專利名稱：海島棉受體類似蛋白激酶基因啟動子及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及海島棉受體類似蛋白激酶基因啟動子及其應用。
背景技術：
植物基因調控主要是在轉錄水平上進行的，受多種順式作用元件和反式作用元件的調控。植物基因啟動子是重要的順式作用元件，是位于結構基因5'端上游區(qū)的DNA序列，能指導酶與模板的正確結合，活化RNA聚合酶，并使之具有起始特異性轉錄的形式，決定轉錄的方向和效率以及所使用的RNA聚合酶類型，是轉錄調控的中心。按其作用方式及功能，可將植物基因工程中常用的啟動子分為3類，即組成型啟動子、組織特異型啟動子和誘導型啟動子。棉花是重要的經濟作物，棉纖維是主要的紡織原料。隨著可耕地面積的減少，環(huán)境的惡化，棉花的生產受到很多種生物和非生物因子的影響，尤其是我國枯、黃萎病，給棉花生產造成很大的損失。通過傳統(tǒng)的育種方法已經很難滿足現代農業(yè)需求，所以通過基因工程的方法來改良現有品種將是今后育種的主要方法。目前，通過轉基因改良農作物，所使用的啟動子大多是組成型啟動子。常用的組成型啟動子有花椰菜花葉病毒(CaMV)的35S啟動子、根癌農桿菌Ti質粒的胭脂堿合酶(N0Q啟動子和章魚堿合酶(0CQ啟動子。35S啟動子是使用最多最頻繁的啟動子。由于組成型啟動子在轉基因作物的不同時期和不同部位均能表達，因此，在轉基因作物中也存在一系列問題。Kohli等(1999)的研究表明，CaMV 35S 啟動子中有19bp左右的回文序列的重組熱點。根據這一結論，Cummins等Q000)和張艷華等Q003)列出CaMV 35S啟動子的潛在風險(1)如果35S啟動子插入到原來整合到植物基因組中的隱性病毒基因組旁，可能會重新活化病毒；( 如果該啟動子插入到某一編碼毒素蛋白的基因上游，可能會增強該毒素的合成；C3)當轉基因植物被動物或人類食用時，CaMV 35S啟動子可能會通過基因的水平插到某一致癌基因上游，活化并且導致癌癥的發(fā)生。魏偉等000 研究還發(fā)現，組成型啟動子CaMV35S啟動抗蟲基因表達，可能會降低棉花植株體內殺蟲物質濃度，同時還消耗棉株大量的能量，影響其殺蟲效果，甚至導致轉基因棉花在正常環(huán)境下都會出現生長延滯的現象。因此，尋找特異性或誘導型啟動子驅動相關基因的表達，可能有利于上述問題的解決。組織或器官特異性啟動子調控下的基因轉錄一般只發(fā)生在某些特定器官或組織中，并往往表現出發(fā)育調節(jié)的特性。組織特異性啟動子啟動外源基因在轉基因植物中的特定組織中表達，不但可以降低植物耗能、減輕對植物形態(tài)和生長發(fā)育的影響，還可以提高外源基因在特定部位的表達濃度，增強轉基因的效果。與組織器官特異性啟動子相比，誘導型啟動子有著獨特的優(yōu)點可根據需要在植物特定的發(fā)育階段、組織器官或生長環(huán)境下，讓其接受誘導信號，誘導目的基因的表達；也可解除脅迫， 讓目的基因的表達停止，可快速誘導基因轉錄的“開”與“關”。采用誘導型啟動子使外源基因能夠定時、定點、定量地在植物中表達。本發(fā)明所克隆的是受體類似蛋白激酶的啟動子，類受體蛋白激酶(receptor likeprotein kinase,RLKs)屬于蛋白激酶的一個亞家族，位于細胞膜上，作為信號分子的受體， 能夠感受外界刺激，參與胞內信號轉導過程，在植物生長發(fā)育過程中起著重要的作用。受體蛋白激酶參與了植物許多由激素和胞外環(huán)境信號引起的生理生化過程，如，自交不親和、調節(jié)胚乳和花粉的發(fā)育、花的脫落、油菜素類固醇信號反應、環(huán)境脅迫及植物抗病等。在已克隆的抗病基因中水稻的)(a21、擬南芥的PBS1、大麥的RPG1、番茄的PTO都含有受體蛋白激酶保守結構域。然而，關于受體蛋白激酶相關基因從啟動子結構、功能及作用機制角度上進行闡述，進展緩慢，目前報道較少。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是克隆一個海島棉受體類似蛋白激酶基因((ibRLK) 的啟動子序列。采用在線軟件Neural Network Promoter Prediction預測轉錄起始位點 (Transcriptional start site, TSS)，采用 PlantCARE、PLACE 等生物信息學分析軟件對啟動子區(qū)中潛在的順式調控元件進行預測。根據預測結果發(fā)現在-l/_644bp中包含啟動子的核心元件，在-644bp/-1476bp中包含一個與病菌誘導相關的順式調控元件W-box， 在-1467bp之后包含一些其他的響應元件。通過設計三對引物，構建含核心元件和不同調控元件區(qū)的三個啟動子缺失載體，載體為35S-pCAMBIA1301-N0Rs。按照激酶基因的起始密碼子ATG的A為+1，則三個載體包含的序列分別為-l/-644bp，-l/-1476，-l/-1890，并分別將其命名為1301-1，1301-2，1301-3。三個重組載體轉化擬南芥，轉基因后代經過⑶S染色， 定量檢測其在各種生物和非生物脅迫后⑶S活性的變化。同時將pCAMBIA1301 (CaMV 35S) 植物表達載體轉化到擬南芥中并篩選獲得轉基因植株，以此作為對啟動子表達活性進行分析的陽性對照。本發(fā)明公開了一種海島棉受體類似蛋白激酶基因((ibRLK)啟動子，長度為 3183bp，其核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。從第1313bp至第3183bp(^ 1890bp)為該啟動子功能研究涉及的序列，第3183bp后接受體類似蛋白激酶的起始密碼子atg。啟動子 1890bp區(qū)域的分析如下.-1890 AGGTTGGTCTGGCTCGGGATAAAAATTTGAAATGAGAAACTTGGAAAAATTGTTCTTTTG-1830 TTTTGGTTTATTTTTGTAAGGTTTGTGTGAACTGCCTGACAATACTCACCATGGATTATTGATA-BoxGATA-Box- 1 7 7 0 CTTGCTTCTTAG ^Α ^ TAGCAGTATTT ^Α ^ GACAGACAGACAGACAGGTAGGTAATATA-1710 TATATAGGGTAGTAGTTGTTGTGCCCCATCCGTTTAATTGATGTATTCTGTAATTAAAAA-1650 AAATTGCGAAAGAGGGATCTTGCATTTTCTTTATTATTATTACTATTATTATTGACTAAG-1590 GTTTTTTATTCTAAGACTTTAAGGTCTTCGCAAACAAATTTTTTTCCCTTGCATTCCTTTMYC-consensus AGM0TIFNTMYB2-1530 TAAACTTAAC |catctg| GATTTATTAAATGAGTTAAC iagatccaa丨 AGAAACAAACACAATAMYBIAT-1470 AAGTCCCGATTACACAATAATCAAAAAAGAAAATAAAAGGTCGCCTAAAATA Kaacc^ TARoot-motif
-1410TGCTTTGAAAACCGCTAAAACTGATG Ktatt| TTAGGAGCTTCAAAATTAATCCTAATTAC-1350CCAGCTGATTTGATCCCAAGTAGCCTCCTCTCTTCATCTTTTATCATTTTTATTTCAGTTBox-fflTCA-elementRoot-motif-1290tctggaagaa |ttgaccctctttttt| ctcaaagtatttttaccccttacgtcttaa ^TATTlRoot-motifRoot-motif- 1 2 30 GATTACTAAAGTTA ^tat^ TCATGCCATTT ^TAT^ TAATTAAGGATTTAAAGTTTAGGGTABRE-1170ttaattatctaagcatttaattaactcaaccatacctt |cacgtg| tagttttcatggtgaa-1110TAATACAAGGCTTTTGATGTTGAATGTTAATCAAGATATTTCATTGAAAATTATGACTGA3-AFl Rinding Site-1050aggaagcgg kagagataat^ caactcttaattggtaaattacactaattagtcattaaat-990TATGGGTAAGTTTTCATTTTTGTCACTTACTAAAAAAGTTATAGTTTGATCATTAAATTA
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-90ATAGCATACGTATGCCGTCTATGCCGTGAAAGACTTGGAAGAGAAAGCAGCGATAGTGTT
-30 TGCCCAGAAACTCAATCTATAACACTAAACATG其中，末尾下劃線部分為受體類似蛋白激酶基因的起始密碼子，以起始密碼子ATG 的A為+1?；疑尘靶蛄袨轭A測的基礎啟動子序列(TATA-box和CAAT-box)。較大的加粗黑體字母A為預測的轉錄起始位點。方框內的序列為光響應相關的調控元件、生長及調控相關的調控元件和與激素及逆境響應相關的調控元件。本發(fā)明從海島棉海71 中克隆受體類似蛋白激酶基因((ibRLK)的啟動子，并驗證其功能的技術路線是1.利用已經克隆的受體類似蛋白激酶5'端序列，設計sefa-PCR(SelIf-Formed Adaptor PCR)引物。sefa-PCR由南京農業(yè)大學生命科學院微生物系王世明博士設計開發(fā)的一種新的 PCR 技術(Wang SM, He J, Cui ZL, et al. Self-Formed Adaptor PCR :a simple and efficient method for chromosome walking. Applied And Environmental Microbiology, 2007，73，5048-5051)。該技術是通過在已知序列的5，端設計巢式引物，擴增上游未知序列的方法。以海島棉海7124DNA為模板，進行PCR擴增?；厥掌?，將回收的片段連入PGEM-T easy Vector (Promega)。挑取10個陽性克隆送上海英俊生物技術有限公司測序。2.采用在線生物軟件Neural Network Promoter Prediction預測轉錄起始位點 (Transcriptional start site, TSS)，采用 PlantCARE、PLACE 等生物信息學分析軟件對啟動子區(qū)中潛在的順式調控元件進行預測。3.根據分析結果以及研究目的設計三對引物，構建缺失表達載體， 如果命名激酶基因的起始密碼子ATG的A為+1，則三個載體包含的序列分別為-l/-644bp，-1/-1476，_1/_1890，分別將其命名為 1301-1，1301-2，1301-3。所用載體為 35S-pCAMBIA1301-N0Rs。4.用擬南芥泡花的方法將構建好的載體轉化擬南芥獲得轉基因種子。5.將轉化獲得擬南芥種子鋪在含有20mg/L潮霉素的MS培養(yǎng)基上篩選。6.將篩選獲得的轉基因擬南芥用⑶S染色。7.轉基因擬南芥用ABA、PEG、NaCl和黃萎病落葉型菌株VD8等逆境處理(具體處理方法見下面具體實施方式
)，定量測定GUS活性。上述海島棉受體類似蛋白激酶基因啟動子作為靶基因的應用。有益效果本發(fā)明海島棉受體類似蛋白激酶基因((ibRLK)的啟動子是從海島棉海71M中得到的。轉基因后代經過GUS染色，發(fā)現該啟動子主要在根中維管束和葉片中的葉脈中優(yōu)勢表達。用PEG，NaCl，黃萎病菌，ABA處理轉基因后代，⑶S基因的表達活性顯著提高。該啟動子具有組織特異表達的特性，同時具有誘導表達啟動子的特性。因此以該啟動子作為研究目標，可以探索植物抗逆的機制，同時，利用該啟動子轉化作物可以使外源基因能夠定時、定點、定量地在植物中表達，可以降低植物耗能、減輕對植物形態(tài)和生長發(fā)育的影響，還可以提高外源基因在特定部位的表達水平，增強轉基因的作用效果。


圖Isefa-PCR結果。M :marker，泳道1為第一輪PCR結果，泳道2為第二輪PCR結果。
圖2轉基因擬南芥PCR檢測。PC 陽性對照，NC 陰性對照，載體1301-3包含最長啟動子序列1890bp，1301-2為次長啟動子序列構建的載體，1301-1為最短啟動子序列構建的載體，1301為空載體。圖3轉基因擬南芥GUS染色結果。所用轉全長啟動子的其中一個陽性克隆，1 轉基因后代3天苗齡染色結果，2 7天苗齡染色結果，3 15天苗齡染色結果，4 根，5 成熟葉片，6 莖，7 氣孔，8 葉片⑶S染色在顯微鏡下觀察結果，9 根⑶S染色在顯微鏡下觀測結果。圖4轉基因對照擬南芥⑶S染色結果。1和2為非轉基因⑶S染色結果，3和4為轉空載體陽性對照，5 陽性對照根部染色結果，6 陽性對照葉脈染色結果，7和8為陽性對照在顯微鏡下觀察結果，7 葉片，8 氣孔。圖5含不同啟動子調控元件區(qū)域的載體轉基因后代中GUS活性測定結果。圖6三個缺失表達載體轉基因后代用PEG，NaCl，黃萎病菌，ABA處理后，⑶S活性的測定結果。 圖7(ihRLK基因上游序列的順式元件預測。
具體實施例方式根據下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的內容僅用于說明本發(fā)明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。實施例1 第一輪SEFA-PCR 擴增反應體系為
IOxLABufFer II(MgCl2 Plus ) 1.5μ1 dNTPs(each 10 mM)2.5μ1
LADNA 聚合酶(5 U/μ )0.2μ1
SP3(25pM)0.4μ1
Genomic DNA1 μ
ddH209.4μ1
總體積15μ1。反應程序為A -MVImin ；94"C30sec ；37 "C3minRamp to 70°C at 0. 2°C /S。PCR反應A結束后，取出PCR管，加入2. 5 μ 1的SPl后繼續(xù)進行PCR ；B :94V30sec
70"C5. 5min,94 °C30sec。PCR反應B進行25cycle，然后進行PCR反應C 8cycleC 94°C 30sec50 °C 30sec70 °C 5min。第二輪SEFA-PCR 擴增PCR反應體系為
IOxLABuffer II(MgCl2 Plus ) dNTPs(each 10 mM) LADNA 聚合酶((5 U/μΙ) SP2(25pM )
第一步PCR產物 ddH20
總體積反應程序為
95 "C5min
94 °C40s、
58°C40s J 30 cycles
72 °C3min
72 °CIOmin應用以上描述的實驗方法，根據已克隆的受體類似蛋白激酶5'端的非翻譯調控序列設計槽式引物SPl，SP2和SP3，設計3'端sefa-PCR引物如下SPl 5' -GCAAACACTATCGCTGCTTTCTC-3‘；SP2 5' -CCTGGTTGAACGGCTTAGTGA-3‘；SP3 5' -TGATCACCTGTCCCTGGNNNNNNNNNGAAAGA-3'。SP3為簡并引物，N為簡并堿基。以海島棉海7124DNA為模板，進行PCR擴增。擴增的第一輪和第二輪產物同時電泳，由結果可知第二輪產物稍大于第一輪產物(圖1)，因此回收第二輪產物，克隆于PGEM-T fesy載體并進行序列測定。測序結果表明3'端序列與已知的序列完全重疊。隨后在測序得到的序列5'端設計引物與基因3'端特異引物配對，以海7124DNA為模板，擴增獲得的序列回收，測序，結果包含基因的完整ORF框和SEFA-PCR的方法得到的序列。由此可知， SEFA-PCR的方法得到的序列是受體類似蛋白激酶5'端的非翻譯調控序列，共獲得基因起始密碼子上游3183bp序列。
1.5μ1 2.5μ1 0.2μ1 0.4μ1 0.25μ1 10.25μ1 15μ1。
實施例2:采用在線生物軟件Neural Network Promoter Prediction預測轉錄起始位點 (Transcriptional start site, TSS)，采用 PlantCARE、PLACE 分析測序結果。我們預測到兩個轉錄起始位點，分別是-221處的A和-1664處的A，分析得分分別是 0. 91 和 0. 99。在-247/-251 位置上有一個 TATA-Box (ATATA)，在-257/-261 和-289/-293位置處各有一個CAAT-Box，它們均為高等植物基礎啟動子所必有的表達調控元件。在-366/-371，和-1127/-1132 位置處有兩個 ABRE，在 _752/_756，-1276/-1280，-15 75/-1579位置各有一個W-Box，在-613/-620位置有一個與木質部相關基因啟動子區(qū)域的順式元件。同時啟動子區(qū)域還包括一些與轉錄因子如MYB，MYC和WRKY等結合的區(qū)域，四個 Root-Motif，以及與光響應相關的調控原元件。實施例3:根據分析結果以及研究目的我們選取基因上游1890bp序列，設計三對引物，構建含不同啟動子調控元件區(qū)域的缺失表達載體，所用載體為35S-pCAMBIA1301-N0Rs。用目標序列代替原始載體中的35S啟動子。根據啟動子序列設計的引物為FI 5' -CCGGAATTCTTTTAATTAGGGTAGACAG-3'；F2 5' -CCGGAATTCACAATAAAGTCCCGATTAC-3'；F3 5' -CCGGAATTCAGGTTGGTCTGGCTCGGGATA-3'；Rl 5' -GAAGATCTACCATGTTTAGTGTTATAGATTGAG-3'；構建的載體通過PCR擴增、酶切和測序驗證，結果表明所構建的載體正確。實施例4:將構建好的載體轉入農桿菌菌株GV3101，用農桿菌泡花的方法轉化擬南芥，轉化后收到的種子在含有20mg/L的潮霉素的MS培養(yǎng)基上篩選。將陽性克隆移栽，取陽性植株的葉片，提取DNA，分別用潮霉素基因引物和啟動子序列特異引物擴增(圖2)。對檢測陽性的植株收種。實施例5:將收獲的種子種植在含有20mg/ml的潮霉素的MS培養(yǎng)基上，選擇陽性植株用GUS 染色，將小苗放在GUS染色液中37°C過夜。GUS染色液由50mmol Γ1磷酸鈉緩沖液(ρΗ 7.0)、5mmol Γ1 K4Fe (CN)6,5mmol Γ1 K3Fe (CN)6UOmmol Γ1 EDTA、0. 1 % TritonX-100 和 1. Omg ml^X-Gluc組成，用0. 45 μ m濾器過濾除菌。染色結果表明⑶S報告基因的表達主要發(fā)生在轉化植株的微管組織中，且集中在根、葉脈、葉柄和莖的導管組織處，在氣孔處有非常微弱的表達。而在葉肉細胞、子葉和根毛等部位沒有GUS基因的表達。相對于幼嫩葉片，成熟葉片中GUS基因的表達量有所降低(圖 3)。這些結果與組成型強啟動子即花椰菜花葉病毒(CaMV) 35S啟動子驅動下的GUS基因表達(圖4)明顯不同，表明(^bRLK基因啟動子是一個組織特異型啟動子。實施例6:選擇陽性植株種植在滅菌的培養(yǎng)基質中，四周后進行脅迫處理(1)高鹽處理將擬南芥幼苗置于含有200mM NaCl MS溶液中，25°C恒溫，分別處理0h，4h，》!，Ia1后取樣，部分迅速置于液氮速低溫后，-70°c保存?zhèn)溆茫?2) ABA處理室溫25°C條件下用200 μ M ABA溶液噴施擬南芥植株葉片，分別處理0h,2h,4h,6h, 8h后取樣，迅速置于液氮速低溫后，-70°C保存?zhèn)溆茫?3)干旱處理將擬南芥幼苗置于含有20% PEG6000的MS溶液中，25°C恒溫，分別處理0h，4h，8h，12h后取樣，迅速置于液氮速低溫后，-70°C保存?zhèn)溆茫?4)對照處理未經任何處理的擬南芥幼苗置于MS溶液中，在相同生長環(huán)境條件下，在0h，2h，4h，6h，他，1 相對于其他脅迫處理同時取樣，迅速置于液氮速低溫后，-700C 保存?zhèn)溆谩?5)病菌處理將擬南芥幼苗根部浸入含有IX IO7個/ml的孢子懸浮液，Imin后移栽到滅菌的培養(yǎng)基質中，同時相應接種水作為模擬對照，接種后植株保濕，分別在接種后 Oh,48h，96h，144h取樣，迅速置于液氮速低溫后，_70°C保存?zhèn)溆?。實施?:⑶S活性的測定7. 1樣品準備取0. Ig保存于-70°C的材料于2. Oml離心管中，加入液氮，研成粉末，加600ul酶提取液。13000rpm 4°C離心lOmin，取上清，即為樣品提取液，備用。7. 2 試劑配制提取緩沖液[50mmol/L Na3P04 (ρΗ7· 0)，lmmol/L EDTA, 0. 1 % TritonX-100, lOmmol/L]，β -—巰基乙醇，反應緩沖液[⑶S提取緩沖液，lmmol/ L4-methylumbelliferyl glucuronic^ 0-MUG)]、終止緩沖液(0. 2mol/L Na2C03)、考馬斯亮藍染液[IOOmg考馬斯亮藍溶于50ml 95%乙醇中，然后加入100ml磷酸，用H2O定容1L， 過濾后置于4°C保存]。7. 3蛋白濃度的測定采用Bradford法(1976)。利用Promega公司提供的牛血清蛋白(BSA)貯存液(10mg/ml)配制 0 μ g/ml，5 μ g/ml，10 μ g/ml，15 μ g/ml，20 μ g/ml， 30 μ g/ml以及40 μ g/ml梯度液(每430 μ 1溶液中均含有30 μ 1提取緩沖液，以ddH20為溶劑)，每430 μ IBSA梯度液分別加入600 μ 1考馬斯亮藍染液，混勻，并于酶標儀中測定 595nm光吸收值。吸收值對蛋白濃度作圖繪制標準曲線；取30 μ 1樣品提取液，加入400 μ 1 ddH20以及600μ 1考馬斯亮藍染液，混勻，并于酶標儀中測定595nm光吸收值，根據標準曲線計算樣品蛋白質含量。7. 4⑶S熒光定量測定取60 μ 1樣品提取液，加入60 μ 1反應緩沖液，混勻，于 37°C水浴鍋中保溫反應；分別在Omin, 5min, lOmin, 15min, 30min和60min各取20 μ 1樣品并迅速轉移到1. 5ml終止緩沖液中終止反應。利用酶標儀在激發(fā)光365nm，發(fā)射光455nm 條件下測定樣品熒光值。以蒸餾水制備0. lymol/L 4-甲基傘形酮G-MU)作為熒光標準物，測定其熒光值，并以此計算樣品中4-MU含量。利用Microsoft Office Excel軟件畫出不同時間對應樣品4-MU含量的函數曲線(線形)，求出每分鐘生成的4-MU含量即GUS活性反應初速度，再除以每個樣品的蛋白含量，最終得到GUS反應活性單位為pmol 4-MU/mg protein/min。結果表明，缺失載體1301-2⑶S基因表達強度最高，載體1301-3的表達強度次之， 但與1301-2相比，差異較大。載體1301-1的啟動子表達強度還不到1301-2的40%，1301-3 的表達活性約為1301-2的60%。三個載體的⑶S活性強度差異都達到顯著性水平(圖 5)。該啟動子受到PEG NaCl，ABA和黃萎病菌等四種脅迫誘導因子處理后，表達活性明顯上升。載體1301-1在ABA處理后⑶S蛋白活性開始上升，在處理4h后⑶S蛋白的活性達到高峰，上調2. 5倍。這表明該區(qū)段包含響應ABA誘導的區(qū)域。該區(qū)段同時對PEG，NaCl 和黃萎病菌等誘導因子也有響應，但對黃萎病菌和NaCl的響應較小，GUS活性上調分別為 1. 4倍和1. 7倍。各種脅迫處理載體1301-2后，⑶S活性的分別上調2. 5，2. 5，2. 5和3. 1 倍。1301-3載體與1301-2相比，⑶S活性下降很多，在用PEG，NaCl，ABA和黃萎病菌等誘導因子處理后，⑶S活性的上調倍數分別是3. 1，1. 5,3. 2和2. 9。以上結果表明在-l/_664bp 位置處存在對ABA，PEG, NaCl，黃萎病菌起誘導作用的響應元件，在-664/_1475bp區(qū)段包含對病菌誘導起增強效應的反應元件(圖6)。
權利要求
1.海島棉受體類似蛋白激酶基因啟動子，長度為318;3bp，核苷酸序列如SEQID NO. 1 所示。
2.權利要求1所述海島棉受體類似蛋白激酶基因啟動子作為靶基因的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了海島棉受體類似蛋白激酶基因啟動子及其應用，該啟動子長度為3183bp，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。受體類似蛋白激酶基因編碼蛋白產物與植物脅迫反應的信號傳導有關，基因的啟動子是一個維管束特異的啟動子，受生物和非生物誘導表達，可通過基因工程方法利用該啟動子增強目標基因在維管束中表達水平，以改良棉花對黃萎病和非生物脅迫的抗性。
文檔編號C12N15/113GK102373205SQ201110340220
公開日2012年3月14日 申請日期2011年11月1日 優(yōu)先權日2011年11月1日
發(fā)明者張?zhí)煺? 張朝軍, 趙君, 郭旺珍 申請人:南京農業(yè)大學