吸附樹脂或AB-8大孔吸附樹脂中的一種。
4.如權(quán)利要求1所述的一種從牡丹籽中提取總芪類化合物的方法,其特征在于:所述的從牡丹籽中提取總芪類化合物的過(guò)程中應(yīng)用到的乙醇均為食用酒精。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK103766913SQ201410011977
【公開日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2014年1月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月10日
【發(fā)明者】劉普, 鄧瑞雪, 梁菊, 楊丹蕾, 劉欣, 尹衛(wèi)平, 高嘉嶼, 段文錄, 柴元武, 時(shí)清亮 申請(qǐng)人:河南科技大學(xué)