一種青霉菌核的平板培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種青霉菌核的平板培養(yǎng)方法。本發(fā)明所使用的菌種是湯姆青霉PT95菌株；培養(yǎng)基配方為：NaNO3 2.9～3.1g、K2HPO4 0.95～1.05g、KCl 0.48～0.52g、FeSO4·7H2O0.009～0.011g、麥芽糖29～31g、瓊脂15～20g、蒸餾水1000mL；培養(yǎng)步驟為：接種物的制備、培養(yǎng)基的配制與倒平板、接種與培養(yǎng)、菌核的分離與收集。本發(fā)明培養(yǎng)方法的優(yōu)點(diǎn)：平板培養(yǎng)物菌核密度大、產(chǎn)量高，菌核產(chǎn)量最高可達(dá)49.5mg/mL培養(yǎng)基，且易收集分離。
【專利說(shuō)明】
一種青霉菌核的平板培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及霉菌的菌核培養(yǎng)方法，具體是一種青霉菌核的平板培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]青霉菌核是青霉菌絲體聚集形成的堅(jiān)硬的休眠體，是其生活史中的一種重要的、常見的結(jié)構(gòu)。產(chǎn)菌核青霉具有一些獨(dú)特的生物學(xué)特性而表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，例如，可以溶解磷來(lái)生產(chǎn)菌肥，能拮抗土傳性植物菌核病病原菌，能降解土壤中的毒植物素酚酸，可以催化合成孕二烯酮中間體，含有抗腫瘤活性成分等。因此，為了研究產(chǎn)菌核青霉的生物學(xué)特性、菌核的分化發(fā)育和相關(guān)菌核產(chǎn)品的應(yīng)用開發(fā)，需要建立能夠獲得大量菌核的培養(yǎng)方法。
[0003]目前培養(yǎng)菌核的方法主要是傳統(tǒng)的查氏平板培養(yǎng)法，該方法得到的培養(yǎng)物由大量的菌絲體、分生孢子和少量的菌核組成，菌核的產(chǎn)量低，收集困難。而本發(fā)明提供的方法不僅能提高培養(yǎng)物中菌核的比例和密度、增加產(chǎn)量，而且還便于分離收集菌核，是一種較好的青霉菌核平板培養(yǎng)的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題提供一種青霉菌核的平板培養(yǎng)方法。該方法不僅能提高培養(yǎng)物中菌核的比例和密度、增加產(chǎn)量，同時(shí)還便于菌核的分離收集。
[0005]本發(fā)明所使用的一株青霉PT95菌株是從山西省汾陽(yáng)市混交林土壤中分離到的，其形態(tài)特征為:帚狀枝為嚴(yán)格單輪生，瓶梗3?8個(gè)輪生，安瓿形;分生孢子鏈狀排列，橢圓形；菌核球形或不規(guī)則形，菌核直徑約300μπι，粉紅至橙紅色。結(jié)合形態(tài)特征和rDNA-1TS序列測(cè)定(NCBI登錄號(hào)KC966728)將其鑒定為湯姆青霉(Penicillium thomii)，命名為“湯姆青霉卩丁95菌株”。該菌株的生物學(xué)特性和鑒定相關(guān)內(nèi)容見:(1)微生物學(xué)通報(bào)，1998，25(6):319-321; (2)微生物學(xué)報(bào)，1999，39(2): 148-153; (3)World Journal of Microb1logyB1technology，2014，30(5):1519-1525。
[0006]本發(fā)明所提供的一種青霉菌核平板培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0007]I)接種物的制備:將在查氏斜面上的菌株P(guān)T95的菌核0.1g經(jīng)研磨處理后，用10mL無(wú)菌水制成lmg/ mL菌核懸液，作為接種物；
[0008]2)平板培養(yǎng)基制備:培養(yǎng)基配方為NaNO3 2.9?3.IgJ2HPO4 0.95?1.05g、KCl0.48?0.52g、FeS04.7H20 0.009?0.0llg、麥芽糖29?31g、瓊脂 15?20g、蒸餾水100mL;按常規(guī)方法制備，滅菌后倒平板備用；
[0009]3)接種與培養(yǎng):將ο.lmL或ο.2mL接種物涂布于平板培養(yǎng)基上，并將涂布好的平板倒置于27?30 °C培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)；
[0010]4)菌核的分離與收集:培養(yǎng)20?23天后，用自來(lái)水將平板上的培養(yǎng)物沖洗下來(lái)，去掉漂在上面的菌絲體和分生孢子，將沉淀在下面的菌核收集后置55?65°C烘箱烘至恒重，計(jì)算菌核的產(chǎn)量。
[0011]所述培養(yǎng)基優(yōu)選配方為NaNO33g,K2HPO4 lg、KCl 0.5g,FeSO4.7H20 0.0lg、麥芽糖30g、瓊脂18g、蒸饋水lOOOmL。
[0012]與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明提供的菌核平板培養(yǎng)方法所獲得的青霉平板培養(yǎng)物菌核密度大、產(chǎn)量高(菌核產(chǎn)量最高可達(dá)49.5mg/mL培養(yǎng)基)，還便于分離收集。
【具體實(shí)施方式】
[0013]實(shí)施例1
[0014]培養(yǎng)基:配方為NaNO32.9g^K2HPO4 0.95g、KCl 0.48g、FeS04.7H20 0.009g、麥芽糖29g、瓊脂15g、蒸饋水lOOOmL。
[0015]菌種:湯姆青霉菌株P(guān)T95，保持在查氏斜面上。
[0016]步驟包括:
[0017]I)接種物的制備:將在查氏斜面上的菌株P(guān)T95的菌核0.1g經(jīng)研磨處理后，用10mL無(wú)菌水制成lmg/ mL菌核懸液，作為接種物；
[0018]2)平板培養(yǎng)基制備:將滅菌的培養(yǎng)基趁熱倒入直徑90mm的培養(yǎng)皿中(每皿30mL培養(yǎng)基)，制成33只平板；
[0019]3)接種與培養(yǎng):每只平板加0.1mL接種物，用無(wú)菌玻璃刮棒涂布均勻，并將涂布好的平板倒置于27°C培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)23天；
[0020]4)菌核的分離與收集:將菌株P(guān)T95在平板上形成的培養(yǎng)物用自來(lái)水沖洗下來(lái)，稍加沉淀，去掉漂在上面的菌絲體和分生孢子，將沉淀在下面的菌核收集后置55°C烘箱烘至恒重。
[0021 ]經(jīng)稱重計(jì)算，33只平板共培養(yǎng)獲得46.5g干菌核，菌核產(chǎn)量為46.5mg/mL培養(yǎng)基。
[0022]實(shí)施例2
[0023]培養(yǎng)基:配方為NaNO33.1g^K2HPO4 1.05g、KCl 0.52g、FeS04.7H20 0.0llg、麥芽糖31g、瓊脂20g、蒸饋水1000mL。
[0024]菌種:同實(shí)施例1。
[0025]步驟包括:
[0026]I)接種物的制備:將在查氏斜面上的菌株P(guān)T95的菌核0.1g經(jīng)研磨處理后，用10mL無(wú)菌水制成lmg/ mL菌核懸液，作為接種物；
[0027]2)平板培養(yǎng)基制備:將滅菌的培養(yǎng)基趁熱倒入直徑120mm的培養(yǎng)皿中(每皿83.3mL培養(yǎng)基)，制成12只平板；
[0028]3)接種與培養(yǎng):每只平板加0.2mL接種物，用無(wú)菌玻璃刮棒涂布均勻，并將涂布好的平板倒置于30°C培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)20天；
[0029]4)菌核的分離與收集:將菌株P(guān)T95在平板上形成的培養(yǎng)物用自來(lái)水和玻璃刮棒沖洗下來(lái)，稍加沉淀，去掉漂在上面的菌絲體和分生孢子，將沉淀在下面的菌核收集后置65 V烘箱烘至恒重。
[0030]經(jīng)稱重計(jì)算，12只平板共培養(yǎng)獲得45.5g干菌核，菌核產(chǎn)量為45.5mg/mL培養(yǎng)基。
[0031]實(shí)施例3
[0032]培養(yǎng)基:配方為NaNO33g,K2HPO4 lg、KCl 0.5g,FeSO4.7H20 0.01g、麥芽糖3g、瓊脂18g、蒸饋水1000mL。
[0033]菌種:同實(shí)施例1。
[0034]步驟包括:
[0035]I)接種物的制備:將在查氏斜面上的菌株P(guān)T95的菌核0.1g經(jīng)研磨處理后，用10mL無(wú)菌水制成lmg/ mL菌核懸液，作為接種物；
[0036]2)平板培養(yǎng)基制備:將滅菌的培養(yǎng)基趁熱倒入直徑90mm的培養(yǎng)皿中(每皿30mL培養(yǎng)基)，制成33只平板；
[0037]3)接種與培養(yǎng):每只平板加0.1mL接種物，用無(wú)菌玻璃刮棒涂布均勻，并將涂布好的平板倒置于28°C培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)21天；
[0038]4)菌核的分離與收集:將菌株P(guān)T95在平板上形成的培養(yǎng)物用自來(lái)水沖洗下來(lái)，稍加沉淀，去掉漂在上面的菌絲體和分生孢子，將沉淀在下面的菌核收集后置60°C烘箱烘至恒重。經(jīng)稱重計(jì)算，33只平板共培養(yǎng)獲得49.5g干菌核，菌核產(chǎn)量為49.5mg/mL培養(yǎng)基。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種青霉菌核平板培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)接種物的制備:將在查氏斜面上的湯姆青霉PT95菌株的菌核0.1g經(jīng)研磨處理后，用I OOmL無(wú)菌水制成lmg/ mL菌核懸液，作為接種物； 2)平板培養(yǎng)基制備:培養(yǎng)基配方為NaNO32.9?3.1g、K2HP04 0.95?I.05g、KCl 0.48—0.52g、FeS04.7H20 0.009?0.0llg、麥芽糖29?31g、瓊脂 15?20g、蒸餾水100mL;按常規(guī)方法制備，滅菌后倒平板備用； 3)接種與培養(yǎng):將0.1mL或0.2mL接種物涂布于平板培養(yǎng)基上，并將涂布好的平板倒置于27?30 °C培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)； 4)菌核的分離與收集:培養(yǎng)20?23天后，用自來(lái)水將平板上的培養(yǎng)物沖洗下來(lái)，去掉漂在上面的菌絲體和分生孢子，將沉淀在下面的菌核收集后置55?65°C烘箱烘至恒重，計(jì)算菌核的產(chǎn)量。2.如權(quán)利要求1所述的一種青霉菌核平板培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)基配方為:NaNO3 3g,K2HPO4 lg、KCl 0.5g、FeS(k.7H20 0.01g、麥芽糖30g、瓊脂 18g、蒸餾水100mL0
【文檔編號(hào)】C12R1/80GK105838628SQ201610417154
【公開日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年6月14日
【發(fā)明人】王琪, 韓建榮
【申請(qǐng)人】山西大學(xué)