專利名稱：一個編碼β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的基因及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一個編碼β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的基因，該基因編碼的蛋白質(zhì)可用淀粉為原料直接來生產(chǎn)β-環(huán)糊精。
背景技術(shù)：
環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(CyclodextrinGlycosyltransferase,CGTase)為食品工業(yè)中的重要酶。CGTase能夠催化4種不同的酶反應(yīng)，分別為水解、環(huán)化、歧化和偶聯(lián)反應(yīng)。環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(EC 2. 4. 1. 19)是糖基水解酶α -淀粉酶家族(糖基水解酶家族13) 的重要成員，其獨特功能是將淀粉轉(zhuǎn)化為環(huán)糊精。環(huán)糊精(Cyclodextrin，簡稱⑶)是由淀粉或淀粉衍生物在環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的環(huán)化反應(yīng)催化下生成的環(huán)狀α-1，4-葡聚糖，是非還原性的麥芽低聚糖。⑶通常由6-12個D-吡喃葡萄糖基以α-1，4_葡萄糖苷鍵連接而成，其中研究最多、應(yīng)用最廣的是由6，7和8個葡萄糖殘基組成的環(huán)糊精，分別稱為α-、β-和γ-⑶(Ronan Μ. Kelly, Lubbert Dijkhuizen, Hans Leemhuis. 2009. The evolution of cyclodextrin glucano-transferase product specificity. App1. Microbiol. Biotechnol. ,84 (1) 119-133.)。環(huán)糊精中葡萄糖單元的空間排列，使其外緣親水而內(nèi)腔疏水，因而環(huán)糊精能夠作為宿主分子和多種疏水性客體分子結(jié)合形成包絡(luò)配合物，從而改變客體分子的性質(zhì)。因此，環(huán)糊精在食品、醫(yī)藥、化妝品、農(nóng)業(yè)等相關(guān)領(lǐng)域具有廣泛的用途(Del Valle EMM. 2004. Cyclodextrins and their uses :a review. Process Biochem. ,39(9) : 1033-1046·)0目前，環(huán)糊精主要是用于食品工業(yè)中(Lajos Szente, Jozsef Szejtli. 2004. Cyclodextrins as food ingredients. Trends Food Sci. Tech. , 15 (3-4) :137-142.)。其功能主要包括以下幾個方面(1)穩(wěn)定食品中的某些成分。( 除去食品中的臭味和苦澀味。 (3)可以使某些食品形成長期穩(wěn)定的乳狀液。(4)增大食品的起泡力。( 將液體食品變?yōu)楣腆w粉末，便于包裝、運輸、貯存和使用。如用環(huán)糊精制粉末酒，穩(wěn)定性高，加冷水溶解與原來酒風(fēng)味相同。(6)與防腐劑一起使用，可提高防腐效果。環(huán)糊精本身不能防腐，但與防腐劑一起使用，可使防腐劑長期有效。(7)作為食品生產(chǎn)輔料。另外，目前環(huán)糊精比較流行的一種應(yīng)用是從動物制品如雞蛋和奶制品中去除膽固醇，經(jīng)過環(huán)糊精處理，能夠去除制品中80%的膽固醇，也能從脂肪中去除自由脂肪酸，從而改善脂肪的油炸性能，如減少油煙和氣泡、不易褐變等；水果和蔬菜汁也能通過環(huán)糊精處理去除能引起酶褐變的酚類化合物。由于環(huán)糊精是無毒或非常低毒的，對健康無任何危害，可以安全地用于食品工業(yè)中(C. Munro, P. M. Newberne, V. R. Young, et al. 2004. Safety assessment of γ -cyclodextrin. Regul. Toxicol. Pharmacol. 39 (Suppl. 1) :3-13.)。在醫(yī)藥工業(yè)中，CD是近年來發(fā)展起來的一種新型藥物載體，它能利用其中空圓筒型特殊結(jié)構(gòu)將藥物分子全部或部分包合而形成非鍵類復(fù)合物，其劑型類似微膠囊， 但環(huán)糊精對藥物呈單分子水平包合，故又稱分子膠囊，該技術(shù)可產(chǎn)生微膠囊和毫微膠■的牛寺(Mark Ε. Davis, Marcus Ε. Brewster. 2004. Cyclodextrin-based
pharmaceutics :past, present and future. Nature reviews, 3 (12) : 1023-1035.)。環(huán)糊精在心腦血管藥物、抗結(jié)核藥物、高血壓藥物、腸胃病藥物等方面有了比較普遍的應(yīng)用。在醫(yī)藥工業(yè)中，環(huán)糊精主要用于以下方面(1)增加藥物的溶解度。( 增加藥物的穩(wěn)定性。(3) 降低藥物的刺激性、毒性和副作用，掩蓋苦味。(4)揮發(fā)性液體和固體、油狀液體的粉末化。 (5)提高藥物的生物利用度。(6)防止藥物與藥物、藥物與添加劑之間的相互作用。在化妝品領(lǐng)域中，環(huán)糊精主要用于增溶香精，防止香精揮發(fā)損失；控制對皮膚有刺激性的表面活性劑使用量，增加化妝品透明感，并不產(chǎn)生油分離析現(xiàn)象；將化妝品的活性成分包合起來，使它不易被氧化和分解，起到穩(wěn)定的作用(Malton，Peter James, Holland, Lynette Anne Makins> Rizzi, George. 2000. Cosmetic compositions comprising cyclic oligosaccharides and fragrance. Wo Pat，2000/067716.)。目前,世界上一些著名的化妝品公司基本上都將環(huán)糊精使用于個人護理產(chǎn)品，主要是利用環(huán)糊精的包合和緩釋特點，將這些活性物質(zhì)和香味包合起來，遇到人體皮膚的溫度和濕度以后起到觸發(fā)作用，活性物質(zhì)和香味開始緩慢均衡地從環(huán)糊精內(nèi)孔釋放出來，并且環(huán)糊精將體表產(chǎn)生體味的分子吸進內(nèi)孔中，成了體味吸收劑，從而消除了體味，這是一個動態(tài)的過程。除了應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和化妝品工業(yè)中，環(huán)糊精在生物技術(shù)、農(nóng)業(yè)、分析化學(xué)、環(huán)保以及紡織等領(lǐng)域也具有非常廣泛的應(yīng)用。在生物技術(shù)領(lǐng)域，由于環(huán)糊精分子空腔對客體分子具有一定的選擇識別能力，因此環(huán)糊精可以用于分子識別，并具有模擬酶的功能；在農(nóng)業(yè)方面，環(huán)糊精可作為植物生長調(diào)節(jié)劑，同時能提高農(nóng)藥的溶解速度和溶解度，增高生物藥效，掩蓋農(nóng)藥異味；在分析化學(xué)中，由于環(huán)糊精能影響有色分子的吸收光譜，對顯色反應(yīng)有增敏、增溶和增穩(wěn)作用，并且能對手性分子進行識別，能用于各類色譜、光譜和電化學(xué)分析中；在環(huán)保方面，環(huán)糊精對土壤等介質(zhì)中的三氯乙烯、氯苯、萘、蒽和DDT等弱極性有機污染物起到增溶作用，并能促進它們的生物降解，CD也能從污染土壤中萃取有機污染物然后利用微生物進行降解。α、β和Y三種⑶均為白色結(jié)晶粉末，無一定熔點，加熱至200°C左右時開始分解，其中β-CD的水溶解度最低，易于結(jié)晶和提純，故其用途引人注目(郭利偉.2007.環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶高產(chǎn)菌株MSUD5的選育、發(fā)酵條件優(yōu)化與酶學(xué)性質(zhì)的研究.西北大學(xué)碩士論文，3-65.)。并且由于環(huán)狀糊精的中空圓柱半徑適中，且又具有與淀粉和糊精一樣的安全性，各方面性能最為良好，在CD中具有最廣泛的工業(yè)用途。CGTase的生產(chǎn)有兩種途徑，其一是采用天然菌株來發(fā)酵生產(chǎn)，主要為細菌(Hans Leemhuis, Ronan Μ. Kelly, Lubbert Dijkhuizen. 2010. Engineering of cyclodextrin glucanotransferases and the impact for biotechnological applications. Appl. Microbiol. Biotechnol. 85 :823-835.)；其二是構(gòu)建基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)CGTase，與其它表達系統(tǒng)相比，大腸桿菌(Escherichia coli)表達系統(tǒng)具有遺傳背景清楚、操作簡便、可以大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)等優(yōu)點，是現(xiàn)階段最常用的表達系統(tǒng)。一般來講，天然菌株發(fā)酵產(chǎn)CGTase 的產(chǎn)量和生產(chǎn)強度均較低，這也是造成環(huán)糊精生產(chǎn)成本較高的主要原因之一。目前，國外對CGTase的研究比較深入，而我國對此酶的研究主要集中在生產(chǎn) CGTase的野生菌株方面，包括篩選野生菌、菌種誘變、發(fā)酵條件優(yōu)化等。并且從自然界中篩選到的產(chǎn)β-CGTase的野生菌株產(chǎn)酶水平普遍較低，且提取純化工藝繁瑣，難以滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需求。目前，國內(nèi)只對來源嗜堿性Bacillus sp. N-227和Paenibacillus sp.這兩個菌株的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因進行了異源表達的研究，如唐上華等人將來源于嗜堿性Bacillus sp. Ν-227 β -CGTase基因分別表達于Ε. coli和B. subtlis (枯草芽孢桿菌) 中(唐上華，馮拮，黃蕊新，等.1990.嗜堿性芽孢桿菌Ν-227 β -環(huán)狀糊精葡基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達.工業(yè)微生物，20 :1-5.唐上華，王磊，周新宇.1995.嗜堿性芽孢桿菌N-227環(huán)糊精葡基轉(zhuǎn)移酶基因在枯草桿菌中的整合表達.工業(yè)微生物，25 1-4.)；王媛等人也將該基因在E. coli中進行表達(王蔭榆，王媛，張紅發(fā)，等.2007.來源嗜堿性芽孢桿菌Ν-227 β -環(huán)糊精葡基轉(zhuǎn)移酶基因分析及在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達.工業(yè)微生物.7 (3) :10-14.)。謝振榮等人將來源類芽孢桿菌屬的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因在大腸桿菌中進行了克隆表達(謝振榮，趙三軍，唐湘華，等.2010.來源I^enibacillus sp.的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達.食品科技，35 (11) 16-19.)。中國專利200910029153. 8公開了“具有高產(chǎn)β -環(huán)糊精能力的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的突變體及突變方法”，江南大學(xué)的陳堅課題組通過對來源于軟化類芽孢桿菌 (Peanibacillus macerans)FB05-01的α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶進行了一系列的突變， 獲得了高產(chǎn)β-環(huán)糊精的α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變酶Κ47Τ，該突變酶的環(huán)糊精產(chǎn)物中β -環(huán)糊精占總環(huán)糊精量的66. 4%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明從廣西南寧篩選的克氏類芽孢桿菌GXKPaenikicillus cookii GX-4)中基因克隆到一個β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，在宿主細胞中表達該基因生產(chǎn)β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，并以淀粉為原料生產(chǎn)環(huán)糊精。本發(fā)明涉及一種β-環(huán)糊精葡萄糖基酶的基因Pcgt，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示，是從實驗室篩選到的克氏類芽孢桿菌GX-4中分離得到。環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列的保守區(qū)、具有序列表中SEQ ID NO. 1所述的堿基序列的外源DNA是由2135個堿基組成，含有完整的β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因Pcgt的開放閱讀框(Open Reading Frame, 0RF), Pcgt基因的起始密碼為ATG，終止密碼子為TAA。Pcgt和芽孢桿菌屬Bacillus sp. B1018 白勺 gene for raw-starch-digesting amylase precursor 同源個生最高，兩者白勺才目似性=2013/2043(99% )。SEQ ID N0.2的蛋白質(zhì)是基因Pcgt編碼的β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物 Pcgt,由692個氨基酸組成，和Pcgt催化功能域同源性最高的為環(huán)狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)白勺 Precursor，eyelomaltodextrin glucanotransferase, M ^ ffi M ft = 672/693(97% )、相同性=679/693(98% )?；騊cgt在大腸桿菌中表達的重組產(chǎn)物Pcgt能夠以淀粉為原料生產(chǎn)環(huán)糊精。本發(fā)明還涉及含有本發(fā)明基因的表達載體，及用于轉(zhuǎn)化本發(fā)明基因的宿主。本發(fā)明提供了一個環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因，該基因所編碼的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在以淀粉為原料生產(chǎn)β-環(huán)糊精中具有廣泛的用途。


圖1是篩選含有β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因Pcgt重組菌株的剛果紅+淀粉的選擇平板圖。圖2是β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶Pcgt以淀粉為底物生產(chǎn)環(huán)糊精的HPLC圖。從圖1 了解到，含有β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因Pcgt的重組菌株能夠在剛果紅+淀粉的選擇平板上形成透明圈。圖2中的A、B和C分別是葡萄糖、α -環(huán)糊精和β -環(huán)糊精的標(biāo)樣，D是Pcgt轉(zhuǎn)化淀粉的產(chǎn)物。從圖2的D中了解到，β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶Pcgt能將淀粉轉(zhuǎn)化成α _環(huán)糊精、β-環(huán)糊精和Y-環(huán)糊精，其中環(huán)糊精產(chǎn)物中β-環(huán)糊精的產(chǎn)量占總環(huán)糊精的63. 42%， 見表1所示，表1為Pcgt轉(zhuǎn)化淀粉的產(chǎn)物比例分析表。
具體實施例方式下述實施方法是為了更好的解釋本發(fā)明，而不應(yīng)該被解釋為限制本發(fā)明的目的。在本發(fā)明的實施例中所用到的材料包括大腸桿菌(Escherichia coli)株系 XLl-Blue、載體pMD19-T (購自大連TaKaRa公司)；表達載體pSE380購自Stratagene公司， 購自TaKaRa、MBI的限制性內(nèi)切酶、修飾酶等試劑。下面將通過實施例對本發(fā)明作詳細描述1、來自類芽孢桿菌屬的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列分析查找到Genbank數(shù)據(jù)庫中已公布的兩個來自類芽孢桿菌屬編碼環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的基因序列。使用SMART軟件在線分析這兩個基因編碼的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)組件，使用 Vector NTI10.0軟件對環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列進行Alignment比對分析，從而獲取環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列基因的同源序列。2、β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因保守區(qū)DNA片段的獲得根據(jù)同源序列，設(shè)計一對弓I物。P-cgtl 5 ‘-CAACAAGCAGAANTTCAGCAC-3，P-cgt4 5 ‘-TTAAGGCTGCCAGTTCAC-3，以從廣西南寧篩選到的克氏類芽孢桿菌GX-4總DNA為模板，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR)擴增得到保守區(qū)DNA片段，大小約為21Λ。將PCR產(chǎn)物直接與pMD19_T載體連接，于 16°C連接12hr。連接產(chǎn)物全部用于CaCl2法轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL1-Blue感受態(tài)細胞中，涂布到含有X-gal、IPTG和100 μ g/mL的氨芐青霉素的LA平板上，37°C培養(yǎng)過夜，待長出單菌落后，分別挑取3個的白色菌落接種于含100 μ g/mL氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)14hr，小量制備質(zhì)粒DNA，再分別用限制性內(nèi)切酶EcoRI完全酶切，進行0. 7 %瓊脂糖凝膠電泳分析，結(jié)果這三個白色菌落的質(zhì)粒DNA均酶切成大小約為4. Skb的DNA條帶。于是，將其中一個質(zhì)粒DNA進行序列測通，命名為P3-6。然后送交上海生工生物工程公司測定 DNA核苷酸序列。3、β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因Pcgt保守區(qū)DNA序列的分析Ρ3-6的外源片段大小為2135bp0使用Vector NTI10. 0軟件對P3-6的DNA序列進行開放閱讀框(Open Reading Frame, 0RF)分析，發(fā)現(xiàn)從51_2U9bp處存在一個0RF，由 2079個核苷酸組成，序列如SEQ ID N0. 1。其中，Pcgt基因的起始密碼子為ATG，終止密碼子為TAA。4、β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因Pcgt編碼的產(chǎn)物Pcgt的氨基酸序列分析β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因Pcgt編碼一個含692個氨基酸的蛋白質(zhì)，用 DNAStar軟件預(yù)測該蛋白質(zhì)的理論分子量大小為75觀2. 16道爾頓。使用SMART在線分析Pcgt的氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)這個蛋白質(zhì)Pcgt不存在信號肽序列。5、β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因Pcgt的克隆和表達使用上游引物5，-TCGCCATGGTGCACCACCACCACCACCACATTACGCCAGCTTGCATGCTGCA G-3，和下游引物5，-CACAAGCTTTTAAGGCTGCCAGTTCACGTTAATG-3，，通過 PCR 擴增 β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因Pcgt，用限制性內(nèi)切酶NcoI和HindIII酶切β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因Pcgt后，與經(jīng)NcoI和HindIII酶切的表達載體pSE380進行連接。再將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌XLl-Blue中，涂布到含ΙΟΟμ g/mL氨芐青霉素的LA平板上。挑取轉(zhuǎn)化得到的單菌落到0. 01 %剛果紅+1 %淀粉+0. 5mmol/L IPTG+100 μ g/mL氨芐青霉素的LA平板上，將平板置于37°C恒溫箱培養(yǎng)他！·，然后進行氯仿熏蒸破胞，把平板置于37°C恒溫箱使表達的Pcgt酶與底物反應(yīng)2 !3hr。觀察選擇平板。然后進一步提取能形成透明圈的克隆子的質(zhì)粒DNA，并將其命名為pSE-Pcgt，用限制性內(nèi)切酶NcoI和HindIII酶切pSE-Pcgt后，進行0. 7 %瓊脂糖凝膠電泳分析，結(jié)果 pSE-Pcgt除有一個4. Ikb的DNA片段外，還有一條大小約為21Λ的DNA片段。將含有質(zhì)粒pSE-Pcgt的重組大腸桿菌XLl-Blue菌株接種到20mL含100 μ g/mL氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)，待OD6tltl為0. 4時，加入終濃度為0. 5mmol/L IPTG、 終濃度為100mmol/L山梨醇和終濃度為2. 5mmol/L甜菜堿，20°C誘導(dǎo)20hr。IlOOOrpm離心3min，收集菌體，用4mL 1 OOmmo 1/L的pH 7. 0磷酸緩沖液重懸菌體，超聲波破胞9min。 12000rpm離心lOmin，上清即為含有β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶Pcgt的粗酶液。6、β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶Pcgt水解淀粉的活力的測定取20 μ 1 β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶Pcgt的粗酶液，加入500 μ 1 IOOmmo 1/L的pH 7. 0磷酸緩沖液，與480 μ 1 1 %淀粉溶液混合，在37°C作用1小時后，加入800 μ 1 DNS溶液，放置沸水中反應(yīng)5分鐘，室溫冷卻，用分光光度計測吸光度0D53(i。吸光度測定值與不同含量的葡萄糖吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線圖作比較計算酶活。所述DNS試劑配制稱取1克NaOH用約 40mL ddH20溶解，再稱取1克二硝基水楊酸、0. 2克苯酚、0. 05克無水亞硫酸鈉、20克四水酒石酸鉀鈉，將其溶解于約30mL (MH2O中，兩種溶液混合，定容到100mL。β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶Pcgt的水解淀粉活性為212U。7、β -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶Pcgt生產(chǎn)環(huán)糊精產(chǎn)物的測定β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶以淀粉為底物生產(chǎn)環(huán)糊精的反應(yīng)取20μ 環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶Pcgt的粗酶液，與(w/v)淀粉溶液(用50mmol/L pH 7. 0磷酸緩沖液溶解)在500 μ 1的反應(yīng)體系中37°C作用3個小時。反應(yīng)時間到后，在100°C加熱10分鐘終止反應(yīng)。Pcgt的產(chǎn)物用高效液相色譜法(HPLC)進行檢測。HPLC檢測的結(jié)果顯示Pcgt 的產(chǎn)物中有葡萄糖、α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精和Y-環(huán)糊精存在，其中環(huán)糊精產(chǎn)物中β-環(huán)糊精產(chǎn)量占總環(huán)糊精的63. 42%。HPLC條件儀器AgilentllOO色譜儀；色譜柱氨基柱；流動相乙腈水(70 30)；流速1. OmL/min ；檢測器RID (折光檢測器)。表1 Pcgt轉(zhuǎn)化淀粉的產(chǎn)物比例分析表
權(quán)利要求
1.一個編碼β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的基因Pcgt，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1 所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的基因所編碼的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列如SEQID NO. 2所示。
3.—種表達載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求1所述的基因。
4.一種宿主細胞，其特征在于，它含有權(quán)利要求3所述表達載體轉(zhuǎn)化的原核細胞或真核細胞。
5.權(quán)利要求2所述的蛋白質(zhì)在以淀粉為原料生產(chǎn)β-環(huán)糊精中的應(yīng)用。
全文摘要
一個編碼β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的基因Pcgt，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。該基因編碼的β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶SEQ ID NO.2及該酶在以淀粉為原料生產(chǎn)β-環(huán)糊精中的應(yīng)用。
文檔編號C12N9/10GK102250931SQ20111017118
公開日2011年11月23日 申請日期2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月23日
發(fā)明者吳磊, 龐浩, 李濤, 杜麗琴, 裴建新, 霍云龍, 韋宇拓, 黃日波 申請人:廣西大學(xué)