專利名稱：一種快速篩選鈣離子通道拮抗劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高通量篩選鈣離子通道拮抗劑的方法。
背景技術(shù)：
鈣離子通道是常見的藥物靶器官，鈣離子通道拮抗劑廣泛應(yīng)用于心血管疾病，如高血壓、心率失常和心衰等各種疾病。因其作用顯著，受到各大醫(yī)藥公司的青睞，每年對大量化合物進(jìn)行篩選以求證其對鈣離子通道的作用，其中絕大部分是對其拮抗作用的篩選。傳統(tǒng)的鈣離子通道拮抗劑的篩選方法用的是結(jié)合法(Binding Assay)，這種方法是化合物和已知鈣離子通道的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，根據(jù)其結(jié)合的強(qiáng)弱來判斷化合物的拮抗性。 這種方法的缺點(diǎn)是結(jié)合位點(diǎn)已知，也就是說無法對未知的阻斷結(jié)合點(diǎn)進(jìn)行藥物篩選，一般需要同位素作為檢測手段，對人體和環(huán)境具有潛在的危害，更由于其篩選出的陽性化合物雖有和鈣離子通道結(jié)合的能力但并不一定有拮抗的效果，因而逐漸淘汰。取以代之的以熒光為基礎(chǔ)的Flippr Assay法，鈣離子通道開放引起的鈣離子向細(xì)胞內(nèi)涌入，進(jìn)而結(jié)合事先置入的熒光蛋白。這類熒光蛋白可根據(jù)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的強(qiáng)弱而發(fā)出不同強(qiáng)弱的熒光，從而檢測熒光的強(qiáng)弱可判斷進(jìn)入細(xì)胞的鈣離子的多少。最近幾年興起的I^atchXpress，Qpatch 和IonWorks等儀器建立在傳統(tǒng)的電生理的基礎(chǔ)上，從而克服了結(jié)合法(Binding Assay)和熒光法(Flippr Assay)的缺點(diǎn)，使藥物篩選過程更接近于生理狀態(tài)，缺點(diǎn)是成本很高。無論以上哪種方法，操作人員都需要一定的專業(yè)知識，長期的訓(xùn)練；更重要的是篩選成本都比較高。藥物篩選領(lǐng)域追求的是低成本高速度，即多少美元一個數(shù)據(jù)點(diǎn)和一天多少數(shù)據(jù)點(diǎn)。關(guān)于能采集多少數(shù)據(jù)點(diǎn)一天，以上各方法并不相同，但至少達(dá)到半高通量的要求，然而，成本卻居高不下，便宜也要$50 —個點(diǎn)左右。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的成本高缺陷提供一種利用細(xì)胞毒性高頻篩選鈣離子通道拮抗劑的方法，該方法并不需要昂貴的實(shí)驗(yàn)儀器，操作人員只需要簡單訓(xùn)練即可掌握，而且也達(dá)到或超過半通量的要求，具有高效、易學(xué)、易用和廉價等優(yōu)點(diǎn)，可快速篩選鈣離子通道拮抗劑。本發(fā)明的上述技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)施的 一種高效篩選鈣離子通道拮抗劑的方法，該方法包括以下步驟
1)制作穩(wěn)定的帶鈣離子通道的細(xì)胞株；
2)劑量效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備將等量的帶鈣離子通道的細(xì)胞株滴入細(xì)胞培養(yǎng)板的各個孔內(nèi)，再加入經(jīng)梯度稀釋的鈣離子通道阻斷劑，以此同時加入ΙμΜ Bay K,培養(yǎng)至少M(fèi) 小時后測量細(xì)胞的存活率，以細(xì)胞存活率對鈣離子通道阻斷劑Mtrendipine的濃度繪制曲線，得到劑量效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線；
3)篩選將帶鈣離子通道的細(xì)胞株滴入細(xì)胞培養(yǎng)板的各個孔內(nèi)，每個孔內(nèi)帶鈣離子通道的細(xì)胞株的量與步驟幻中帶鈣離子通道的細(xì)胞株的量的加入量相同，再向孔內(nèi)加入待篩選化合物，得到的數(shù)值與劑量效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線對照，確定其是否對鈣離子通道有阻斷作用。本發(fā)明是利用鈣離子內(nèi)流至細(xì)胞內(nèi)，可引起細(xì)胞死亡這一原理而設(shè)計(jì)的。一般情況下，細(xì)胞膜內(nèi)外兩側(cè)有一個在-70到-90毫伏之間的電壓差(膜電壓)，如心肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等。HEK293細(xì)胞相對特殊，它的膜電壓在-20到-40毫伏之間。鈣離子通道是一種電壓敏感性通道，在處于-70之-90毫伏的靜息電位時，離子通道是關(guān)閉的；細(xì)胞內(nèi)外的鈣離子并不交流；而電壓上升到一定程度時，也就是說在某一特定的電壓段，離子通道會被打開 (激活狀態(tài))。-40毫伏的膜電壓正好達(dá)到了鈣離子通道的開放域值；HEK293細(xì)胞的膜電位真好在-20到-40毫伏之間。那么，鈣離子克隆在這類細(xì)胞株上，鈣離子通道將處于持續(xù)激活狀態(tài)，即連接細(xì)胞內(nèi)外的，在細(xì)胞膜上的鈣離子通道一直處在開放狀態(tài)。從單個鈣離子通道來說，鈣離子通道開放后會迅速失活。失活的概念指的是在離子通道開放的條件繼續(xù)存在的條件下，離子通道不再開放的一種狀態(tài)。克隆了鈣離子通道的HEK293細(xì)胞上有很多鈣離子通道，作為特定的單個離子通道，它在開放后，迅速失活；但以整個細(xì)胞的鈣離子通道來說，始終會有一些通道在一定條件下處于開放狀態(tài)；而這個特定條件就是細(xì)胞膜之間的膜電壓在-20到-40毫伏左右。有實(shí)驗(yàn)證明在-40毫伏到-20毫伏之間，始終有一定數(shù)量的鈣離子通道處于開放狀態(tài)。由于鈣離子在細(xì)胞內(nèi)外存在濃度差， 細(xì)胞外的鈣離子濃度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，這樣在鈣離子通道開放的情況下， 鈣離子順著離子濃度梯度從細(xì)胞外進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。鈣離子在細(xì)胞內(nèi)濃度升高，可引起各種生理現(xiàn)象，也可引起細(xì)胞自然死亡。如果能阻止鈣離子的內(nèi)流，細(xì)胞就不會死亡。這樣，一個化合物是否對鈣離子通道有阻斷作用，就可以在細(xì)胞的死亡率上表現(xiàn)出來。這種不同的死亡率，就可以用來對鈣離子他的的阻斷劑進(jìn)行篩選。這個專利就是利用離子通道的這一特點(diǎn)進(jìn)行藥物篩選。在實(shí)驗(yàn)中用到的Bay K，可以增加鈣離子通道的開放。雖然原理上有待進(jìn)一步探討，但一般認(rèn)為它作用在鈣離子通道的失活期，從而使離子通道開放時間大大延長。實(shí)驗(yàn)中使用Bay K可以使細(xì)胞死亡率增高以增加篩選的敏感度。這個發(fā)明的高效是和IonWorks以及PatchXpress，Qpatch相比較的，Molecular Devices公司的IonWorks Quattro是目前速度最快的儀器，其網(wǎng)站認(rèn)為在6小時內(nèi)可獲 2300個資料點(diǎn)。這個數(shù)據(jù)并不反映實(shí)際情況，Quattro用的是384孔板，除去陽性和陰性對照后是320個空，即百分之百成功一次可得320個數(shù)據(jù)點(diǎn)。一個實(shí)驗(yàn)程序一般需要70 到120分鐘，加上每次實(shí)驗(yàn)前的一些必須準(zhǔn)備(如處理細(xì)胞等)，一天8小時最多能完成4個實(shí)驗(yàn)，即1280個數(shù)據(jù)點(diǎn)，鈣離子通道的實(shí)驗(yàn)程序一般需要2小時，數(shù)據(jù)點(diǎn)更少。Molecular Devices公司的PatchXpress和Sophion的Qpatch屬于同一類型的產(chǎn)品，采用16空板，即最多可得到16個細(xì)胞，屬于半高通量的篩選儀器。由于這類產(chǎn)品在一個細(xì)胞上能得到多個點(diǎn)(可得到5個點(diǎn)一個細(xì)胞)，成功率可達(dá)50% ；—天8小時，可完成6次實(shí)驗(yàn)，即一天可獲得240個點(diǎn)，但在實(shí)踐中，很少有達(dá)到200個點(diǎn)的。本發(fā)明采用的是96空板，除去陽性和陰性對照后是80個空，即可獲80個數(shù)據(jù)點(diǎn)一次。本方法可用多種測試方法，其速度也和測試方法相關(guān)。如果用目測法，按我的測試，每空平均需要25秒，不到半分鐘，即一整個板不需要50分鐘，一天測8個板或640個數(shù)據(jù)，不應(yīng)有問題；也可以用Vi-Cell (Vi-Cell XR, Cell Viability analyzer, Beckman Coulter)來測量細(xì)胞的存活率，Vi-Cell 是專門用來測細(xì)胞存活率的儀器，一般好點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)室都會有類似的儀器。Vi-Cell的測試速度并不快，和目測不相上下，一天可得640個數(shù)據(jù)或8個板；但它可節(jié)省很多人力。另外，各種掃描儀(microplate reader)也可以執(zhí)行任務(wù)。比如，GE IN Cell Analyzer 1000 是用于 High content Analysis的儀器，也可在本發(fā)明中運(yùn)用，它的掃描速度和曝光以及圖像數(shù)量有關(guān)， 96孔板需要1到4小時，在本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中只需1小時，8小時內(nèi)，可得640個數(shù)據(jù)點(diǎn)。由于測試前細(xì)胞不需要進(jìn)一步處理，如果再接上自動傳遞裝置，理論上可進(jìn)行M小時測試，從而達(dá)到近2000個數(shù)據(jù)點(diǎn)。在成本上，采用目測法，需要一臺倒置顯微鏡，價格$1500左右， 一般細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室均擁有這種儀器；Vi-Cell也是細(xì)胞培養(yǎng)室的常用儀器，好點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)室均會擁有，它的價格在$45000左右；儀器GE IN Cell Analyzer 1000—般只有從事藥物篩選的實(shí)驗(yàn)室才有，價格也較昂貴。和IonWorks Quattro，PatchXpress以及Qpatch 40到 50萬美元一臺相比，本發(fā)明可以說是成本低廉；另外，Ionfforks Quattro，PatchXpress和 Qpatch每次實(shí)驗(yàn)需要消耗一個板(chip)，每個chip需上百美元，而一個96孔板大約需要 1美元左右，所以消耗品成本也很低廉。作為優(yōu)選，步驟1)具體為鈣離子通道有4個亞單位，需要至少2個單位α和β 亞單位，其中α亞單位可組成離子通道的孔道而β對其有功能修飾作用，另兩個亞單位 α2δ和Υ對鈣離子通道的表達(dá)有增加作用。一般需要α，β和Ci2 δ同時表達(dá)以達(dá)到所需的表達(dá)量。與此同時，這三種亞型需要表達(dá)在三種帶不同抗藥性并可作哺乳動物細(xì)胞的質(zhì)粒，這種不同的抗藥性可選擇性地保留三種亞單位在細(xì)胞中表達(dá)，同時殺死不帶或少帶抗藥性的細(xì)胞，從而達(dá)到穩(wěn)態(tài)表達(dá)離子通道的目的。通過抗藥性的選擇可將鈣離子通道克隆到 HEK (human embryonic kidney cell)或 CHO (Chinese Hamster Oocyte)等細(xì)胞上， 得到Cavl. 2細(xì)胞株。作為優(yōu)選，所述的質(zhì)粒為可作哺乳動物細(xì)胞表達(dá)的質(zhì)粒。鈣離子通道細(xì)胞株的保存將鈣離子通道阻斷劑尼群地平溶于含10%小牛血清細(xì)胞培養(yǎng)液中，并在常規(guī)(X)2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)傳代備用。本發(fā)明是利用鈣離子對細(xì)胞的毒性對鈣離子通道的拮抗劑和調(diào)節(jié)劑進(jìn)行快速高頻篩選，一天可獲得幾百甚至上千個實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，成本大大降低，操作人員在簡單訓(xùn)練后即可掌握。因此，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的方法不僅在速度上具有較大的優(yōu)勢，而且可使成本由原來的一個數(shù)據(jù)點(diǎn)$50左右降至$1左右，具有很大的價格優(yōu)勢和發(fā)展前景。


圖1是尼群地平(Nitrendipine)對細(xì)胞死亡的保護(hù)作用曲線。橫坐標(biāo)代表的是尼群地平濃度；縱坐標(biāo)代表的是細(xì)胞死亡率。曲線是用邏輯回歸擬合后得到的量效曲線。 其半數(shù)阻斷劑量(IC5tl)為2. 4微摩爾。圖2是用Ionworks獲得的尼群地平對鈣離子通道阻斷作用曲線。本圖采用的數(shù)據(jù)是對比用藥前后的最大鈣內(nèi)流電流變化以及其相應(yīng)的尼群地平濃度。曲線是用邏輯回歸擬合后得到的量效曲線。其半數(shù)阻斷劑量(IC5tl)為0. 9微摩爾。圖3是維拉帕米(Verapamil)對細(xì)胞死亡的保護(hù)作用曲線。橫坐標(biāo)代表的是維拉帕米濃度；縱坐標(biāo)代表的是細(xì)胞死亡率。曲線是用邏輯回歸擬合后得到的量效曲線。其 IC5tl是觀.7微摩爾。圖4是地爾硫卓(Diltiazem)對細(xì)胞死亡的保護(hù)作用曲線。橫坐標(biāo)代表的是地爾硫卓濃度；縱坐標(biāo)代表的是細(xì)胞死亡率。曲線是用邏輯回歸擬合后得到的量效曲線。其 IC5tl是71. 6微摩爾。圖5是顯示8種未知化合物對細(xì)胞死亡率的影響曲線。A，B, C, D, E, F，G和 H代表的是10微摩爾的8中未知化合物。黑色的方塊是各種濃度的尼群西平，曲線是用邏輯回歸(logistic regression)模擬后得到的劑量效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖6是用Ionworks測量鈣離子通道用藥前后變化的電壓命令程序。
具體實(shí)施例方式以下是本發(fā)明的具體實(shí)施例；這些實(shí)施例可以對本發(fā)明作進(jìn)一步的補(bǔ)充和說明； 但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。以下實(shí)施例中所使用的技術(shù)，除非特別說明，均為本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)；所使用的儀器設(shè)備、試劑等，除非是本說明書特別說明，均為本領(lǐng)域的研究和技術(shù)人員可以通過公共途徑獲得的。如無特殊說明，本發(fā)明涉及的物質(zhì)的含量均為質(zhì)量含量。HEK293細(xì)胞株從Eton Bioscience有限責(zé)任公司購得。L型鈣離子通道的HEK293細(xì)胞株的制備過程為常規(guī)技術(shù)，具體可以根據(jù)如下的步驟進(jìn)行
1) L型鈣離子通道的cDNA和PCMV-A-Puro表達(dá)載體(vector)均從Origene公司購買(α IC :#SC311958 ； β 2 :#SC122135 ； α 2 δ #SC124161 ;PCMV-A_Puro 表達(dá)載體 #PS100025) ；pcdna3. 1/Zeo (+)和 pcdna3. 1/hygro (+)表達(dá)載體是從 invitrogen 公司購買(pcdna3. 1(+) :V790020 ；pcdna3. 1/hygro (+) :V87020)。購買后由 Origene 公司負(fù)責(zé)將 cDNA更換到指定載體。2)按Roche公司的Fugene方法將三種cDNA轉(zhuǎn)錄到HEK293細(xì)胞株上，這一步在 96孔板進(jìn)行。3)大約16小時后，將96孔板空中細(xì)胞培養(yǎng)液換成帶有抗菌素的培養(yǎng)液。每7 到10天換液，一直到陰性對照細(xì)胞全部被抗生素殺死。這時可以進(jìn)行克隆細(xì)胞。用酶 (Trypsinization)徹底將細(xì)胞懸浮并打開。測定細(xì)胞數(shù)量后，將細(xì)胞稀釋到每100毫米培養(yǎng)皿1到5個細(xì)胞。讓細(xì)胞長2星期左右，并在單克隆的菌落下做好標(biāo)記。將菌落轉(zhuǎn)移到 M孔板上繼續(xù)生長到80%滿時，再做電生理鑒定，以找到最佳克隆。從而得到L型鈣離子通道的HEK293細(xì)胞株。其他試劑來源
小牛血清Jnvitrogen公司#16000 ； D-MEM/F-12 培養(yǎng)液hvitrogen 公司； Nitrendipine (尼群地平)西格馬(Sigma)公司； 胰蛋白酶消化液(Trypsin/EDTA) Jnvitrogen公司； BayK :BayK-8644,西格馬(Sigma)公司；
Vicell :Vi-Cell XR,細(xì)胞活性分析儀，Beckman Coulter 公司； Ionworks :Molecular Devices 公司。
1)本發(fā)明是利用鈣離子對細(xì)胞的毒性對鈣離子通道的拮抗劑和調(diào)節(jié)劑進(jìn)行高頻篩選，具體以HEK293為例來說明本發(fā)明方法的實(shí)施過程，HEK293細(xì)胞是一種生物研究中廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞株，起源于人類胚胎腎細(xì)胞。首先，在HEK293細(xì)胞株上進(jìn)行。這個克隆細(xì)胞株帶有大量的L型鈣離子通道，可以用來篩選針對鈣離子通道的拮抗劑。2)由于鈣離子可以不斷通過鈣離子通道進(jìn)入細(xì)胞，造成細(xì)胞死亡，因而，帶鈣離子通道的HEK293細(xì)胞株需有鈣離子通道阻斷劑，如尼群地平(Nitrendipine) (10 μΜ)來保護(hù)進(jìn)行傳代。Nitrendipine是二氫吡啶類1，4_Dihydropryridine類L-型鈣離子通道高效阻斷劑。這類阻斷劑能更有效地與處于失激活狀態(tài)的鈣離子通道結(jié)合，也是優(yōu)先選擇這類阻斷劑的重要原因；L型鈣離子通道也可用CHO進(jìn)行表達(dá)，制成細(xì)胞株，但因?yàn)镃HO抗死亡能力較強(qiáng)，所以不優(yōu)先選擇CHO細(xì)胞。將Nitrendipine溶于帶有10%小牛血清細(xì)胞培養(yǎng)液中，使其濃度達(dá)到10 μΜ。在該混合液中，37°C，5%0)2的培養(yǎng)箱內(nèi)HEK293細(xì)胞株培養(yǎng)傳代直到實(shí)驗(yàn)的時候。HEK293細(xì)胞株在例行傳代培養(yǎng)時，采用拌有L-型谷氨酸的D_MEM/F_12培養(yǎng)液，并加入10%的小牛血清以及G418 400μδ/πι1, Riromycin (嘌羅霉素)0. 625Pg/ml和 hygromycin (潮霉素)lOOPg/ml三種抗生素；以及10 μΜ的Nitrendipine (尼群地平)。每隔36小時到48小時，傳代并重新更換培養(yǎng)液，確保細(xì)胞密度不超過80%。傳代的步驟可按以下進(jìn)行
a.去除所有的培養(yǎng)液并用5毫升37°C的磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗1次；
b.去除PBS并用37°C的胰蛋白酶消化液清洗后立即去除；
c.把培養(yǎng)皿放置在37°C的細(xì)胞培養(yǎng)箱里2到5分鐘；
d.輕擊培養(yǎng)皿使細(xì)胞脫離培養(yǎng)皿的底部，再加入新的37°C的細(xì)胞培養(yǎng)液并重新懸浮細(xì)胞；
e.用吸管把懸浮細(xì)胞加入15毫升的離心管中用震蕩器搖勻；
f.取1 毫升用 Vicell 儀(Vi-Cell XR, Cell Viability analyzer, Beckman Coulter) 測細(xì)胞的數(shù)量和存活度；
g.經(jīng)計(jì)算后，將兩到三百萬細(xì)胞加入175毫升的培養(yǎng)皿里進(jìn)行培養(yǎng)。
3)在篩選實(shí)驗(yàn)時，HEK293細(xì)胞被放置在96孔板中，每孔含10萬細(xì)胞。具體方法 a.細(xì)胞培養(yǎng)液，繼續(xù)使用拌有L-型谷氨酸D-MEM/F-12培養(yǎng)液，加入10%的小牛血清； 并加入 μΜ的BayK和相應(yīng)的三種抗生素。注意培養(yǎng)液中不含Nitrendipine。b.可按傳代方法懸浮細(xì)胞，將10萬個細(xì)胞加入96孔板的每個孔中，并加入200μΜ 的細(xì)胞培養(yǎng)液。c.在加入細(xì)胞后，含有ΗΕΚ293細(xì)胞株的孔板被轉(zhuǎn)移到30 °C，5% C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48小時后，取出并測試細(xì)胞存活率；具體測試方法按Vicell的說明書操作，細(xì)胞存活率見表1。表1 Bay K8644對帶L型鈣離子通道的HEK293細(xì)胞死亡率和存活率的影響
權(quán)利要求
1.一種高效篩選鈣離子通道拮抗劑的方法，其特征在于該方法包括以下步驟1)制作穩(wěn)定的帶鈣離子通道的細(xì)胞株；2)劑量效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備將等量的帶鈣離子通道的細(xì)胞株滴入細(xì)胞培養(yǎng)板的各個孔內(nèi)，再加入經(jīng)梯度稀釋的鈣離子通道阻斷劑，以此同時加入ΙμΜ Bay K,培養(yǎng)至少M(fèi) 小時后測量細(xì)胞的存活率，以細(xì)胞存活率對鈣離子通道阻斷劑Nitrendipine的濃度繪制曲線，得到劑量效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線；3)篩選將帶鈣離子通道的細(xì)胞株滴入細(xì)胞培養(yǎng)板的各個孔內(nèi)，每個孔內(nèi)帶鈣離子通道的細(xì)胞株的量與步驟幻中帶鈣離子通道的細(xì)胞株的量的加入量相同，再向孔內(nèi)加入待篩選化合物，得到的數(shù)值與劑量效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線對照，確定其是否對鈣離子通道有阻斷作用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1)具體為通過抗藥性的選擇可將鈣離子通道克隆到HEK或CHO細(xì)胞上，得到Cavl. 2細(xì)胞株。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的質(zhì)粒為可作哺乳動物細(xì)胞表達(dá)的質(zhì)粒。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高通量篩選鈣離子通道拮抗劑的方法。一種高效篩選鈣離子通道拮抗劑的方法，該方法包括以下步驟1)制作穩(wěn)定的帶鈣離子通道的細(xì)胞株；2)劑量效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備；3)篩選。本發(fā)明是利用鈣離子對細(xì)胞的毒性對鈣離子通道的拮抗劑和調(diào)節(jié)劑進(jìn)行快速高頻篩選，一天可獲得幾百甚至上千個實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，成本大大降低，操作人員在簡單訓(xùn)練后即可掌握。因此，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的方法不僅在速度上具有較大的優(yōu)勢，而且可使成本由原來的一個數(shù)據(jù)點(diǎn)$50左右降至$1左右，具有很大的價格優(yōu)勢和發(fā)展前景。
文檔編號C12Q1/02GK102260730SQ20111011341
公開日2011年11月30日 申請日期2011年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者陳淵, 陳滔 申請人:陳滔