日本血吸蟲重組抗原SjPDI及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種日本血吸蟲重組抗原，該重組抗原包含：日本血吸蟲PDI蛋白的SEQ?IDNO.1所示氨基酸序列。本發(fā)明還公開了一種重組載體，包含日本血吸蟲PDI基因，該基因序列為編碼SEQ?ID?NO.1所示氨基酸序列的核苷酸序列。本發(fā)明還公開了上述日本血吸蟲重組抗原的制備方法及其在制備預(yù)防或治療血吸蟲病的疫苗或藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的日本血吸蟲重組抗原，在小鼠免疫實驗中可誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗重組抗原的特異性IgG、IgG1和IgG2a抗體并能達(dá)到一個較高的水平，動物保護(hù)實驗誘導(dǎo)了35.32％的減蟲率和33.17％的減卵率，表明該重組抗原適于作為抗血吸蟲病候選疫苗，具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說明】日本血吸蟲重組抗原SjPDI及其制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種日本血吸蟲重組抗原及其制備方法 和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 血吸蟲病是由血吸蟲引起的一種重要人畜共患病，在熱帶和亞熱帶地區(qū)約有2億 人感染，在我國主要流行的是日本血吸蟲病。截止到2011年，全國共有血吸蟲病流行縣 (市、區(qū)）454個，血吸蟲病人28. 68萬，全國實有釘螺面積372664. 10hm2,較2010年增加了 932. 08hm2。我國血吸蟲病防治工作仍面臨挑戰(zhàn)，形勢不容樂觀，因此，加強(qiáng)抗血吸蟲疫苗候 選分子和新藥物靶標(biāo)的篩選顯得尤其重要。
[0003] 在宿主體內(nèi)，寄生蟲組織結(jié)構(gòu)和行為方式會發(fā)生變化，蟲體移行于宿主體液和組 織之間，由腸上皮和（或）表皮以及其他特異排泄分泌器官在整個生命周期釋放或分泌的 排泄分泌產(chǎn)物能引起宿主免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)。這些成分直接暴露于宿主免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)宿主的 免疫應(yīng)答，干擾宿主的免疫反應(yīng)過程,使血吸蟲可以逃脫宿主的免疫攻擊，同時還是宿主體 內(nèi)存在活蟲體的重要指征。血吸蟲排泄分泌蛋白的重要功能及研究意義有：①排泄分泌蛋 白含有一些重要的酶、信號傳導(dǎo)蛋白、解毒分子，在血吸蟲生長發(fā)育中發(fā)揮了重要的作用； ②血吸蟲排泄分泌蛋白的不斷變化對血吸蟲逃避宿主免疫攻擊，在宿主體內(nèi)存活、發(fā)育、繁 殖中扮演著重要角色，在免疫逃避機(jī)制中起到了重要作用；③一些已呈現(xiàn)較好免疫保護(hù)效 果的血吸蟲疫苗候選分子，已證明在血吸蟲排泄分泌產(chǎn)物中呈現(xiàn)；④由于排泄分泌蛋白暴 露于宿主的免疫系統(tǒng)并引起宿主的免疫應(yīng)答，一些排泄分泌蛋白已被證明是良好的血吸蟲 病診斷抗原。因此，對排泄分泌蛋白總成分的鑒定有利于理解血吸蟲如何調(diào)節(jié)寄主免疫應(yīng) 答以建立慢性感染，以及與寄主相互作用機(jī)制。同時，這些信息有利于發(fā)現(xiàn)控制血吸蟲病的 疫苗候選分子、新的診斷試劑及新藥物靶點(diǎn)。
[0004] 蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶（Protein disulfide ?8〇η?θΓΒ8θ，Η)Ι)被鑒定為一種排泄分 泌蛋白，在二硫鍵形成過程中起關(guān)鍵作用。PDI屬于硫氧還蛋白家族，基因含有兩個獨(dú)立的 活性位點(diǎn)，每個活性位點(diǎn)包含兩個半胱氨酸（WCGHCK)，PDI催化底物二硫鍵的形成及重排 以形成有活性的天然結(jié)構(gòu)。在肝片吸蟲中，PDI保護(hù)蟲體免受氧化壓力的影響；在新孢子蟲 和弓形蟲中，pdi在寄生蟲-宿主相互作用中扮演重要角色。有關(guān)roi的研究在日本血吸 蟲中還未被報道，因此，深入研究Sjroi的生物學(xué)功能及在血吸蟲生長發(fā)育中的作用具有 重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決目前缺乏抗血吸蟲高效疫苗的技術(shù)問題，提供一種日本血吸蟲重組 抗原，該重組抗原包含日本血吸蟲蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶（SjPDI)的SEQ ID NO. 1所示氨基 酸序列，具有良好的免疫原性，適于作為抗血吸蟲病候選疫苗。
[0006] 此外，還需要提供一種上述日本血吸蟲重組抗原的制備方法和應(yīng)用。
[0007] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0008] 在本發(fā)明的一個方面，提供了一種重組載體，包含日本血吸蟲PDI基因，該基因序 列為編碼SEQ ID NO. 1所示氨基酸序列的核苷酸序列。
[0009] 優(yōu)選的，所述重組載體的空載體為原核表達(dá)載體pET28a(+)，所述日本血吸蟲Η)Ι 基因插入在空載體pET28a(+)的EcoR I和Sal I兩個酶切位點(diǎn)之間。
[0010] 更優(yōu)選的，所述日本血吸蟲PDI基因序列為SEQ ID N0. 2所示核苷酸序列。
[0011] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種日本血吸蟲重組抗原，該重組抗原由上述重 組載體經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)制得。
[0012] 本發(fā)明的日本血吸蟲重組抗原，包含日本血吸蟲的蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶氨基酸序 列，還包含由部分載體序列表達(dá)的具有幾個組氨酸的標(biāo)簽序列，該標(biāo)簽序列僅是便于后續(xù) 的重組抗原蛋白純化。
[0013] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種包含上述重組載體的宿主細(xì)胞。
[0014] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述日本血吸蟲重組抗原的制備方法，包括 以下步驟：
[0015] 構(gòu)建含日本血吸蟲PDI基因的重組表達(dá)載體，所述基因是編碼SEQ ID NO. 1 所示氨基酸序列的日本血吸蟲PDI基因，所述重組表達(dá)載體的空載體為原核表達(dá)載體 pET28a(+)，所述日本血吸蟲PDI基因插入在空載體pET28a(+)的EcoR I和Sal I兩個酶 切位點(diǎn)之間；
[0016] 將所述重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入大腸桿菌宿主細(xì)胞；
[0017] 培養(yǎng)包含重組表達(dá)載體的大腸桿菌宿主細(xì)胞，并在合適條件下，誘導(dǎo)該重組表達(dá) 載體表達(dá)日本血吸蟲PDI蛋白；
[0018] 純化重組表達(dá)的日本血吸蟲PDI蛋白。
[0019] 在本發(fā)明的一個具體實施例中，構(gòu)建含日本血吸蟲PDI基因的重組表達(dá)載體，具 體包括以下步驟：利用生物信息學(xué)進(jìn)行在線分析，找出編碼日本血吸蟲蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu) 酶（SjPDI)的核苷酸片段；根據(jù)該核酸序列設(shè)計PCR上下游引物，分別在上下游引物5'末 端加上EcoR I、Sal I限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)，PCR擴(kuò)增核酸片斷，再利用特異限制性內(nèi)切 酶EcoR I、Sal I酶切PCR擴(kuò)增片段，將酶切下來的編碼SjPDI抗原的核酸片段定向克隆至 原核表達(dá)載體pET28a (+)的多克隆位點(diǎn)區(qū)，構(gòu)建成重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a (+) -S jH)I。
[0020] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種包含上述日本血吸蟲重組抗原的抗血吸蟲疫 苗。
[0021] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種能與上述日本血吸蟲重組抗原特異性結(jié)合的 抗體。
[0022] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述重組載體在制備預(yù)防或治療血吸蟲病的 疫苗或藥物中的應(yīng)用。
[0023] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述重組載體在制備診斷血吸蟲病的產(chǎn)品中 的應(yīng)用。
[0024] 本發(fā)明重組載體表達(dá)的日本血吸蟲蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶可以作為診斷抗原對血 吸蟲病畜進(jìn)行診斷。
[0025] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述重組載體在制備蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶產(chǎn) 品中的應(yīng)用。
[0026] 本發(fā)明日本血吸蟲重組抗原Sjroi，在小鼠保護(hù)實驗中分別誘導(dǎo)35.32 %、 33. 17%的減蟲率和減卵率，同時可誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗重組抗原的特異性IgG、IgGl和 IgG2a抗體，并且能達(dá)到一個較高的水平，表明該重組抗原具有發(fā)展為抗血吸蟲病候選疫苗 分子及新藥靶的潛力，具有很好的應(yīng)用價值。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0027] 下面結(jié)合附圖和【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0028] 圖1是本發(fā)明實施例1的重組質(zhì)粒pET28a(+)_Sjroi的雙酶切鑒定圖；
[0029] 圖2是本發(fā)明實施例1重組蛋白SjPDI的表達(dá)和純化結(jié)果圖；
[0030] 圖3是本發(fā)明實施例2的實時定量PCR分析SjPDI在不同發(fā)育階段血吸蟲內(nèi)的轉(zhuǎn) 錄水平圖；
[0031] 圖4是本發(fā)明實施例3重組蛋白SjPDI抗原性分析結(jié)果圖；
[0032] 圖5是本發(fā)明實施例4的SjPDI蛋白在血吸蟲體內(nèi)的定位表達(dá)圖；
[0033] 圖6是本發(fā)明實施例6抗SjPDI特異性IgG抗體水平的檢測結(jié)果圖；
[0034] 圖7是本發(fā)明實施例7的酶活性試驗結(jié)果圖。

【具體實施方式】
[0035] 下列實施例中，未注明具體條件的實驗方法，通常按常規(guī)條件，如《精編分子生物 學(xué)實驗指南》（F.M.奧斯伯，R.E.金斯頓，J.G.塞德曼等主編，馬學(xué)軍，舒躍龍的譯.北京： 科學(xué)出版社，2004)中所述的方法進(jìn)行。
[0036] 本發(fā)明運(yùn)用基因工程重組技術(shù)構(gòu)建了重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)_Sjroi，將該 重組質(zhì)粒pET28a (+)-S jPDI轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得S jPDI重組蛋白，該重 組蛋白在小鼠保護(hù)實驗中分別誘導(dǎo)35. 32%、33. 17%的減蟲率和減卵率，同時可誘導(dǎo)小鼠 體內(nèi)產(chǎn)生抗重組抗原的特異性IgG、IgGl和IgG2a抗體，并且能達(dá)到一個較高的水平。這些 實驗結(jié)果表明，本發(fā)明重組抗原具有發(fā)展為抗血吸蟲病候選疫苗及新藥靶的潛力，應(yīng)用價 值廣闊。
[0037] 實施例lSjPDI日本血吸蟲重組蛋白的克隆、表達(dá)和純化
[0038] 1.方法
[0039] 1. 1重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
[0040] 根據(jù)NCBI登錄號gi226468213的SjPDI的基因序列，設(shè)計引物，上游引物：5'-CG￡ MTTCAGTGAGGTTCTCGAACTC-3? (SEQ ID N0. 3,下劃線處為 EcoR I 酶切位點(diǎn)）；下游引物：5'C GGTCGACCTATAGATCACTCTTCTTC-3' (SEQ ID N0. 4,下劃線處為 Sal I 酶切位點(diǎn)）。以日本血 吸蟲42d蟲體的cDNA為模板（2ul)，Master Mixl2. 5ul，上下游引物各lul，ddH208. 5ul，混 勻，擴(kuò)增SjPDI基因序列中ORF片段（其氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示），PCR擴(kuò)增程序： 95°C 5min，95°C變性 30sec，55°C退火 30sec，72°C延伸 2min，共 31 個循環(huán)；最后 72°C 10min。
[0041] 凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物，將鑒定正確的產(chǎn)物純化回收，之后連接pMD19-T載體，轉(zhuǎn) 化至DH5細(xì)胞，挑取單個克隆，進(jìn)行菌液PCR鑒定，陽性克隆送上海華津公司測序。將上述測 序正確的菌液大量擴(kuò)增，提取質(zhì)粒后進(jìn)行純化回收，酶切，將帶有粘性末端的DNA片段定向 克隆到原核表達(dá)載體pET28a (+)的多克隆位點(diǎn)中，構(gòu)建成重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a (+)-S jroi， 將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中，挑取單個克隆，PCR菌液鑒定后送上海華津公司 測序。
[0042] 1. 2重組蛋白pET28a(+)_SjPDI的表達(dá)與純化
[0043] 將測序正確的pET28a(+)-Sjroi/BL21菌液轉(zhuǎn)接到500ml LB(K+)液體培養(yǎng)基中， 37°C，250rpm/min振蕩培養(yǎng)至細(xì)菌生長對數(shù)期0D6(KI = 0. 6,加入IPTG，使其終濃度為1禮， 20°C，250rpm/min，振蕩誘導(dǎo)7h。然后將菌液4°C，12000 X g離心15min，棄上清，用15ml PBS 懸浮沉淀，反復(fù)凍融3次，待完全融化后，超聲lOmin (超5s，停45s)，隨后4°C，12000 X g離 心15min，收集上清，再用10ml8mol/L尿素溶解沉淀，4?，12000Xg離心15min，收集上清。 分別取PBS和尿素溶解的上清50ul，與50yLlXSDS PAGE Loading Buffer充分混勻。沸 水煮樣5_6min，直接進(jìn)行SDS-PAGE分析。重組蛋白在大腸桿菌BL21中可溶性表達(dá)，超聲上 清按照說明書利用Ni 2+-NTAHis-Bind Resin純化得到重組蛋白。
[0044] 2.結(jié)果
[0045] 2. 1重組質(zhì)粒pET28a (+) -S jPDI的構(gòu)建及鑒定
[0046] 以日本血吸蟲42d蟲體為cDNA模板，PCR擴(kuò)增目的基因后和特異性限制內(nèi)切酶 EcoR I、Sal I將SjPDI核苷酸片段克隆至表達(dá)載體pET28a(+)中，雙酶切鑒定重組質(zhì)粒， 結(jié)果與預(yù)期DNA片段大小一致（圖1)，圖1中，M :Marker ;1 :EcoR I、sal I雙酶切重組質(zhì) 粒。酶切鑒定正確的質(zhì)粒送上海華津生物公司測序，核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示，與預(yù) 測相符。
[0047] 2. 2pET28a(+)_SjPDI在大腸桿菌中的表達(dá)與重組蛋白的純化
[0048] 重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)_SjPDI在大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中為可溶性表達(dá)， 經(jīng)純化得到了較純的重組蛋白，重組蛋白分子量為55kD(圖2)。圖2中，M:Marker ;1、2 : pET28a(+)未誘導(dǎo)、誘導(dǎo)的細(xì)菌裂解產(chǎn)物；3、4 :PET28a(+)-SjPDI未誘導(dǎo)、誘導(dǎo)的細(xì)菌裂解 產(chǎn)物；5、6 :PET28a(+)-SjPDI誘導(dǎo)7h后的超聲上清、包涵體沉淀；7 :純化后的SjH)I。
[0049] 實施例2熒光實時定量PCR分析SjPDI在蟲體不同發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄水平
[0050] 1.方法
[0051] 取凍存于液氮的7、14、21、28、35、42天以及42天雌、雄蟲體，利用Trizol提取 各期別蟲體的總 RNA，米用 Prime Script RT reagent Kit With gDNAEraser(TaKaRa) 試劑盒反轉(zhuǎn)錄成 cDNA 后利用 7500Real_Time PCR system (Applied Biosystems) and SYBR1.· Premix Ex Taq?II (Perfect Real Time) (Takara)檢測 SjPDI 在日本血吸 蟲不同發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄水平。SjPDI基因上游引物：5' -GCTCCTTGGTGTGGTCATTG-3'（SEQ IDN0·5);下游引物：5'-TTGGTAAAGCATGGGTGAAGAC-3'（SEQIDN0·6)，作為內(nèi)參對照的 NADH 脫氫酶基因的上游引物：5'-CGAGGACCTAACAGCAGAGG-3'（SEQ ID NO. 7);下游引物： 5' -TCCGAACGAACTTTGAATCC-3'（SEQ ID Ν0· 8)。50ul 反應(yīng)體系包括 25μ 1 SYBR* Premix Ex Taq? ΙΙ(2Χ)，4μ1 上下游引物（10μΜ)，1ιι1 R0X Reference Dye ΙΙ(50Χ)，4μ1 cDNA 模板，16ul ddH20。反應(yīng)程序為 95°C 30s，95°C 5s、60°C 34s(40cycles)，60°C 34s 時收集熒 光信號。利用ABI7500System Software進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算SjPDI在不 同發(fā)育時期蟲體中的表達(dá)量。
[0052] 2.結(jié)果
[0053] 以NADH脫氫酶為內(nèi)參基因，檢測SjPDI在7(1、14(1、21(1、28(1、35(1、42(1血吸蟲蟲體 及42d雌、雄蟲體中的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示，SjPDI在每個時期均有表達(dá)，其中在42d及42d 雄蟲轉(zhuǎn)錄水平較高，28d蟲體中轉(zhuǎn)錄水平最低（圖3)。
[0054] 實施例3SjPDI日本血吸蟲重組蛋白的抗原性檢測
[0055] 1. Western Blotting分析重組蛋白抗原性
[0056] Ni2+柱純化后的重組蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳，之后4°C，280mA，1. 5h轉(zhuǎn)移到硝酸 纖維素膜上，5%脫脂奶粉封閉2h，PBST洗三次后，用pET28a(+)-SjPDI重組蛋白免疫小 鼠的三免血清和健康小鼠的陰性血清分別作為一抗，室溫孵育2h，之后用辣根過氧化物酶 (HRP)標(biāo)記的山羊抗小鼠 IgG作為二抗，孵育lh，DAB作為底物觀察顯色情況，并分析重組 蛋白的抗原性。
[0057] 2. Western Blotting分析重組蛋白抗原性的結(jié)果
[0058] 結(jié)果如圖4所示，55kD處有一明顯的識別條帶，以陰性血清作為一抗時，55kD處沒 有明顯條帶,表明重組蛋白有很好的免疫原性和抗原性。圖4中，M :Marker ;1 :以重組蛋白 免疫小鼠的血清作為一抗；2 :以健康小鼠的陰性血清作為一抗。
[0059] 實施例4SjPDI的組織定位分析
[0060] 42d蟲體冰凍切片用冰凍丙酮固定30min后，10%山羊血清室溫封閉2h，PBST洗 3次，每次lOmin，之后分別用小鼠抗SjH)I的三免血清和陰性血清作為一抗，孵育2h，PBST 洗3次后用CY3標(biāo)記的山羊抗小鼠 IgG作為二抗室溫孵育2h，之后用DAPI復(fù)染5min，在熒 光顯微鏡下觀察蛋白的組織分布。
[0061] 結(jié)果：熒光組織定位結(jié)果顯示，PDI主要分布于表膜和實質(zhì)器官內(nèi)，陰性對照組無 明顯著色（圖5)。圖5中，a :以重組蛋白免疫小鼠的血清作為一抗；b :以健康小鼠的陰性 血清作為一抗。
[0062] 實施例5動物免疫保護(hù)實驗
[0063] 將30只BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組，每組15只，分別注射重組蛋白 pET28a(+)-SjPDI+206 佐劑、206 佐劑 +PBS、PBS，注射劑量為 20ug/100ul/ 只。每兩個星 期免疫一次，共免疫三次，末次免疫2周后，每只小鼠經(jīng)腹部人工感染尾蚴40±2條。感染 42d后，解剖小鼠，采用肝靜脈灌注法收集蟲體并計數(shù)，按以下公式計算減蟲率：減蟲率= (1-免疫組平均蟲數(shù)/對照組平均蟲數(shù)）X 100%。收集肝臟并稱重，加入15ml PBS充分勻 漿研磨，之后各管取出lml勻漿加入等體積10%的NaOH溶液，56°C水浴消化lh，上下顛倒 混勻后，取出50ul，在顯微鏡下計數(shù)肝組織蟲卵數(shù)，每個樣品重復(fù)三次，按以下公式計算減 卵率：減卵率=(1-免疫組EPG/對照組EPG) X 100% (EPG為平均每克肝組織中所有蟲卵 數(shù)）。
[0064] 結(jié)果：重組蛋白pET28a(+)_SjPDI誘導(dǎo)的免疫保護(hù)效果見表1。與PBS空白對照 組相比，免疫組在BALB/c小鼠中分別誘導(dǎo)了 35. 32%、33. 17%的減蟲率和減卵率。
[0065] 表1重組蛋白SjPDI誘導(dǎo)的動物免疫保護(hù)效果
[0066]

【權(quán)利要求】
1. 一種重組載體，其特征在于，包含日本血吸蟲PDI基因，該基因序列為編碼SEQ ID NO. 1所示氨基酸序列的核苷酸序列。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體的空載體為原核表達(dá) 載體pET28a (+)，所述日本血吸蟲PDI基因插入在空載體pET28a (+)的EcoR I和Sal I兩 個酶切位點(diǎn)之間。
3. -種日本血吸蟲重組抗原，其特征在于，該重組抗原由權(quán)利要求1或2所述的重組載 體經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)制得。
4. 一種包含權(quán)利要求1或2所述重組載體的宿主細(xì)胞。
5. -種日本血吸蟲重組抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 構(gòu)建含日本血吸蟲PDI基因的重組表達(dá)載體，所述基因是編碼SEQ ID NO. 1所示氨基 酸序列的日本血吸蟲PDI基因，所述重組表達(dá)載體的空載體為原核表達(dá)載體pET28a (+)，所 述日本血吸蟲PDI基因插入在空載體pET28a(+)的EcoR I和Sal I兩個酶切位點(diǎn)之間； 將所述重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入大腸桿菌宿主細(xì)胞； 培養(yǎng)包含重組表達(dá)載體的大腸桿菌宿主細(xì)胞，并在合適條件下，誘導(dǎo)該重組表達(dá)載體 表達(dá)日本血吸蟲PDI蛋白； 純化重組表達(dá)的日本血吸蟲PDI蛋白。
6. -種抗血吸蟲疫苗，其特征在于，包含權(quán)利要求3所述日本血吸蟲重組抗原。
7. -種能與權(quán)利要求3所述日本血吸蟲重組抗原特異性結(jié)合的抗體。
8. 權(quán)利要求1或2所述重組載體在制備預(yù)防或治療血吸蟲病的疫苗或藥物中的應(yīng)用。
9. 權(quán)利要求1或2所述重組載體在制備診斷血吸蟲病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
10. 權(quán)利要求1或2所述重組載體在制備蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶產(chǎn)品中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12N1/21GK104152477SQ201310173813
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2013年5月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月13日
【發(fā)明者】林矯矯, 曹曉丹, 傅志強(qiáng), 洪煬, 張旻, 韓艷輝, 王馨茁, 李長健, 伍妙梨, 郭小勇, 陸珂, 朱傳剛 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所