專利名稱：Cik細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒。
背景技術(shù)：
過繼性細(xì)胞免疫治療是腫瘤生物治療的一種，它將自體或異體的免疫效應(yīng)細(xì)胞分離后于體外經(jīng)擴(kuò)增、修飾等處理后回輸或轉(zhuǎn)輸給腫瘤患者，使其在體內(nèi)發(fā)揮效應(yīng)以增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤能力的一種療法，在腫瘤的綜合治療中占有重要的作用，已成為繼手術(shù)、放療、化療后對腫瘤患者進(jìn)行綜合治療的重要手段之一。免疫效應(yīng)細(xì)胞包括淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TIL)和細(xì)胞因子活化的殺傷細(xì)胞(CIK)，LAK細(xì)胞和TIL細(xì)胞存在體外增殖數(shù)量不足、細(xì)胞分離過程復(fù)雜及治療毒副反應(yīng)大等缺點(diǎn)，限制了它們的進(jìn)一步應(yīng)用。CIK細(xì)胞作為一種新的免疫效應(yīng)細(xì)胞，將人外周血單個核細(xì)胞在體外用多種誘導(dǎo)因子(IFN-γ、anti-⑶3McAb、人重組IL-1、人重組IL-2)共同培養(yǎng)一段時間后獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞，具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和非主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性的優(yōu)點(diǎn)，在人體內(nèi)可大規(guī)模擴(kuò)增，可以在沒有損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下，對腫瘤細(xì)胞具有直接殺傷作用及調(diào)節(jié)宿主免疫功能的作用。與其他過繼性免疫治療細(xì)胞相比，具有增殖速度快、活性高、殺瘤譜廣等優(yōu)點(diǎn)。近年來對CIK細(xì)胞的研究與開發(fā)應(yīng)用也日漸深入，已經(jīng)形成了較為成熟的CIK細(xì)胞誘導(dǎo)與培養(yǎng)方法，但在CIK細(xì)胞的培養(yǎng)過程中采用的試劑較多，標(biāo)準(zhǔn)不一致，培養(yǎng)過程中的工作量大，培養(yǎng)時間較長，染菌風(fēng)險大，使許多研究人員尤其是各級醫(yī)院的工作人員很難在短時間內(nèi)培養(yǎng)出質(zhì)量均一的CIK細(xì)胞。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒，該CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒中存放的試劑采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)制成，培養(yǎng)過程中無需另行配制試劑，減少培養(yǎng)過程中的工作量，縮短CIK細(xì)胞的培養(yǎng)時間，降低培養(yǎng)過程中染菌風(fēng)險，在短時間內(nèi)能夠培養(yǎng)出質(zhì)量均一的CIK細(xì)胞。本實(shí)用新型要解決的技術(shù)方案是一種CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒，包括盒體，盒蓋，其特殊之處是在所述的盒體內(nèi)放置試劑架，所述的試劑架上有六個插孔，所述的插孔分兩排布置；在六個插孔內(nèi)分別放置有內(nèi)裝淋巴細(xì)胞分離液、無血清培養(yǎng)基、誘導(dǎo)因子人重組IL-I 2 α、誘導(dǎo)因子抗⑶3單抗、誘導(dǎo)因子人重組IL-2和誘導(dǎo)因子IFN-γ的試劑瓶；在所述試劑架上對應(yīng)試劑瓶位置和試劑瓶上分別設(shè)有標(biāo)簽。上述的CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒，在試劑瓶的瓶體和瓶盒上分別設(shè)有彼此對應(yīng)的標(biāo)簽。本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是將內(nèi)裝采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)配制的無血清培養(yǎng)基、誘導(dǎo)因子和淋巴細(xì)胞分離液的試劑瓶一同放入一個試劑盒內(nèi)，在培養(yǎng)CIK細(xì)胞時無需另行配制無血清培養(yǎng)基和誘導(dǎo)因子，縮短了培養(yǎng)CIK細(xì)胞的時間；盒體、試劑架和試劑瓶為分體式結(jié)構(gòu)，便于清洗消毒，降低了培養(yǎng)過程中的染菌風(fēng)險，可在短時間內(nèi)培養(yǎng)出質(zhì)量均一的CIK細(xì)胞。

圖1是本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是圖1中試劑架的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中1-盒體、2-盒蓋、3-試劑架、301-插孔、4-試劑瓶、5-標(biāo)簽。
具體實(shí)施方式
如圖1所示，該CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒由盒體1、盒蓋2、位于盒體1內(nèi)的試劑架3、放置在試劑架3內(nèi)的試劑瓶4和標(biāo)簽5構(gòu)成，所述的盒體1與盒蓋2連接，以使盒蓋2 可翻轉(zhuǎn)。所述的試劑架3上設(shè)有六個插孔301，在六個插孔301內(nèi)分別放置有內(nèi)裝淋巴細(xì)胞分離液、無血清培養(yǎng)基、誘導(dǎo)因子人重組IL-I 2 α、誘導(dǎo)因子抗⑶3單抗、誘導(dǎo)因子人重組IL-2和誘導(dǎo)因子IFN- γ的試劑瓶4，在所述試劑架3上對應(yīng)試劑瓶4位置、試劑瓶4的瓶體與瓶蓋上分別設(shè)有彼此對應(yīng)的標(biāo)簽5，在標(biāo)簽5上分別標(biāo)有文字“淋巴細(xì)胞分離液”、 “無血清培養(yǎng)基”、“誘導(dǎo)因子人重組IL-I 2 α ”、“誘導(dǎo)因子抗⑶3單抗”、“誘導(dǎo)因子人重組 IL-2”和“誘導(dǎo)因子IFN-Y ”。利用該CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒培養(yǎng)CIK細(xì)胞的步驟如下1、通過血細(xì)胞采集儀采集患者外周血單個核細(xì)胞，采集標(biāo)準(zhǔn)為=Karnofsky評分 ^ 60分，預(yù)計生存期>3個月；治療前心、肝、腎功能及血常規(guī)大致正常；采血前1個月及治療期間均未接受過放、化療。2、打開CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒的盒蓋2，將標(biāo)簽5上標(biāo)有“淋巴細(xì)胞分離液” 所對應(yīng)的試劑瓶4取出，打開瓶蓋，取出淋巴細(xì)胞分離液放入離心管中，將通過血細(xì)胞采集儀采集患者外周血單個核細(xì)胞放入淋巴細(xì)胞分離液中，打開離心機(jī)進(jìn)行梯度離心，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為2000r/min，離心時間為20min ；離心后取界面層單個核細(xì)胞，PBS洗滌3次。3、從CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒中取出無血清培養(yǎng)基，將洗滌好的界面層單個核細(xì)胞放入無血清培養(yǎng)基中，細(xì)胞濃度為IXio 6/ml，置于溫度在37 °C、濃度為5%的CO2中培養(yǎng)。4、從CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒中取出誘導(dǎo)因子IFN- y 1000U/ml、誘導(dǎo)因子抗 ⑶3單抗lOOng/ml，放入無血清培養(yǎng)基中。5、對小時后從CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒中取出誘導(dǎo)因子人重組IL-I 2 a 100U/ml，誘導(dǎo)因子人重組IL-2 1000U/ml，放入無血清培養(yǎng)基中。6、培養(yǎng)第3天、第6天和第9天從CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒中取出誘導(dǎo)因子 IL-2a 100U/ml、誘導(dǎo)因子rIFN-γ 1000U/ml，放入無血清培養(yǎng)基中。7、從細(xì)胞培養(yǎng)的第8天開始，每天取部分細(xì)胞進(jìn)行細(xì)菌、霉菌的檢測。第10 13 天后，待上述結(jié)果均為陰性后收集培養(yǎng)的CIK細(xì)胞，細(xì)胞總數(shù)>101(1個，600 r/minX10 min 離心、洗滌2次后待用。
權(quán)利要求1.一種CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒，包括盒體，盒蓋，其特征是在所述的盒體內(nèi)放置試劑架，所述的試劑架上有六個插孔，所述的插孔分兩排布置；在六個插孔內(nèi)分別放置有內(nèi)裝淋巴細(xì)胞分離液、無血清培養(yǎng)基、誘導(dǎo)因子人重組IL-I 2 α、誘導(dǎo)因子抗⑶3單抗、誘導(dǎo)因子人重組IL-2和誘導(dǎo)因子IFN- γ的試劑瓶；在所述試劑架上對應(yīng)試劑瓶位置和試劑瓶上分別設(shè)有標(biāo)簽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒，其特征是在試劑瓶的瓶體和瓶盒上分別設(shè)有彼此對應(yīng)的標(biāo)簽。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)活化試劑盒，包括盒體，盒蓋，其特殊之處是在盒體內(nèi)放置試劑架，所述的試劑架上有六個插孔，所述的插孔分兩排布置；在六個插孔內(nèi)分別放置有內(nèi)裝淋巴細(xì)胞分離液、無血清培養(yǎng)基、誘導(dǎo)因子人重組IL-12α、誘導(dǎo)因子抗CD3單抗、誘導(dǎo)因子人重組IL-2和誘導(dǎo)因子IFN-γ的試劑瓶；在所述試劑架上對應(yīng)試劑瓶位置和試劑瓶上分別設(shè)有識別標(biāo)簽。優(yōu)點(diǎn)是縮短了培養(yǎng)CIK細(xì)胞的時間；盒體、試劑架和試劑瓶為分體式結(jié)構(gòu)，便于清洗消毒，降低了培養(yǎng)過程中的染菌風(fēng)險，可在短時間內(nèi)培養(yǎng)出質(zhì)量均一的CIK細(xì)胞。
文檔編號C12N5/078GK202107707SQ2011202278
公開日2012年1月11日 申請日期2011年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月30日
發(fā)明者楊光 申請人:蘇州市立醫(yī)院(東區(qū))