一種新的鹽單胞菌及其生產(chǎn)四氫嘧啶的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種可用于生產(chǎn)四氫嘧啶的新的鹽單胞菌Halomonas?sp.HS-2255及其突變株，保藏號(hào)為CGMCC?No.6248。本發(fā)明還公開了該菌株的培養(yǎng)方法以及發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶的方法；該菌株在含有可同化的碳源和氮源且較低的NaCl含量的培養(yǎng)基中具有較高的四氫嘧啶產(chǎn)量，并且副產(chǎn)物羥基四氫嘧啶的含量較低，可用于工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶，具有良好的應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】一種新的鹽單胞菌及其生產(chǎn)四氫嘧啶的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體涉及一種新的鹽單胞菌及其突變株在發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】:
[0002]嗜鹽菌屬于一種極端微生物，根據(jù)其對(duì)NaCl的耐受程度可以分為輕度嗜鹽菌(最適NaCl濃度為10-30g/L)、中度嗜鹽菌(最適NaCl濃度為50_100g/L)和極端嗜鹽菌(最適NaCl濃度為130-150g/L)。為了維持細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓平衡，在嗜鹽菌細(xì)胞中會(huì)積累一些物質(zhì)以抵抗外界的高滲環(huán)境，這類物質(zhì)主要包括氨基酸及其衍生物、多元醇、糖類以及四氫嘧啶類，其中四氫嘧啶具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
[0003]四氫嘧啶(1，4，5，6-四氫-2-甲基_4_嘧啶羧酸，Ectoine)于1985年在極度嗜鹽光合細(xì)菌(Ectothiorhodospira hlochloris strain DSM 1059)菌株中首次被 Galinsk 等
發(fā)現(xiàn)并且鑒定結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)式如下:
【權(quán)利要求】
1.一種鹽單胞菌(Halomonas sp.) HS-2255，其保藏編號(hào)為CGMCC N0.6248，具有生產(chǎn)四氫嘧啶的能力。
2.—種權(quán)利要求1所述的鹽單胞菌的培養(yǎng)方法，其特征在于:將所述的鹽單胞菌(Halomonas sp.)HS_2255 (CGMCC N0.6248)接種于種子培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為28 - 35°C的條件下培養(yǎng)至種子液稀釋30倍后的OD6tltl為0.1 — 1.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求2中所述的種子培養(yǎng)基，其特征在于:含有魚蛋白胨5-20g/L，葡萄糖10-50g/L，酵母膏 10-30g/L，NaC130_50g/L，PH7.5。
4.一種制備四氫卩密唳的方法，其特征在于:包括采用鹽單胞菌(Halomonas sp.)HS-2255 (CGMCC N0.6248)在含有可同化的碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基里，進(jìn)行有氧發(fā)酵的步驟。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述可同化的碳源選自葡萄糖、糊精、蔗糖、味精、糖蜜、乳酸、甘油、麥芽糊精、麥芽糖中的一種或多種，優(yōu)選為葡萄糖和味精。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述可同化的氮源選自酵母抽提物、酵母膏、魚蛋白胨、味精、氯化銨、硫酸銨，大豆蛋白胨、夫質(zhì)粉、豆粉、金槍魚膏、玉米粉、花生餅、棉籽餅中的一種或多種，優(yōu)選酵母抽提物、酵母膏、魚蛋白胨、味精、氯化銨或硫酸銨。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述無(wú)機(jī)鹽包括氯化鈉和選自磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂、七水硫酸鐵、二水氯化鈣、氯化鉀、溴化鈉、硫酸錳一水合物、硫酸鈉、磷酸氫二鈉中的一種或多種鹽，可優(yōu)選為氯化鈉和選自磷酸氫二鉀或七水硫酸鎂中的一種或兩種鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于:氯化鈉的含量為30-100g/L。`
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制`備方法，其特征在于:所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為25°C-35°C,pH為6.0-9.0，培養(yǎng)時(shí)間為12-120小時(shí)。
10.根據(jù)權(quán)利要求4-9任意權(quán)利要求所述的制備方法，其特征在于:所述四氫嘧啶產(chǎn)生菌為鹽單胞菌(Halomonas sp.) HS-2255 (CGMCC N0.6248),或鹽單朐菌(Halomonas sp.)HS-2255 (CGMCC N0.6248)通過(guò)抗高劑量代謝終產(chǎn)物、結(jié)構(gòu)類似物的誘變篩選而獲得的突變株。
11.權(quán)利要求1所述的鹽單胞菌(Halomonassp.) HS-2255 (CGMCC N0.6248)及其突變株在制備四氫嘧啶中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12R1/01GK103451137SQ201310416404
【公開日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月12日
【發(fā)明者】朱皖宜, 邱海瀟, 羅紅瑜, 李振武, 許江麗, 張寶新, 韓雙, 林丹丹, 彭飛宇, 陳華, 鄭玲輝, 王玲萍, 陶正利 申請(qǐng)人:浙江海正藥業(yè)股份有限公司