專利名稱：一種利用海參制備ace抑制肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種肽的制備，尤其涉及一種利用海參制備ACE抑制肽的方法。
背景技術(shù)：
降血壓肽，又稱為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin Converting Enzyme, EC3.4. 15. 1，簡稱ACE)抑制肽，是從食物蛋白中分離出的一類具有顯著降低血壓功效的肽，通常為小分子肽。在眾多降壓物質(zhì)中，降血壓肽因其無毒副作用的降壓功能成為活性肽研究的熱點?，F(xiàn)在已經(jīng)從乳酪蛋白中的干酪素、乳清蛋白等；動植物蛋白中的雞肉、明膠、豬肉、雞蛋、蕎麥、玉米、椰菜、大蒜等；魚貝藻類蛋白中的沙丁魚、金槍魚、鱔魚頭、牡蠣、裙帶菜等分離出ACE抑制肽；國內(nèi)一些研究者還從中國傳統(tǒng)的食品即墨老酒，豆腐乳中發(fā)現(xiàn)ACE 抑制肽。目前，許多研究己經(jīng)通過體內(nèi)實驗驗證ACE抑制肽具有較好的降壓活性，且對正常血壓無影響。海參隸屬于棘皮動物門海參綱。在明代《食物本草》中，早已指出海參具有主補元氣、滋益五臟六腑和祛虛損等諸多養(yǎng)生功能?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，海參富含多糖、海參素、 海參皂甙、谷氨酸、甘氨酸、精氨酸、硒、鋅、鐵、碘、鈣、超氧化物歧化酶(SOD)、硫酸軟骨素等 50多種對人體有益的營養(yǎng)成分，是一座天然的營養(yǎng)寶庫。經(jīng)實驗測定，海參水解肽也具有 ACE抑制活性，是潛在的可開發(fā)的降血壓活性物質(zhì)。目前，還未見有利用海參制備ACE抑制肽的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種利用海參制備ACE抑制肽的方法。該方法提取所得的海參活性肽具有ACE抑制活性和降壓功效。該制備ACE抑制肽的方法工藝合理、操作簡便、可操作性強、易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其是以包括鮮海參、或干海參、或水發(fā)參、或高壓參在內(nèi)的海參為原料，進行脫鹽、軟化處理，制漿后加入海參重量10 30倍的純凈水，加熱滅除微生物，冷卻后加入蛋白水解酶進行酶解，酶解液加熱滅酶，冷卻后離心去除不溶物，上清液通過管膜過濾脫除大分子，管膜濾過液通過孔徑為3000DaltOn的有機膜截留分級，3000DaltOn以下的截留液通過納濾濃縮脫鹽，干燥，得海參ACE抑制肽。所述的蛋白水解酶為復(fù)合蛋白水解酶或風(fēng)味蛋白水解酶中的一種，其用量為海參重量的2 10%。。本發(fā)明是將海參原料經(jīng)脫鹽、軟化處理，制漿后加水，加熱滅除微生物，冷卻后酶解，加熱滅酶，冷卻后離心，取上清液通過管濾、超濾、納濾，干燥，得海參ACE抑制肽。所分離得到的具有ACE抑制活性的短肽保存了完好的結(jié)構(gòu)和有效的生物活性。實驗表明，采用此方法分離出的ACE抑制肽經(jīng)原發(fā)性高血壓大鼠實驗，能有效降低大鼠舒張壓。該方法利用可控的酶解條件，并結(jié)合膜分離技術(shù)將具有ACE抑制功效的短肽片段分離出來，其酶解技術(shù)方案實現(xiàn)了最佳優(yōu)化，經(jīng)管濾、超濾、納濾技術(shù)進行分離提取，其提取的效率高。分離出的具有降壓活性的短肽片段具有較高的利用價值。其制備ACE抑制肽的方法工藝合理、操作簡便、可操作性強，易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選取與處理其是以鮮海參為原料，將鮮海參去腸后，放入沸水浴水煮IOmin 以上，撈出浙干水分去除參嘴，然后利用高壓鍋或殺菌鍋進行軟化處理；
或是以干海參為原料，將干海參放入冷水中浸泡Mh以上去除鹽分，放入沸水浴水煮 IOmin以上，撈出浙干水分去除參嘴，然后利用高壓鍋或殺菌鍋進行軟化處理； 或是以水發(fā)海參為原料； 或是以高壓海參為原料；
將上述經(jīng)過脫鹽、軟化處理的鮮海參、或干海參、或水發(fā)海參、或高壓海參原料采用打漿機進行打漿處理，然后采用膠體磨將物料進一步細化處理，得漿狀物；
b、酶解將步驟(a)得到的漿狀物加入海參重量10 30倍的純凈水，加熱至溶液中心溫度達到95 100°C，持續(xù)lOmin，滅除微生物；冷卻至50 55°C，加入蛋白水解酶進行酶解，其用量為海參重量的2 10%。，酶解時間為1 池，得酶解液；其中，所述的蛋白水解酶為復(fù)合蛋白水解酶或風(fēng)味蛋白水解酶中的一種；
c、滅酶將步驟(b)酶解所得的酶解液加熱至溶液中心溫度達到95 100°C，持續(xù) 10 30min，進行滅酶處理，得滅酶的酶解液；
d、去除不溶物將步驟(c)所得的滅酶酶解液冷卻至4°C，采用離心機離心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜過濾將步驟(d)收集的上清液采用管膜過濾脫除大分子，管膜濾過液通過孔徑為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集3000DaltOn以下截留液；
f、納濾將步驟(e)收集的3000DaltOn以下的截留液，通過納濾濃縮脫鹽，收集納濾截留液；
g、干燥將步驟(f)收集的納濾截留液進行干燥處理，得ACE抑制肽。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明。實施例1
一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選擇與處理選取鮮海參IOOkg為原料，去腸后，放入沸水浴水煮20min，撈出浙干水分去除參嘴，然后采用殺菌鍋0. IMpa 121°C 30min進行軟化處理，軟化處理的海參為Ag，將該軟化的海參使用打漿機進行打漿處理，然后采用膠體磨將物料進一步細化處理，得到粒度很小的海參漿狀物；
b、酶解將所得的海參漿狀物加入200L的純凈水，加熱至溶液中心溫度達到100°C， 持續(xù)lOmin，滅除微生物；冷卻至50°C，加入復(fù)合蛋白水解酶40g，酶解池，得酶解液；其中復(fù)合蛋白水解酶可為市購的商品酶，如ftOtamex復(fù)合蛋白酶，也可以自行配制，配制的復(fù)合蛋白水解酶中含有木瓜蛋白酶、淀粉酶等多種酶；
c、滅酶將酶解液加熱至溶液中心溫度達到100°C，持續(xù)lOmin，進行滅酶處理；d、去除不溶物將滅酶后的酶解液冷卻至4°C，采用三足式離心機，控制轉(zhuǎn)速2000 rpm，離心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜過濾將收集的上清液采用管膜過濾進一步脫除大分子，管膜濾過液通過孔徑為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集3000DaltOn以下截留液；
f、納濾將收集的3000DaltOn以下的截留液，通過納濾濃縮脫鹽，最終濃液電導(dǎo)達到 300μ s/cm以下時，停止納濾，收集納濾截留液；
g、FD凍干將收集的納濾截留液加到殺過菌的料盤中，厚度在5mm-30mm之間均可，然后放到凍結(jié)隧道中，進行凍結(jié)，時間在6 — 12個小時左右，凍結(jié)后馬上進入凍干倉進行凍干處理，凍干后采用粉碎機進行粉碎，所得粉狀物即為ACE抑制肽。實施例2
一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選擇與處理選取干海參5kg為原料，放入冷水中浸泡1天，撈出放入沸水中煮20min，撈出后采用殺菌鍋0. IMpa 121°C 20min進行軟化處理，軟化處理的海參采用打漿機進行打漿處理，然后采用膠體磨將物料進一步細化處理，得到粒度很小的海參漿狀物；
b、酶解將所得的海參漿狀物加入100L的純凈水，加熱至溶液中心溫度達到95°C，持續(xù)30min，滅除微生物；冷卻至55°C，加入風(fēng)味蛋白水解酶50g，酶解lh，得酶解液；
c、滅酶將酶解液加熱至溶液中心溫度達到95°C，持續(xù)lOmin，進行滅酶處理；
d、去除不溶物將滅酶后的酶解液冷卻至4°C，采用管式離心機，控制轉(zhuǎn)速3000rpm, 離心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜過濾將收集的上清液采用管膜過濾進一步脫除大分子，管膜濾過液通過孔徑為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集3000DaltOn以下的截留液；
f、納濾將收集的3000DaltOn以下的截留液，通過納濾濃縮脫鹽，最終濃液電導(dǎo)達到 300 μ s/cm以下時，停止納濾，收集納濾截留液；
g、噴霧干燥將收集的納濾截留液進行噴霧干燥，所得粉狀物即為ACE抑制肽。實施例3
一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選擇與處理其是選取水發(fā)參20kg為原料，使用打漿機進行打漿處理，再采用膠體磨將物料進一步細化處理，得到粒度很小的海參漿狀物；
b、酶解將所得到的海參漿狀物加入200L的純凈水，加熱至溶液中心溫度達到100°C， 持15min，滅除微生物；冷卻至50°C，加入復(fù)合蛋白水解酶50g，酶解池，得酶解液；復(fù)合蛋白水解酶為市購的ftOtamex復(fù)合蛋白酶；
c、滅酶將酶解液加熱至溶液中心溫度達到100°C，持續(xù)lOmin，進行滅酶處理；
d、去除不溶物將滅酶后的酶解液冷卻至4°C，采用三足式離心機，控制轉(zhuǎn)速2000 rpm，離心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜過濾將收集的上清液采用管膜過濾進一步脫除大分子，管膜濾過液通過孔徑為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集3000DaltOn以下截留液；
f、納濾將收集的3000DaltOn以下的截留液，通過納濾濃縮脫鹽，最終濃液電導(dǎo)達到 300 μ s/cm以下時，停止納濾，收集納濾截留液；g、凍干將收集的納濾截留液進行采用冷凍干燥法凍干，凍干后粉碎，所得粉狀物即為ACE抑制肽。實施例4
一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選擇與處理其是選取高壓參20kg為原料，采用打漿機進行打漿處理，再采用膠體磨進一步將物料細化處理，得到粒度很小的海參漿狀物；
b、酶解將所得的海參漿狀物加入300L的純凈水，加熱至溶液中心溫度達到95°C，持續(xù)lOmin，滅除微生物；冷卻至53°C，加入風(fēng)味蛋白水解酶60g，酶解池，得酶解液；
c、滅酶將酶解液加熱至溶液中心溫度達到95°C，持續(xù)lOmin，進行滅酶處理；
d、去除不溶物將滅酶后的酶解液冷卻至4°C，采用三足式離心機，控制轉(zhuǎn)速2000 rpm,離心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜過濾將收集的上清液采用管膜過濾進一步脫除大分子，管膜濾過液通過孔徑為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集3000DaltOn以下截留液；
f、納濾將收集的3000DaltOn以下的截留液，通過納濾濃縮脫鹽，最終濃液電導(dǎo)達到 300μ s/cm以下時，停止納濾，收集納濾截留液；
g、干燥將收集的納濾截留液進行采用微波干燥法進行干燥，粉碎后所得粉狀物即為 ACE抑制肽。實施例5
一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選擇與處理其是選取鹽漬海參IOkg為原料，放入冷水中浸泡12小時去鹽處理，撈出放入沸水中煮20min，撈出后采用殺菌鍋0. IMpa 121°C 20min進行軟化處理，軟化處理后的海參采用打漿機進行打漿處理，然后采用膠體磨將物料進一步細化處理，得到粒度很小的海參漿狀物；
b、酶解將所得的海參漿狀物加入250L的純凈水，加熱至溶液中心溫度達到97°C，持續(xù)20min，滅除微生物；冷卻至50°C，加入風(fēng)味蛋白水解酶50g，酶解池，得酶解液；
c、滅酶將酶解液加熱至溶液中心溫度達到100°C，持續(xù)lOmin，進行滅酶處理；
d、去除不溶物將滅酶后的酶解液冷卻至4°C，采用三足式離心機，控制轉(zhuǎn)速2000 rpm，離心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜過濾將收集的上清液采用管膜過濾進一步脫除大分子，管膜濾過液通過孔徑為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集3000DaltOn以下截留液；
f、納濾將收集的3000DaltOn以下的截留液，通過納濾濃縮脫鹽，最終濃液電導(dǎo)達到 300 μ s/cm以下時，停止納濾，收集納濾截留液；
g、干燥將收集的納濾截留液進行采用微波干燥法進行干燥，粉碎后所得粉狀物即為 ACE抑制肽。下面結(jié)合動物實驗進一步說明本發(fā)明所制備的ACE抑制肽的降壓效果。本動物實驗是將M只SHR隨機分為空白對照組8只，陽性對照組8只、ACE抑制肽樣品組8只，陽性對照組給予卡托普利0. M mg/kg*d劑量灌胃。ACE抑制肽樣品組ACE 抑制肽溶液以0. 48g/kg ·(!劑量灌胃，給藥時間均為4周。每周測定尾動脈收縮壓一次，數(shù)據(jù)見附表。
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附表各給藥組對SHR尾動脈收縮壓的影響(i 士 s，mmHg)
權(quán)利要求
1.一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其特征在于其是以包括鮮海參、或干海參、 或水發(fā)參、或高壓參在內(nèi)的海參為原料，進行脫鹽、軟化處理，制漿后加入海參重量10 30 倍的純凈水，加熱滅除微生物，冷卻后加入蛋白水解酶進行酶解，酶解液加熱滅酶，冷卻后離心去除不溶物，上清液通過管膜過濾脫除大分子，管膜濾過液通過孔徑為3000DaltOn的有機膜截留分級，3000DaltOn以下的截留液通過納濾濃縮脫鹽，干燥，得ACE抑制肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其特征在于所述的蛋白水解酶為復(fù)合蛋白水解酶或風(fēng)味蛋白水解酶中的一種，其用量為海參重量的2 10%。
3.一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其特征在于其具體工藝步驟如下a、原料的選取與處理其是以鮮海參為原料，將鮮海參去腸后，放入沸水浴水煮IOmin 以上，撈出浙干水分去除參嘴，然后利用高壓鍋或殺菌鍋進行軟化處理；或是以干海參為原料，將干海參放入冷水中浸泡Mh以上去除鹽分，放入沸水浴水煮 IOmin以上，撈出浙干水分去除參嘴，然后利用高壓鍋或殺菌鍋進行軟化處理；或是以水發(fā)海參為原料；或是以高壓海參為原料；將上述經(jīng)過脫鹽、軟化處理的鮮海參、或干海參、或水發(fā)海參、或高壓海參原料采用打漿機進行打漿處理，然后采用膠體磨將物料進一步細化處理，得漿狀物；b、酶解將步驟(a)得到的漿狀物加入海參重量10 30倍的純凈水，加熱至溶液中心溫度達到95 100°C，持續(xù)lOmin，滅除微生物；冷卻至50 55°C，加入蛋白水解酶進行酶解，其用量為海參重量的2 10%。，酶解時間為1 池，得酶解液；其中，所述的蛋白水解酶為復(fù)合蛋白水解酶或風(fēng)味蛋白水解酶中的一種；c、滅酶將步驟(b)酶解所得的酶解液加熱至溶液中心溫度達到95 100°C，持續(xù) 10 30min，進行滅酶處理，得滅酶的酶解液；d、去除不溶物將步驟(c)所得的滅酶酶解液冷卻至4°C，采用離心機離心去除不溶物，收集上清液；e、管膜過濾將步驟(d)收集的上清液采用管膜過濾脫除大分子，管膜濾過液通過孔徑為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集3000DaltOn以下截留液；f、納濾將步驟(e)收集的3000DaltOn以下的截留液，通過納濾濃縮脫鹽，收集納濾截留液；g、干燥將步驟(f)收集的納濾截留液進行干燥處理，得ACE抑制肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用海參制備ACE抑制肽的方法，其是以包括鮮海參、或干海參、或水發(fā)參、或高壓參在內(nèi)的海參為原料，脫鹽、軟化處理，制漿后加水，加熱滅除微生物，冷卻后加入復(fù)合蛋白水解酶或風(fēng)味蛋白水解酶中的一種進行酶解，滅酶，冷卻后離心去除不溶物，上清液管濾，濾過液過3000Dalton的有機膜截留分級，3000Dalton以下的截留液通過納濾，干燥，得ACE抑制肽。其酶解技術(shù)方案實現(xiàn)了最佳優(yōu)化，經(jīng)管濾、超濾、納濾進行分離提取技術(shù)，其提取的效率高，所得的ACE抑制肽降壓效果好。本發(fā)明的方法工藝合理、操作簡便、可操作性強，易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C12P21/06GK102517364SQ20111038472
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月29日
發(fā)明者劉新, 劉昌衡, 唐聚德, 孫永軍, 張綿松, 王志偉, 胡煒, 袁文鵬 申請人:山東好當家海洋發(fā)展股份有限公司, 山東省科學(xué)院生物研究所