專(zhuān)利名稱(chēng)：用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的引物、探針及其方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的引物、探針及其方法。
背景技術(shù)：
自然感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的病毒很多，根據(jù)對(duì)人類(lèi)的危害性，可將其分為三類(lèi)；一類(lèi)為人獸共患病病毒，能夠感染人與靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物；二類(lèi)目前尚無(wú)跡象表明感染人，但能在體外培養(yǎng)的人、猿和猴源性細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，對(duì)人類(lèi)有潛在危險(xiǎn)性；三類(lèi)病毒在自然條件下僅感染動(dòng)物本身，目前尚無(wú)跡象表明能夠感染人，因此對(duì)人類(lèi)威脅不大。現(xiàn)今，小鼠作為單克隆抗體、蛋白類(lèi)藥物等生物制品的一個(gè)主要來(lái)源，具有潛在的病毒污染。在《中華人民共和國(guó)藥典(2010年版)》三部中，規(guī)定了鼠源性生物制品需質(zhì)檢的 8種鼠源病毒，其中小鼠仙臺(tái)病毒屬于一類(lèi)，人獸共患病病毒，能夠感染人與靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，對(duì)人體來(lái)說(shuō)有很大的危險(xiǎn)性。仙臺(tái)病毒(Sendai virus，SEV)屬于副粘病毒科，副粘病毒屬。1953年首次于日本仙臺(tái)發(fā)現(xiàn)，并分離出了第一株病毒Fushimi株，之后人們對(duì)仙臺(tái)病毒進(jìn)行了廣泛的研究和報(bào)道。仙臺(tái)病毒為單股負(fù)鏈RNA病毒，病毒粒子多是呈圓形，直徑130 250nm。病毒內(nèi)部由直徑約18nm的螺旋狀對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)的核蛋白組成，外包有脂蛋白囊膜，其上有放射狀排列的纖突，纖突長(zhǎng)8 15nm，寬2 4nm。小鼠仙臺(tái)病毒的自然宿主是嚙齒類(lèi)動(dòng)物。仙臺(tái)病毒可凝聚和溶解多種動(dòng)物的紅細(xì)胞，如小鼠、豚鼠、人、雞、大鼠、綿羊、兔的紅細(xì)胞。小鼠感染本病后可有兩種表現(xiàn)型。慢性型多見(jiàn)于幼鼠至42日齡的小鼠，呈亞臨床感染，病毒在鼠群中長(zhǎng)期存在，并呈地方性流行。急性型病鼠常表現(xiàn)臨床癥狀，即被毛粗亂、 呼吸困難、消瘦等。孕鼠死胎率提高，新生乳鼠死亡率上升。同時(shí)小鼠仙臺(tái)病毒也可感染人類(lèi)，引起呼吸道系統(tǒng)疾病。為了客觀評(píng)價(jià)小鼠生物制品的質(zhì)量，確保人民健康必將起到積極的作用，藥典制定了鼠源病毒檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。其中規(guī)定的鼠源病毒檢測(cè)方法有細(xì)胞試驗(yàn)、動(dòng)物抗體產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)和雞胚感染實(shí)驗(yàn)。這些方法從生物效應(yīng)角度來(lái)檢測(cè)鼠源病毒的潛在污染，檢測(cè)手段復(fù)雜費(fèi)時(shí)，周期長(zhǎng)，且對(duì)操作的實(shí)驗(yàn)室有一定要求，不宜作為一種常規(guī)的指導(dǎo)生產(chǎn)的質(zhì)控手段。而目前發(fā)展十分成熟的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Real-time Fluorence Quantitative Polymerase Chain Reaction Real Time PCR)1 ,
便,且對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求也很低。Real Time PCR于1996年由美國(guó)Applied biosystems公司推出，是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，使每一個(gè)循環(huán)變得“可見(jiàn)”，最后通過(guò)Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品中的DNA(or cDNA)的起始濃度進(jìn)行定量分析的方法。該方法自產(chǎn)生以來(lái)，不斷發(fā)展完善，特別是隨著Taqman熒光探針的廣泛應(yīng)用，到目前為止該技術(shù)已經(jīng)非常成熟。Taqman熒光探針的PCR檢測(cè)是指進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，在反應(yīng)體系中加入一對(duì)引物的同時(shí)還加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸， 兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基因和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。當(dāng)探針完整時(shí)，報(bào)告基因所發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基因吸收，擴(kuò)增時(shí)隨著Taq酶在鏈延伸過(guò)程中遇到與模板結(jié)合的探針，其 5’ _3’外切核酸酶活性將探針酶切降解，報(bào)告熒光基團(tuán)與淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光檢測(cè)系統(tǒng)可以監(jiān)測(cè)到熒光信號(hào)，模板每復(fù)制一次，就有一個(gè)探針被切斷伴隨一個(gè)熒光信號(hào)的釋放。由于被釋放的熒光基團(tuán)數(shù)目和PCR產(chǎn)物數(shù)量是一對(duì)一關(guān)系，所以信號(hào)累積與PCR產(chǎn)物完全同步。整個(gè)反應(yīng)結(jié)束后，便可得到一條擴(kuò)增曲線，由已知濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品的擴(kuò)增曲線可以得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)曲線以及樣品中的擴(kuò)增曲線可對(duì)樣品進(jìn)行定量分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA/RNA模板的定量，而且具有靈敏度和特異性高、能實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)、自動(dòng)化程度高、無(wú)污染、實(shí)時(shí)和準(zhǔn)確等特點(diǎn)，該已被廣泛用于免疫分析、細(xì)菌、病毒檢測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域。迄今為止，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒方面還未見(jiàn)有報(bào)道，無(wú)疑有著很廣闊的發(fā)展空間。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有小鼠仙臺(tái)病毒檢測(cè)方法的不足，本發(fā)明提供了一種實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的引物、探針及其方法，該方法簡(jiǎn)單方便、靈敏度高且檢測(cè)時(shí)間短。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一對(duì)用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的引物。本發(fā)明提供的引物，是由具有序列表中的SEQ ID NO 1的上游引物與具有序列表中的SEQ ID NO :2的下游引物組成的一對(duì)寡核苷酸。序列表中的SEQ ID NO :1由21個(gè)堿基組成；序列表中的SEQ ID NO 2由19個(gè)堿
基組成。本發(fā)明人設(shè)計(jì)了多對(duì)PCR引物，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期大量的實(shí)驗(yàn)從眾多引物對(duì)中篩選出了由上述上游引物和下游引物組成的引物對(duì)。其擴(kuò)增片斷大小為lOObp。該引物對(duì)小鼠仙臺(tái)病毒具有高度的保守性，且與小鼠基因組不具有顯著的同源性，使用該引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定性、定量檢測(cè)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的探針，所述探針具有序列表中的SEQ ID NO 3的核苷酸序列，所述探針5’端連接有熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端連接有熒光淬滅基團(tuán)。所述探針中熒光報(bào)告基團(tuán)可選自包括但不限于FAM、VIC、J0E、HEX中的任意一種， 優(yōu)選為FAM ；所述熒光淬滅基團(tuán)選自TAMRA或Eclipse，優(yōu)選為T(mén)AMRA。所述序列表中的SEQ ID NO 3由25個(gè)堿基組成。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的方法，所述方法使用上述提及引物及探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。優(yōu)選地，所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)體系還包括仙臺(tái)病毒RT-PCR擴(kuò)增試劑、陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品、酵母tRNA稀釋液、陰性質(zhì)控品、空白對(duì)照。優(yōu)選地，所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的退火溫度為60°C。優(yōu)選地，所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)條件為48°C，15min ;95°C，IOmin ;95°C， 15sec，60°C，40sec，共 40 個(gè)循環(huán)。優(yōu)選地，所述方法還包括標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立，方法為擴(kuò)增含序列表中SEQ ID NO 4
4所示的堿基同源序列的PMD18-T載體，得到IOObp的DNA片段，體外轉(zhuǎn)錄所述DNA片段并純化獲得的RNA作為陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品，將其十倍稀釋成不同濃度的陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品，以所述陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，得到用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的標(biāo)準(zhǔn)曲線。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的試劑盒，所述試劑盒含上述提及的引物探針。優(yōu)選地，所述試劑盒的反應(yīng)體系還包括仙臺(tái)病毒RT-PCR擴(kuò)增試劑、陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品、酵母tRNA稀釋液、陰性質(zhì)控品、空白對(duì)照。優(yōu)選地，所述RT-PCR擴(kuò)增試劑為 2 X Taqman PCR Mix,40 X TaqmanRT-Enzyme MIX, 也可直接使用 Taqman RNA-Ct I-Step kit。優(yōu)選地，所述陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品通過(guò)下述方法獲得擴(kuò)增含序列表中SEQ ID NO :4所示的堿基同源序列的PMD18-T載體，得到IOObp的DNA片段，體外轉(zhuǎn)錄所述DNA片段并純化獲得RNA即標(biāo)準(zhǔn)品。本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供上述提及的引物或探針在檢測(cè)鼠源生物制品中仙臺(tái)病毒殘留時(shí)的應(yīng)用。與現(xiàn)有檢測(cè)方法相比，本發(fā)明提供的熒光定量PCR方法檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒具有以下優(yōu)點(diǎn)1、簡(jiǎn)單快速現(xiàn)有的藥典小鼠仙臺(tái)病毒檢測(cè)方法為細(xì)胞試驗(yàn)、動(dòng)物抗體產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)和雞胚感染實(shí)驗(yàn)，從生物學(xué)效應(yīng)角度檢測(cè)生物制品中小鼠仙臺(tái)病毒的潛在感染，需時(shí)長(zhǎng) (1 4周時(shí)間)，而本發(fā)明從核酸角度對(duì)仙臺(tái)病毒進(jìn)行檢測(cè)，從樣品RNA提取開(kāi)始到獲得結(jié)果只需要6小時(shí)左右，其中本發(fā)明熒光定量PCR使用的是一步法反應(yīng)體系，操作更為簡(jiǎn)便快速，只需1小時(shí)45分鐘的時(shí)間。并且，本發(fā)明對(duì)操作實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求不高，規(guī)避了以前抽檢產(chǎn)品可能產(chǎn)生的漏洞，可在企業(yè)實(shí)現(xiàn)批批檢測(cè)，進(jìn)一步提高了生物制品質(zhì)控質(zhì)量；2、靈敏度高現(xiàn)有檢測(cè)方法是從生物學(xué)效應(yīng)角度檢測(cè)生物制品中小鼠仙臺(tái)病毒的潛在感染，其中因制劑在制備過(guò)程中經(jīng)過(guò)了多個(gè)工藝步驟的處理，殘留鼠源病毒的活病毒抗原及病毒抗體存在的可能性極小，而本發(fā)明從病毒核酸角度進(jìn)行檢測(cè)，相對(duì)前述藥典規(guī)定方法而言，提高了檢測(cè)的靈敏度。利用本發(fā)明中的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)鼠源生物制品中仙臺(tái)病毒時(shí)，可以準(zhǔn)確定量，目標(biāo)RNA在IO2 IO7濃度范圍內(nèi)，都有很好的線性關(guān)系，靈敏度高可達(dá)至Ij 20copies/y 1 (lOOcopies/reaction)；3、重復(fù)性、準(zhǔn)確性和特異性本發(fā)明中的引物和探針根據(jù)小鼠SEV基因組序列設(shè)計(jì)，且與小鼠基因組無(wú)同源性，檢測(cè)特異性強(qiáng)，重復(fù)性好；4、準(zhǔn)確性更高本發(fā)明使用的是RNA標(biāo)準(zhǔn)品，更貼近病毒的天然狀態(tài)；同時(shí)，在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都是RNA，在提取和擴(kuò)增體系上具有一致性，彌補(bǔ)了使用DNA標(biāo)準(zhǔn)品無(wú)法衡量在RT步驟中的檢測(cè)效率的缺陷，準(zhǔn)確性更高；5、回收率高本發(fā)明從提取步驟開(kāi)始(而不只是熒光定量PCR過(guò)程)衡量了整個(gè)方法的可行性。行業(yè)內(nèi)通用標(biāo)準(zhǔn)要求檢測(cè)方法的回收率要達(dá)到50%以上，本發(fā)明實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法回收率均達(dá)到了 80%以上，是一種理想的可替代現(xiàn)有藥典規(guī)定的檢測(cè)方法。


1、圖1為實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量曲線；2、圖2為實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實(shí)施例方式以下所舉實(shí)施例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。下述實(shí)施例中所述試劑原料除特別注明來(lái)源外，均為市售的常見(jiàn)原料，試劑的配制采用常規(guī)方法。實(shí)施例中未詳述的方法均為本領(lǐng)域常規(guī)操作，詳見(jiàn)《分子克隆》第三版。實(shí)施例1小鼠仙臺(tái)病毒專(zhuān)用引物和探針的設(shè)計(jì)仙臺(tái)病毒RNA共由15383個(gè)核苷酸組成，編碼6個(gè)病毒結(jié)構(gòu)蛋白和一個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，6 個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白為 L(Iarge)，P (RNA polymerase), NP (nucleocapsid)， HN(hemagglutinin—neuraminidase)，F(xiàn)(Fusion)禾口 M(membrane)。一個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白 C 是病毒特有的蛋白。其基因排列次序?yàn)椋?’ -Leader-NP-P+C-M-F-HN-L-Leader-5’，在3’端和 5’端各有一段前導(dǎo)序列。通過(guò)比對(duì)GenBank內(nèi)不同株系SEV的基因組，選取病毒非結(jié)構(gòu)蛋白中保守的同源序列即SEQ ID NO :4所示核苷酸序列。針對(duì)找出的保守的同源序列區(qū)域設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)專(zhuān)用引物和探針序列，擴(kuò)增出的目的片段大小為100堿基。其中優(yōu)選的引物、探針序列為上游引物QSEV-IOObp-F :5，-GAAAGAGATGGCTACATTGTT_3，，即 SEQ ID NO :1 所示核苷酸序列；下游引物QSEV-IOObp-R 5，-AAACACATAACTCGCGTCT-3，，即 SEQ ID NO 2 所示核苷
酸序列；所述探針QSEV-IOObp-P 5，-AGTCTTGGTGTAATCCAGTCTGCTC-3，，即 SEQ ID NO 3 所示核苷酸序列；所述探針的5’端用熒光報(bào)告基團(tuán)FAM標(biāo)記，3’端用熒光淬滅基團(tuán)TAMRA標(biāo)記。用設(shè)計(jì)的引物、探針進(jìn)行同源性比對(duì)后發(fā)現(xiàn)其只對(duì)小鼠仙臺(tái)病毒具有高度保守型，與小鼠基因組/EST、及其他近緣病毒不同源，其特異性較高。實(shí)施例2陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品的制備首先制備含有同源序列SEQ ID NO 4所示核苷酸序列的pMD18_T載體，以其為載體擴(kuò)增得IOObp的DNA片段，回收進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后消化DNA模板并純化RNA， 定量后作為陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品。1、體外轉(zhuǎn)錄模板的制備合成SEQ ID NO :4所示核苷酸序列，并將其插入pMD18_T載體中制備而成 (由hvitrogen公司合成)，命名為pMD18T_SEV。以pMD18T_SEV為模板，用上游引物 SEV-IOObp-F :5，-TAATACGACTCACTATAGGGCATCTATG-3，和下游引物 SEV-IOObp-R 5，-TTTGCAAACACAATAC-3，進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增出IOObp的DNA片段，瓊脂糖凝膠電泳回收后，作為體外轉(zhuǎn)錄的模板。2、體外轉(zhuǎn)錄制備大量RNA在RNase free的EP管中配制反應(yīng)體系，具體配制比例如下所示
權(quán)利要求
1.用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的引物，其特征在于，所述引物是由具有序列表中的SEQID NO 1的上游引物與具有序列表中的SEQ ID NO 2的下游引物組成的一對(duì)寡核苷酸。
2.一種與權(quán)利要求1所述引物配合使用的探針，其特征在于，所述探針具有序列表中的SEQ ID NO 3的核苷酸序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的探針，其特征在于，所述探針5’端連接有熒光報(bào)告基團(tuán)，3’ 端連接有熒光淬滅基團(tuán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的探針，其特征在于，所述熒光報(bào)告基團(tuán)選自FAM、VIC、J0E、HEX 中的任意一種，所述熒光淬滅基團(tuán)選自TAMRA或Ecl ipse。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的探針，其特征在于，所述熒光報(bào)告基團(tuán)為FAM，所述熒光淬滅基團(tuán)為T(mén)AMRA。
6.一種用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的方法，其特征在于，所述方法使用權(quán)利要求1中所述的引物及權(quán)利要求2 5任一所述的探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)體系還包括 RT-PCR擴(kuò)增試劑、陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品、酵母tRNA稀釋液、陰性質(zhì)控品、空白對(duì)照。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的退火溫度為 60 "C。
9.根據(jù)權(quán)利要求6 8任一所述的方法，其特征在于，所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)條件為:48°C, 15min ；95°C, IOmin ；95°C，15sec，60°C，40sec，共 40 個(gè)循環(huán)。
10.根據(jù)權(quán)利要求6 9任一所述的方法，其特征在于，所述方法還包括標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立，方法為擴(kuò)增含序列表中SEQ ID N0:4所示的堿基同源序列的pMD18-T載體，得到IOObp 的DNA片段，體外轉(zhuǎn)錄所述DNA片段并純化獲得的RNA作為陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品，將其十倍稀釋成不同濃度的陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品，以所述陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，得到檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
11.一種檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權(quán)利要求1中所述的引物及權(quán)利要求2 5任一所述的探針。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應(yīng)體系還包括 RT-PCR擴(kuò)增試劑、陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品、酵母tRNA稀釋液、陰性質(zhì)控品、空白對(duì)照。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的試劑盒，其特征在于，所述RT-PCR擴(kuò)增試劑為2X Taqman PCR Mix、40XTaqman RT-Enzyme MIX。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13任一所述的試劑盒，其特征在于，所述陽(yáng)性RNA標(biāo)準(zhǔn)品通過(guò)下述方法獲得擴(kuò)增含序列表中SEQ ID NO 4所示的堿基同源序列的pMDIS-T載體，得到 IOObp的DNA片段，體外轉(zhuǎn)錄所述DNA片段并純化獲得的RNA即標(biāo)準(zhǔn)品。
15.權(quán)利要求1中所述的引物或權(quán)利要求2 5任一所述的探針在檢測(cè)鼠源生物制品中仙臺(tái)病毒殘留時(shí)的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒的引物、探針及其方法，所述引物是由具有序列表中的SEQ ID NO1的上游引物與具有序列表中的SEQ ID NO2的下游引物組成的一對(duì)寡核苷酸，與所述引物配合使用的探針具有序列表中的SEQ ID NO3的核苷酸序列。用本發(fā)明的方法及試劑盒檢測(cè)小鼠仙臺(tái)病毒具有快速簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性強(qiáng)且回收率高的優(yōu)點(diǎn)，解決了現(xiàn)有檢測(cè)手段復(fù)雜費(fèi)時(shí)，周期長(zhǎng)，且對(duì)操作的實(shí)驗(yàn)室有一定要求的不足，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12Q1/70GK102337358SQ201110340728
公開(kāi)日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2011年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月2日
發(fā)明者周志文, 李萃, 王剛, 蔣立新, 譚淑萍 申請(qǐng)人:舒泰神(北京)生物制藥股份有限公司