2-羥丙基-β-環(huán)化糊精在制備治療X-連鎖腎上腺腦白質(zhì)退化癥的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及2-羥丙基-β -環(huán)化糊精在制備治療X-連鎖腎上腺腦白質(zhì)退化癥的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]X-連鎖腎上腺腦白質(zhì)退化癥(X-ALD)是一種X連鎖隱形遺傳的脂質(zhì)代謝類疾病。目前認(rèn)為，由于細(xì)胞中過氧化物酶體對極長鏈脂肪酸(VLCFA)，主要是C23?C30脂肪酸，尤其C26的氧化發(fā)生障礙，以致VLCFA在血、腦白質(zhì)、腎上腺皮質(zhì)等器官和組織內(nèi)大量聚集，引發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘和腎上腺皮質(zhì)萎縮或發(fā)育不良。每10萬人約有0.5-1人患有該病，其中95%是男性，5%為女性雜合子。X-ALD致病基因ABCDl(Sarde et al.，1994)編碼過氧化物酶體膜蛋白ALDP (adrenoleukodystrophy protein)，其含有745個(gè)氨基酸。ALDP和另外3個(gè)位于過氧化物酶體膜上的蛋白結(jié)合，形成二聚體，能將飽和的VLCFA轉(zhuǎn)運(yùn)至過氧化物酶體中進(jìn)行氧化。由于ABCDl基因突變，導(dǎo)致ALDP功能異常，使得VLCFA的氧化受阻，進(jìn)而引起VLCFA聚集。VLCFA在神經(jīng)系統(tǒng)中聚集可破壞髓鞘的穩(wěn)定性和髓鞘的正常形成，而在腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞中聚集會(huì)降低腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞膜表面的ACTH受體功能，使細(xì)胞內(nèi)類固醇合成受抑制，而至腎上腺功能減退。
[0003]目前尚無有效的X-ALD疾病治療方案，目前治療的治療方法包括腎上腺皮質(zhì)激素替代療法和飲食療法等。發(fā)生腎上腺皮質(zhì)功能不全時(shí)，可用激素替代療法，給以類固醇激素可顯著改善患者的內(nèi)分泌狀態(tài)，但不能改善神經(jīng)系統(tǒng)癥狀；低脂飲食配合Lorenzo’ soil (三芥酸甘油酸:三油酸甘油酯=4:1)可能對一些患者血漿中VLCFA水平降低有一定療效，但無法阻止腦的脫髓鞘化；基因治療前景廣闊但近期尚不可行；造血干細(xì)胞移植可有效治療疾病早期的腦型患者，但不適于疾病快速進(jìn)展階段的腦型患者；藥物誘導(dǎo)基因治療如洛伐他汀的使用和療效目前還停留在實(shí)驗(yàn)水平。
[0004]目前治療X-ALD使用最廣的Lorenzo’s oil可以降低部分患者血漿中的VLCFA水平，但不能改善X-ALD導(dǎo)致的腦部病變和行為學(xué)異常。另一用于試驗(yàn)的小分子4-PBA在患者中有較好的耐受性，卻無法降低體內(nèi)VLCFA水平。
[0005]X-ALD通常被認(rèn)為是VLCFA在組織內(nèi)聚集引發(fā)的脂質(zhì)代謝類疾病。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)HPCD作用于X-ALD小鼠，不僅使血漿、小腦、腎上腺的膽固醇水平降到正常范圍之內(nèi)，而且降低了 VLCFA水平，減輕了 X-ALD小鼠神經(jīng)退行性病變造成的行為學(xué)異常。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種2-羥丙基-β -環(huán)化糊精(HP⑶)在制備治療X-連鎖腎上腺腦白質(zhì)退化癥(X-ALD)的藥物中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0008]本發(fā)明通過對野生型(WT)和X-ALD模型小鼠(AB⑶I基因敲除小鼠，AB⑶1+小鼠)注射HPCD，6月齡至7月齡小鼠每周注射4次，在7月齡時(shí)進(jìn)行細(xì)胞Filipin染色、腎上腺和小腦組織切片F(xiàn)ilipin染色以及血漿總膽固醇與極長鏈脂肪酸的測量；7月齡至12月齡每月注射5次，在12月齡時(shí)進(jìn)行體重的測量；小鼠12月齡后每月注射8次，在20月齡時(shí)進(jìn)行行為學(xué)檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HPCD能使血漿、小腦、腎上腺的膽固醇水平降到正常范圍之內(nèi)，而且降低了 VLCFA水平，減輕了 X-ALD小鼠神經(jīng)退行性病變造成的行為學(xué)異常?；谠摻Y(jié)果表明HPCD能夠治療X-ALD，其可以用于制備治療X-ALD的藥物。
[0009]本發(fā)明具有如下有益效果:相較于已有的治療藥物L(fēng)orenzo’s oil和4_PBA，HP⑶不僅降低了 X-ALD小鼠體內(nèi)VLCFA水平，而且減輕了 X-ALD小鼠的行為學(xué)異常癥狀。HP⑶將會(huì)是一種新的有效的治療X-ALD疾病的化合物。
【附圖說明】
[0010]圖1是HPCD注射X-ALD小鼠程序圖。
[0011]圖2是7月齡WT和AB⑶1+小鼠尾尖成纖維細(xì)胞Fi I ip in染色的共聚焦顯微圖。
[0012]圖3是7月齡WT和AB⑶1+小鼠腎上腺和小腦組織切片F(xiàn)ilipin染色的熒光顯微鏡圖。
[0013]圖4是7月齡WT和AB⑶1+小鼠的血漿總膽固醇含量的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖；NS:無顯著差異；*:有顯著差異，P〈0.05。
[0014]圖5是7月齡WT和AB⑶1+小鼠腎上腺或腦組織的VLCFA含量的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖；NS:無顯著差異；*:有顯著差異，P〈0.05 ; * *:有顯著差異，P〈0.01。
[0015]圖6是12月齡WT和AB⑶1+小鼠的體重圖；NS:無顯著差異；*:有顯著差異，Ρ〈0.05 ; * *:有顯著差異，P〈0.0lo
[0016]圖7是20月齡WT和AB⑶1+小鼠轉(zhuǎn)桿實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖；NS:無顯著差異；*:有顯著差異，P〈0.05 ; * *:有顯著差異，P〈0.01。
[0017]圖8是20月齡WT和ABCDl+小鼠曠場實(shí)驗(yàn)中小鼠前肢離地次數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖；NS:無顯著差異；* *:有顯著差異，P〈0.01。
[0018]圖9是20月齡WT和AB⑶1+小鼠曠場實(shí)驗(yàn)中小鼠15分鐘內(nèi)移動(dòng)總距離的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖；NS:無顯著差異；*:有顯著差異，P〈0.05 ; * *:有顯著差異，P〈0.01。
[0019]圖10是20月齡WT和AB⑶1+小鼠曠場實(shí)驗(yàn)中小鼠15分鐘內(nèi)的移動(dòng)軌跡如圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制，在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。
[0021 ] 實(shí)施例1HPCD注射X-ALD小鼠程序
[0022]本實(shí)施例中所用的材料:2_羥丙基-β-環(huán)化糊精(2-hydroxypropy1-β-cyclodextrin)HPCD 購于 Cyclodextrin TechnologiesDevelopment, Inc.，ABCDl 基因敲除小鼠購于 Jackson Laboratory。
[0023]按照圖1所示的程序?qū)σ吧?WT)和X-ALD模型小鼠(AB⑶I基因敲除小鼠，AB⑶1+小鼠)頸背部注射HP⑶，注射劑量為4000mg HP⑶每kg小鼠體重，具體如下:用
0.9%生理鹽水配制20% HP⑶(W/V)，6月齡至7月齡小鼠每周注射4次20% HP⑶，對照組注射同體積生理鹽水，在7月齡時(shí)進(jìn)行細(xì)胞Filipin染色、腎上腺和小腦組織切片F(xiàn)ilipin染色以及