異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑及其制備方法和應(yīng)用，屬于水產(chǎn)配合飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域。其包括虎杖、大黃、野菊花、金銀花、黃芩、大青葉、連翹等；將上述各組份切片，后經(jīng)進(jìn)行水浴回流濃縮提取，后濾液經(jīng)真空濃縮噴霧干燥制成復(fù)合中草藥提取物促生長劑干粉。本發(fā)明原料來源穩(wěn)定，制備簡單，取材廣泛，成本低廉，并且具有天然型、無殘留、毒副作用小等優(yōu)點；從中醫(yī)的理論出發(fā)，復(fù)合中草藥提取物促生長劑可以彌補(bǔ)中草藥的直接復(fù)配或者單味中草藥提取物在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用，并且添加劑量小，用時能提高魚體免疫與抗氧化能力，抵抗嗜水氣單胞菌感染能力，促進(jìn)異育銀鯽生長。
【專利說明】
異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑及其制備方法和應(yīng)用，屬于水產(chǎn)配合飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]異育銀鯽(Carassius aura tus是利用天然雌核發(fā)育的方正銀鯽為母本，以興國紅鯉為父本，經(jīng)人工授精繁育的子代。具有良好的雜種優(yōu)勢，增產(chǎn)效果明顯，且肉質(zhì)細(xì)嫩，營養(yǎng)豐富，并且離水存活時間長，食性廣、容易飼養(yǎng)，適應(yīng)性強(qiáng)，成活率等特點，是中國的大宗淡水魚類之一，深受養(yǎng)殖者和消費者歡迎。近年來還成了出口韓國、日本和東南亞地區(qū)的新秀，受到當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖者的喜愛和歡迎，取得了較好的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。
[0003]為了追求高的效益，集約化、高密度應(yīng)激的養(yǎng)殖下，特別高溫應(yīng)激條件下，病害頻繁發(fā)生，特別是近年來江蘇鹽城等地大規(guī)模爆發(fā)的皰疹病毒病，體表、下顎、腮部等充血，鰓組織粒細(xì)胞、腎臟和脾臟等造血細(xì)胞壞死，魚體免疫能力低下，池塘鯽魚死亡率高達(dá)90%以上，一些池塘幾近絕收，嚴(yán)重影響異育銀鯽的經(jīng)濟(jì)效益，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為防治病原菌，抗生素及抗菌藥物得到了大量使用，并造成藥物殘留、耐藥性增強(qiáng)、引起動物免疫力下降、微生態(tài)失調(diào)以及致畸、致癌、環(huán)境污染等一系列不良后果，有些抗生素或者抗菌藥物，還會有藥物殘留，影響人類食品安全，影響水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。因此，一些綠色、安全、高效飼料添加劑的開發(fā)與應(yīng)用應(yīng)運而生。植物提取物具有天然、高效、毒副作用少、資源豐富等優(yōu)點，含有與動物的免疫功能密切相關(guān)的生物堿、茶多酚、皂甙、低聚糖、黃酮類、揮發(fā)油類等，可促進(jìn)機(jī)體的生長發(fā)育，并通過影響非特異性免疫系統(tǒng)，激活和誘生多種細(xì)胞因子等途徑提高水產(chǎn)動物機(jī)體免疫力，防治病害的發(fā)生。
[0004]近幾年關(guān)于鯽魚免疫與抗病相關(guān)的專利有:魏萬權(quán)等(20I 2)申請專利(201 51020 1964.8)—種異育銀鯽專用中草藥飼料添加劑；肖玲等(2013)申請專利(201310293137.6)—種異育銀鯽復(fù)方中草藥飼料添加劑；黃劍飛等(2015)申請專利(201510355536.X)—種防治異育銀鯽腮出血疾病的藥物組合物及其制備方法;黃錦爐等(2015)申請專利(201510126559.3)—種用于預(yù)防異育銀鯽感染鯉皰疹病毒的飼料添加劑；
目前已有一些關(guān)于虎杖、大黃、野菊花、金銀花、黃芩、大青葉、連翹等單獨或者部分配伍的研究報道在水產(chǎn)養(yǎng)殖的少量使用，但是有關(guān)與虎杖、大黃、野菊花、金銀花、黃芩、連翹、板藍(lán)根等配伍后提取物的使用及其提取方法，還未見報道。因此研制一種鯽魚抗病促生長劑，既能促進(jìn)魚體生長，又能提高魚體抗病能力，對水產(chǎn)健康養(yǎng)殖和可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，提供一種異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑及其制備方法和應(yīng)用，其能耗低、工藝簡單、生產(chǎn)成本低，能提高異育銀鯽免疫與抗氧化能力，提高異育銀鯽體抵抗嗜水氣單胞菌感染能力，且可促進(jìn)異育銀鯽生長。
[0006]按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案，一種異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑，配方比例按重量份計為:虎杖20-26份、大黃15-19份、野菊花9-15份、金銀花12-18份、大青葉10-15份、黃芩葉12-16份、連翹葉為5-9份;將上述各組份切片、水浴回流提取、濃縮、噴霧干燥，即制得異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑。
[0007]所述異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑的制備方法，步驟為:
(1)前處理:取虎杖20-26份、大黃15-19份、野菊花9-15份、金銀花12-18份、大青葉10-15份、黃芩葉12-16份、連翹葉為5-9份，烘干至水分小于12%，切片后備用，切片速度600-700轉(zhuǎn)/分；
(2)水浴回流提取:在步驟(I)所得切片后的混合物料中添加水，水的質(zhì)量為物料總量的10-15倍，水浴回流提取2-3h;提取時，提取罐加熱蒸汽壓力0.15-0.2MPa，提取罐溫度為90-100°C收集提取液；
(3)濃縮:將步驟(2)所得的提取液經(jīng)真空濃縮至原提取液體積的10%-20%，濃縮罐加熱蒸汽壓力0.05-0.1MPa;濃縮罐溫度為80-85 °C，真空度為_0.05—0.04 MPa，得到濃縮液；
(4)噴霧干燥:將步驟(3)所得濃縮液充分進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)料濾液速度為32-36轉(zhuǎn)/分，進(jìn)風(fēng)溫度為150-200°C，出風(fēng)溫度為45-50°C，產(chǎn)品粉狀的異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑。
[0008]所述異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑的應(yīng)用，添加在異育銀鯽飼料中，以抑制水產(chǎn)養(yǎng)殖中的嗜水氣單胞菌，添加量為0.2%-0.6%。
[0009]所述異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑的使用周期在30d以上，飼料中的添加量為0.2%-0.3%;使用周期在7d以內(nèi)，飼料中的添加量為0.5%-0.6%。
[0010]本發(fā)明的有益效果:
1、本發(fā)明從中醫(yī)的理論出發(fā)，以虎杖為君，大黃、野菊花、金銀花為臣，大青葉、黃芩葉、連翹等為使，研制復(fù)合中草藥提取物，能克服某一種產(chǎn)品的不足之處，相互補(bǔ)充，促進(jìn)異育銀鯽魚體生長。
[0011]2、本發(fā)明原料來源穩(wěn)定，制備簡單，取材廣泛，成本低廉，并且具有天然型、無殘留、毒副作用小等優(yōu)點。
[0012]3、本發(fā)明虎杖、大黃、野菊花、金銀花、大青葉、黃芩葉、連翹等等復(fù)合中草藥提取物，經(jīng)過濃縮干燥的粉劑，可以彌補(bǔ)中草藥的直接復(fù)配或者單味中草藥提取物在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用，并且添加劑量小，作用效果好。
[0013 ] 4、本發(fā)明通過動物試驗，表明該復(fù)合中草藥提取物提高異育銀鯽免疫與抗氧化能力，抵抗嗜水氣單胞菌感染能力，促進(jìn)魚體生長。
【具體實施方式】
[0014]以下實施例中切片機(jī)采用中藥切片機(jī)，DXQ-130B，購自廣州市大祥電子機(jī)械設(shè)備有限公司；水浴回流濃縮提取采用中草藥濃縮機(jī)組，RTN-100雙效并聯(lián)型，購自浙江金安制藥機(jī)械有限公司；噴霧干燥采用噴霧干燥機(jī)，Z YG-5噴霧干燥機(jī)，購自浙江金安制藥機(jī)械有限公司。
[0015]下面本發(fā)明將結(jié)合實施例作進(jìn)一步描述: 實施例1
一種異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑制備和應(yīng)用采用以下工藝步驟，其組份配比如下:
(1)前處理:本發(fā)明配制Ikg復(fù)合中草藥抗病促長劑其各原料組成:取虎杖260g、大黃150g、野菊花150g、金銀花120g、大青葉150g、黃芩葉120g、連翹葉為50g;將上述各組份進(jìn)行烘干，烘干至水分〈I 2%;烘干后的各組分用中藥切片機(jī)進(jìn)行切片，切片速度:600轉(zhuǎn)/分；
(2)水浴回流提取:所得的粗片混合后經(jīng)中草藥濃縮機(jī)組進(jìn)行水浴回流濃縮提取，其中添加自來水10升;提取罐加熱蒸汽壓力:0.15MPa;提取罐溫度為90°C。水浴回流提取時間2小時；
(3)濃縮:濾液經(jīng)真空濃縮提取原濾液體積的10%溶液。濃縮罐加熱蒸汽壓力0.05MPa;濃縮罐溫度為80°C;真空度為-0.05 MPa;
(4)噴霧干燥:將上述濾液充分經(jīng)噴霧干燥機(jī)噴霧干燥，其中進(jìn)料濾液速度:32轉(zhuǎn)/分；進(jìn)風(fēng)溫度:150°C，出風(fēng)溫度:45°C，制成粉狀異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑。
[0016]生長實驗:異育銀鯽由中國水產(chǎn)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究中心漁場提供。
[0017]試驗選擇健康、規(guī)格、重量基本一致的異育銀鯽，個體初均重約30gO隨機(jī)分組，設(shè)有對照組與對照組，每組設(shè)3個平行試驗，每平行組30尾試驗魚，共6個圓形蓄養(yǎng)槽(規(guī)格為Φ 1.2Xlm)，采用室內(nèi)循環(huán)流水系統(tǒng)。每組試驗所用養(yǎng)殖桶在空間位置上隨機(jī)分散排布，避免人為因素造成的誤差。異育銀鯽馴化15d后投喂0、0.2%兩個劑量異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑56d，測定其生長、免疫的影響。
[0018]攻毒實驗:飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細(xì)菌-嗜水性氣單胞菌，將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理鹽水稀釋，使終濃度約為lX107cellS/mL。按每50 g魚重腹腔注射菌液0.3mL，后放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積的圓形蓄養(yǎng)槽(規(guī)格為Φ 1.2 X Im)，并保證充足的氧氣，每天觀察魚體死亡情況，觀察7d，統(tǒng)計死亡率。
[0019]結(jié)果表明:與對照組相比，0.2%異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑增重率顯著(P〈0.05)分別提高了 12.58%;病原菌感染魚體7d，對照組死亡率為92.11%,0.2%復(fù)合中草藥提取物制劑魚死亡率為58.42%;與對照組相比，0.2%復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑顯著降低血液丙二醛濃度6.43%，增加了血液呼吸爆發(fā)活性9.25%、白細(xì)胞介素8.55%、抗腫瘤壞死因子10.11%。因此，0.2%復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑能提高魚體免疫與抗氧化能力，抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，促進(jìn)魚體生長。
[0020]實施例2
本發(fā)明一種異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑制備和應(yīng)用采用以下工藝步驟，其組分配比如下:
(1)前處理:本發(fā)明配制Ikg復(fù)合中草藥抗病促長劑其各原料組成:取虎杖230g、大黃170g、野菊花120g、金銀花150g、大青葉100g、黃芩葉160g、連翹葉為70g;將上述各組份進(jìn)行烘干，烘干至水分〈I 2%;烘干后的各組分用中藥切片機(jī)進(jìn)行切片，切片速度:600轉(zhuǎn)/分；
(2)水浴回流提取:所得的粗片混合后經(jīng)中草藥濃縮機(jī)組進(jìn)行水浴回流濃縮提取，其中添加自來水10升;提取罐加熱蒸汽壓力:0.18 MPa;提取罐溫度為100°C，水浴回流提取時間2.5小時； (3 )濃縮:濾液經(jīng)真空濃縮提取原濾液體積的15%溶液。濃縮罐加熱蒸汽壓力0.08MPa;濃縮罐溫度為85°C;真空度為-0.04 MPa;
(4)噴霧干燥:將上述濾液充分經(jīng)噴霧干燥機(jī)噴霧干燥，制成粉狀異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑。其中進(jìn)料濾液速度:36轉(zhuǎn)/分;進(jìn)風(fēng)溫度:1800C，出風(fēng)溫度:50°C。
[0021 ]生長實驗:異育銀鯽由中國水產(chǎn)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究中心漁場提供。
[0022]試驗選擇健康、規(guī)格、重量基本一致的異育銀鯽，個體初均重約30gο隨機(jī)分組，設(shè)有對照組與對照組，每組設(shè)3個平行試驗，每平行組30尾試驗魚，共6個圓形蓄養(yǎng)槽(規(guī)格為Φ 1.2Xlm)，采用室內(nèi)循環(huán)流水系統(tǒng)。每組試驗所用養(yǎng)殖桶在空間位置上隨機(jī)分散排布，避免人為因素造成的誤差。異育銀鯽馴化15d后投喂0、0.5%兩個劑量復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑56d，測定其生長、免疫的影響。
[0023]攻毒實驗:飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細(xì)菌-嗜水性氣單胞菌，將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理鹽水稀釋，使終濃度約為lX107cellS/mL。按每50 g魚重腹腔注射菌液0.3mL，后放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積的圓形蓄養(yǎng)槽(規(guī)格為Φ 1.2 X Im)，并保證充足的氧氣，每天觀察魚體死亡情況，觀察7d，統(tǒng)計死亡率。
[0024]結(jié)果表明:與對照組相比，0.5%復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑增重率顯著分別提高了8.92%;病原菌感染魚體7d，對照組死亡率為90.75%，0.5%復(fù)合中草藥提取物制劑魚死亡率為68.44%;與對照組相比，0.5%復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑顯著降低血液丙二醛濃度7.87%，增加了血液呼吸爆發(fā)活性11.26%、白細(xì)胞介素濃度5.43%、抗腫瘤壞死因子6.43%、超氧化物歧化酶活性6.67%。因此，0.5%復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑能提高魚體免疫與抗氧化能力，抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，促進(jìn)魚體生長。
[0025]實施例3
本發(fā)明一種異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑制備和應(yīng)用采用以下工藝步驟，其組分配比如下:
(1)前處理:取虎杖200g、大黃190g、野菊花90g、金銀花180g、大青葉120g、黃芩葉130g、連翹葉為90g;將上述各組份進(jìn)行烘干，烘干至水分〈12%;烘干后的各組分用中藥切片機(jī)進(jìn)行切片，切片速度:700轉(zhuǎn)/分；
(2)水浴回流提取:所得的粗片混合后經(jīng)中草藥濃縮機(jī)組進(jìn)行水浴回流濃縮提取，其中添加自來水12升;提取罐加熱蒸汽壓力:0.20 MPa；提取罐溫度為95°C。水浴回流提取時間3小時；
(3)濃縮:后濾液經(jīng)真空濃縮提取原濾液體積的20%溶液。濃縮罐加熱蒸汽壓力
0.08MPa ；濃縮罐溫度為83 °C ；真空度為_0.045 MPa ；
(4)噴霧干燥:將上述濾液充分經(jīng)噴霧干燥機(jī)噴霧干燥，制成粉狀復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑。其中進(jìn)料濾液速度:34轉(zhuǎn)/分;進(jìn)風(fēng)溫度:200 0C，出風(fēng)溫度:48 °C。
[0026]生長實驗:異育銀鯽由中國水產(chǎn)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究中心漁場提供。
[0027]試驗選擇健康、規(guī)格、重量基本一致的異育銀鯽，個體初均重約50gο隨機(jī)分組，設(shè)有對照組與對照組，每組設(shè)3個平行試驗，每平行組30尾試驗魚，共6個圓形蓄養(yǎng)槽(規(guī)格為Φ 1.2Xlm)，采用室內(nèi)循環(huán)流水系統(tǒng)。每組試驗所用養(yǎng)殖桶在空間位置上隨機(jī)分散排布，避免人為因素造成的誤差。異育銀鯽馴化15d后投喂0、0.6%兩個劑量復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑56d，測定其生長、免疫的影響。
[0028]攻毒實驗:飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細(xì)菌-嗜水性氣單胞菌，將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理鹽水稀釋，使終濃度約為I X 107cells/mL。按每50 g魚重腹腔注射菌液0.3 mL，后放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積的圓形蓄養(yǎng)槽(規(guī)格為Φ 1.2 X Im)，并保證充足的氧氣，每天觀察魚體死亡情況，觀察7d，統(tǒng)計死亡率。
[0029]結(jié)果表明:與對照組相比，0.6%復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑增重率顯著分別提高了 10.23%;病原菌感染魚體7d，對照組死亡率為91.65%，0.6%復(fù)合中草藥提取物制劑魚死亡率為57.45%;與對照組相比，0.6%復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑顯著降低血液丙二醛濃度5.56%，增加了血液呼吸爆發(fā)活性6.57%、白細(xì)胞介素濃度9.85%、抗腫瘤壞死因子11.54%、超氧化物歧化酶活性6.77%。因此，0.6%復(fù)合中草藥提取物抗病促長劑能提高魚體免疫與抗氧化能力，抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，促進(jìn)魚體生長。
【主權(quán)項】
1.一種異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑，其特征是配方比例按重量份計為:虎杖20-26份、大黃15-19份、野菊花9-15份、金銀花12-18份、大青葉10-15份、黃芩葉12-16份、連翹葉為5-9份;將上述各組份切片、水浴回流提取、濃縮、噴霧干燥，即制得異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑。2.權(quán)利要求1所述異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑的制備方法，其特征是步驟為: (1)前處理:取虎杖20-26份、大黃15-19份、野菊花9-15份、金銀花12-18份、大青葉10-15份、黃芩葉12-16份、連翹葉為5-9份，烘干至水分小于12%，切片后備用，切片速度600-700轉(zhuǎn)/分； (2)水浴回流提取:在步驟(I)所得切片后的混合物料中添加水，水的質(zhì)量為物料總量的10-15倍，水浴回流提取2-3h;提取時，提取罐加熱蒸汽壓力0.15-0.2MPa，提取罐溫度為90-100°C收集提取液； (3)濃縮:將步驟(2)所得的提取液經(jīng)真空濃縮至原提取液體積的10%-20%，濃縮罐加熱蒸汽壓力0.05-0.1MPa;濃縮罐溫度為80-85 °C，真空度為_0.05—0.04 MPa，得到濃縮液； (4)噴霧干燥:將步驟(3)所得濃縮液充分進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)料濾液速度為32-36轉(zhuǎn)/分，進(jìn)風(fēng)溫度為150-200°C，出風(fēng)溫度為45-50°C，產(chǎn)品粉狀的異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑。3.權(quán)利要求1所述異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑的應(yīng)用，其特征是:添加在異育銀鯽飼料中，以抑制水產(chǎn)養(yǎng)殖中的嗜水氣單胞菌，添加量為0.2%-0.6%。4.如權(quán)利要求3所述異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑的應(yīng)用，其特征是:異育銀鯽復(fù)合中草藥抗嗜水氣單胞菌制劑的使用周期在30d以上，飼料中的添加量為0.2%-.0.3%;使用周期在7d以內(nèi)，飼料中的添加量為0.5%-0.6%。
【文檔編號】A23K50/80GK105901328SQ201610329375
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月18日
【發(fā)明人】劉波, 戈賢平, 謝駿, 任鳴春, 周群蘭, 繆凌鴻, 潘良坤
【申請人】中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心