專利名稱：一種同時(shí)提取花生rna和dna的通用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種同時(shí)提取花生RNA和DNA的方法，可有效避免花生中多糖、脂類、酚類等影響，提取純度高、完整性好、得率高，尤其適用于少量樣品的珍貴材料。
背景技術(shù)：
從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA和DNA是進(jìn)行分子生物學(xué)研究的必要前提和關(guān)鍵。因不同植物、不同發(fā)育時(shí)期的組織成分存在很大差異，所以針對(duì)不同來源的RNA和DNA的提取必須采取相應(yīng)的方法技術(shù)。
花生富含多糖、油脂、蛋白、酚類及一些成分復(fù)雜的次級(jí)代謝產(chǎn)物，不同組織如根、 莖、葉、花、種子的成分有很大差異，并且在不同發(fā)育時(shí)期，不同組織的RNA和DNA含量也不同，因此在提取過程中如何最大限度地抑制RNase和DNase的活性，并快速去除各種代謝產(chǎn)物對(duì)于保證提取樣品的完整性和純度至關(guān)重要。
目前提取植物總RNA和DNA的方法很多，但尚沒有一種方法能同時(shí)提取花生RNA 和DNA，并且適用于花生不同組織。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種可同時(shí)高效提取花生RNA和DNA的通用方法，能有效去除多糖、脂類等代謝產(chǎn)物的影響，所提取的RNA和DNA純度高、完整性好，產(chǎn)量高。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種同時(shí)提取花生RNA和DNA的通用方法，其特征按如下步驟進(jìn)行
(1)取0. 5g花生組織樣品置液氮中冷凍，研磨成粉；
(2)加入5ml提取緩沖液，混勻，65°C溫育20min ；
(3)加入3ml氯仿，混勻，冰置5min ；
(4) 40C 8000rmp 離心 20min ；
(5)取上清4ml，加入2. 4ml氯仿，混勻，冰置5min ；
(6) 40C 8000rmp 離心 20min ；
(7)取上清:3ml，加入Iml濃度為8mol/L的LiCl，混勻后于4°C沉淀過夜或_20°C 放置4h ；
(8) 40C 8000rmp離心20min ；沉淀轉(zhuǎn)入第(9)步，上清轉(zhuǎn)入第(10)步；
(9)沉淀用Iml 75%乙醇漂洗后，4°C SOOOrmp離心lOmin，棄上清，真空抽干；沉淀溶于 100 μ 1 RNase-Free dH20 中，_80°C保存；
(10)第⑶步上清細(xì)1轉(zhuǎn)入無菌離心管中，加入8ml無水乙醇，冰置30min ；
(ll)8000rmp 離心 lOmin，棄上清；
(12)沉淀用Iml 75 %乙醇漂洗，8000rmp離心lOmin，棄上清，沉淀溶于100 μ 1 Dnase-FreedH2O, _20°C保存。


圖1是本發(fā)明實(shí)施例提取并純化出的花生總RNA的瓊脂糖電泳圖譜。其中1 根； 2 莖；3 葉；4 花；5 幼嫩種子；6 成熟種子。
圖2是本發(fā)明實(shí)施例提取并純化出的花生總DNA的瓊脂糖電泳圖譜。其中1 根； 2 莖；3 葉；4 花；5 幼嫩種子；6 成熟種子。
具體實(shí)施例方式
(1)分別取0.5g花生根、莖、葉、花、幼嫩種子和成熟種子置液氮中冷凍，研磨成粉，轉(zhuǎn)入IOml RNase-Free離心管中；
(2)分別加入5ml提取緩沖液，混勻，65°C溫育20min ；
(3)分別加入3ml氯仿，混勻，冰置5min ；
(4) 40C 8000rmp 離心 20min ；
(5)分別取上清，加入2. 4ml氯仿，混勻，冰置5min ；
(6) 40C 8000rmp 離心 20min ；
(7)分別取上清:3ml，加入Iml濃度為8mol/L的LiCl，混勻后于4°C沉淀過夜或-20°C放置4h ；
(8) 40C SOOOrmp離心20min ；沉淀轉(zhuǎn)入第(9)步操作，上清轉(zhuǎn)入第(10)步操作；
(9)沉淀分別用Iml 75%乙醇漂洗30sec后，4°C 8000rmp離心lOmin，棄上清，真空抽干；沉淀溶于100 μ 1 RNase-Free dH20中，_80°C保存；至此獲得各組織總RNA。
(10)將第⑶步上清分別轉(zhuǎn)入無菌離心管中，加入8ml無水乙醇，冰置 30min ；
(ll)8000rmp 離心 lOmin，棄上清；
(12)沉淀用Iml 75 %乙醇漂洗30sec，8000rmp離心lOmin，棄上清，沉淀溶于 100 μ IDnase-Free dH20, -20°C保存，至此獲得各組織 DNA。
本發(fā)明提取并純化出的花生不同組織總RNA的瓊脂糖電泳如圖1所示有明顯清晰的三條帶，并且28S條帶的亮度是18S的兩倍，說明RNA的完整性好，純度高。
本發(fā)明提取并純化出的花生不同組織總DNA的瓊脂糖電泳如圖2所示有明顯清晰的一條帶，說明DNA的完整性好，純度高。
權(quán)利要求
1. 一種同時(shí)提取花生RNA和DNA的方法，其特征是依次按如下步驟進(jìn)行(1)取0.5g花生組織樣品置液氮中冷凍，研磨成粉；(2)加入5ml提取緩沖液，混勻，65°C溫育20min；(3)加入3ml氯仿，混勻，冰置5min；(4)40C 8000rmp 離心 20min ；(5)取上清4ml，加入2.4ml氯仿，混勻，冰置5min ；(6)40C 8000rmp 離心 20min ；(7)取上清:3ml，加入Iml濃度為8mol/L的LiCl，混勻后于4°C沉淀過夜或_20°C放置4h ；(8)40C 8000rmp離心20min ；沉淀轉(zhuǎn)入第(9)步，上清轉(zhuǎn)入第(10)步；(9)沉淀用Iml75%乙醇漂洗后，4°C SOOOrmp離心lOmin，棄上清，真空抽干；沉淀溶于 100 μ 1 RNase-Free dH20 中，_80°C保存；(10)第(8)步上清細(xì)1轉(zhuǎn)入無菌離心管中，加入8ml無水乙醇，冰置30min；(11)8000rmp離心 lOmin，棄上清；(12)沉淀用Iml75 %乙醇漂洗，8000rmp離心lOmin，棄上清，沉淀溶于100 μ 1 Dnase-FreedH2O, _20°C保存。
全文摘要
本發(fā)明公開一種同時(shí)提取花生RNA和DNA的方法，適用于花生的根、莖、葉、花、種子等不同組織。該方法采用高鹽做提取緩沖液，隨后用LiCl分離出RNA和DNA。該方法具有經(jīng)濟(jì)、快捷、操作性強(qiáng)等特點(diǎn)，所提取的RNA和DNA質(zhì)量好、純度高、產(chǎn)量多，能滿足后續(xù)反轉(zhuǎn)錄、文庫構(gòu)建、酶切、雜交等實(shí)驗(yàn)要求。
文檔編號(hào)C12N15/10GK102533723SQ20101059028
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月16日
發(fā)明者崔黨群, 張幸果, 殷冬梅 申請(qǐng)人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)