專(zhuān)利名稱(chēng)：一種霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用培養(yǎng)基及其制備與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用培養(yǎng)基及其制備與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中，常用于煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用培養(yǎng)基有如下4種孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、察氏瓊脂和含20%蔗糖的高滲察氏瓊脂培養(yǎng)基。孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基的配方為蛋白胨5.0g，葡萄糖10. 0g，磷酸二氫鉀I. Ogjt 酸鎂(無(wú)水)O. 5g，瓊脂20. Og,孟加拉紅O. 033g,氯霉素O. Ig,蒸餾水1000mL。該培養(yǎng)基能滿(mǎn)足環(huán)境中一般霉菌的生長(zhǎng)，也能滿(mǎn)足部分具嗜干性特點(diǎn)霉菌的生長(zhǎng)。但煙草及煙草制品中常見(jiàn)的具嗜干性特點(diǎn)的污染霉菌——局限曲霉，則不能在其上生長(zhǎng)，從而可影響待檢樣品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯(去皮切塊)300g (按GB4789. 15-2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù))(也有200g (按中國(guó)科學(xué)院微生物研究所《常見(jiàn)與常用真菌》編寫(xiě)組.常見(jiàn)與常用真菌，北京科學(xué)出版社，1973))，葡萄糖20. Og,瓊脂20. Og,氯霉素O. Ig(有的加入此化合物，有的未加入)，蒸餾水1000mL。該培養(yǎng)基能滿(mǎn)足環(huán)境中一般霉菌的生長(zhǎng)，也能滿(mǎn)足部分具嗜干性特點(diǎn)霉菌的生長(zhǎng)。但煙草及煙草制品中常見(jiàn)的具嗜干性特點(diǎn)的污染霉菌——局限曲霉，則不能在其上生長(zhǎng)，從而可影響待檢樣品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。察氏瓊脂培養(yǎng)基的配方為=NaNO33. 0g, K2HPO4 I. 0g, KC10. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，F(xiàn)eSO4 0. Olg,蔗糖20. Og,瓊脂20. Og,蒸餾水1000mL。該培養(yǎng)基能滿(mǎn)足環(huán)境中一般霉菌的生長(zhǎng)。但煙草及煙草制品中常見(jiàn)的具嗜干性特點(diǎn)的污染霉菌，如局限曲霉則不能在其上生長(zhǎng)。另外煙草及煙草制品中常見(jiàn)的污染霉菌，如匍枝根霉在其上生長(zhǎng)極弱甚至不生長(zhǎng)。(原因是其不能利用該培養(yǎng)基中的NaNO3作為生長(zhǎng)用的N源營(yíng)養(yǎng)物(中國(guó)科學(xué)院微生物研究所《常見(jiàn)與常用真菌》編寫(xiě)組.常見(jiàn)與常用真菌，北京科學(xué)出版社，1973.))。因而可影響待檢樣品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。含20%蔗糖的高滲察氏瓊脂培養(yǎng)基的配方為=NaNO3 3. Og7K2HPO4 I. 0g,KC10. 5g，MgSO4 ·7Η20 O. 5g，F(xiàn)eSO4 O. 01g，蔗糖200g，瓊脂20. 0g，蒸餾水IOOOmL0該培養(yǎng)基能滿(mǎn)足環(huán)境中具嗜干性特點(diǎn)的霉菌生長(zhǎng)，也能滿(mǎn)足環(huán)境中一般霉菌的生長(zhǎng)。但煙草及煙草制品中常見(jiàn)的污染霉菌，如匍枝根霉在其上生長(zhǎng)極弱，甚至可不生長(zhǎng)(原因同察氏瓊脂)。因而可影響待檢樣品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是針對(duì)當(dāng)前國(guó)內(nèi)外暫未建立煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)方法，更無(wú)適用于煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的現(xiàn)狀，研制一種新的、完全能適用于煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基，從而解決了這一檢驗(yàn)領(lǐng)域的技術(shù)難題，為建立我國(guó)煙草行業(yè)的煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)方法奠定基礎(chǔ)。本發(fā)明首先提供了一種適用于煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基，為NaCl (氯化鈉)添加濃度為10-50g/1000ml的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。較佳的，所述霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用培養(yǎng)基中，NaCl添加濃度為25-35g/1000ml培養(yǎng)基，最佳為30g/1000ml培養(yǎng)基。進(jìn)一步的，除NaCl外，每IOOOmL本發(fā)明的培養(yǎng)基還含有下列組分馬鈴薯200_300g，葡萄糖15_25g, 瓊脂15_25g，氯霉素0-0. lg，蒸懼水補(bǔ)足培養(yǎng)基總體積至1000mL。最佳的，本發(fā)明的霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用培養(yǎng)基中，每IOOOmL培養(yǎng)基含有下列組分馬鈴薯200g葡萄糖20. OgNaC130. Og瓊脂16. Og氯霉素O. Ig蒸餾水補(bǔ)足培養(yǎng)基總體積至1000mL。本發(fā)明的霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用培養(yǎng)基的制備方法如下將馬鈴薯去皮切塊，加蒸餾水IOOOmL,煮沸l(wèi)Omin，后用紗布過(guò)濾，按配比加入葡萄糖、NaCl和瓊脂，補(bǔ)加蒸餾水至IOOOmL,加熱溶化，分裝后滅菌，倒平板前，按配比將氯霉素加入培養(yǎng)基中。氯霉素加入培養(yǎng)基的方法可先用少量乙醇溶解氯霉素后加入培養(yǎng)基。本發(fā)明的培養(yǎng)基特別適用于煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量的檢驗(yàn)。本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的霉菌培養(yǎng)基，有的雖能滿(mǎn)足煙草及煙草制品中一般霉菌的生長(zhǎng)，但卻不能滿(mǎn)足煙草及煙草制品中某些具嗜干性特點(diǎn)霉菌的生長(zhǎng)(如馬鈴薯葡萄糖瓊脂、孟加拉紅瓊脂、察氏瓊脂培養(yǎng)基上局限曲霉不能生長(zhǎng));有的培養(yǎng)基，如含20%蔗糖的高滲察氏瓊脂培養(yǎng)基，雖能滿(mǎn)足煙草及煙草制品中具嗜干性特點(diǎn)霉菌的生長(zhǎng)，也能滿(mǎn)足大多普通霉菌的生長(zhǎng)，但煙草及煙草制品中常見(jiàn)的污染霉菌——匍枝根霉在其上生長(zhǎng)極弱，甚至不生長(zhǎng)(該菌在察氏瓊脂上生長(zhǎng)情況也是如此，見(jiàn)下實(shí)施例子和文獻(xiàn))。對(duì)此，本發(fā)明根據(jù)煙草及煙草制品中常見(jiàn)污染霉菌的營(yíng)養(yǎng)需求及生理特點(diǎn)，選用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基(其營(yíng)養(yǎng)成分能滿(mǎn)足一般霉菌生長(zhǎng)需求)，同時(shí)在其中加入一定量的NaCl，以適當(dāng)提高培養(yǎng)基的滲透壓(即達(dá)到既不影響煙草及煙草制品中一般霉菌生長(zhǎng)，又能滿(mǎn)足具嗜干性特點(diǎn)霉菌生長(zhǎng)所需的滲透壓)，這樣的嘗試，取得了理想的試驗(yàn)結(jié)果，從而解決了煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)領(lǐng)域的一個(gè)技術(shù)難題。與以往常用的霉菌培養(yǎng)基相比，采用本發(fā)明的培養(yǎng)基不僅具有檢驗(yàn)霉菌菌相更全面、而且具有獲得霉菌數(shù)量結(jié)果更準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。


圖I局限曲霉、產(chǎn)黃青霉和總狀毛霉在孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況圖2局限曲霉、產(chǎn)黃青霉和總狀毛霉在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況圖3局限曲霉、產(chǎn)黃青霉和總狀毛霉在本發(fā)明培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況附圖標(biāo)記I :總狀毛霉2 :產(chǎn)黃青霉·3:局限曲霉
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)特定的具體實(shí)例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說(shuō)明書(shū)所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。本發(fā)明還可以通過(guò)另外不同的具體實(shí)施方式
加以實(shí)施或應(yīng)用，本說(shuō)明書(shū)中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)也可以基于不同觀(guān)點(diǎn)與應(yīng)用，在沒(méi)有背離本發(fā)明的精神下進(jìn)行各種修飾或改變。實(shí)施例I按下列配方配制培養(yǎng)基馬鈴薯200g葡萄糖20. OgNaC130. Og瓊脂16. Og氯霉素O. Ig蒸餾水補(bǔ)足1000mL。培養(yǎng)基配制方法將馬鈴薯去皮切塊，加IOOOmL蒸餾水，煮沸l(wèi)Omin。用紗布過(guò)濾，加入葡萄糖、NaCl和瓊脂，補(bǔ)加蒸餾水至IOOOmL,加熱溶化，分裝后，121°C滅菌20min。倒平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中。實(shí)施例2按下列配方配制培養(yǎng)基馬鈴薯300g葡萄糖15. OgNaC125. Og瓊脂25. Og蒸餾水補(bǔ)足lOOOmL。培養(yǎng)基配制方法將馬鈴薯去皮切塊，加IOOOmL蒸懼水,煮沸l(wèi)Omin。用紗布過(guò)濾，加入葡萄糖、NaCl和瓊脂，補(bǔ)加蒸餾水至IOOOmL,加熱溶化，分裝后，121°C滅菌20min，倒平板。實(shí)施例3按下列配方配制培養(yǎng)基馬鈴薯200g葡萄糖25. Og
NaC135. Og瓊脂15. Og氯霉素O. Ig蒸餾水補(bǔ)足lOOOmL。培養(yǎng)基配制方法同實(shí)施例I。實(shí)施例48種試驗(yàn)霉囷在6種霉囷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況以煙草及煙草制品中常見(jiàn)的8種污染霉菌作為試驗(yàn)菌，并選擇6種常用的霉菌培 養(yǎng)基作為試驗(yàn)用的候選培養(yǎng)基(包括實(shí)施例I制備的培養(yǎng)基(以下稱(chēng)為I號(hào)瓊脂培養(yǎng)基))，采用霉菌三點(diǎn)接種法接種，經(jīng)28°C培養(yǎng)6-9d后，觀(guān)察各試驗(yàn)菌在上述6種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表I表I. 8種試驗(yàn)霉菌在6種常用霉菌培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況
權(quán)利要求
1.一種霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基，為NaCl添加濃度為10-50g/1000ml的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。
2.如權(quán)利要求I所述霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基，其特征在于，所述NaCl添加濃度為25-35g/1000ml 培養(yǎng)基。
3.如權(quán)利要求I所述霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基，其特征在于，除NaCl外，每IOOOmL所述培養(yǎng)基還含有下列組分 馬鈴薯200-300g， 葡萄糖15-25g， 瓊脂 15-25g， 氯霉素0-0. Ig, 蒸餾水補(bǔ)足培養(yǎng)基總體積至1000mL。
4.如權(quán)利要求I所述霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基，其特征在于，每IOOOmL所述培養(yǎng)基中含有下列組分 馬鈴薯200g 葡萄糖20. Og NaC130. Og 瓊脂16. Og 氯霉素O. Ig 蒸餾水補(bǔ)足培養(yǎng)基總體積至1000mL。
5.如權(quán)利要求1-3任一權(quán)利要求所述培養(yǎng)基用于煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基及其應(yīng)用。本發(fā)明的霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基，為NaCl添加濃度為10-50g/1000ml的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。本發(fā)明的霉菌數(shù)量檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基既不影響煙草及煙草制品中一般霉菌生長(zhǎng)，又能滿(mǎn)足具嗜干性特點(diǎn)霉菌生長(zhǎng)的需求，特別適合煙草及煙草制品中霉菌數(shù)量檢驗(yàn)。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK102943105SQ20121038240
公開(kāi)日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2012年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月10日
發(fā)明者林華清, 沙云菲, 戚大偉, 吳達(dá) 申請(qǐng)人:上海煙草集團(tuán)有限責(zé)任公司