一種發(fā)酵法制備棘白菌素b的方法及菌株的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一株構(gòu)巢曲霉菌突變株——構(gòu)巢曲霉（Aspergillus?nidulans）ZJB09223，以及采用該菌株發(fā)酵法制取棘白菌素B的方法。該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國，武漢市，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號為CCTCC?NO：M?2012300，保藏日期為2012年07月25日。本發(fā)明通過LiCl/紫外/亞硝酸鈉復(fù)合誘變結(jié)合抗性篩選方式獲得了一種構(gòu)巢曲霉Aspergillus?nidulans突變株ZJB09223；該突變株能夠高效生產(chǎn)棘白菌素B，且培養(yǎng)方便，制備棘白菌素B的過程也較為簡便高效，能得到高純度的棘白菌素B，具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種發(fā)酵法制備棘白菌素B的方法及菌株
(一)【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一株構(gòu)巢曲霉菌突變株-構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)
ZJB09223,以及利用所述的構(gòu)巢曲霉ZJB09223發(fā)酵法制備棘白菌素B的方法。
(二)【背景技術(shù)】
[0002]棘白菌素B (Echinocandin B)是ー種具有環(huán)狀六肽核心和脂肪酸側(cè)鏈結(jié)構(gòu)天然環(huán)狀脂肽類化合物?；瘜W(xué)名是，分子式為C52H81N7O16，分子量為1060，結(jié)構(gòu)式如下:
[0003]
【權(quán)利要求】
1.一株構(gòu)巢曲霉菌突變株-構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)ZJB09223,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號為CCTCC NO:M2012300，保藏日期為2012年07月25日。
2.利用權(quán)利要求1所述的構(gòu)巢曲霉ZJB09223發(fā)酵法制備棘白菌素B的方法，所述方法包括: (1)種子培養(yǎng):將構(gòu)巢曲霉ZJB09223接種至種子培養(yǎng)基，25~30°C培養(yǎng)24~48h，獲得種子液；所述種子培養(yǎng)基組成如下:葡萄糖0.5~1.5%，甘油0.5~5%，棉籽粉I~10%，溶劑為蒸餾水，PH值自然； (2)發(fā)酵培養(yǎng):步驟(1)種子液以I~10%體積比接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，20~30°C、220~280rpm下培養(yǎng)7~12天，得到發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)分離純化得到所述棘白菌素B ;所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下:甘油0.5~5%，蛋白胨0.5~5%，L-脯氨酸0.1~0.5%，甘露醇I~10%，黃豆餅粉I~10%，鳥氨酸0.1~0.5%,花生油0.5~5%，K2HP043H200.2~2%，MgS047H200.01% ~0.1%，MnPO4H2O0.01% ~0.1%，F(xiàn)eSOJH2OO? 005%, CaCl20.01% ~0.1%，CuSO4.5H200.01%~0.1%，溶劑為蒸餾水，pH值自然。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述分離純化方法如下:發(fā)酵液離心，分別收集沉淀和上清液；上清液經(jīng)異丁醇充分萃取后收集異丁醇萃取相；沉淀用異丁醇浸提，離心收集異丁醇液相；合并異丁醇相，濃縮，加入5~10倍異丁醇相體積的こ酸乙酯，(TC下過夜結(jié)晶，過濾，得到棘`白菌素B晶體。
【文檔編號】C12N1/14GK103555591SQ201310477670
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月12日
【發(fā)明者】鄭裕國, 鄒樹平, 牛坤, 鐘偉, 毛健, 沈寅初 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)