專利名稱：一種微小rna用于調(diào)控pten基因表達(dá)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及基因表達(dá)調(diào)控技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及微小RNA用于調(diào)控PTEN基因表達(dá)。
背景技術(shù)：
基因于1997年被發(fā)現(xiàn)，是一種具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因(Li J, YenC， Liaw Dj et al. PTENj a putative protein tyrosine pho sphatase gene mutatedin human brain, breast, and prostate cancer. Science 1997，275 (5308):1943-7)，通過(guò)負(fù)性調(diào)控PI3K/Akt通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖(Wu H，Goel V，Haluska FG. PTENsignaling pathways in melanoma. Oncogene 2003，22 (20) :3113-22)。研究發(fā)現(xiàn)，在多種腫瘤中PTEN基因有不同程度的突變或丟失，如結(jié)直腸癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、甲狀腺癌及黑色素瘤等。PTEN分子表達(dá)缺失與結(jié)直腸癌的肝轉(zhuǎn)移以及患者的生存率顯著相關(guān)(Sawai H， Yasuda A, Ochi N， et al. Loss of PTEN expression is associated withcolorectal cancer liver metastasis and poor patient survival. BMC Gastroenterol2008,8:56)。因此，調(diào)控PI3K/PTEN/AKT信號(hào)通路將成為一種潛在的抗腫瘤治療途徑(Zhang Jj Roberts TM， Shivdasani RA. Targeting PI3K signaling as a therapeuticapproach for colorectal cancer. Gastroenterology 2011，141(I) :50_61)o是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)于真核細(xì)胞中的一類長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼小分子RNA，可通過(guò)與靶mRNA的3’ -UTR互補(bǔ)結(jié)合在轉(zhuǎn)錄后水平使其降解，或者與之不完全互補(bǔ)結(jié)合在翻譯水平抑制蛋白合成，從而在基因表達(dá)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。越來(lái)越多的研究證實(shí)，miRNA在腫瘤組織中表達(dá)異常，與腫瘤發(fā)生發(fā)展及患者治療反應(yīng)密切相關(guān)；如hsa-miR-21在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)上調(diào)，與結(jié)直腸癌 M分期及患者預(yù)后密切相關(guān)(SchetterAJj Leung SYj Sohn JJj et al. MicroRNA expression profiles associated withprognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma. JAMA 2008， 299(4):425-36)。近期研究還發(fā)現(xiàn)，hsa-miR-21能抑制PTEN基因在人肝癌組織中的表達(dá)(MengF， Henson Rj Wehbe-Janek H， et al. MicroRNA-21 regulates expression of thePTEN tumor suppressor gene in human hepatocellular cancer. Gastroenterology2007，133(2) :647-58)。這種在腫瘤組織中表達(dá)異常的miRNA有的已被證實(shí)具有顯著的抗腫瘤活性Thorsen SB，et al. The Therapeutic Potential of MicroRNAs inCancer. Cancer J 2012，18(3) :275-84.，如 miR-145 和 miR_33a 能抑制 HCT-116 結(jié)直腸癌細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)Ibrahim AF，et al. MicroRNA replacement therapy formiR-145 and miR_33a is efficacious in a model of colon carcinoma. Cancer Res2011,71:5214-5224.。另外，miR-122由于能調(diào)控丙型肝炎病毒RNA的豐度，其互補(bǔ)序列用于治療丙型肝炎病毒感染患者已經(jīng)進(jìn)入II期臨床試驗(yàn)Janssen HLj ReesinkHWjZeuzem S， et al. A randomized, double-blind, placebo (plb) controlled safetyand anti-viral proof of concept study of miravirsen (MIR), an oligonucleotidetargeting miR-122, in treatment naBve patients with genotype I (gtl) chronicHCV infection. Hepatology. 2011:1430A.,顯不出miRNA作為一種極其重要的基因表達(dá)調(diào)控因子和作用靶標(biāo)，具有潛在的治療作用和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。雖然本領(lǐng)域中已知某些微小RNA與腫瘤具有一定的相關(guān)性，但本領(lǐng)域中已知的miRNA種類繁多，功能各異，要從中篩選出與腫瘤相關(guān)且可作為發(fā)病、治療方案的選擇及預(yù)后的特定miRNA存在較大難度。目前，本領(lǐng)域中尚無(wú)miR-20b和PTEN基因相關(guān)性的報(bào)道
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種微小RNA對(duì)PTEN基因表達(dá)的調(diào)控，特別是miR-20b用于調(diào)控PTEN基因表達(dá)。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)的一種微小RNA用于調(diào)控PTEN基因表達(dá)，其特征在于，所述的微小RNA為包含以下序列的核酸或者功能片段或變體5’ -caaagugcucauagugcagguag- 3f 優(yōu)選地，所述微小RNA能與PTEN基因3’ -UTR結(jié)合，抑制PTEN基因表達(dá)。優(yōu)選地，所述微小RNA為miR_20b。優(yōu)選地，所述微小RNA通過(guò)化學(xué)合成得到。優(yōu)選地，所述微小RNA來(lái)自生物體樣本，包括組織、細(xì)胞和外周血。本發(fā)明微小RNA的獲取來(lái)源可以是來(lái)自化學(xué)合成和/或存在該基因序列的細(xì)胞、組織，組織可以選自外周血、體液、腔道的脫落物、病變組織，以及用這些組織制成的石蠟塊、石蠟切片。在本文中，術(shù)語(yǔ)“樣本”指的是潛在可能含有微小RNAmiR_20b的離體循環(huán)血樣品，優(yōu)選是來(lái)自人的樣品。盡管用抽提出血總RNA的純化樣品也能夠在本發(fā)明中使用，但是，本發(fā)明的樣品優(yōu)選是未經(jīng)提純的、含有血總RNA的裂解液體樣品。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉將固體的有核血細(xì)胞裂解或抽提、純化并保持其中miRNA成分不被降解的細(xì)胞分子生物學(xué)技術(shù)。本發(fā)明的樣品可以是經(jīng)過(guò)處理的樣品，如稀釋處理、血細(xì)胞裂解處理以及PCR擴(kuò)增等，也可以是未經(jīng)處理的樣品。經(jīng)過(guò)處理的樣品可以進(jìn)一步純化，以富集miRNA。在本文中，術(shù)語(yǔ)“miR_20b”指的是指的是包含序列“caaagugcucauagugcagguag”或其同源序列的微小RNA。本領(lǐng)域中已知各種來(lái)源的miR-20b，例如人、黑猩猩、馬、雞等，這些同源序列均包含在本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“miR-20b”中。本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)中還包含上述天然存在的miR-20b序列中經(jīng)過(guò)取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸，或經(jīng)過(guò)生物化學(xué)修飾，且仍然具有生物學(xué)活性的衍生RNA。發(fā)明人采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定了 6例結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中miRNA的表達(dá)；統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，hsa-miR-20b在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組織，結(jié)果如圖I所示。本發(fā)明人采用生物信息學(xué)軟件miRanda和TargetScan聯(lián)合預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，hsa-miR-20b可能與PTEN基因3’-UTR結(jié)合，結(jié)果如圖2所示。隨后，發(fā)明人采用體外生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)證實(shí)，hsa-miR-20b可與PTEN基因3’-UTR結(jié)合，從而抑制PTEN分子表達(dá)，可通過(guò)調(diào)控PTEN信號(hào)通路和/或miR-20b表達(dá)及功能以發(fā)揮抗腫瘤作用。


下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述
圖I為為結(jié)直腸癌組織中和正常組織miR-20b表達(dá)量測(cè)定結(jié)果；
圖2 A為miRanda軟件預(yù)測(cè)結(jié)果；圖2 B為TargetScan軟件預(yù)測(cè)結(jié)果；
圖3為PTEN基因3’ -UTR的PCR擴(kuò)增結(jié)果；
圖4為PTEN/3’ -UTR/pGEM-T重組載體酶切驗(yàn)證結(jié)果；
圖5為PTEN/3’ -UTR/pGEM-T重組載體測(cè)序驗(yàn)證結(jié)果；
圖6為PTEN/3’ -UTR/ pGL-3重組載體酶切驗(yàn)證結(jié)果；
圖7為PTEN/3’ -UTR/ pGL-3重組載體測(cè)序驗(yàn)證結(jié)果；
圖8為hsa-miR-20b對(duì)PTEN/3’ -UTR/ pGL-3重組載體表達(dá)活性的抑制作用。請(qǐng)?zhí)峁┖诎讏D
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)上述方案做進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例是用于說(shuō)明本發(fā)明而不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中采用的實(shí)施條件可以根據(jù)具體廠家的條件做進(jìn)一步調(diào)整，未注明的實(shí)施條件通常為常規(guī)實(shí)驗(yàn)中的條件。一、試劑與材料 I、試劑
胎牛血清(Hyclone，美國(guó))；完全培養(yǎng)基每升RPMI1640 (Hyclone，美國(guó))中，添加胎牛血清100ml、L-谷氨酰胺O. 15g、2-巰基乙醇10.0 ml (5X l(T3mol/L);脂質(zhì)體2000(Invitrogen,美國(guó));青霉素、鏈霉素(上海生工生物技術(shù)有限公司);TRIzol (Invitrogen,美國(guó));瓊脂糖(LP0028A，Oxoid Ltd,英國(guó));凝膠電泳加樣液和溴化乙錠(EtBr)(上海生工生物技術(shù)有限公司);膠回收DNA試劑盒和質(zhì)粒抽提試劑盒(Axygen,美國(guó));鹿糖、Triton-100、MgCl2*6H20、三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)、鹽酸、EDTA、NaCl、苯酚、氯仿、異戊醇、十二烷基磺酸鈉(SDS)和無(wú)水乙醇等實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純或優(yōu)級(jí)純；雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒(Promega,美國(guó)Xhsa-miR-ZOb及其實(shí)時(shí)突光定量試劑盒(上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司);TaqDNA聚合酶、M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶、油a I限制性內(nèi)切酶(MBI，美國(guó))；T4 DNA連接酶(Takar a，日本)；PCR 引物(Invitrogen, PAGE 級(jí))。pGEM-T、pGL-3> pRL-TK 載體(Promega,美國(guó))。、組織樣本
收集6例結(jié)直腸癌患者的新鮮手術(shù)組織樣本，包括癌組織和遠(yuǎn)端正常腸組織(離癌邊沿5cm)。所有患者經(jīng)HE染色、病理診斷確認(rèn)為結(jié)直腸癌；術(shù)前未接受化療或放療。、細(xì)胞株
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞株CHO (ATCC，美國(guó));大腸桿菌TPlO (Novagen，美國(guó))。細(xì)胞株經(jīng)檢測(cè)，無(wú)支原體污染。、儀器
CO2培養(yǎng)箱、低溫高速離心機(jī)、常速離心機(jī)(Thermo,德國(guó))；倒置顯微鏡(Olympus,日本)；微弱發(fā)光測(cè)量?jī)x(BPCL-K，中科院生物物理研究所)；PCR儀(S1000，Bio-Rad，美國(guó))；電泳儀(Bio-Rad,美國(guó))；微量定量分光光度計(jì)(Alpha Innotech,美國(guó))；凝膠成像系統(tǒng)(GeneGenius, SYNGENE,英國(guó))。二、實(shí)驗(yàn)方法I、細(xì)胞培養(yǎng)
采用含10% FCS的RPMI 1640培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)液中含有100kU/L青霉素、IOOmg/L鏈霉素，培養(yǎng)條件為37° C、5% CO2、飽和濕度。CHO細(xì)胞株貼壁生長(zhǎng)，傳代時(shí)用O. 25%胰酶消化。間隔2-3天更換新鮮培養(yǎng)基。、實(shí)時(shí)熒光定量分析hsa-miR_20b表達(dá)量
采用Trizol試劑按照使用說(shuō)明書從6對(duì)結(jié)直腸癌和正常組織樣本中提取總RNA。實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒測(cè)定RNA樣本中hsa-miR-20b的表達(dá)量；以U6 RNA為內(nèi)對(duì)照。、miRNA作用靶位點(diǎn)的預(yù)測(cè)米用生物信息學(xué)軟件 miRanda (www.microRNA.org)和 TargetScan (http://www.targetscan. org/)預(yù)測(cè)可能與 PTEN 基因 3’ -UTR 結(jié)合的 miRNA。、構(gòu)建含PTEN基因3’-UTR片段的熒光素酶表達(dá)載體
采用Trizol試劑按照使用說(shuō)明書從MDA-MB-435細(xì)胞中提取總RNA，以O(shè)ligo (dT)為逆轉(zhuǎn)錄引物，用M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。μ L PCR反應(yīng)體系中含有2 μ L cDNA模板，I. 25U Taq DNA聚合酶，I X緩沖液，O. 2mmol/L dNTPs，O. 4Mmol/L 正向引物 5’ -GC TCT AGA TGA CAC CAC TGA CTC TGA TC-3’ 和反向引物5’ -GC TCT AGA CGC AAA CAA CAA GCA GTG AC-3’(下劃線堿基為內(nèi)切酶油al識(shí)別序列)。熱循環(huán)條件為94° C預(yù)變性5min ;然后以94° C變性20sec，60° C退火30seC，72° C延伸lmin，擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)；最后72° C延伸7min使反應(yīng)完全。反應(yīng)完成后，取反應(yīng)產(chǎn)物3PL在I. 5%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳(I X TAE電泳緩沖液，電壓200V，恒壓電泳5min)，凝膠成像系統(tǒng)拍攝電泳圖譜。擴(kuò)增成功的產(chǎn)物采用Sanger’ s測(cè)序法測(cè)定DNA序列(Invitrogen);另取30μ 反應(yīng)產(chǎn)物在2. 0%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳(I XTAE電泳緩沖液，電壓100V，恒壓電泳lOmin)，然后采用膠回收DNA試劑盒回收純化目的DNA片段，并用微量紫外分光光度計(jì)測(cè)定其濃度。參考產(chǎn)品說(shuō)明書，將純化的PTEN基因3’ -UTR片段克隆到pGEM_T載體；熱轉(zhuǎn)化大腸桿菌TPlO感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行藍(lán)白斑篩選。挑取白斑搖菌，抽提質(zhì)粒；PCR擴(kuò)增及酶切鑒定后再進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。將測(cè)序正確的重組子用油al酶切后，回收3’ -UTR片段。用PGL-3和pRL-TK載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化常規(guī)制備的大腸桿菌TPlO感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行大量擴(kuò)增；試劑盒抽提法大量制備PGL-3和pRL-TK質(zhì)粒，電泳檢測(cè)質(zhì)粒的純度和含量。用限制性內(nèi)切酶對(duì)提取的PGL-3質(zhì)粒進(jìn)行酶切，試劑盒直接回收大片段的酶切產(chǎn)物。參考產(chǎn)品說(shuō)明書，將酶切回收純化后的PTEN基因3 ’ -UTR片段按適當(dāng)比例與pGL-3載體的Xba I酶切片段進(jìn)行連接反應(yīng)，16° C酶連過(guò)夜。取10 μ L連接產(chǎn)物直接轉(zhuǎn)化100 μ L大腸桿菌TPlO感受態(tài)細(xì)胞。經(jīng)過(guò)含有氨芐青霉素的LB平板固體培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng)。從轉(zhuǎn)化子的平板上隨機(jī)挑取10個(gè)菌落，經(jīng)過(guò)含氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基擴(kuò)增培養(yǎng)；經(jīng)PCR擴(kuò)增、酶切和測(cè)序鑒定后，用試劑盒抽提質(zhì)粒備用。、細(xì)胞轉(zhuǎn)染
首先，將培養(yǎng)于含有10% FCS、100kU/L青霉素、100mg/L鏈霉素的RPMI1640完全培養(yǎng)基中細(xì)胞株，按I X IO4個(gè)細(xì)胞/孔的量在24孔板中接種指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，培養(yǎng)過(guò)夜，直到細(xì)胞80%匯片。然后，將一定量的hsa-miR-20b、PTEN/3' _UTR/pGL3重組質(zhì)粒和內(nèi)參質(zhì)粒pRL_TK稀釋至50 μ L不含血清和抗生素的Opti-MEM I培養(yǎng)基中，用移液槍混合均勻；然后將I μ L脂質(zhì)體2000懸 液加入50 μ L不含血清和抗生素的Opti-MEM I培養(yǎng)基中，在室溫孵育5min ；最后將兩者混合在一起，充分混勻，靜置20min，使hsa-miR-20b、重組質(zhì)粒和內(nèi)參質(zhì)粒與脂質(zhì)體充分結(jié)合。將只加脂質(zhì)體的孔作為陰性對(duì)照。最后，吸去接種到24孔板中的培養(yǎng)液，用不含血清和抗生素的0pti-MEM I培養(yǎng)基洗一次，在每個(gè)孔中加入100 μ L上述混合物，培養(yǎng)3h ;吸棄培養(yǎng)板中的轉(zhuǎn)染培養(yǎng)液，向各孔加入100 μ L有血清無(wú)抗生素的0pti-MEM I培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24h后進(jìn)行檢測(cè)。、雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)基因活性測(cè)定
將轉(zhuǎn)染有PGL-3和pRL-TK的CHO細(xì)胞經(jīng)過(guò)24h培養(yǎng)后收集，吸棄培養(yǎng)基，用PBS洗I次。加入裂解液20 μ L/孔，室溫?fù)u動(dòng)15 min0按照雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒的操作說(shuō)明書，取100 μ L突光素酶分析緩沖液II于I. 5ml離心管中，設(shè)定化學(xué)發(fā)光儀延遲2sec,發(fā)光儀測(cè)讀IOsec ;將全部細(xì)胞裂解液加入到離心管中，用移液槍輕輕抽吸2-3次混勻(不要旋渦振動(dòng))；將離心管放入化學(xué)發(fā)光儀中測(cè)讀螢火蟲熒光素酶發(fā)光值Fl ;將離心管移出發(fā)光儀，力口AlOOuL Stop&Glo試劑，快速旋渦混勻后，將離心管重放回發(fā)光儀中測(cè)讀海腎熒光素酶發(fā)光值F2。應(yīng)用SPSS. 10統(tǒng)計(jì)軟件的卡方檢驗(yàn)分析受試組與空白對(duì)照組的F1/F2比值差異，以判斷hsa-miR_20b的調(diào)控作用。三、結(jié)果
I.hsa-miR-20b在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組織采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定了 6例結(jié)直腸癌組織和正常組織中miRNA的表達(dá)；統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，hsa-miR-20b在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組織，結(jié)果如圖I所示。與PTEN 基因 3’ -UTR 結(jié)合
我們采用生物信息學(xué)軟件miRanda和TargetScan聯(lián)合預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),hsa_miR-20b可能與PTEN基因3’ -UTR結(jié)合，結(jié)果如圖2所示。構(gòu)建PTEN/3’ _UTR/pGL3熒光素酶表達(dá)載體
PCR擴(kuò)增得到長(zhǎng)度為752bp的PTEN基因3’_UTR序列(圖3)，切膠純化回收后，將片段插入pGEM-T載體，轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌。隨機(jī)挑克隆擴(kuò)增后提取質(zhì)粒DNA。經(jīng)過(guò)油a I酶切鑒定，證實(shí)酶切后得到的基因片段與預(yù)期大小740bp相符(圖4)。測(cè)序結(jié)果表明，插入pGEM-T載體的PTEN基因3’ -UTR片段序列正確，如圖5所示。抽提pGEM_T載體，酶切獲得PTEN基因3’-UTR片段；將其插入pGL3載體，然后轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌。酶切后得到的基因片段與預(yù)期大小740bp相符(圖6);測(cè)序結(jié)果證實(shí)插入序列正確(圖7)。、hsa-miR-20b抑制重組熒光素酶表達(dá)活性
將200ng重組PTEN/3’ _UTR/pGL3熒光素酶表達(dá)載體、20ng內(nèi)參質(zhì)粒pRL-ΤΚ與IOpmolhsa-miR-20b共同轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后，采用熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)后CHO細(xì)胞中熒光素酶的活性。結(jié)果顯示，在CHO細(xì)胞中加入hsa-miR-20b后，熒光素酶的活性比值(pGL-3/pRL-TK)顯著低于不加hsa_miR-20b的細(xì)胞(圖8)。由此表明，hsa_miR-20b通過(guò)與PTEN基因3’ -UTR上靶點(diǎn)序列結(jié)合，抑制了熒光素酶的表達(dá)。上述實(shí)例只為說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人是能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種微小RNA用于調(diào)控PTEN基因表達(dá),其特征在于,所述的微小RNA為包含以下序列的核酸或者功能片段或變體5’ -caaagugcucauagugcagguag- 3’。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于，所述微小RNA能與PTEN基因3’-UTR結(jié)合，抑制PTEN基因表達(dá)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于，所述微小RNA為miR-20b。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于，所述微小RNA通過(guò)化學(xué)合成得到。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于，所述微小RNA來(lái)自生物體樣本，包括組織、細(xì)胞和外周血。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種微小RNA用于調(diào)控PTEN基因表達(dá)，所述的微小RNA為包含以下序列的核酸或者功能片段或變體:5’-caaagugcucauagugcagguag-3’。所述微小RNA為miR-20b，本發(fā)明人采用體外生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)證實(shí)，hsa-miR-20b可與PTEN基因3’-UTR結(jié)合，從而抑制PTEN分子表達(dá)；可通過(guò)調(diào)控PTEN信號(hào)通路和/或miR-20b表達(dá)及功能以發(fā)揮抗腫瘤作用。
文檔編號(hào)C12N15/113GK102776190SQ20121025259
公開日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2012年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月20日
發(fā)明者朱健潔, 汪維鵬, 陳蘭心 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)