以木醇糖作為原料對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行發(fā)酵的工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開以木醇糖作為原料對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行發(fā)酵的工藝。具體步驟如下：將原料木糖醇作為發(fā)酵生產(chǎn)葡萄糖氧化酶的出發(fā)菌株，對(duì)其進(jìn)行紅外線的誘變處理；培養(yǎng)基中的初糖濃度質(zhì)量分?jǐn)?shù)不能低于百分之十；再對(duì)其進(jìn)行紫外誘變，選擇具有最佳產(chǎn)酶的葡萄糖濃度；搖瓶發(fā)酵，初定葡萄糖氧化酶膜過濾發(fā)酵工藝中的初糖濃度至少為百分之八；運(yùn)用雙層紗膜進(jìn)行透析；加入氯化氫或者氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)其PH為4-7范圍內(nèi)；再次進(jìn)行傳代實(shí)驗(yàn)，3-5次，即可。所述具有最佳產(chǎn)酶的葡萄糖濃度為百分之七點(diǎn)五至百分之八點(diǎn)二；所選用的接種菌齡應(yīng)該為其生長后期。本發(fā)明的有益效果是：產(chǎn)酶反應(yīng)活度高，變化比較平穩(wěn)，有效減少了發(fā)酵過程中代謝物的產(chǎn)生以及其對(duì)產(chǎn)物合成的阻礙作用。
【專利說明】以木醇糖作為原料對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行發(fā)酵的工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生化物質(zhì)的制備方法，具體來說，是指以木醇糖作為原料對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行發(fā)酵的工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]葡萄糖氧化酶(G I u c ο s eOxidase，簡稱G0D)系統(tǒng)名為β _D_葡萄糖:氧化還原酶(EC1.1.3.4)它能專一地將β -D-葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過氧化氫。葡萄糖氧化酶是酶【技術(shù)領(lǐng)域】中一種非常重要的酶，由于葡萄糖氧化酶與生命重要物質(zhì)葡萄糖和氧的密切關(guān)系，導(dǎo)致了它在科研、醫(yī)藥和食品工業(yè)生產(chǎn)上廣泛的應(yīng)用。20世紀(jì)初Maximou在黑曲霉培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)吸氧酶系統(tǒng)。1924年Malliard發(fā)現(xiàn)了葡萄糖酸。1928年，Muller用黑曲霉菌絲體壓制進(jìn)行葡萄糖酸形成的酶學(xué)研究，探明在葡萄糖存在時(shí)能消耗氧，并命名為葡萄糖氧化酶，把它歸入脫氫酶。以后許多研究者對(duì)該酶的性質(zhì)作了大量的工作，尤其對(duì)葡萄糖氧化酶的輔基一黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)作了深入的研究，并給予詳細(xì)的說明。BentleyNeubergar應(yīng)用同位素1802.2180明確了在有過氧化氫酶存在下的一系列試驗(yàn)。Keilin等對(duì)黑曲霉的葡萄糖氧化酶的動(dòng)力學(xué)及其作用形式也作了較詳細(xì)的研究。1961年國際生化協(xié)會(huì)酶委員會(huì)將該酶的系統(tǒng)名稱叫做(β -D-萄萄糖-氧化還原酶(EC1.1.3.4)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案: 以木醇糖作為原料對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行發(fā)酵的工藝，具體步驟如下:
將原料木糖醇作為發(fā)酵生產(chǎn)葡萄糖氧化酶的出發(fā)菌株，對(duì)其進(jìn)行紅外線的誘變處理； 培養(yǎng)基中的初糖濃度質(zhì)量分?jǐn)?shù)不能低于百分之十；
再對(duì)其進(jìn)行紫外誘變，選擇具有最佳產(chǎn)酶的葡萄糖濃度；
搖瓶發(fā)酵，初定葡萄糖氧化酶膜過濾發(fā)酵工藝中的初糖濃度至少為百分之八；
運(yùn)用雙層紗膜進(jìn)行透析；
加入氯化氫或者氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)其PH為4-7范圍內(nèi)；
再次進(jìn)行傳代實(shí)驗(yàn)，3-5次，即可。
[0004]本發(fā)明中，所述具有最佳產(chǎn)酶的葡萄糖濃度為百分之七點(diǎn)五至百分之八點(diǎn)二。
[0005]本發(fā)明中，所選用的接種菌齡應(yīng)該為其生長后期。
[0006]本發(fā)明的有益效果是:產(chǎn)酶反應(yīng)活度高，變化比較平穩(wěn)，有效減少了發(fā)酵過程中代謝物的產(chǎn)生以及其對(duì)產(chǎn)物合成的阻礙作用。
【具體實(shí)施方式】
[0007]以木醇糖作為原料對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行發(fā)酵的工藝，具體步驟如下:
將原料木糖醇作為發(fā)酵生產(chǎn)葡萄糖氧化酶的出發(fā)菌株，對(duì)其進(jìn)行紅外線的誘變處理； 培養(yǎng)基中的初糖濃度質(zhì)量分?jǐn)?shù)為百分之十；再對(duì)其進(jìn)行紫外誘變，選擇具有最佳產(chǎn)酶的葡萄糖濃度；
搖瓶發(fā)酵，初定葡萄糖氧化酶膜過濾發(fā)酵工藝中的初糖濃度為百分之八；
運(yùn)用雙層紗膜進(jìn)行透析；
加入氯化氫或者氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)其PH為6范圍內(nèi)；
再次進(jìn)行傳代實(shí)驗(yàn)，5次，即可。
[0008]所述具有最佳產(chǎn)酶的葡萄糖濃度為百分之七點(diǎn)五。
[0009]所選用的接種菌齡應(yīng)該為其生長后期。
[0010]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變， 都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.以木醇糖作為原料對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行發(fā)酵的工藝，其特征在于，具體步驟如下: 將原料木糖醇作為發(fā)酵生產(chǎn)葡萄糖氧化酶的出發(fā)菌株，對(duì)其進(jìn)行紅外線的誘變處理； 培養(yǎng)基中的初糖濃度質(zhì)量分?jǐn)?shù)不能低于百分之十； 再對(duì)其進(jìn)行紫外誘變，選擇具有最佳產(chǎn)酶的葡萄糖濃度； 搖瓶發(fā)酵，初定葡萄糖氧化酶膜過濾發(fā)酵工藝中的初糖濃度至少為百分之八； 運(yùn)用雙層紗膜進(jìn)行透析； 加入氯化氫或者氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)其PH為4-7范圍內(nèi)； 再次進(jìn)行傳代實(shí)驗(yàn)，3-5次，即可。
2.如權(quán)利要求1所述的以木醇糖作為原料對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行發(fā)酵的工藝，其特征在于，所述具有最佳產(chǎn)酶的葡萄糖濃度為百分之七點(diǎn)五至百分之八點(diǎn)二。
3.如權(quán)利要求1所述的以木醇糖作為原料對(duì)葡萄糖氧化酶進(jìn)行發(fā)酵的工藝，其特征在于，所選用的接種菌齡應(yīng)該為其`生長后期。
【文檔編號(hào)】C12N9/04GK103627682SQ201310588368
【公開日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月21日
【發(fā)明者】周懂懂 申請(qǐng)人:周懂懂