專利名稱：一株斜臥青霉及其培養(yǎng)方法與在轉(zhuǎn)化甾體藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株能將去氫表雄酮有效轉(zhuǎn)化為1 α -羥基去氫表雄酮的菌株斜臥青 霉(Penicillium deCumbens)UC086及其培養(yǎng)方法與在轉(zhuǎn)化甾體藥物方面中的應(yīng)用，屬于微 生物技術(shù)領(lǐng)域。留體藥物具有抗感染、抗病毒和抗腫瘤等作用，被廣泛用于治療皮膚病、風(fēng)濕病、 心血管病、癌癥等，已成為人類藥物中消費(fèi)量僅次于抗生素的藥物。留體藥物結(jié)構(gòu)十分復(fù) 雜，含有多個(gè)不對稱中心，尤其是它的活性高低主要取決于取代基，而且往往是特定位點(diǎn)的 取代基，如Cla、Clli3位上的羥基以及C1、C2位的雙鍵等。目前利用全合成的方法生產(chǎn)甾 體藥物比較困難，通常以具有留體母核結(jié)構(gòu)的天然產(chǎn)物為原料采用半合成的方法修飾后制 得。去氫表雄酮(dehydro印iandrosterone，DHEA)是一種具有留體母核結(jié)構(gòu)的C19類 固醇化合物(結(jié)構(gòu)式如下)化學(xué)名稱為3 β -羥基雄甾-5-烯-17-酮，分子式為C19H28O2,它是合成許多甾體 藥物的重要中間體。例如，在母核的A環(huán)上進(jìn)行羥基化修飾的得到的1 α -羥基去氫表雄酮
(結(jié)構(gòu)式如下)
權(quán)利要求
1.一株斜臥青霉(Penicillium decumbens)UC086菌株，該菌株在2010年8月9日保 藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號CGMCC 4075。
2.權(quán)利要求1所述菌株斜臥青霉(Penicilliumdecumbens) UC086的培養(yǎng)方法，步驟如下(1)取菌種保藏號為CGMCC4075的斜臥青霉UC086接種于活化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件溫 度27 ^°C，搖床轉(zhuǎn)速120 200r/min，培養(yǎng)1 2天，得活化后的斜臥青霉UC086 ；(2)取活化后的斜臥青霉UC086接種于種子培養(yǎng)基中，于25 35°C、100 300r/min 的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)2 4天，過濾，即得。
3.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(1)中的活化培養(yǎng)基組分如 下去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL，pH值自然。
4.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟O)中的種子培養(yǎng)基組分如 下碳源1 5g/L，氮源1 5g/L，無機(jī)鹽0. 01 2g/L ；碳源選自葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳 糖、可溶性淀粉之一；氮源選自酵母浸粉、蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉膏、玉米漿、硝酸鈉、硫酸 銨之一；無機(jī)鹽選自硫酸鎂、硫酸亞鐵、磷酸氫二鉀、氯化鈣、硫酸鋅、硫酸銅、硫酸錳之一； PH 5.0 9.0 ；優(yōu)選的，種子培養(yǎng)基組分如下葡萄糖3 5g/L，酵母浸粉3-5g/L，硫酸鎂為 0. 1 lg/L。
5.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(2)中種子培養(yǎng)基的接種量為 5 X IO6 lX10、/mL。
6.權(quán)利要求1所述斜臥青霉(Penicilliumdecumbens)UC086在利用去氫表雄酮生產(chǎn) 1 α-羥基去氫表雄酮方面的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟如下(1)取經(jīng)培養(yǎng)后的斜臥青霉UC086，接入生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基，培養(yǎng)1 2天，然后向生物 轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中添加底物溶液，使培養(yǎng)基中去氫表雄酮終濃度達(dá)到0. 2 2g/L，25 35°C、 100 300r/min培養(yǎng)3 5天，得誘導(dǎo)培養(yǎng)液；(2)將步驟(1)制得的誘導(dǎo)培養(yǎng)液與有機(jī)溶劑混合萃取30 60min，將萃取物加入柱 層析硅膠進(jìn)行吸附，干法上樣，柱層析分離，收集組分進(jìn)行TLC檢測，目標(biāo)組分濃縮，再進(jìn)行 1 3次柱層析分離，目標(biāo)組分濃縮即得1 α -羥基去氫表雄酮。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟(1)中的生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，碳源 選自葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、乳糖、檸檬酸之一，添加量為1 5g/L;氮源選自 蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、玉米漿、硫酸銨、硝酸鈉之一，添加量為1 5g/L;無機(jī)鹽選自硫 酸亞鐵、硫酸鋅、硫酸銅、氯化鉀、硫酸鎂、氯化鈣、硫酸錳之一，添加量為0. 0001 2g/L，pH 5. 0 9. 0 ；優(yōu)選的，上述生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基組分如下蔗糖為3 5g/L，硝酸鈉為3 5g/L， 硫酸鎂為0. 1 lg/L，硫酸錳為0. 0001 0. 01g/L，硫酸亞鐵為0. 0001 0. 01g/L。
9.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟(1)中的底物溶液通過如下步驟配制用溶劑溶解去氫表雄酮，按每克去氫表雄酮溶解于10 20毫升溶劑計(jì)；優(yōu)選的，溶劑 選自甲醇、乙醇、丙酮、環(huán)糊精之一。
10.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟(2)中的機(jī)溶劑選自二氯甲烷、乙 酸乙酯、三氯甲烷、丙酮；柱層析分離采用200 300目硅膠H進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑由乙酸乙酯和乙醚按體積比15 25 1配制而成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一株能將去氫表雄酮有效轉(zhuǎn)化為1α-羥基去氫表雄酮的菌株斜臥青霉(Penicillium decumbens)UC086及其培養(yǎng)方法與轉(zhuǎn)化甾體藥物中的應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。該菌株在2010年8月9日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號CGMCC NO.4075。本發(fā)明所述的菌株具有生長迅速，易于培養(yǎng)的特點(diǎn)，該菌株可高效的將去氫表雄酮轉(zhuǎn)化為1α-羥基去氫表雄酮，并且產(chǎn)物易于提取，終產(chǎn)物純度高。經(jīng)檢測，1α-羥基去氫表雄酮的生物轉(zhuǎn)化率為20～50％，產(chǎn)物提取得率75～80％，1α-羥基去氫表雄酮產(chǎn)品純度大于99.5％。
文檔編號C12N1/14GK102127511SQ20101054838
公開日2011年7月20日 申請日期2010年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月17日
發(fā)明者劉佩卉, 劉新利, 張妍妍, 趙林 申請人:山東輕工業(yè)學(xué)院