專利名稱：一種檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒及其制備和檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒及其制備和檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
β -內(nèi)酰胺酶是細(xì)菌產(chǎn)生的可水解β -內(nèi)酰胺類抗生素(如青霉素類)的酶，它 的種類和數(shù)量現(xiàn)已超過了 400種。由于β-內(nèi)酰胺酶可以水解青霉素類抗生素，所以被不 法分子作為解抗劑非法添加入食品或食品原料(例如生乳)中，從而達(dá)到掩敝抗生素的目 的，影響抗生素殘留檢測(cè)。內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生是細(xì)菌對(duì)抗菌藥物耐藥最常見的機(jī)制，長(zhǎng)期 食入非法添加的β -內(nèi)酰胺酶，對(duì)人體健康會(huì)有嚴(yán)重影響。目前常用的檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒檢測(cè)限高，一般為1 4U，檢測(cè)靈敏度差， 特異性差，不易觀察；試劑盒的制備方法復(fù)雜且成本高。β -內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)方法時(shí)間長(zhǎng)， 費(fèi)用高，重復(fù)性差，不能定量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒檢測(cè)限高，特異性差，不易觀 察，試劑盒的制備方法復(fù)雜，內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)方法費(fèi)用高，重復(fù)性差，不能定量的問題， 而提供一種檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒及其制備和檢測(cè)方法。本發(fā)明的檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒由瓊脂糖、磷酸鈉緩沖溶液、可溶性淀粉、 β -內(nèi)酰胺類抗生素、碘液和β -內(nèi)酰胺酶的抑制劑制成；其中每克瓊脂糖加入30 50mL0. 05mol/L的磷酸鈉緩沖溶液，磷酸鈉緩沖溶液的pH值為7. 2 7. 4，可溶性淀粉與瓊 脂糖的質(zhì)量比為1.5 2. 5 1，β-內(nèi)酰胺類抗生素與瓊脂糖的質(zhì)量比為0.8 1.2 1， 所述的碘液由碘和碘化鉀溶液組成，每克碘加入80 120mL3. 2mol/L的碘化鉀溶液，所述 的β-內(nèi)酰胺酶的抑制劑為舒巴坦、舒巴坦鈉、克拉維酸或他唑巴坦中的任意一種。上述檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒的制備方法，按以下步驟進(jìn)行一、將瓊脂糖溶解 于pH值為7. 2 7. 4的0. 05mol/L的磷酸鈉緩沖溶液中，得瓊脂糖溶液；二、然后用微波爐 加熱至沸騰，取出，待瓊脂糖溶液冷卻至45 55°C時(shí)加入可溶性淀粉和β -內(nèi)酰胺類抗生 素，攪拌均勻，得混合液體；三、向M孔板的每孔中加入500 1000 μ L混合液體，靜置冷卻 至凝固，得凝膠；四、然后向M孔板的每孔凝膠中加入500 1000 μ L的碘液，待凝膠由白 色變?yōu)樯钏{(lán)紫色，作用3 6min，倒去碘液，即得到檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒；其中步驟 一中每克瓊脂糖加入30 50mL磷酸鈉緩沖溶液；步驟二中可溶性淀粉與瓊脂糖的質(zhì)量比 為1.5 2. 5 1，β-內(nèi)酰胺類抗生素與瓊脂糖的質(zhì)量比為0.8 1.2 1;步驟四中的 碘液由碘和碘化鉀溶液組成，每克碘加入80 120mL3. 2mol/L的碘化鉀溶液。利用上述檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的定性檢測(cè)方法，按以下步驟進(jìn)行一、向試 劑盒的孔中加入去離子水作為陰性對(duì)照；二、將待檢樣品平均分為兩個(gè)部分，一部分待檢 樣品不經(jīng)過處理直接加入到試劑盒的孔中，每孔加20 100 μ L，另一部分待檢樣品中加 入β -內(nèi)酰胺酶的抑制劑，至β -內(nèi)酰胺酶的抑制劑的濃度為0. 05 0. 5g/mL，作用10 20min后加入到試劑盒的孔中，每孔加20 100 μ L ；三、待檢樣品加入后5 30min進(jìn)行觀 察，陰性對(duì)照不退色，仍為深藍(lán)紫色，將待檢樣品的顏色與陰性對(duì)照的顏色進(jìn)行比較，如果 未經(jīng)處理的待檢樣品孔褪色，加入內(nèi)酰胺酶的抑制劑的待檢樣品孔不褪色，則判定為 陽(yáng)性，如果未經(jīng)處理的待檢樣品孔和加入內(nèi)酰胺酶的抑制劑的待檢樣品孔均不褪色或 均褪色，則判定為陰性，即得到待檢樣品的定性檢測(cè)結(jié)果；其中步驟二中所述的內(nèi)酰胺 酶的抑制劑為舒巴坦、舒巴坦鈉、克拉維酸或他唑巴坦中的任意一種。利用上述檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的半定量檢測(cè)方法，按以下步驟進(jìn)行一、向 試劑盒的孔中加入去離子水作為陰性對(duì)照，選取具有梯度濃度的β -內(nèi)酰胺酶溶液作為標(biāo) 準(zhǔn)液，依次加入到試劑盒的其他孔中，每孔加20 100 μ L ；二、在剩余的孔中加入待檢樣 品，靜置5 30min后，陰性對(duì)照不退色，仍為深藍(lán)紫色，將待檢樣品的顏色與不同梯度濃度 的標(biāo)準(zhǔn)液的顏色進(jìn)行比較，即得到待檢樣品的半定量檢測(cè)結(jié)果。本發(fā)明的原理β -內(nèi)酰胺酶水解β -內(nèi)酰胺類抗生素后的產(chǎn)物可與碘作用，與 淀粉競(jìng)爭(zhēng)游離碘，破壞了碘與淀粉形成藍(lán)色復(fù)合物，使藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，從而判斷是否含有 β -內(nèi)酰胺酶。β -內(nèi)酰胺酶的抑制劑可以使β -內(nèi)酰胺酶失活，不能水解β -內(nèi)酰胺類抗 生素，從而不能使藍(lán)色的碘與淀粉復(fù)合物褪色。本發(fā)明的一種檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒檢測(cè)限低，為0. 1 0.4U，檢測(cè)靈敏度 高，特異性強(qiáng)，易觀察；檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的制備方法簡(jiǎn)單；內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)方 法費(fèi)用低，重復(fù)性好，能夠半定量。


圖1是具體實(shí)施方式
十一制備的檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒照片； 圖2是具體實(shí)施方式
十六檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒的定性檢測(cè)結(jié)果圖3是具體實(shí)施方式
十七制備的具有梯度濃度的β-內(nèi)酰胺酶溶液標(biāo)準(zhǔn)液照片； 圖4是具體實(shí)施方式
二十檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒的半定量檢測(cè)結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的 任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式的檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒由瓊脂糖、磷酸鈉緩 沖溶液、可溶性淀粉、β -內(nèi)酰胺類抗生素、碘液和β -內(nèi)酰胺酶的抑制劑制成；其中每克瓊 脂糖加入30 50mL0. 05mol/L的磷酸鈉緩沖溶液，磷酸鈉緩沖溶液的pH值為7. 2 7. 4， 可溶性淀粉與瓊脂糖的質(zhì)量比為1. 5 2. 5 1，β -內(nèi)酰胺類抗生素與瓊脂糖的質(zhì)量比為 0. 8 1. 2 1，所述的碘液由碘和碘化鉀溶液組成，每克碘加入80 120mL3. 2mol/L的碘 化鉀溶液，所述的β -內(nèi)酰胺酶的抑制劑為舒巴坦、舒巴坦鈉、克拉維酸或他唑巴坦中的任 意一種。本實(shí)施方式中的瓊脂糖、可溶性淀粉、β -內(nèi)酰胺類抗生素和β -內(nèi)酰胺酶的抑制 劑為市場(chǎng)銷售的產(chǎn)品。
具體實(shí)施方式
二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是每克瓊脂糖加入 40mL0. 05mol/L的磷酸鈉緩沖溶液。其他與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是可溶性淀粉與瓊 脂糖的質(zhì)量比為2 1。其他與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是β -內(nèi)酰胺 類抗生素與瓊脂糖的質(zhì)量比為1 1。其他與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至四之一不同的是每克碘加入 100mL3. 2mol/L的碘化鉀溶液。其他與具體實(shí)施方式
一至四之一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式的檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的制備方法，按以下 步驟進(jìn)行一、將瓊脂糖溶解于PH值為7. 2 7. 4的0. 05mol/L的磷酸鈉緩沖溶液中，得瓊 脂糖溶液；二、然后用微波爐加熱至沸騰，取出，待瓊脂糖溶液冷卻至45 55°C時(shí)加入可溶 性淀粉和β -內(nèi)酰胺類抗生素，攪拌均勻，得混合液體；三、向M孔板的每孔中加入500 1000 μ L混合液體，靜置冷卻至凝固，得凝膠；四、然后向M孔板的每孔凝膠中加入500 1000 μ L的碘液，待凝膠由白色變?yōu)樯钏{(lán)紫色，作用3 6min，倒去碘液，即得到檢測(cè)β -內(nèi) 酰胺酶的試劑盒；其中步驟一中每克瓊脂糖加入30 50mL磷酸鈉緩沖溶液；步驟二中可 溶性淀粉與瓊脂糖的質(zhì)量比為1.5 2. 5 1，內(nèi)酰胺類抗生素與瓊脂糖的質(zhì)量比為 0. 8 1. 2 1 ；步驟四中的碘液由碘和碘化鉀溶液組成，每克碘加入80 120mL3. 2mol/L 的碘化鉀溶液。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
六不同的是步驟二中待瓊脂糖溶 液冷卻至50°C時(shí)加入可溶性淀粉和β-內(nèi)酰胺類抗生素。其他與具體實(shí)施方式
六相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
六或七不同的是步驟三中向M孔 板的每孔中加入600 900 μ L混合液體。其他與具體實(shí)施方式
六或七相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
六至八之一不同的是步驟四中向 24孔板的每孔凝膠中加入600 900 μ L的碘液。其他與具體實(shí)施方式
六至八之一相同。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
六至九之一不同的是步驟四中作 用4 5min。其他與具體實(shí)施方式
六至九之一相同。
具體實(shí)施方式
十一本實(shí)施方式的檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的制備方法，按以 下步驟進(jìn)行一、將Ig瓊脂糖溶解于40mLpH值為7. 4的0. 05mol/L的磷酸鈉緩沖溶液中， 得瓊脂糖溶液；二、然后用微波爐加熱至沸騰，取出，待瓊脂糖溶液冷卻至50°C時(shí)加入2g可 溶性淀粉和Ig氨芐西林鈉，攪拌均勻，得混合液體；三、向M孔板的每孔中加入700 μ L混 合液體，靜置冷卻至凝固，得凝膠；四、然后向M孔板的每孔凝膠中加入700 μ L的碘液，待 凝膠由白色變?yōu)樯钏{(lán)紫色，作用5min，倒去碘液，即得到檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒；其中 步驟四中的碘液由碘和碘化鉀溶液組成，每克碘加入100mL3. 2mol/L的碘化鉀溶液。本實(shí)施方式制備的檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒照片如圖1所示，本實(shí)施方式制備 的試劑盒檢測(cè)限低，為0. 1U，檢測(cè)靈敏度高，易觀察。
具體實(shí)施方式
十二 本實(shí)施方式的檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒的定性檢測(cè)方法， 按以下步驟進(jìn)行一、向試劑盒的孔中加入去離子水作為陰性對(duì)照；二、將待檢樣品平均分 為兩個(gè)部分，一部分待檢樣品不經(jīng)過處理直接加入到試劑盒的孔中，每孔加20 100 μ L， 另一部分待檢樣品中加入內(nèi)酰胺酶的抑制劑，至內(nèi)酰胺酶的抑制劑的濃度為 0. 05 0. 5g/mL,作用10 20min后加入到試劑盒的孔中，每孔加20 100 μ L ；三、待檢 樣品加入后5 30min進(jìn)行觀察，陰性對(duì)照不退色，仍為深藍(lán)紫色，將待檢樣品的顏色與陰性對(duì)照的顏色進(jìn)行比較，如果未經(jīng)處理的待檢樣品孔褪色，加入內(nèi)酰胺酶的抑制劑的 待檢樣品孔不褪色，則判定為陽(yáng)性，如果未經(jīng)處理的待檢樣品孔和加入內(nèi)酰胺酶的抑 制劑的待檢樣品孔均不褪色或均褪色，則判定為陰性，即得到待檢樣品的定性檢測(cè)結(jié)果；其 中步驟二中所述的β-內(nèi)酰胺酶的抑制劑為舒巴坦、舒巴坦鈉、克拉維酸或他唑巴坦中的
任意一種。
具體實(shí)施方式
十三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十二不同的是步驟二中β -內(nèi) 酰胺酶的抑制劑的濃度為0. 2 0. 4g/mL。其他與具體實(shí)施方式
十二相同。
具體實(shí)施方式
十四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十二或十三不同的是步驟二中 作用10 20min后加入到2個(gè)孔中。其他與具體實(shí)施方式
十二或十三相同。
具體實(shí)施方式
十五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十二至十四之一不同的是步驟 三中待檢樣品加入后10 20min進(jìn)行觀察。其他與具體實(shí)施方式
十二至十四之一相同。
具體實(shí)施方式
十六本實(shí)施方式的檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒的定性檢測(cè)方法， 按以下步驟進(jìn)行一、將試劑盒的每個(gè)孔進(jìn)行編號(hào)，向試劑盒的Al和Bl孔中加入去離子水 作為陰性對(duì)照；二、將待檢樣品1、2、3、4和5分別平均分為兩個(gè)部分，一部分待檢樣品不經(jīng) 過處理直接依次加入到Α2Β2、Α3Β3, Α4Β4、Α5Β5和Α6Β6孔中，每孔加40 μ L未經(jīng)處理的待 檢樣品，另一部分待檢樣品中分別加入舒巴坦鈉固體，至舒巴坦鈉的濃度為0. 5g/mL，作用 IOmin后依次加入到C2D2、C3D3、C4D4、C5D5和C6D6孔中，每孔加40 μ L加入舒巴坦鈉的待 檢樣品；三、待檢樣品加入后20min進(jìn)行觀察，陰性對(duì)照不退色，仍為深藍(lán)紫色，將待檢樣品 的顏色與陰性對(duì)照的顏色進(jìn)行比較，如果未經(jīng)處理的待檢樣品孔褪色，加入舒巴坦鈉的待 檢樣品孔不褪色，則判定為陽(yáng)性，如果未經(jīng)處理的待檢樣品孔和加入舒巴坦鈉的待檢樣品 孔均不褪色或均褪色，則判定為陰性，即得到待檢樣品的定性檢測(cè)結(jié)果。本實(shí)施方式的定性檢測(cè)結(jié)果如圖2所示，A2B2孔褪色，C2D2孔不褪色，因此待檢 樣品1為陽(yáng)性，含有β -內(nèi)酰胺酶。Α3Β3和C3D3孔均不褪色、Α4Β4合C4D4孔均不褪色， Α5Β5和C5D5孔均不褪色，Α6Β6和C6D6孔均退色，因此待檢樣品2、3、4和5為陰性，不含有 β-內(nèi)酰胺酶。
具體實(shí)施方式
十七本實(shí)施方式的檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒的半定量檢測(cè)方 法，按以下步驟進(jìn)行一、向試劑盒的孔中加入去離子水作為陰性對(duì)照，選取具有梯度濃度 的β -內(nèi)酰胺酶溶液作為標(biāo)準(zhǔn)液，依次加入到試劑盒的其他孔中，每孔加20 100 μ L ；二、 在剩余的孔中加入待檢樣品，靜置5 30min后，陰性對(duì)照不退色，仍為深藍(lán)紫色，將待檢樣 品的顏色與不同梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)液的顏色進(jìn)行比較，即得到待檢樣品的半定量檢測(cè)結(jié)果。本實(shí)施方式制備的具有梯度濃度的β -內(nèi)酰胺酶溶液標(biāo)準(zhǔn)液如圖3所示，1列為加 入去離子水的陰性對(duì)照，2 6列依次是濃度為50U/mL、20U/mL、10U/mL、lU/mL和0. lU/mL 的β-內(nèi)酰胺酶溶液，A D行是四組重復(fù)。從圖3中可以看出，檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑 盒的半定量檢測(cè)方法中，標(biāo)準(zhǔn)液的重復(fù)性好。
具體實(shí)施方式
十八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十七不同的是步驟一中每孔加 40 80yL。其他與具體實(shí)施方式
十七相同。
具體實(shí)施方式
十九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十七或十八不同的是步驟二中 靜置10 20min。其他與具體實(shí)施方式
十七或十八相同。
具體實(shí)施方式
二十本實(shí)施方式的檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒的半定量檢測(cè)方
7法，按以下步驟進(jìn)行一、將試劑盒的每個(gè)孔進(jìn)行編號(hào)，向試劑盒的Al和Bl孔中加入去離子 水作為陰性對(duì)照，選取濃度為50U/mL、20U/mL、10U/mL、lU/mL和0. lU/mL的β -內(nèi)酰胺酶溶 液作為標(biāo)準(zhǔn)液，依次加入到試劑盒的Α2Β2、Α3Β3, Α4Β4、Α5Β5和Α6Β6孔中，每孔加40 μ L ； 二、將待檢樣品a、b、c、d和e依次加入到
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒，其特征在于檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒由瓊脂 糖、磷酸鈉緩沖溶液、可溶性淀粉、β-內(nèi)酰胺類抗生素、碘液和β-內(nèi)酰胺酶的抑制劑制 成；其中每克瓊脂糖加入30 50mL0. 05mol/L的磷酸鈉緩沖溶液，磷酸鈉緩沖溶液的pH 值為7. 2 7. 4，可溶性淀粉與瓊脂糖的質(zhì)量比為1.5 2. 5 1，β -內(nèi)酰胺類抗生素與 瓊脂糖的質(zhì)量比為0. 8 1. 2 1，所述的碘液由碘和碘化鉀溶液組成，每克碘加入80 120mL3. 2mol/L的碘化鉀溶液，所述的β -內(nèi)酰胺酶的抑制劑為舒巴坦、舒巴坦鈉、克拉維 酸或他唑巴坦中的任意一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒，其特征在于每克瓊脂糖加 入40mL0. 05mol/L的磷酸鈉緩沖溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒，其特征在于可溶性淀 粉與瓊脂糖的質(zhì)量比為2 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒，其特征在于內(nèi)酰胺類 抗生素與瓊脂糖的質(zhì)量比為1 1。
5.如權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的制備方法，其特征在于檢測(cè) β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒的制備方法，按以下步驟進(jìn)行一、將瓊脂糖溶解于PH值為7. 2 7. 4的0. 05mol/L的磷酸鈉緩沖溶液中，得瓊脂糖溶液；二、然后用微波爐加熱至沸騰，取 出，待瓊脂糖溶液冷卻至45 55°C時(shí)加入可溶性淀粉和β -內(nèi)酰胺類抗生素，攪拌均勻，得 混合液體；三、向M孔板的每孔中加入500 1000 μ L混合液體，靜置冷卻至凝固，得凝膠； 四、然后向M孔板的每孔凝膠中加入500 1000 μ L的碘液，待凝膠由白色變?yōu)樯钏{(lán)紫色， 作用3 6min，倒去碘液，即得到檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒；其中步驟一中每克瓊脂糖加 入30 50mL磷酸鈉緩沖溶液；步驟二中可溶性淀粉與瓊脂糖的質(zhì)量比為1. 5 2. 5 1， β-內(nèi)酰胺類抗生素與瓊脂糖的質(zhì)量比為0.8 1.2 1 ；步驟四中的碘液由碘和碘化鉀溶 液組成，每克碘加入80 120mL3. 2mol/L的碘化鉀溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的制備方法，其特征在于步 驟三中向M孔板的每孔中加入600 900 μ L混合液體。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的一種檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒的制備方法，其特征在 于步驟四中向M孔板的每孔凝膠中加入600 900 μ L的碘液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的制備方法，其特征在于步 驟四中作用4 5min。
9.利用權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的定性檢測(cè)方法，其特征在 于利用檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的試劑盒的定性檢測(cè)方法，按以下步驟進(jìn)行一、向試劑盒的孔中 加入去離子水作為陰性對(duì)照；二、將待檢樣品平均分為兩個(gè)部分，一部分待檢樣品不經(jīng)過處 理直接加入到試劑盒的孔中，每孔加20 100 μ L，另一部分待檢樣品中加入β -內(nèi)酰胺酶 的抑制劑，至β -內(nèi)酰胺酶的抑制劑的濃度為0. 05 0. 5g/mL,作用10 20min后加入到 試劑盒的孔中，每孔加20 100 μ L ；三、待檢樣品加入后5 30min進(jìn)行觀察，陰性對(duì)照不 退色，仍為深藍(lán)紫色，將待檢樣品的顏色與陰性對(duì)照的顏色進(jìn)行比較，如果未經(jīng)處理的待檢 樣品孔褪色，加入內(nèi)酰胺酶的抑制劑的待檢樣品孔不褪色，則判定為陽(yáng)性，如果未經(jīng)處 理的待檢樣品孔和加入內(nèi)酰胺酶的抑制劑的待檢樣品孔均不褪色或均褪色，則判定為 陰性，即得到待檢樣品的定性檢測(cè)結(jié)果；其中步驟二中所述的內(nèi)酰胺酶的抑制劑為舒巴坦、舒巴坦鈉、克拉維酸或他唑巴坦中的任意一種。
10.利用權(quán)利要求1所述的檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒的半定量檢測(cè)方法，其特征在 于利用檢測(cè)β -內(nèi)酰胺酶的試劑盒的半定量檢測(cè)方法，按以下步驟進(jìn)行一、向試劑盒的孔 中加入去離子水作為陰性對(duì)照，選取具有梯度濃度的β-內(nèi)酰胺酶溶液作為標(biāo)準(zhǔn)液，依次 加入到試劑盒的其他孔中，每孔加20 οομ L ；二、在剩余的孔中加入待檢樣品，靜置5 30min后，陰性對(duì)照不退色，仍為深藍(lán)紫色，將待檢樣品的顏色與不同梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)液的 顏色進(jìn)行比較，即得到待檢樣品的半定量檢測(cè)結(jié)果。
全文摘要
一種檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒及其制備和檢測(cè)方法，涉及一種檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒及其制備和檢測(cè)方法。本發(fā)明為了解決現(xiàn)有檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的試劑盒檢測(cè)限高，特異性差，不易觀察，試劑盒的制備方法復(fù)雜，β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)方法費(fèi)用高，重復(fù)性差，不能定量的問題。試劑盒由瓊脂糖、磷酸鈉緩沖溶液、可溶性淀粉、β-內(nèi)酰胺類抗生素、碘液和β-內(nèi)酰胺酶的抑制劑制成。制備方法一、將瓊脂糖溶解于磷酸鈉緩沖溶液中；二、加熱至沸騰，冷卻，加入可溶性淀粉和β-內(nèi)酰胺類抗生素，攪拌得混合液；三、加入到24孔板中，冷卻至凝固；四、加入碘液，待凝膠由白色變?yōu)樯钏{(lán)紫色，倒去碘液，即得到試劑盒。應(yīng)用于β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)領(lǐng)域。
文檔編號(hào)C12Q1/34GK102115780SQ20101058927
公開日2011年7月6日 申請(qǐng)日期2010年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月15日
發(fā)明者劉珊珊, 盧雁, 呂學(xué)娜, 姜毓君, 房玉國(guó), 沙淼, 滿朝新, 王勝男, 謝鯤昊 申請(qǐng)人:黑龍江省乳品工業(yè)技術(shù)開發(fā)中心